循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)在預(yù)測(cè)非小細(xì)胞肺癌化療療效中的應(yīng)用

鐘光華 劉麗賢 朱曉慧 唐 娉 黃云龍

循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)在預(yù)測(cè)非小細(xì)胞肺癌化療療效中的應(yīng)用

鐘光華 劉麗賢 朱曉慧 唐 娉 黃云龍

目的探討循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)在預(yù)測(cè)非小細(xì)胞肺癌化療療效中的應(yīng)用。方法選擇非小細(xì)胞肺癌患者(肺Ca組)共25例，另選擇慢性阻塞性疾病患者(COPD組)25例作為對(duì)比研究。入院后及化療2個(gè)周期后分別采集所有參與研究的人員靜脈血7.5 ml，利用密度梯度離心法富積循環(huán)腫瘤細(xì)胞，分析其與臨床特征及化療療效的關(guān)系。結(jié)果

肺Ca組循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽性率達(dá)72.00%，而COPD組陽性率為0，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽性表達(dá)與NSCLC病理類型、患者性別、年齡、吸煙情況等均無明顯關(guān)系(P>0.05)，僅與癌癥分期相關(guān)(P<0.05)。2個(gè)周期的化療結(jié)束，發(fā)現(xiàn)對(duì)循環(huán)腫瘤細(xì)胞數(shù)目的評(píng)價(jià)與實(shí)體腫瘤療效標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)大致吻合，差異不具備統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)這兩種評(píng)價(jià)方法呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(γ=-0.465P=0.021)。結(jié)論循環(huán)腫瘤細(xì)胞的存在與非小細(xì)胞肺癌的臨床分期及化療療效有密切關(guān)系，可以用來預(yù)測(cè)非小細(xì)胞肺癌的轉(zhuǎn)歸。

循環(huán)腫瘤細(xì)胞；非小細(xì)胞肺癌；預(yù)測(cè)；化療

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:1521～1523)

隨著環(huán)境污染程度增加，吸煙人群及被動(dòng)吸煙人群不斷擴(kuò)大，肺癌的發(fā)病率逐年升高[1]。在肺癌中，80%以上是非小細(xì)胞肺癌，常發(fā)生于中老年患者[2]。手術(shù)完全切除腫瘤是使患者達(dá)到“無瘤狀態(tài)”的最好方式，但對(duì)于晚期非小細(xì)胞肺癌患者，綜合治療可能更為安全有效。循環(huán)腫瘤細(xì)胞指腫瘤細(xì)胞進(jìn)入體循環(huán)，與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[3-4]。本研究通過對(duì)循環(huán)腫瘤細(xì)胞的探索，明確其與非小細(xì)胞肺癌臨床特征及化療療效的關(guān)系，探討其預(yù)測(cè)肺癌疾病轉(zhuǎn)歸的臨床價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選擇于2015年8月至2015年12月間我院收治的非小細(xì)胞肺癌患者25例(肺Ca組)，另選擇在我院接受治療的慢性阻塞性疾病患者25例(COPD組)作為對(duì)比研究。參選的非小細(xì)胞肺癌患者需滿足：①伴有咳嗽、咳血、痰中帶血等臨床表現(xiàn)；②經(jīng)胸部高分辨率CT、支氣管鏡檢查及病理活檢，診斷為晚期非小細(xì)胞肺癌明確，且為Ⅲ期或Ⅳ期患者；③均無化療禁忌證，血常規(guī)、肝腎功、心電圖都符合正常范圍。整個(gè)研究均在患者知情同意下進(jìn)行，并經(jīng)我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)實(shí)施。2組患者在性別、BMI、年齡、病程、癥狀表現(xiàn)以及吸煙史等一般資料方面沒有明顯的差異，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 2組患者一般資料比較

1.2 方法

入院后采集所有患者靜脈血7.5 ml，加入到肝素抗凝試管混勻。用磷酸鹽緩沖液混入其中，充分搖勻，加到細(xì)胞分離層面上，以2 000 r/min的轉(zhuǎn)速，離心3次，15 min/次。將富積到的細(xì)胞均勻涂在玻片上，使用人鼠抗Pan-細(xì)胞角蛋白(CK)(生產(chǎn)廠家：上海賓智生物科技有限公司)和4、6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)(生產(chǎn)廠家：上海久嶺化工有限公司)染色。最后采用免疫熒光顯微鏡(生產(chǎn)廠家：北京上六光儀器有限公司)觀察。整個(gè)操作過程注意避光、無污染。

非小細(xì)胞肺癌患者均采用相同的化療方案(紫杉醇+卡鉑)治療2個(gè)周期。化療期間每日常規(guī)用托烷司瓊止吐、還原性谷胱甘肽保肝及埃索美拉唑保胃等對(duì)癥支持治療?；熃Y(jié)束后復(fù)查血常規(guī)、胸部高分辨率CT判斷腫瘤是否得到緩解?；熃Y(jié)束后重新采集非小細(xì)胞肺癌患者的血清利用密度梯度離心法富積循環(huán)腫瘤細(xì)胞，判斷治療效果。

1.3 觀察指標(biāo)及療效判定

觀察到的循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽性標(biāo)準(zhǔn)為：①細(xì)胞呈圓形或橢圓形，體積明顯大于血細(xì)胞，形態(tài)完整；②可以同時(shí)被CK和DAPI染色。

化療療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)：①參照2009歐洲癌癥雜志發(fā)表的實(shí)體腫瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)(RECIST1.1)[5]分為部分緩解、穩(wěn)定、進(jìn)展。②循環(huán)腫瘤細(xì)胞數(shù)目評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)[6]：以7.5 ml靜脈血中腫瘤細(xì)胞減少1個(gè)以上為緩解、不變?yōu)榉€(wěn)定、增加1個(gè)以上為進(jìn)展。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 2組患者檢測(cè)循環(huán)腫瘤細(xì)胞情況的比較分析

肺Ca組循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽性率達(dá)72.00%(18/25)，而COPD組卻1例都沒有，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(μ=28.1250，P<0.05)。

2.2 循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽性表達(dá)與各因素的關(guān)系分析

在非小細(xì)胞肺癌患者中，循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽性表達(dá)與性別、年齡、吸煙情況、病理類型等均無明顯關(guān)系(P>0.05)，僅與癌癥分期相關(guān)(P<0.05)。見表2。

表2 比較循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽性與各因素的關(guān)系(例，%)

2.3 循環(huán)腫瘤細(xì)胞數(shù)目的評(píng)價(jià)與實(shí)體腫瘤療效評(píng)價(jià)的相關(guān)性

比較2個(gè)周期的化療治療效果，發(fā)現(xiàn)對(duì)循環(huán)腫瘤細(xì)胞數(shù)目的評(píng)價(jià)與實(shí)體腫瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)大致吻合，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)這兩種評(píng)價(jià)方法呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(γ=-0.465，P=0.021)。見表3。

表3 循環(huán)腫瘤細(xì)胞數(shù)目對(duì)療效的評(píng)價(jià)與實(shí)體腫瘤療效評(píng)價(jià)的相關(guān)性(例，%)

3 討論

根據(jù)世界衛(wèi)生組織2011年公布的數(shù)據(jù)顯示，肺癌在發(fā)病率和死亡率都高居全球癌癥首位[7]。傳統(tǒng)手術(shù)治療雖然可以使部分患者達(dá)到術(shù)后病除，但也有部分患者及時(shí)做了手術(shù)，不僅沒使病情好轉(zhuǎn)，反而因手術(shù)的創(chuàng)傷及術(shù)后并發(fā)癥，加快了死亡進(jìn)程。相關(guān)文獻(xiàn)表明，而今治療的方式還主要是以手術(shù)切除為主，輔以新輔助化療、放化療結(jié)合等綜合治療方法，能有效改善患者病情，延長(zhǎng)生存時(shí)間，達(dá)到“治愈”效果[8-10]。

Ⅳ期非小細(xì)胞肺癌患者由于失去了根治切除腫瘤的機(jī)會(huì)，通常采用綜合化療的方法，能夠得到一定治療療效。化療的根本目的是使腫瘤組織體積縮小、盡早殺滅轉(zhuǎn)移到他處的細(xì)胞，以保證患者的生存質(zhì)量[11]。由于腫瘤組織血流豐富，化療藥物可進(jìn)入體內(nèi)，有效殺死部分腫瘤細(xì)胞，達(dá)到縮小腫瘤體積的效果，降低肺癌分期，提高手術(shù)切除的可能性，改善患者生存質(zhì)量。而常規(guī)判定化療療效的方法通常包含肺部CT、血常規(guī)、腫瘤標(biāo)志物等間接手段，不能從根本上判斷是否局限了腫瘤擴(kuò)散[12]。

循環(huán)腫瘤細(xì)胞的提出，可以為診治非小細(xì)胞肺癌提供新思路。其可以是因腫瘤達(dá)到Ⅳ期后“被迫”轉(zhuǎn)到體循環(huán)內(nèi)，種植到新的轉(zhuǎn)移灶的傳遞員；也可能腫瘤臨床分期不高，但距離血管組織較近，血管壁被腫瘤組織長(zhǎng)期侵犯而擴(kuò)散入血，但只要能在外周血中檢測(cè)到循環(huán)腫瘤細(xì)胞，就預(yù)示著該患者的預(yù)后會(huì)較差[13]。我院通過研究發(fā)現(xiàn)外周血中循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽性表達(dá)率高達(dá)72.00%，而對(duì)照研究的25例慢性阻塞性肺疾病患者外周血中均無循環(huán)腫瘤細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)，說明了其表達(dá)的特異性。通過對(duì)該25例NSCLC患者的臨床特征進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽性表達(dá)與吸煙情況、性別、病理類型、年齡等均無明顯關(guān)系，而16例Ⅳ期患者表達(dá)率高達(dá)93.76%，9例Ⅲ期患者表達(dá)33.33%，說明其與臨床分期具有密切關(guān)系，也正驗(yàn)證了以上觀點(diǎn)。通過2個(gè)周期的化療治療，發(fā)現(xiàn)采用實(shí)體腫瘤評(píng)定法與腫瘤細(xì)胞數(shù)評(píng)定法得到的患者臨床療效評(píng)價(jià)大致相同，說明這兩種方法呈負(fù)相關(guān)性(γ=-0.46,P=0.021)，充分肯定了循環(huán)腫瘤細(xì)胞預(yù)測(cè)非小細(xì)胞肺癌化療療效的判定。

綜上所述，本研究認(rèn)為了解循環(huán)腫瘤細(xì)胞與非小細(xì)胞肺癌患者臨床特征的關(guān)系，對(duì)于完善晚期非小細(xì)胞肺癌的病因?qū)W和分子病理學(xué)理論、對(duì)于發(fā)現(xiàn)新的預(yù)測(cè)療效方法及患者預(yù)后的生物標(biāo)志物、對(duì)于提高非小細(xì)胞肺癌的早期診斷和治療水平具有重要的意義，也為如何通過影響循環(huán)腫瘤細(xì)胞表達(dá)水平而達(dá)到預(yù)防非小細(xì)胞肺癌的轉(zhuǎn)移打下理論基礎(chǔ)；另外也可以為新型抗非小細(xì)胞肺癌的藥物開發(fā)提供新的策略和思路，具有廣闊的應(yīng)用前景。

[1] 陳 鵬，李 雷.非小細(xì)胞肺癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)進(jìn)展〔J〕.中國(guó)腫瘤臨床，2013，10(14)：862-865.

[2] 王 加，潘世揚(yáng)，張炳峰，等.特異性循環(huán)肺癌細(xì)胞流式檢測(cè)參考區(qū)間的建立及在非小細(xì)胞肺癌化療中的應(yīng)用〔J〕.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2015，38(1)：45-48.

[3] 王漢萍，張 力.非小細(xì)胞肺癌患者中循環(huán)腫瘤細(xì)胞的預(yù)測(cè)作用〔J〕.癌癥進(jìn)展，2015，11(4)：369-375.

[4] Stella GM，Senetta R，Inghilleri S，et al.MET mutations are associated with aggressive and radioresistant brain metastatic non-small-cell lung cancer〔J〕.Neuro Oncol，2016，18(4)：598-599.

[5] 羅 闊，楊志祥.晚期非小細(xì)胞肺癌的化學(xué)治療進(jìn)展〔J〕.中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2015，12(8)：37-41.

[6] 王 純，盧宏達(dá).新輔助化療對(duì)局部晚期非小細(xì)胞肺癌腫瘤標(biāo)記物和淋巴細(xì)胞亞群的影響〔J〕.重慶醫(yī)學(xué)，2014，43(1)：61-63，66.

[7] Katayama R，Sakashita T，Yanagitani N.P-glycoprotein mediates ceritinib resistance in anaplastic lymphoma kinase-rearranged non-small cell lung cancer〔J〕.E Bio Medicine，2015，3：54-66.

[8] 萬佳蔚，嚴(yán)子禾，韓志君，等.NSCLC患者胸腔積液中腫瘤細(xì)胞的檢測(cè)價(jià)值〔J〕.江蘇醫(yī)藥，2016，42(7)：778-780.

[9] 張 超.老年晚期非小細(xì)胞肺癌治療進(jìn)展〔J〕.現(xiàn)代診斷與治療，2015，23(11)：2426-2428.

[10] 程少毅，馮 征，周勇安，等.新輔助化療對(duì)局部晚期非小細(xì)胞肺癌患者術(shù)后生存質(zhì)量的影響〔J〕.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2014，14(13)：2465-2468.

[11] Mansfield AS，Dong H.Implications of programmed cell death 1 ligand 1 heterogeneity in the selection of patients with non-small cell lung cancer to receive immunotherapy〔J〕.Clin Pharmacol Ther，2016，100(3)：220-222.

[12] 陳 燕，李 虎，秦 琴,等.非小細(xì)胞肺癌患者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測(cè)及與病理分期關(guān)系〔J〕.臨床軍醫(yī)雜志，2014，42(2)：192-194.

[13] 萬佳蔚，沈洪遠(yuǎn)，黃紅宇,等.非小細(xì)胞肺癌患者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞與臨床特征關(guān)系的初步研究〔J〕.臨床與病理雜志，2015，35(1)：43-47.

(編輯：甘艷)

DetectionofCirculatingTumorCellsinPredictingNon-smallCellLungCancerChemotherapy

ZHONGGuanghua，LIULixian，ZHUXiaohui，etal.

ChanchengCentralHospital，F(xiàn)oshan,528000

ObjectiveTo analyze detection of circulating tumor cells in predicting non-small cell lung cancer chemotherapy.MethodsSelect 25 case of non-small cell lung cancer and 25 patients with chronic obstructive pulmonary disease as a comparative study.Collecting 7.5 mL blood from all persons who were participating in the study after 2 cycles of chemotherapy and after admission，Density gradient centrifugation enrichment of circulating tumor cells and analyze the relationship between clinical features and efficacy of chemotherapy.ResultsCirculating tumor cells in both groups were found，the number of positive cases of pulmonary Ca group reached 72.00%，while positive cases of the COPD group was 0，the difference was obvious，there had statistical significance(P<0.05).There was no significant correlation of positive expression with age，gender，smoking status，pathological type，etc，the difference had no statistical significance(P>0.05)，only related with the staging of cancer(P<0.05).After 2 cycles of chemotherapy，evaluation of circulating tumor cells and clinical evaluation criteria in solid tumor were coincident(P>0.05).The 2 methods were negatively correlated(γ=-0.465P=0.021).ConclusionThe presence of clinical stage and chemotherapy for non-small cell lung cancer is closely related to circulating tumor cells，which can be used to predict the prognosis of non-small cell lung cancer.

Circulating tumor cells；Non-small cell lung cancer；Prediction；Chemotherapy

528000 廣東省佛山市禪城區(qū)中心醫(yī)院

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.09.037

R734.2

A

1001-5930(2017)09-1521-03

2016-09-08

2017-03-23)