復(fù)方丹參制劑中丹參、三七合提工藝優(yōu)選*

劉 沛，胡梅娟，譚靜靜，劉翠哲

(承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所/河北省中藥研究與開(kāi)發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，承德醫(yī)學(xué)院，河北承德 067000)

基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)

復(fù)方丹參制劑中丹參、三七合提工藝優(yōu)選*

劉 沛，胡梅娟，譚靜靜，劉翠哲△

(承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所/河北省中藥研究與開(kāi)發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，承德醫(yī)學(xué)院，河北承德 067000)

目的:優(yōu)選復(fù)方丹參制劑中丹參、三七合提工藝。方法：以丹參素、丹參酮ⅡA、三七皂苷R1為指標(biāo)成分，采用四因素三水平L9(34)的正交試驗(yàn)優(yōu)選丹參與三七合提的工藝。結(jié)果：丹參、三七合提最佳工藝為8倍量70%乙醇超聲提取3次，每次60min，合并濾液，抽濾；濾渣加10倍量水超聲提取2次，每次30min，合并水液，醇沉至含醇量50%，抽濾；濾液與醇提液合并，回收乙醇，冷凍干燥。結(jié)論：本研究確定的復(fù)方丹參制劑中丹參、三七的提取工藝穩(wěn)定簡(jiǎn)便，丹參和三七中有效成分的提取率均較高。

復(fù)方丹參制劑；丹參；三七；合提工藝；正交試驗(yàn)

丹參的主要有效成分包括脂溶性成分和水溶性成分，三七的主要有效成分是皂苷類[1-4]。復(fù)方制劑中丹參、三七有效成分含量的高低，直接關(guān)系制劑療效的好壞。歷版中國(guó)藥典復(fù)方丹參方中，復(fù)方丹參滴丸是將丹參和三七用水合煎，復(fù)方丹參氣霧劑是將丹參和三七分別提取干燥后混合制劑，其它復(fù)方丹參制劑如復(fù)方丹參片、復(fù)方丹參顆粒等都是將丹參提取濃縮成浸膏或干膏后與三七粉直接混勻制劑。若只用水煎則影響脂溶性成分的溶出；若將三七直接粉碎后入藥，則需加大服用量；若將丹參和三七單獨(dú)提取，則忽略了二者之間在提取過(guò)程中的相互作用。有文獻(xiàn)報(bào)道，丹參與三七合提，在一定程度上能增加丹參有效成分的提取率，抑制三七的溶出，且發(fā)現(xiàn)有新物質(zhì)產(chǎn)生[5]。為此，本研究對(duì)丹參、三七的合提工藝進(jìn)行了篩選，以期提高二者有效成分的含量，為進(jìn)一步研究復(fù)方丹參方制劑及其藥理作用提供基礎(chǔ)。

1 儀器、試藥與動(dòng)物

Agilent Technologies 1200 Series高效液相色譜儀：四元泵，Agilent DAD檢測(cè)器，在線脫氣裝置，自動(dòng)進(jìn)樣器，柱溫箱和Agilent Chemstation工作站(美國(guó)Agilent公司)；CHRIST實(shí)驗(yàn)室型凍干機(jī)(北京博勵(lì)行儀器有限公司)；KQZ200DE型數(shù)控超聲儀(昆山市超聲儀器有限公司)。丹參為屬植物丹參(Salvia miltiorrhiza Bge）的干燥根及根莖，三七為五加科植物三七(Panax notoginseng (Burk）F.H.Chen）的干燥根，均購(gòu)于北京同仁堂藥店承德分店，由承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所趙春穎教授鑒定。丹參素鈉、丹參酮ⅡA、三七皂苷R1對(duì)照品（110855-200809、11076-200518、110745-200312，中國(guó)藥品生物制品檢定所，含量均＞98%）；甲醇、乙腈為色譜純(天津市協(xié)和昊鵬色譜科技有限公司)，冰醋酸、磷酸為分析純(天津市北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠)，水為重蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 丹參、三七合提方法 稱取丹參5g、三七3g置100ml錐形瓶中，先用醇液超聲提取，過(guò)濾得醇提液備用；濾渣加10倍量水超聲2次，每次30min，過(guò)濾得水提液，合并水提液醇沉至含醇量50%，過(guò)濾，與先前醇提液合并，回收乙醇，冷凍干燥。采用高效液相色譜法測(cè)定丹參素、丹參酮ⅡA和三七皂苷R1的含量[6-7]。

2.2 正交試驗(yàn)優(yōu)選醇提工藝 選取提取時(shí)間（A）、提取次數(shù)（B）、乙醇濃度（C）和溶劑量（D）四個(gè)因素，以丹參素、丹參酮ⅡA和三七皂苷R1的含量為指標(biāo)，選用L9(34)正交表按2.1的方法安排試驗(yàn)進(jìn)行考察。因素水平表見(jiàn)表1，正交試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 因素水平表

根據(jù)正交試驗(yàn)結(jié)果（表2）：丹參素極差R大小順序?yàn)锳＞C＞B＞D，說(shuō)明提取時(shí)間對(duì)丹參素的影響最大，最佳搭配為A2B3C2D2；丹參酮A極差R大小順序?yàn)镃＞A＞D＞B，說(shuō)明乙醇濃度對(duì)丹參酮ⅡA影響最大，最佳搭配為A1B3C2D1；三七皂苷R1極差R大小順序?yàn)锽＞A＞C＞D，說(shuō)明提取次數(shù)對(duì)三七皂苷R1影響最大，最佳搭配為A1B3C2D1。

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果

方差分析結(jié)果（表3）顯示：提取時(shí)間、提取次數(shù)、乙醇濃度對(duì)丹參素含量具有顯著影響，溶劑倍數(shù)對(duì)其影響不大，各個(gè)因素對(duì)丹參酮A和三七皂苷R1的含量影響均不大。綜合考慮丹參素、丹參酮A和三七皂苷R1的含量均較高，且結(jié)合時(shí)間與資源的節(jié)約，確定最佳醇提工藝為A2B3C2D1，即采用8倍量70%乙醇超聲提取3次，每次60min。

表3 方差分析表

2.3 工藝驗(yàn)證試驗(yàn) 稱取丹參5g、三七3g置100ml錐形瓶中，共3份，按照優(yōu)選的最佳工藝進(jìn)行提取，測(cè)定丹參素、丹參酮ⅡA和三七皂苷R1的含量。結(jié)果顯示，優(yōu)選的最佳提取工藝穩(wěn)定性良好，可用于對(duì)丹參、三七合提。見(jiàn)表4：

表4 工藝驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

復(fù)方丹參方中有丹參、三七和冰片三味藥，冰片為揮發(fā)性結(jié)晶成分，不用提取。提取研究多針對(duì)丹參、三七進(jìn)行，且多以二者單獨(dú)提取為主。本研究在參考文獻(xiàn)[8-11]和預(yù)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用超聲法將丹參和三七進(jìn)行合提，為保證丹參中脂溶性成分和水溶性成分的提取率，提取過(guò)程包括了醇提和水提兩部分。并且，本研究采用正交試驗(yàn)優(yōu)選醇提工藝，并對(duì)優(yōu)選的最佳提取工藝進(jìn)行了驗(yàn)證，結(jié)果顯示工藝穩(wěn)定，丹參和三七中有效成分的提取率均較高。

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OPTIMIZATION OF CO-EXTRACTING TECHNOLOGY OF SALVIA MILTIORRHIZA AND PANAX NOTOGINSENG IN COMPOUND DANSHEN PREPARATION

LIU Pei, HU Mei-juan, TAN Jing-jing, et al
(Institute of Chinese Materia Medica/Hebei Key Laboratory of Research and Exploitation of Traditional Chinese Medicine, Chengde Medical College, Hebei Chengde 067000, China)

Objective:To optimize the extraction process of Salvia miltiorrhiza and Panax notoginseng in Compound Danshen preparation.Methods:Four factors and three levels L9(34) orthogonal test was used to optimize the co-extracting technology of Salvia miltiorrhiza and Panax notoginseng by taking Danshensu, tanshinoneA and notoginsenoside R1as index component.Results:The optimal co-extracting technology of Salvia miltiorrhiza and Panax notoginseng was: 8 times of 70% ethanol ultrasonic extraction of 3 times, each time 60min, merged fi ltrate and fi ltering; the residue was ultrasonically extracted 2 times with 10 times of water, each time 30min; merged the water solution, alcohol precipitation to the alcohol content of 50% and fi ltering; merged the fi ltrate and alcohol extract, recycled ethanol and froze drying.Conclusions:The co-extracting technology of Salvia miltiorrhiza and Panax notoginseng in Compound Danshen preparation in this study is stable and simple, and the extraction effi ciency is fairly high.

Compound Danshen preparation; Salvia miltiorrhiza; Panax notoginseng; Co-extraction technology;Orthogonal test

R283

】A

1004-6879（2017）06-0451-03

* 河北省高校重點(diǎn)學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目資助

△ 通訊作者

2017-03-03）