浙江省鐵皮石斛病害的發(fā)生及調(diào)查

謝昀燁，方 麗，王連平，王漢榮

(浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 植物保護與微生物研究所，浙江 杭州 310021)

浙江省鐵皮石斛病害的發(fā)生及調(diào)查

謝昀燁，方 麗，王連平，王漢榮*

(浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 植物保護與微生物研究所，浙江 杭州 310021)

對浙江省18個地區(qū)的鐵皮石斛種植園內(nèi)的病害進行調(diào)查，共發(fā)現(xiàn)12種病害，其中莖葉部病害3種，為漆斑病、灰霉病和褐斑??；根部病害有2種，為鐮刀菌枯萎病和白娟??；基質(zhì)病害有2種，為白羽紋病和木腐病；生理性病害有4種，為黑斑病、濕腐病、枯心病和萎蔫病；同時在浙江省的鐵皮石斛栽培的基質(zhì)和植株上發(fā)現(xiàn)了黏菌的存在。

中藥材； 鐵皮石斛； 病害； 浙江

鐵皮石斛(DendrobiumofficinaleKimura et Migo)為蘭科石斛屬多年生草本植物，主要分布于中國浙江、安徽、福建、廣西、云南等地區(qū)。鐵皮石斛在石斛屬植物中多糖含量最高，同時富含多種氨基酸和微量元素，具有很好的免疫調(diào)節(jié)作用[1-5]。鐵皮石斛中的生物堿類化合物具有解熱鎮(zhèn)痛和抗腫瘤的作用[6-7]。20世紀(jì)90年代以前，鐵皮石斛主要依靠野生資源。由于毀滅性采挖、生存環(huán)境的破壞以及自身繁殖能力低下，野生資源基本枯竭，1987年國務(wù)院將其列為國家2級保護植物[8]。隨著野生資源的成功移栽，浙江等省實現(xiàn)了鐵皮石斛的人工栽培和大規(guī)模種植。目前浙江省的石斛產(chǎn)業(yè)化基地已超過100個，種植面積高達2 000 hm2。鐵皮石斛產(chǎn)業(yè)的發(fā)展不僅提高了浙江省鐵皮石斛的經(jīng)濟產(chǎn)值，還推動了我國中藥材產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。但是隨著浙江省鐵皮石斛的大面積人工栽培，其病蟲害的發(fā)生也逐年增加，據(jù)報道，鐵皮石斛主要病害有炭疽病、黑斑病、軟腐病、白絹病、莖基腐病等[9-13]。自2013年1月至2016年8月，作者針對浙江省主要鐵皮石斛生產(chǎn)基地進行了鐵皮石斛病害的普查，以期為浙江省鐵皮石斛病害防治提供基礎(chǔ)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 病害標(biāo)本的采集

通過直接到基地采集，或生產(chǎn)大戶、企業(yè)、合作社快遞等方式，從杭州、樂清、瑞安、金華等17個鐵皮石斛生產(chǎn)基地，采集到鐵皮石斛病葉、病莖、發(fā)病基質(zhì)樣本共計1 389份，其中杭州186份、樂清237份、瑞安14份、金華154份、溫嶺36份、臨海51份、新昌165份、天臺72份、東陽4份、龍泉47份、磐安69份、武義21份、麗水36份、黃巖23份、建德175份、龍游146份、嵊州23份、諸暨6份。采集的病害標(biāo)本保存于4 ℃冰箱，便于觀察及鑒定。

1.2 病原菌的分離

采用組織分離法對鐵皮石斛病害標(biāo)本進行病原菌分離，剪去病健交界處組織，消毒后放置于培養(yǎng)基平板中恒溫培養(yǎng)，因不同真菌的生物學(xué)特性有區(qū)別，實驗室常采用不同培養(yǎng)基質(zhì)和溫度針對不同真菌進行培養(yǎng)，常用培養(yǎng)溫度為25 ℃，常用的分離的培養(yǎng)基有PDA、OMA和CMA等[14]。

1.3 病原菌的鑒定

對采集的鐵皮石斛病害標(biāo)本進行實驗室內(nèi)顯微觀察，根據(jù)其形態(tài)學(xué)特征進行鑒定。對分離純化得到的病原真菌菌株進行分子鑒定。病原真菌菌絲DNA提取后對其rDNA-ITS區(qū)間進行序列擴增，將其擴增的序列提交至Genbank中進行序列比對，進一步確定其病原名稱。因不同真菌的基因有差別，不同真菌種類的分子鑒定區(qū)間不同，真菌常見的序列區(qū)間有EF-1α、β-tubulin和action等。

1.4 致病性測定

根據(jù)柯赫氏法則[15]，將分離得到的病原菌菌株回接到健康的寄主植物上，觀察其發(fā)病情況，確定其對寄主植物的致病性。生理性病害采用盆栽過量葉面施肥試驗等確定。

2 結(jié)果與分析

病葉、病莖、發(fā)病基質(zhì)樣本通過顯微鏡鏡檢，采用PDA、NA、OMA等多個培養(yǎng)基進行組織分離，分離得到了漆斑病菌、灰霉病菌、褐斑病菌、白娟病菌、枯萎病菌、白紋羽病等6個真菌性的病原菌菌株，經(jīng)對鐵皮石斛的致病性測定均對其具有致病性。另外還分離到木腐病菌、黏菌等對鐵皮石斛的栽培基質(zhì)具有寄生性的菌類。還有1種水分過量造成的生理性萎蔫病和黑斑病、濕腐病、枯心病等3種氮肥過量造成的生理性病害(表1)。

表1 浙江省鐵皮石斛病害種類及其樣本來源

2.1 漆斑病

漆斑病主要侵染鐵皮石斛的葉片，以及衰老的葉鞘和花梗，衰老或休眠的莖干。葉片染病后病斑初呈淡褐色至黑褐色的小點，后小點漸漸擴大，直至1～2 mm大小。病斑圓形或橢圓形，中間凹陷，灰白色，病健交界處似圍繞一條淡褐色至黑褐色的邊界線。嚴(yán)重時，較老的葉片上出現(xiàn)許多大小不一的病斑，一般新葉不染病。當(dāng)葉鞘和花梗衰老變得灰白時易染病，染病后在其上長出黑色小點，即病原菌的分生孢子器。衰老而灰白的葉鞘和花梗染病后常引起衰老或休眠莖干的頂部枯死，其上有時也長出黑色小點，即病原菌的分生孢子器。

2.2 灰霉病

灰霉病主要侵染鐵皮石斛的葉片及嫩莖。葉片染病后病斑初呈淡褐色至黑褐色的小點，后小點漸漸擴大，有時呈輪紋狀，病健交界處常有褐色至深褐色的暈圈；病斑圓形或橢圓形，淡褐色至黑褐色，中間凹陷，最大病斑可達鐵皮石斛葉片的邊緣。在深秋、冬季和早春石斛發(fā)病后葉片常發(fā)黃，或枯死，或脫落。發(fā)黃的病葉帶有橘紅色，其上病斑則呈淡褐色至黑褐色，病斑與發(fā)黃葉部交界處常常有或淺或深的綠色暈圈，病斑上，尤其是病斑中心常長有灰褐色的霉層，即病原菌的分生孢子。這些發(fā)黃的病葉輕輕碰觸，即可脫落。在深秋、冬季和早春田間濕度高時，葉片、嫩梢以及枯黃的葉片有時會出現(xiàn)大量水漬狀的濕腐，并在病斑上產(chǎn)生大量的灰褐色的霉層，即病原菌的分生孢子。

2.3 褐斑病

褐斑病僅侵染鐵皮石斛的葉片。葉片染病后病斑初呈淡褐色至黑褐色的小點，后小點漸漸擴大，最大病斑5～6 mm。病斑圓形或橢圓形，淡褐色至黑褐色，有時病健交界處有一圈褐色的暈圈。病斑中間凹陷。嚴(yán)重時，葉片上出現(xiàn)許多大小不一的病斑，一般新葉不染病。

2.4 白娟病

白娟病病原菌主要為害植株近基質(zhì)的莖基部，在夏季高溫高濕或基質(zhì)偏酸時易發(fā)生。此病發(fā)生時，在基質(zhì)表面可見絹狀菌絲，并在中心部位形成褐色小菌核，植株近基質(zhì)的莖上會出現(xiàn)黃色至淡褐色的病斑，絲狀物可在基質(zhì)表面及莖葉部位蔓延，后期病斑變成褐色至黑褐色。該病可導(dǎo)致植株基部腐爛并向莖上部及葉擴展，感染部位腐爛變軟，植株很快腐爛并死亡。

2.5 枯萎病

枯萎病主要為害植株的根部。病原菌侵染鐵皮石斛根系后引起植株萎蔫，根系枯死。植株基部莖干表皮變得粗糙，間或有裂縫，濕度大時可見白色或粉紅色霉?fàn)钗?，有些在莖基部還能看到水浸狀病斑。橫切或縱切莖基部，均可見維管束有褐色或黑褐色的環(huán)變。

2.6 白紋羽病

白紋羽病主要侵染鐵皮石斛的根系。病原菌侵染根系后引起根系枯黃壞死，在根系及基質(zhì)中形成大量的白色或略帶棕褐色的菌絲層或菌絲索，結(jié)構(gòu)比較疏松柔軟。菌絲索可以擴展到基質(zhì)中，變成較細的菌索，填滿基質(zhì)中的空隙，拔起發(fā)病的鐵皮石斛植株可見白色菌絲將根系與基質(zhì)纏繞成團。菌絲層上可生長出黑色的菌核。與健康的鐵皮石斛植株相比，發(fā)病的鐵皮石斛植株葉片不夠鮮活，并呈現(xiàn)缺水狀的輕度扭曲，葉片漸漸黃化，自下而上出現(xiàn)枯黃、脫落，枯黃的葉片常帶有橘紅色，新枝抽生減少或無，莖干的莖基部呈現(xiàn)皺縮或干枯狀。

2.7 木腐病

木腐病為多孔菌侵染定植鐵皮石斛的松樹皮基質(zhì)，而使松樹皮基質(zhì)與鐵皮石斛植株板結(jié)成白色、發(fā)硬的大菌塊，影響鐵皮石斛植株的發(fā)枝和生長。白色菌塊上的鐵皮石斛植株稀疏、矮小，植株莖干下部的葉片枯黃，枯黃的葉片常帶有橘紅色，使鐵皮石斛植株的產(chǎn)量和品質(zhì)銳減。

2.8 黏菌

在鐵皮石斛栽培田中常有美發(fā)菌和煤絨菌2種黏菌發(fā)生。美發(fā)菌子實體較小，生長在活體植物的莖、葉上。子實體初為白色，散布在寄主表面，呈粒狀小點，隨后呈乳白色。成熟的子實體呈暗褐色，肉眼觀察如同覆蓋了一層黑褐色霉層。煤絨菌子實體較大，腐生在栽培田中的基質(zhì)上，或覆蓋在整穴鐵皮石斛植株上。條件適宜時整穴植株完全被該菌覆蓋。由于黏菌子實體的遮蔽影響了植物正常的光合作用，導(dǎo)致植株矮化。

2.9 生理性病害

黑斑病是由于過量施用氮肥而引起的生理性病害，該病僅發(fā)生在鐵皮石斛的葉片上。該病的病斑大小1～2 mm，圓形或橢圓形，淡褐色至黑褐色，中間凹陷，病健分界清晰。

濕腐病是由于過量施用氮肥而引起的生理性病害，該病主要發(fā)生在鐵皮石斛的葉片、嫩梢和嫩莖上。在高溫季節(jié)，過量施用氮肥后，噴灌水分引起鐵皮石斛栽培環(huán)境高濕，從而引起成片鐵皮石斛植株的葉片、嫩梢和嫩莖呈水漬狀腐爛，較老的莖干呈淡褐色至棕褐色，濕腐的葉片干燥后呈淡褐色至黑褐色，嚴(yán)重影響鐵皮石斛植株的發(fā)枝和生長。

枯心病是由于過量施用氮肥而引起的生理性病害，該病主要發(fā)生在鐵皮石斛植株抽生的心葉上。過量施用氮肥后，引起鐵皮石斛植株抽生的心葉呈灰褐色枯死，其他葉片或葉尖上也會出現(xiàn)灰褐色枯死，具有突發(fā)性。

萎蔫病是由水分引起的生理性病害。該病是由于冬季鐵皮石斛的根系浸水而引起根系死亡，發(fā)病植株與健康植株相比，其葉片不夠鮮活，并呈現(xiàn)缺水狀的輕度扭曲，葉片黃化，莖干上發(fā)黃的葉片自下而上出現(xiàn)枯黃、脫落，枯黃的葉片常帶有橘紅色，鐵皮石斛植株呈萎蔫狀。

3 小結(jié)與討論

2013年至2016年對浙江省鐵皮石斛生長基地的病害調(diào)查，及進行實驗室分離鑒定的結(jié)果表明，鐵皮石斛發(fā)生的主要病害有漆斑病、灰霉病、褐斑病、白娟病、枯萎病、白紋羽病和木腐病，其中枯萎病、白紋羽病和木腐病是鐵皮石斛根部的主要病害。生理性病害有黑斑病、濕腐病和枯心病，在浙江省的鐵皮石斛的栽培基質(zhì)上同時發(fā)現(xiàn)了美發(fā)菌和煤絨菌等黏菌的存在。

鐵皮石斛主要種植于我國的浙江、廣西和云南各地區(qū)，因氣候和地理位置的不同，導(dǎo)致鐵皮石斛病害的發(fā)生也有所不同。寧沛恩[16]對廣西容縣的鐵皮石斛病害進行調(diào)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在容縣地區(qū)主要病害種類有炭疽病、細菌性軟腐病和花葉病毒病。陳爾等[17]對廣西林科院花卉所溫室大棚種植的鐵皮石斛病害進行了調(diào)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在溫室中的病害類型較多，主要有葉斑病、黑斑病、白娟病和軟腐病。蔣平對貴陽地區(qū)的鐵皮石斛病害的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，猝倒病、黑腐病、銹病、根腐病和疫病也有發(fā)生。在浙江省鐵皮石斛上的病害種類明顯比廣西地區(qū)多，最先在我國云南省發(fā)現(xiàn)鐵皮石斛漆斑病[18]，也第1次在浙江省大面積發(fā)生。由于不合理的種植，在浙江省大部分鐵皮石斛種植園中出現(xiàn)了大面積的生理性病害，如氮肥過量引起的黑斑病和濕腐病，水分過量引起的萎蔫病。因此在預(yù)防真菌性病害的同時也需要合理地種植和管理鐵皮石斛的生長。近年來，屠艷拉等[19]在浙江省鐵皮石斛栽培田中發(fā)現(xiàn)了美發(fā)菌和煤絨菌等2種黏菌，雖然黏菌不能直接使植物致病，但是它可以爬滿葉片甚至覆蓋整個植株，使鐵皮石斛的光合作用受到阻礙，嚴(yán)重影響了鐵皮石斛的生長。

目前，浙江省鐵皮石斛的種植面積不斷擴大，但在大規(guī)模集約化種植鐵皮石斛時，其病害的發(fā)生會越來越嚴(yán)重，這將會嚴(yán)重制約鐵皮石斛產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。其次，如果病害發(fā)生而采用不恰當(dāng)?shù)乃巹┓乐?，也會對鐵皮石斛產(chǎn)品的質(zhì)量安全造成風(fēng)險。因此，要明確浙江省鐵皮石斛上的病害種類，有效地進行農(nóng)業(yè)、物理、生態(tài)、生物等綠色防控技術(shù)的研發(fā)，以確保鐵皮石斛產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展。

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收入日期：2017-08-12

浙江省特色農(nóng)產(chǎn)品全產(chǎn)業(yè)鏈安全風(fēng)險管控項目；樂清院士工作站項目；樂清院地合作項目

謝昀燁(1987—)，女，吉林集安人，助理研究員，博士，從事蔬菜病害及其抗性研究工作，E-mail:xieyunqiao@126.com。

王漢榮，E-mail:wanghrg@126.com。

文獻著錄格式：謝昀燁，方麗，王連平，等. 浙江省鐵皮石斛病害的發(fā)生及調(diào)查[J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，58(10)：1757-1759，1762.

10.16178/j.issn.0528-9017.20171027

S567

A

0528-9017(2017)10-1757-03

(責(zé)任編輯張才德)