漢族人HLA-G基因多態(tài)性與胃癌相關(guān)性研究

劉洪福, 張 蕾, 陽(yáng)書(shū)華, 章新華, 謝榮臻, 鄧龍穎, 鄧 偉

(贛南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院, 江西 贛州, 341000)

漢族人HLA-G基因多態(tài)性與胃癌相關(guān)性研究

劉洪福, 張 蕾, 陽(yáng)書(shū)華, 章新華, 謝榮臻, 鄧龍穎, 鄧 偉

(贛南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院, 江西 贛州, 341000)

目的探討漢族人HLA-G基因多態(tài)性與胃癌相關(guān)性方法將123例胃癌患者作為研究對(duì)象(經(jīng)過(guò)病理學(xué)確診為胃癌的患者)，同時(shí)選取同期健康體檢患者150例作為對(duì)照組。采用聚合酶鏈反應(yīng)序列特異性引物方法(PCR SSP)對(duì)以上患者的HLA-G和HLA-DRB1等位基因亞型進(jìn)行檢測(cè)，觀察2組患者HLA-G和HLA-DRB1等位基因亞型分布頻率。結(jié)果與對(duì)照組比較，觀察組中HLA-DRB1*03和HLA-DRB1*15檢出率顯著高于對(duì)照組(P<0.05), 且RR分別為1.427和2.209; 2組HLA-G*01012分布存在顯著差異(P<0.05), 且RR值為1.75。結(jié)論胃癌發(fā)生可能與HLA-G*01012、HLA-DRB1-03和HLA-DRB1-15等位基因頻率有較強(qiáng)的相關(guān)性，且均為保護(hù)性基因。

HLA-G; 基因多態(tài)性; 胃癌; 相關(guān)性

人類(lèi)白細(xì)胞抗原(HLA)是人類(lèi)的主要組織相容性復(fù)合體(MHC), 位于6號(hào)染色體上(6p21.31), 包括一系列緊密連鎖的基因座，與人類(lèi)的免疫系統(tǒng)功能密切相關(guān)。其中部分基因編碼細(xì)胞表面抗原，成為每個(gè)人的細(xì)胞不可混淆的“特征”，是免疫系統(tǒng)區(qū)分本身和異體物質(zhì)的基礎(chǔ)[1]。研究[2]報(bào)道, HLA基因多態(tài)性與人類(lèi)腫瘤的發(fā)生具有重要的聯(lián)系，其中報(bào)道最多的是與胃部相關(guān)腫瘤。本研究觀察不同亞型的HLA等位基因分布情況，來(lái)探討I型(主要是HLA-G基因)和Ⅱ型(DRB1基因)多態(tài)性與胃癌的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將2013年3月—2016年4月在本院就診的123例胃癌患者(經(jīng)過(guò)消化道內(nèi)鏡和病理學(xué)診斷確診)作為觀察組，同時(shí)選取同期在本院行健康體檢患者150例作為對(duì)照組。觀察組年齡35～52歲，平均年齡(43.2±12.2)歲，男、女分別為72、51例; 對(duì)照組年齡28～56歲，平均年齡(44.1±11.9)歲，男、女分別為84、66例。以上研究對(duì)象均為漢族，均無(wú)血緣關(guān)系。2組研究對(duì)象在年齡和性別上均無(wú)顯著差異(P>0.05)。

1.2 方法

對(duì)所有研究對(duì)象采用(PCR SSP)方法進(jìn)行基因多態(tài)性分布測(cè)定，主要包括DNA提取(采用QIAGEN Immobilon-p濾膜吸附法)、HLA亞型測(cè)定和等位基因計(jì)算, DNA提取嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作步驟進(jìn)行，提取DNA放到22 ℃恒溫冰箱進(jìn)行備用。HLA亞型檢測(cè): 將提取制備好的DNA、引物板和D-MIX管在22 ℃～24 ℃進(jìn)行溶解，將DNA樣本混勻。在D-MIX管中加入3.0 μL TaP酶進(jìn)行混勻處理，取出15 μL注入陰性對(duì)照孔內(nèi)，在D-MIX加入40 μL DNA樣本，進(jìn)行混勻處理，在除陰性對(duì)照孔外，其他板孔均加入以上混勻液10 μL, 完成后密封試劑板。在輸入PCR程序后采用PE9800型擴(kuò)增儀進(jìn)行擴(kuò)增，將擴(kuò)增產(chǎn)物轉(zhuǎn)載到微量瓊脂糖凝膠孔內(nèi)，恒壓140～150 V, 電泳5 min后在UV下進(jìn)行電泳結(jié)果觀察，進(jìn)行工作單記錄和分析。通過(guò)紫外分析儀對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行觀察，記錄陽(yáng)性區(qū)帶，分析檢測(cè)基因位點(diǎn)，對(duì)于每個(gè)座位的基因記錄等位基因個(gè)數(shù)，其中檢出一個(gè)按照純合子記錄[3]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0軟件對(duì)本次研究涉及到的數(shù)據(jù)進(jìn)行整理和統(tǒng)計(jì)分析，進(jìn)行危險(xiǎn)指數(shù)(RR)計(jì)算。計(jì)數(shù)資料采用[n(%)]進(jìn)行表示，采用卡方檢驗(yàn)進(jìn)行差異性統(tǒng)計(jì),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 不同HLA-DRB1亞型分布情況

與對(duì)照組比較，觀察組中HLA-DRB1*03和HLA-DRB1*15檢出率顯著高于對(duì)照組 (P<0.05), 且RR分別為(1.427和2.209), 2個(gè)HLA-DRB1亞型對(duì)于胃癌的發(fā)生有保護(hù)性的作用。見(jiàn)表1。

2.2 不同HLA-G亞型分布情況

2組HLA-G*01012分布存在顯著差異(P<0.05), 且RR=1.75為保護(hù)性基因。見(jiàn)表2。

表1 不同HLA-DRB1亞型分布情況[n(%)]

與對(duì)照組比較, *P<0.05。

表2 不同HLA-DQB1亞型分布情況[n(%)]

與對(duì)照組比較, *P<0.05。

3 討 論

胃癌發(fā)病率逐年增高，死亡率較高，預(yù)后較差，對(duì)患者的生活質(zhì)量造成了嚴(yán)重的影響，其主要的臨床診斷方法是通過(guò)對(duì)血清學(xué)的篩查和病理學(xué)的活檢確診。有研究[4]顯示人類(lèi)白細(xì)胞抗原(HLA-G)多態(tài)性與胃癌的發(fā)生具有相關(guān)性。HLA復(fù)合體作為迄今人類(lèi)多態(tài)性最復(fù)雜的遺傳系統(tǒng)，主要是作為疾病易感性的最主要的免疫學(xué)遺傳組成部分[5]。對(duì)于T細(xì)胞的提呈和激活均有重要的作用，參與整個(gè)免疫應(yīng)答的重要的遺傳調(diào)控[6]。從分子生物學(xué)角度來(lái)看，大量等位基因的存在，造就HLA是一個(gè)人體多態(tài)性的基因復(fù)合體, HLA可分為Ⅰ型(HLA-A、HLA-B、HLA-C和HLA-G)和Ⅱ型(DRB1、DQA1、DQB1、DQB1和DPB1)。由于基因的多態(tài)性，導(dǎo)致了形成抗原的構(gòu)想和結(jié)合部位不同，免疫應(yīng)答過(guò)程中的提呈效率不同，導(dǎo)致了人類(lèi)對(duì)某些疾病的易感性的不同。人類(lèi)相關(guān)抗原G(HLA-G)作為I型HLA的重要成員之一，最早特異性表達(dá)在胎兒的滋養(yǎng)層細(xì)胞，在母體免疫耐受中起到重要的作用[7]。同時(shí)有報(bào)道[8]HLA-G所表達(dá)蛋白可與CD94/PKG2A受體結(jié)合，抑制細(xì)胞毒性溶解作用，在抑制T細(xì)胞的激活和腫瘤-宿主過(guò)程中都有較大的作用，主要有4種亞型(HLA-G*01012、HLA-G*01011、HLA-G*01013、HLA-G*0103)。HLA的Ⅱ型基因中關(guān)于DRB1與疾病關(guān)系的報(bào)道有DRB1亞型中12型與IgA腎病、類(lèi)天皰瘡具有較好疾病相關(guān)性。岡比亞地區(qū)關(guān)于HLA的研究[9]顯示, DRB1*13能夠顯著降低肝部感染的發(fā)生, DRB1*1與慢性乙肝患者預(yù)后較差具有重要的聯(lián)系。

本研究結(jié)果顯示, DRB1*3和DRB1*15兩種亞型在胃癌患者體內(nèi)的檢出率和健康對(duì)照組的檢出率存在顯著差異(P<0.05), 在危險(xiǎn)度計(jì)算后認(rèn)為該兩種亞型為保護(hù)作用基因; HLA-G*01012在2組中也有顯著差異(P<0.05), 亞型為保護(hù)性基因。有研究表明DRB1*15和幽門(mén)螺旋桿菌的感染發(fā)生率具有負(fù)相關(guān)性，幽門(mén)螺旋感染的發(fā)生是胃炎、胃潰瘍發(fā)生的重要原因，同時(shí)兩種疾病的進(jìn)一步發(fā)展也是以胃癌為終點(diǎn)。研究[10-13]顯示HLA-G基因在腫瘤細(xì)胞免疫逃逸過(guò)程中發(fā)揮了重要的作用，主要與其能夠調(diào)節(jié)NK細(xì)胞的細(xì)胞毒性溶解作用有關(guān)，同時(shí)有報(bào)道HLA-G與細(xì)胞因子IL-10具有相關(guān)性，同時(shí)腫瘤細(xì)胞也能夠分泌可溶性的HLA-G, 而該物質(zhì)具有免疫抑制作用。部分研究[14-16]指出HLA-G在腫瘤細(xì)胞的臨床轉(zhuǎn)移消化道鱗癌的發(fā)生具有重要聯(lián)系。在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中，免疫因子的存在具有重要作用。免疫狀態(tài)的異常存在和對(duì)幽門(mén)螺旋桿菌感染抑制可能是HLA與胃癌發(fā)生的相關(guān)性的重要的中間環(huán)節(jié)。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)HLA-G的01012亞型和DRB1型的03和15亞型可能與胃癌的發(fā)生具有相關(guān)性，且均為保護(hù)性因素。

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CorrelationbetweenHLA-GgenepolymorphismandgastriccancerinHannationality

LIUHongfu,ZHANGLei,YANGShuhua,ZHANGXinhua,XIERongzhen,DENGLongying,DENGWei

(FirstAffiliatedHospitalofGannanMedicalCollege,Ganzhou,Jiangxi, 341000)

ObjectiveTo explore the correlation between HLA-G gene polymorphism and gastric cancer in Han nationality.MethodsA total of 123 gastric cancer patients in our hospital as the research objects (confirmed as gastric carcinoma by pathological diagnosis). At the same time, a total of 150 healthy controls were selected in our hospital, HLA-G and HLA-DRB1 allele subtypes were detected by polymerase chain reaction sequence specific primers (PCR SSP) detection method, and the allele distribution frequencies of subtypes of HLA-G and HLA-DRB1 were observed and analyzed.ResultsCompared with the control group, the observation group had higher detection rate in HLA-DRB1*03 and HLA-DRB1*15 (P<0.05), and RR were 1.427 and 2.209, respectively. And there were significant differences in HLA-G*01012 distribution in two groups (P<0.05).ConclusionThe incidence of gastric cancer may possibly correlated with HLA-G*01012, HLA-DRB1-03 and HLA-DRB1-15 frequencies, and they are all protective genes.

HLA-G; gene polymorphism; gastric cancer; correlation

R 735.2

A

1672-2353(2017)19-070-03

10.7619/jcmp.201719020

2017-05-12

江西省贛州市指導(dǎo)性科技計(jì)劃項(xiàng)目(GZ2015ZSF068)

鄧偉