不同期食管癌患者血清葉酸水平的研究

汪 瑞 孫桂菊* 童建東 殷旭東 袁 昕

（1 江蘇省揚州市第一人民醫(yī)院腫瘤科，江蘇 揚州 225009；2 東南大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，江蘇 南京 210009）

不同期食管癌患者血清葉酸水平的研究

汪 瑞1孫桂菊2* 童建東1殷旭東1袁 昕1

（1 江蘇省揚州市第一人民醫(yī)院腫瘤科，江蘇 揚州 225009；2 東南大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，江蘇 南京 210009）

目的 分析食管癌患者外周血血清葉酸水平與腫瘤分期的關(guān)系，探討葉酸在食管癌發(fā)生發(fā)展中的意義。方法①食管癌患者來自2011年2月至2011年12月經(jīng)揚州市第一人民醫(yī)院確診的72例新發(fā)病例；②通過酶聯(lián)免疫吸附法檢測食管癌患者血清葉酸水平。結(jié)果所研究食管癌患者，其中Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期分別為24、23、25例，葉酸水平分別為（單位：μg/L）65.0±40.0，37.4±10.0，21.9±5.4，差別具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001）。結(jié)論隨著患者疾病分期進展，血清葉酸水平依次降低，提示葉酸水平與食管癌發(fā)生發(fā)展均有關(guān)聯(lián)。

食管癌；血清葉酸

近20余年來，微量營養(yǎng)素與食管癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系越來越受關(guān)注，尤其是其中的抗氧化劑以及某些對食管上皮具有保護作用的維生素。葉酸（folic acid，F(xiàn)A或folate）是人體內(nèi)必需的B族維生素，在人體內(nèi)，葉酸以四氫葉酸的形式發(fā)揮作用[1]。本研究通過分析不同分期食管癌患者外周血血清葉酸的水平，探討其在食管癌發(fā)生發(fā)展中的意義，為防治食管癌提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究對象：患者均來自2011年2月至2011年12月經(jīng)揚州市第一人民醫(yī)院確診的72例新發(fā)病例，均有病理組織學(xué)診斷依據(jù)。

患者的納入標準：①均為揚州當?shù)爻Ｗ∪丝?，在當?shù)鼐幼?0年及以上；②均行電子胃鏡檢查，并取得食管組織經(jīng)病理學(xué)確診；③食管癌的分期參照1997年UICC食管癌國際TNM分期；④排除罹患其他惡性腫瘤。

1.2 內(nèi)容與方法

1.2.1 研究內(nèi)容：研究內(nèi)容為血液樣本的檢測。檢測不同分期食管癌患者血清葉酸的水平。

1.2.2 血液標本的采集和檢測。采集方法：食管癌患者在第1次入院時，并在放化療前采血；清晨，空腹12 h，普通試管肘靜脈采血5 mL，待樣品充分凝結(jié)后，1 h內(nèi)離心分離血清（3000 r/min，10 min），分離后血清置于-20 ℃低溫冰箱內(nèi)避光保存?zhèn)錅y。

檢測方法：血清葉酸水平測定采用酶聯(lián)免疫吸附法進行定量檢測，Elisa試劑盒由上?？婆d商貿(mào)有限公司提供。

儀器與試劑：①采血管：江蘇康健醫(yī)療用品有限公司，批號20100817。②乙二胺四乙酸鈉（EDTA）抗凝管：江蘇康健醫(yī)療用品有限公司，批號20100921。③EP管：江蘇康健醫(yī)療用品有限公司。④移液器：Eppendorf公司。⑤低溫離心機：長沙湘儀離心機儀器有限公司TGL-16M高速臺式冷凍離心機。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析：數(shù)據(jù)使用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，確定檢驗水準α=0.05，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

食管癌患者不同分期與葉酸水平的關(guān)系比較：食管癌患者Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期分別為24、23、25例，葉酸水平不符合正態(tài)性，所以這三組間的比較選擇秩和檢驗。使用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期食管癌患者葉酸水平（均數(shù)±標準差）分別為（單位：μg/L）：65.0±40.0，37.4±10.0，21.9±5.4，三組間比較采用方差分析，差別具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001）。具體見表1。

3 討 論

中國是是人口大國，食管癌的發(fā)病率和病死率均較高，占全世界的50%以上，研究食管癌的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)因素具有重要意義。

葉酸通常主要存在于各類蔬菜和水果中，為各類水果和蔬菜中一種非常重要的組成成分，人體卻不能自身合成，從膳食（主要是蔬菜和水果）中獲取是一條必需途徑。若蔬菜和水果攝入不足，就極易造成葉酸的缺乏。葉酸以及其輔酶對所有活細胞的生長、發(fā)育等功能都有著重要的影響。葉酸還對核酸的合成，以及細胞DNA、RNA、蛋白與磷脂分子的生物學(xué)甲基化產(chǎn)生重要的影響。目前，已有越來越多的證據(jù)可以證明：葉酸缺乏及代謝異常與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。如已有國外某些研究提出葉酸水平狀態(tài)可以調(diào)控結(jié)、直腸癌的發(fā)生；還有某些流行病學(xué)研究也發(fā)現(xiàn)：葉酸的狀態(tài)與宮頸、大腸、肺、食管、腦、胰腺以及乳腺等腫瘤的發(fā)生有關(guān)聯(lián)。

表1 食管癌分期與葉酸水平的關(guān)系（μg/L）

葉酸是一類化合物的統(tǒng)稱，是人體內(nèi)必需的B族維生素，在人體內(nèi)葉酸以四氫葉酸的形式起作用。葉酸的缺乏可影響DNA甲基化進程、DNA整合受阻，并且可使DNA修復(fù)受損，從而進一步改變腫瘤抑制基因的表達，促進腫瘤的形成。葉酸缺乏或代謝障礙參與腫瘤發(fā)病的機制非常復(fù)雜[2-4]，其可能機制包括：①DNA甲基化減低，DNA修復(fù)機制障礙；②致癌病毒對機體的作用增強；③尿嘧啶脫氧核苷酸取代胸腺嘧啶核苷酸摻入DNA，導(dǎo)致DNA股鏈斷裂；④影響細胞的凋亡作用。Fang等[5]研究也證實胃癌、腸癌組織中的癌基因普遍存在低甲基化現(xiàn)象，這些改變與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。而葉酸的供甲基作用，參與維持細胞DNA甲基化狀態(tài)，并抑制腫瘤細胞中癌基因的表達，從而可以阻止腫瘤組織進一步惡變。

機體攝入葉酸后，必須在細胞內(nèi)經(jīng)多個酶促反應(yīng)，進而代謝轉(zhuǎn)化才具有生理活性。因此，葉酸在代謝通路的正常運轉(zhuǎn)以及在保證細胞具有充足的活性方面也至關(guān)重要[6]。

近年來，眾多已有研究資料也表明：葉酸缺乏可以增加多種腫瘤發(fā)病風(fēng)險；如葉酸攝入正常但出現(xiàn)代謝障礙的個體也可能對腫瘤易感[7-10]。在我國上海地區(qū)的一項病例-對照研究表明：膳食中葉酸攝入量處于最低四分位的人群患乳腺癌的風(fēng)險比處于最高四分位的人群高1.6倍[11]。朱凡等[12]對142例常見診斷明確的惡性腫瘤患者測定其血清葉酸水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)各組惡性腫瘤患者的血清葉酸水平均值較正常對照組下降。王金桃等[13]對宮頸鱗癌新發(fā)病例和子宮肌瘤患者的對照研究發(fā)現(xiàn)：宮頸癌組膳食中葉酸攝入量和血清葉酸水平均低于子宮肌瘤組；特別是隨著血清葉酸水平的降低，患宮頸癌的危險性會增加。在葉酸攝入與胰腺癌發(fā)病關(guān)系方面，結(jié)果表明：飲食中葉酸攝入的增加是胰腺癌發(fā)生的保護性因素。朱舜時等[14]研究結(jié)果表明：給高風(fēng)險人群補充超出生理劑量的葉酸可減緩甚至逆轉(zhuǎn)腫瘤的發(fā)生。也有動物實驗表明，服用葉酸可降低二甲肼誘發(fā)Wistar大鼠罹患結(jié)腸癌的風(fēng)險。其機制可能與葉酸對DNA損傷修復(fù)酶的上調(diào)有關(guān)[15]。Xiao等[16]以小獵犬為研究對象，也觀察到葉酸對乙基亞硝基胍誘發(fā)胃部腫瘤具有預(yù)防作用。

在食管癌的研究中，也有病例對照研究支持大量攝入水果、蔬菜能降低食管癌發(fā)病率[17]。秦江梅等[18]發(fā)現(xiàn)，葉酸攝入量與哈薩克族食管癌有關(guān)聯(lián)，葉酸攝入量高為保護因素。郝婷等[19]也發(fā)現(xiàn)血清葉酸水平低時患食管癌的風(fēng)險會升高。

我們的研究顯示不同分期食管癌患者血清葉酸水平的差異，雖然不是直接反映病例組與對照組血清葉酸水平的差異，但也符合葉酸與腫瘤發(fā)生的關(guān)系。我們進一步發(fā)現(xiàn)，隨著患者疾病分期進展，血清葉酸水平依次降低，提示葉酸水平與食管癌發(fā)生發(fā)展均有關(guān)聯(lián)。因此，經(jīng)常食用蔬菜、豆類、水果、干果等富含葉酸食物，不僅能對食管癌發(fā)病起到一定預(yù)防作用，還可能對部分患者，如術(shù)后患者，起到延緩腫瘤進展的作用。

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*通訊作者：E-mail:guiju.sun@gmail.com