多肉植物吸財樹組培快繁技術(shù)

管 菊，萬 勁，陳嘉裔

(1.西南林業(yè)大學(xué) 園林學(xué)院，云南 昆明 650224； 2.三江學(xué)院 建筑學(xué)院，江蘇 南京 210012； 3.東南大學(xué) 成賢學(xué)院，江蘇 南京 210088)

多肉植物吸財樹組培快繁技術(shù)

管 菊1，萬 勁2，陳嘉裔3*

(1.西南林業(yè)大學(xué) 園林學(xué)院，云南 昆明 650224； 2.三江學(xué)院 建筑學(xué)院，江蘇 南京 210012； 3.東南大學(xué) 成賢學(xué)院，江蘇 南京 210088)

分別以吸財樹葉片、莖段為外植體，誘導(dǎo)建立無菌快繁體系；在此基礎(chǔ)上，篩選適合吸財樹組培快繁不同生長階段的最適培養(yǎng)基以及煉苗移栽方法。結(jié)果表明：以莖段為外植體，采用75%乙醇處理15 s，0.1% HgCl2處理12 min為吸財樹的最佳消毒處理方法；MS+2 mg·L-16-BA+0.1 mg·L-1NAA為最佳誘導(dǎo)配方，每株叢生芽誘導(dǎo)量可達(dá)4.21個；MS+1 mg·L-1KT+0.1 mg·L-1NAA可使植物保持正常狀態(tài)，并且達(dá)到最高增殖倍數(shù)6.54；經(jīng)瓶內(nèi)誘導(dǎo)生根的組培苗在保持濕潤的介質(zhì)中生長最好、成活率最高，為吸財樹最優(yōu)煉苗處理方法。

吸財樹； 組織培養(yǎng)； 多肉植物； 培養(yǎng)基

吸財樹(CrassulaobliqueGollum)是以觀葉為主的景天科青鎖龍屬多肉植物，原產(chǎn)地南非納塔爾省。植株形態(tài)呈多分支的灌木狀，莖明顯，葉密集互生于莖的頂端、肉質(zhì)筒狀，故又稱筒葉花月，是一種理想的室內(nèi)小型觀葉植物，具有很高的觀賞價值[1]。本實驗通過對吸財樹組織培養(yǎng)過程中無菌體系建立、高效增殖培養(yǎng)途徑、生根煉苗等關(guān)鍵環(huán)節(jié)的研究，獲取最適宜培養(yǎng)基、最佳的增殖配方以及適當(dāng)?shù)某銎糠N植方法，從而為吸財樹的規(guī)模化繁育工作提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1材料

以西南林業(yè)大學(xué)大棚內(nèi)種植的多肉植物吸財樹為試驗材料，選取長勢良好的植株上莖段與葉片為供試材料。葉片要求為從基部與莖段分離的完整葉片，葉片飽滿挺拔、表面無傷痕；莖段要求為當(dāng)年生幼嫩莖段，表面無傷痕、無蟲害。

1.2方法

1.2.1 培養(yǎng)條件

使用三洋MLR-351植物培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25 ℃，濕度80%，光強2 000 lx，光周期16 h/8 h(L/D)。

1.2.2 材料預(yù)處理與無菌體系建立

剪取材料后，將材料先置于洗衣粉中浸泡約10 min，在浸泡過程中，用軟毛刷輕輕刷洗，清除材料表面殘留的土壤灰塵等污物，后再將材料用自來水沖洗約3 h，沖洗完成后將材料置于滅菌的空瓶中待用。無菌體系的建立：以葉片、莖段2種不同材料為外植體，0.1% HgCl2消毒處理不同時間為消毒方法，以此比較不同外植體材料在不同消毒時間下的消毒效果。試驗每瓶接種1棵，每個處理20瓶，3次重復(fù)。5 d后開始記錄污染率、污染類型、死亡率，之后每日記錄1次，15 d后結(jié)束記錄。

1.2.3 吸財樹叢生芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)

以MS為基本培養(yǎng)基，分別添加不同濃度的NAA和6-BA，使用先前試驗中所得的最適外植體材料以及最適消毒方法，將外植體分別接種于添加不同濃度激素的培養(yǎng)基中，每種處理接20瓶，每瓶接種1棵，重復(fù)3次，60 d后統(tǒng)計叢生芽誘導(dǎo)情況。

1.2.4 不同濃度6-BA、KT對吸財樹叢生芽增殖的影響

均采用單因素試驗設(shè)計，以MS培養(yǎng)基+0.1 mg·L-1NAA作為基本培養(yǎng)基，分別加入不同濃度的6-BA或KT，每個處理20瓶，每瓶接3～5叢叢生芽，重復(fù)3次，45 d后統(tǒng)計不同濃度6-BA、KT處理下的叢生芽增殖系數(shù)及長勢。

1.2.5 吸財樹組培苗的生根壯苗培養(yǎng)與煉苗移栽

參考相關(guān)文獻(xiàn)資料及實際培養(yǎng)情況，由于吸財樹在培養(yǎng)各環(huán)節(jié)中均有根系產(chǎn)生，屬于易生根類型植物，故生根壯苗培養(yǎng)直接采用1/2 MS培養(yǎng)基進(jìn)行。煉苗移栽采用椰糠+珍珠巖(體積比1∶1)作為煉苗基質(zhì)，121 ℃高壓蒸汽對基質(zhì)進(jìn)行消毒滅菌。由于多肉植物與常規(guī)草本植物有一定區(qū)別，故分別選取未經(jīng)生根培養(yǎng)、經(jīng)過生根培養(yǎng)且根長為3～5 cm的2種材料進(jìn)行煉苗培養(yǎng)。先將待煉苗瓶口打開，逐漸與外界環(huán)境接觸，提高其適應(yīng)能力，5 d后將小苗取出，在自來水下用鑷子、軟毛刷等洗凈附著的培養(yǎng)基，種于含水量不同的基質(zhì)中。煉苗培養(yǎng)共設(shè)4個處理組：處理組1用未生根苗，基質(zhì)保持濕潤；處理組2用生根苗，基質(zhì)保持濕潤；處理組3用未生根苗，基質(zhì)保持干燥；處理組4用生根苗，基質(zhì)保持干燥。每處理接種20苗，3次重復(fù)，保持空氣濕度在70%以上，45 d后統(tǒng)計成活率。

2 結(jié)果與分析

2.1不同器官及不同HgCl2消毒時間對外植體成活率的影響

試驗結(jié)果見表1，隨著HgCl2消毒時間的增加，外植體污染率大幅降低，說明使用HgCl2處理對材料表面所攜帶的污染物具有較好的滅殺效果，2種外植體通過HgCl2滅菌均可以有效建立無菌體系。同時，以莖段為外植體的處理組5 d污染率、15 d污染率等指標(biāo)較葉片為外植體的處理組明顯偏高，這說明吸財樹莖段材料可能存在一定的消毒死角、內(nèi)生菌等問題，這可能是由于多肉植物生長速度慢、葉片集生造成的[2]。而在后續(xù)實驗中，我們還發(fā)現(xiàn)在相同培養(yǎng)基下，以葉片為外植體的處理組雖然能夠存活，但存在明顯的僵苗問題，部分

葉片甚至半年后仍然保持接入初期的模樣，不死亡、不生長，這一問題對于組培來說無疑是非常嚴(yán)重的，這可能與植物體自身特性有關(guān)，也可能是消毒處理時升汞毒害所導(dǎo)致[3]；而以莖段為外植體的處理，雖然污染率相對較高，但叢生芽萌發(fā)時間明顯早于葉片，故綜合考慮，外植體選材以莖段為宜，HgCl2消毒時長以12 min為宜。

表1 不同植物器官及不同HgCl2消毒時間對外植體的影響

2.2不同培養(yǎng)基中吸財樹叢生芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)

結(jié)果如表2、圖1所示。叢生芽誘導(dǎo)量與6-BA含量呈極顯著的相關(guān)關(guān)系(P<0.01)，與NAA含量呈不顯著負(fù)的相關(guān)。當(dāng)6-BA含量低于2 mg·L-1時，外植體均無叢生芽產(chǎn)生，而當(dāng)6-BA添加量達(dá)到3 mg·L-1時，產(chǎn)生的叢生芽出現(xiàn)明顯玻璃化現(xiàn)象。因此，MS+2 mg·L-16-BA+0.1 mg·L-1NAA為最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基，吸財樹每株叢生芽誘導(dǎo)量可達(dá)4.21叢。

表2 不同培養(yǎng)基的叢生芽誘導(dǎo)情況

注：+號數(shù)量表示長勢情況，越多表示叢生芽長勢越好。

圖1 吸財樹叢生芽的誘導(dǎo)、增殖情況

2.3不同濃度6-BA、KT對吸財樹叢生芽增殖的影響

6-BA對叢生芽增殖的影響如表3所示。在本實驗梯度內(nèi)，增殖倍數(shù)隨著6-BA濃度的增加而增加，但當(dāng)6-BA濃度達(dá)到3 mg·L-1時，叢生芽開始變得透明，出現(xiàn)和叢生芽誘導(dǎo)時相似的嚴(yán)重玻璃化現(xiàn)象，無法繼續(xù)增殖繼代，說明過高濃度的6-BA并不利于叢生芽的增殖。6-BA濃度為2 mg·L-1、NAA濃度為0.1 mg·L-1時，增殖倍數(shù)可達(dá)4.61，且長勢相對較好，為本組最優(yōu)激素組合。

表3 不同濃度6-BA對吸財樹叢生芽增殖的影響

注：+號數(shù)量表示長勢情況，越少表示越趨向于玻璃化，越多表示叢生芽越壯。表4同。

KT對叢生芽增殖的影響如表4所示。在本實驗梯度內(nèi)，增殖倍數(shù)也隨著KT濃度的升高先增加而后略微下降，KT濃度為0～2 mg·L-1時，增殖倍數(shù)隨著KT濃度的增加而上升；當(dāng)KT濃度超過2 mg·L-1時，增殖倍數(shù)出現(xiàn)下降情況，同時叢生芽開始變得透明，出現(xiàn)較為嚴(yán)重的玻璃化現(xiàn)象，無法繼續(xù)增殖繼代。KT濃度為1 mg·L-1、NAA濃度為0.1 mg·L-1時，增殖倍數(shù)可達(dá)6.54，且長勢相對較好，為本組最優(yōu)激素組合。

表4 不同濃度KT對吸財樹叢生芽增殖的影響

在6-BA實驗組中，植物正常狀態(tài)下最高增殖倍數(shù)為4.61；而在KT實驗組中，植物正常狀態(tài)下最高增殖倍數(shù)可達(dá)6.54，說明KT更適于作為細(xì)胞分裂素應(yīng)用于吸財樹組織培養(yǎng)。

2.4吸財樹組培苗的生根壯苗培養(yǎng)與煉苗移栽

將組培苗轉(zhuǎn)接入1/2 MS生根壯苗培養(yǎng)基中，組培苗很快即有根系產(chǎn)生，且植株后續(xù)生長茁壯，葉片截面邊緣呈現(xiàn)出應(yīng)有的紅色，說明吸財樹是一種較易生根復(fù)壯的植物。煉苗移栽實驗結(jié)果見表5，將帶根的組培苗移栽于干燥介質(zhì)中，根系很快便出現(xiàn)死亡，大部分植株均出現(xiàn)萎蔫，嚴(yán)重的甚至出現(xiàn)死亡，41 d后才有新根出現(xiàn)。切根的組培苗移栽入保持干燥的介質(zhì)中，大部分植株也出現(xiàn)輕度萎蔫甚至死亡，36 d左右出現(xiàn)新根，說明干燥環(huán)境不利于吸財樹組培苗的煉苗。而在濕潤的介質(zhì)中，切根后的組培苗傷口極易腐爛從而導(dǎo)致植株死亡，說明此方法也不適宜。帶根的組培苗在保持濕潤的介質(zhì)中生長最好，移栽后不萎蔫，發(fā)根速度快，成活率最高，為吸財樹的最優(yōu)煉苗方法。

表5 吸財樹煉苗移栽45 d后生長情況

3 討論

不同的多肉植物根據(jù)自身特性的不同，可以采用不同的誘導(dǎo)方式及增殖手法來進(jìn)行組培擴(kuò)繁。在實際操作中，需要視不同植物的生長情況進(jìn)行科學(xué)選擇，如玉露、條紋十二卷、壽等這些多肉植物，由于葉片、莖段不易獲取，只能使用花莖等材料作為外植體，故必須通過誘導(dǎo)愈傷組織或GGB，通過分化產(chǎn)生叢生芽建立擴(kuò)繁體系[4-5]。而對于吸財樹以及白牡丹、初戀、冬美人等這類易于獲取葉片、莖段的多肉植物，可通過外植體直接誘導(dǎo)叢生芽進(jìn)而獲得高效增殖擴(kuò)繁體系[6]，若對其進(jìn)行愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)反而影響了其增殖進(jìn)程，沒有意義。

在吸財樹叢生芽的增殖培養(yǎng)過程中，本實驗僅對6-BA、KT分別進(jìn)行了單因素實驗，得出KT效果優(yōu)于6-BA，更有利于外植體的增殖培養(yǎng)；但實驗中并未對6-BA、KT進(jìn)行組合實驗。有研究報道，多肉植物白銀壽在NAA與KT、6-BA組合下可達(dá)到更好的增殖效果[7]，在吸財樹上是否也如此，還有待進(jìn)一步進(jìn)行研究。

在常規(guī)多肉植物煉苗移栽過程中，一般采用較為干燥的基質(zhì)，但本研究中，干燥基質(zhì)并不適用于吸財樹。吸財樹無菌苗的適宜煉苗方法與草本植物組培煉苗類似[8]，需要瓶內(nèi)生根，栽培時基質(zhì)需要保持一定的濕度，這可能是吸財樹生境及由此形成的一些自身特性所決定的，具體是哪些因素，也有待進(jìn)行研究。

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收入日期：2017-06-17

西南林業(yè)大學(xué)科技創(chuàng)新項目(C16051)

管 菊(1991—)，女，云南宣威人，碩士研究生，研究方向為觀賞植物繁殖與栽培，E-mail：710029000@qq.com。

陳嘉裔，從事園林綠化工作，E-mail：wansju@foxmail.com。

文獻(xiàn)著錄格式：管菊，萬勁，陳嘉裔. 多肉植物吸財樹組培快繁技術(shù)[J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，58(10)：1829-1831，1836.

10.16178/j.issn.0528-9017.20171046

S682.36

B

0528-9017(2017)10-1829-03

(責(zé)任編輯侯春曉)