• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    基質(zhì)金屬蛋白酶-9基因多態(tài)性與2型糖尿病視網(wǎng)膜病變的相關(guān)性研究

    2017-11-02 03:35:08馬英慧董微麗崔秀成賈淑君
    河北醫(yī)學(xué) 2017年10期
    關(guān)鍵詞:等位基因蛋白酶多態(tài)性

    楊 潔, 馬英慧, 董微麗, 崔秀成, 石 晶, 賈淑君

    (承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院眼科, 河北 承德 067000)

    基質(zhì)金屬蛋白酶-9基因多態(tài)性與2型糖尿病視網(wǎng)膜病變的相關(guān)性研究

    楊 潔, 馬英慧, 董微麗, 崔秀成, 石 晶, 賈淑君

    (承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院眼科, 河北 承德067000)

    目的研究基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9) -1562C/T基因多態(tài)性與中國北方漢族人群2型糖尿病視網(wǎng)膜病變的關(guān)系。方法采用限制性片段長度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)(PCR-RFLP)方法檢測了180名健康對照者和400例2型糖尿病患者(其中單純2型糖尿病患者180例、糖尿病視網(wǎng)膜病變患者220例)的MMP-9基因型,比較各組之間基因型及等位基因頻率的差別。結(jié)果MMP-9-1562C/T正常對照組,糖尿病組,糖尿病視網(wǎng)膜病變組三組C、T等位基因頻率分別為8.3%,91.7%;7.8%,92.2%;91.4%,8.6%,三組等位基因頻率間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=790.09,P=0.000)。三組C/C,C/T,T/T基因型頻率分別為0%,16.7%,83.3%;2.2%,11.1%,86.7%;84.1%,14.5%,1.4%,三組基因型頻率之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=470.16,P=0.000),其中正常對照組與糖尿病視網(wǎng)膜病變組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);正常對照組與糖尿病組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.01);糖尿病組與糖尿病視網(wǎng)膜病變組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。與T等位基因型相比,C等位基因可能會增加2型糖尿病視網(wǎng)膜病變的發(fā)病風險。結(jié)論MMP-9基因-1562C/T多態(tài)性可能與2型糖尿病視網(wǎng)膜病變的發(fā)生有關(guān),T等位基因可能是2型糖尿病視網(wǎng)膜病變的保護基因。

    糖尿病視網(wǎng)膜病變; 基質(zhì)金屬蛋白酶-9; 基 因; 單核苷酸多態(tài)性

    糖尿病視網(wǎng)膜病變(diabetic retinopathy,DR)是2型糖尿病(diabetes mellitus,DM)患者中常見的并發(fā)癥,是導(dǎo)致2型糖尿病患者視力喪失的最主要的原因,嚴重影響了糖尿病患者的生存質(zhì)量,其發(fā)病機制至今尚未完全闡明[1]。糖尿病視網(wǎng)膜病變與多種危險因素密切相關(guān),如年齡、高血壓、性別等[2],但不同地區(qū)、不同種族患病率存在差異[3]。提示基因在糖尿病視網(wǎng)膜病變的發(fā)生、發(fā)展中可能起著重要的作用?;|(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)是基質(zhì)金屬蛋白酶家族(MMPs) 的一員, 主要參與血管基底膜主要結(jié)構(gòu)成分,IV型膠原的降解,與糖尿病血管病變密切相關(guān)[4]。MMP-9基因啟動子區(qū)-1562C/T,已經(jīng)被證實是一種能影響其功能的突變[5]。本研究旨在探討MMP-9基因-1562C/T多態(tài)性與2型糖尿病視網(wǎng)膜病變的關(guān)系。

    1 資料與方法

    1.1一般資料:本研究采用病例對照的研究方法。所有受試對象均為中國北方漢族人。病例來源:2014年5月至2015年8月我院內(nèi)分泌科收治的2型糖尿病患者400例,均經(jīng)1999年WHO 關(guān)于糖尿病的診斷標準[6]確診,其中單純2型糖尿病患者(DM組)180例,男91例,女89例;2型糖尿病視網(wǎng)膜病變患者(DR組)220例,男112例,女108例,所有2型糖尿病視網(wǎng)膜病變患者經(jīng)過檢查均不合并其他糖尿病并發(fā)癥。正常對照組為性別、年齡、地區(qū)與病例組相匹配的180名健康者,男92例,女88例,來自我院體檢中心。所有受檢者均接受詳細的眼科檢查,包括:最佳矯正視力、眼壓、裂隙燈顯微鏡、眼底照相等檢查。眼底照相可疑DR的受試者行眼底血管造影檢查以確診DR。DR的診斷標準參照文獻[7]。本研究經(jīng)承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院倫理委員會批準,所有受試者均告知研究目的并簽署知情同意書。

    1.2檢測方法

    1.2.1記錄所有受檢人員的姓名、性別、年齡以及身高、體重、糖尿病病程、空腹血糖、體重指數(shù)、收縮壓、舒張壓等指標。

    1.2.2受檢者DNA的提?。撼槿∷惺軝z人員肘靜脈血4mL,加EDTA抗凝,于-80℃保存,通過蛋白酶K消化-飽和氯化鈉鹽析法提取基因組DNA[8]。

    1.2.3MMP-9基因-1562C/T多態(tài)性檢測:應(yīng)用PCR-RFLP技術(shù)。引物序列參考文獻[2]設(shè)計,由上海生化生物工程公司合成,上游引物:5’-GCCTGGCACATAGATGGCCC-3’,下游引物:5’-CTTCCTAGCCAGCC-GGCATA-3’。PCR反應(yīng)體系為20μL,包括滅菌去離子水10.4μL,DNA模板2.0μL,Taq DNA聚合酶0.4μL,10×PCR緩沖液2.4μL,PCR染料2.4μL,三磷酸脫氧核糖核酸(dNTPs)0.4μL和上下游引物各1.0μL。PCR循環(huán)條件:95℃預(yù)變性5min;以后按95℃變性20s,50℃退火30s,72℃延伸40s,35個循環(huán)后,最后一步為72℃繼續(xù)延伸7min。10μL酶切反應(yīng)體系中加入8μL PCR產(chǎn)物后再加入10IU的限制性內(nèi)切酶,置于37℃水浴過夜消化。消化后的產(chǎn)物置于經(jīng)溴化乙錠染色的4%瓊脂糖凝膠中電泳。

    2 結(jié) 果

    2.1三組研究對象基本資料分析:正常對照組、DM組、DR組三組之在年齡、體重指數(shù)、收縮壓、舒張壓等指標均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。但空腹血糖三組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),病程DM組和DR組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(見表1)。

    表1 三組間臨床資料對比

    2.2MMP-9基因Hardy-Weinberg遺傳平衡性檢驗三組中CC、CT、TT 基因型分布觀測值與期望值之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),符合Hardy-Weinberg定律,說明能夠達到遺傳平衡,具有很好的群體代表性(見表2)。

    表2 MMP-9基因型頻率的Hardy-Weinberg 遺傳平衡性檢驗

    2.3MMP-9 C-1562T基因多態(tài)性和糖尿病視網(wǎng)膜病變的關(guān)系:( 見表3)。正常對照組, 糖尿病組, 糖尿病視網(wǎng)膜病變組三組C、T等位基因頻率分別為8.3%,91.7%;7.8%,92.2%;91.4%,8.6%。三組C和T等位基因頻率之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=790.09,P=0.000)。三組C/C,C/T,T/T 基因型頻率分別為0%,16.7%,83.3%;2.2%,11.1%,86.7%;84.1%,14.5%,1.4%。三組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=470.16,P=0.000)??ǚ椒指钸M行兩兩比較,認為P<0.01具有統(tǒng)計學(xué)意義。三組兩兩之間比較結(jié)果:正常對照組與糖尿病組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=6.12,P=0.047>0.01);糖尿病組與糖尿病視網(wǎng)膜病變組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=322.56,P=0.000<0.01);正常對照組與糖尿病視網(wǎng)膜病變組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=325.55,P=0.000<0.01)。與C/T+T/T基因型比較,C/C基因型有可能增加2型糖尿病視網(wǎng)膜病變的發(fā)病風險。

    2.4糖尿病視網(wǎng)膜病變相關(guān)危險因素分析:以有無糖尿病視網(wǎng)膜病變?yōu)橐蜃兞?有糖尿病視網(wǎng)膜病變=1,無糖尿病視網(wǎng)膜病變=0),自變量為:病程、空腹血糖及MMP-9-1562C/T分別進行多因素logistic回歸分析,結(jié)果顯示病程、空腹血糖及MMP-9基因啟動子區(qū)-1562C/C基因型是DR發(fā)生的危險因素(見表4)。

    3 討 論

    糖尿病視網(wǎng)膜病變是2型糖尿病最常見且最嚴重的微血管并發(fā)癥之一,對糖尿病患者的生活質(zhì)量造成了極為嚴重的影響。隨著全球糖尿病發(fā)病率的不斷升高,2013年全球糖尿病患者已高達3.82 億,估計到2035年將會高達5.92億[9];而在國內(nèi),2013年最數(shù)據(jù)顯示我國糖尿病發(fā)病率為11.6%,18 歲以上糖尿病患者約有1.14億[10]。近年來研究發(fā)現(xiàn)DR的發(fā)生與發(fā)展不僅與糖尿病的病程、血糖控制情況有關(guān),還受一定的遺傳因素[11]影響。目前認為DR的發(fā)病受多種基因的影響,其中每個基因都存在多態(tài)性現(xiàn)象。研究表明[12]多種基因多態(tài)性與DR有關(guān),如一氧化氮合酶、血管內(nèi)皮生長因子、糖基化終末產(chǎn)物受體、醛糖還原酶等基因多態(tài)性都與DR發(fā)生有關(guān)。

    基質(zhì)金屬蛋白酶 9(MMP-9)又稱IV型膠原酶, 在生理和病理條件下, MMP-9 可以降解許多細胞外基質(zhì)(ECM)成分, 對細胞遷移, 組織重建, 血管新生起重要作用[13]。近年研究指出, MMP-9 在糖尿病視網(wǎng)膜病進展中, 參與組織的破壞, 是其進展的值得引起注意的危險因子[14]。這種MMP-9基因多態(tài)性參與糖尿病視網(wǎng)膜病變的發(fā)病機制目前尚不清楚。人類的MMP-9基因位于20號染色體長臂的11 區(qū)1帶~13區(qū)1帶之間(20q11.1~13.1)。MMP-9的表達主要是轉(zhuǎn)錄水平被調(diào)節(jié),MMP-9基因啟動子區(qū)含有許多順式作用元件,這些順式作用元件在其轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)方面起非常重要的作用,其中就包括MMP-9基因啟動子-1562區(qū)域C/T基因多態(tài)位點,它是一個很重要的調(diào)節(jié)元件,可能是一個轉(zhuǎn)錄抑制因子蛋白的結(jié)合位點,影響MMP-9基因的轉(zhuǎn)錄水平[15]。當MMP-9基因-1562位點C突變成基因T以后,DNA-蛋白質(zhì)的相互作用被消除,由此產(chǎn)生高的啟動子轉(zhuǎn)錄活性[16],導(dǎo)致MMP-9的表達增加,從而加速了Ⅳ型膠原的降解,減少了視網(wǎng)膜細胞外基質(zhì)的堆積,阻止或延緩DR的發(fā)生與發(fā)展。相反,當T等位基因的頻率減少時會加速DR的發(fā)生和進展。

    本研究結(jié)果表明DR組的TT基因型頻率和T等位基因低于正常對照組和DM組,T等位基因攜帶者DR的發(fā)病率明顯降低,提示T等位基因可能是DR的保護性基因,這可能是由于攜帶T等位基因的MMP-9啟動子的轉(zhuǎn)錄活性增強,導(dǎo)致MMP-9在組織中的表達增加[16],從而促進了細胞外基質(zhì)的降解,抑制了DR的發(fā)生和發(fā)展。由此可見MMP-9-1562C/T多態(tài)性與DR的發(fā)生相關(guān),突變型T等位基因可能是DR的保護基因。

    [1] 翟紅艷,王亞嬌.趨化素、腫瘤壞死因子α與2型糖尿病視網(wǎng)膜病變的相關(guān)性[J].眼科新進展,2015,35(7):667~669.

    [2] 李豐,游志鵬,謝琳.糖尿病視網(wǎng)膜病變危險因素及基因多態(tài)性研究進展[J].中國實用眼科雜志,2015,33(1):6~8.

    [3] 劉麗萍,朱吉偉,熊毅,等.上海市淞南社區(qū)糖尿病居民中糖尿病視網(wǎng)膜病變患病率及其影響因素調(diào)查分析[J].中華眼底病雜志,2015,31(2):126~129.

    [4] 郭立新,汪恕萍,李萍,等.基質(zhì)金屬蛋白酶9與糖尿病大血管病變的關(guān)系[J].中華內(nèi)分泌代謝雜志,2002,18(6):471~472.

    [5] Pollanen PJ, Karhunen PJ, Mikkelsson J, et al. Coronary artery complicated lesion area is related to functional polymorphism of matrix metalloproteinase9gene: an autopsy study[J].ArteriosclerThrombVascBiol, 2001,21(9):1446~1450.

    [6] WHO.Report of the expert committee on diagnosis and classification of diabetics mellitus[J].Diabetics Care, 2010, 20:1183~1197.

    [7] 中華醫(yī)學(xué)會眼科學(xué)會眼底病學(xué)組.我國糖尿病視網(wǎng)膜病變臨床診療指南[J].中華眼科雜志,2014,50(11):851~864.

    [8] Miller SA, Dykes DD, Polesky HF. A simple salting out procedure for extracting DNA from human nucleated cells[J].Nucleic Acid Res 1988,16(3):1215.

    [9] IDF.DiabetesAltas,6thed. Brussels: International Diabetes Federation EB.http://www.idf.org/diabetesatlas[J].2014.

    [10] 寧光,畢宇芳.營養(yǎng)與糖尿病并發(fā)癥-達能營養(yǎng)中心第十六屆學(xué)術(shù)會議論文集[C].2013:1~5.

    [11] Ivarsen A,Hjortdal J. Seven-year changes in corneal power and aberrations after PRK or LASIK[J].Invest Ophthalmol Vis Sci,2012,53(10):6011~6016.

    [12] 王寧,許迅.糖尿病視網(wǎng)膜病變相關(guān)基因多態(tài)性研究進展[J].中華眼科雜志,2006,42(6):563~566.

    [13] Nagase H, Woessner JF Jr.Matrixmetalloproteinases [J].Biol Chem,1999,274(31):21491~21494.

    [14] Kosano H, Okano T, Katsura Y, et al.ProMMP-9(92 kDagelatinase)in vitreous fluid of patients with proliferative diabetic retinopathy[J].Life Sci,1999,64(25):2307~2315.

    [15] 潘明麟,張曉梅,孫衛(wèi)華,等.MMP-9-1562C/T基因多態(tài)性與2型糖尿病腎病關(guān)系的研究[J].天津醫(yī)藥,2010,38(8):644~647.

    [16] Zhang B, Ye S, Herrmann SM, etal.Functional polymorphism in the regulatory region of gelatinaseB gene in relation to severity of coronary atherosclerosis[J].Circulation,1999,99(14):1788~1794.

    AStudyoftheAssociationbetweenPolymorphismsoftheMMP-9Geneandtype2DiabeticRetinopathy

    YANGJie,MAYinghui,DONGWeili,etal

    (TheAffiliatedHospitalofChengdeMedicalCollege,HebeiChengde067000,China)

    Objective:To study of the association between polymorphism of the MMP-9 gene(-1562C/T)and type 2 diabetic retinopathy.MethodsMMP-9 -1562C/T SNP was genotyped by polymerase chain reaction-restrictive fragment length polymorphism (PCR-RFLP) ,analysis in 180 healthy persons as control and 400 patients with type 2 diabetes including 180 complication-free cases and 220 with diabetic retinopathy (DR).ResultsAssociation between the MMP-9 -1562C/T SNP in promoter region and diabetic retinopathy: the C and T allele frequencies in Control, DM, DR groups are 8.3%,91.7%; 7.8%, 92.2%; 91.4%, 8.6% respectively. And the results have a significant deviation (χ2=790.09,P=0.000). The C/C, C/T , T/T genotypic frequencies of cases in the three groups are 0%,16.7%,83.3%;2.2%,11.1%,86.7%;84.1%,14.5%,1.4%.There's a significant deviation of C and T allele frequency of MMP-9 -1562C/T between the Control group、the DM group and DR group(χ2=470.16,P=0.000).There's a significant deviation of C/C,C/T,T/T genotypic frequencies between the Control group and DM group(P<0.01),or the DM group and DR group(P<0.01),while there is no significant deviation between the Control group and DM group(P>0.01) .Compared with the T allele, the C allele may increase the onset risk of diabetic retinopathy.ConclusionThe MMP-9 -1562C/T SNP may play a role in the genetic susceptibility to the invasion of diabetic retinopathy. T allele is a protective gene for diabetic retinopathy.

    Diabetic retinopathy; Matrix metalloproteinase-9; Gene; Single nucleotide polymorphism

    A

    10.3969/j.issn.1006-6233.2017.10.023

    1006-6233(2017)10-1663-05

    馬英慧

    猜你喜歡
    等位基因蛋白酶多態(tài)性
    單核苷酸多態(tài)性與中醫(yī)證候相關(guān)性研究進展
    親子鑒定中男性個體Amelogenin基因座異常1例
    智慧健康(2021年17期)2021-07-30 14:38:32
    思鄉(xiāng)與蛋白酶
    文苑(2018年22期)2018-11-19 02:54:30
    WHOHLA命名委員會命名的新等位基因HLA-A*24∶327序列分析及確認
    多胚蛋白酶 高效養(yǎng)畜禽
    馬鈴薯cpDNA/mtDNA多態(tài)性的多重PCR檢測
    IgA蛋白酶在IgA腎病治療中的潛在價值
    DXS101基因座稀有等位基因的確認1例
    GlobalFiler~? PCR擴增試劑盒驗證及其STR遺傳多態(tài)性
    冷卻豬肉中產(chǎn)蛋白酶腐敗菌的分離鑒定
    ponron亚洲| 精品第一国产精品| 老司机午夜福利在线观看视频| 精品熟女少妇八av免费久了| 午夜免费观看网址| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 国产精品乱码一区二三区的特点| 国产成+人综合+亚洲专区| 一级毛片高清免费大全| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 中文资源天堂在线| 欧美乱色亚洲激情| 亚洲熟女毛片儿| 不卡一级毛片| 午夜免费成人在线视频| 99re在线观看精品视频| 88av欧美| 一夜夜www| 99久久精品国产亚洲精品| 黄色毛片三级朝国网站| 18禁观看日本| 欧美性猛交黑人性爽| 午夜精品久久久久久毛片777| 国产av一区在线观看免费| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 久久午夜亚洲精品久久| 久久国产亚洲av麻豆专区| 一级毛片高清免费大全| 国产野战对白在线观看| 两个人视频免费观看高清| 欧美丝袜亚洲另类 | 可以免费在线观看a视频的电影网站| 午夜日韩欧美国产| 免费看a级黄色片| 日韩视频一区二区在线观看| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 免费在线观看日本一区| 男人舔奶头视频| 久久久久久久午夜电影| 两人在一起打扑克的视频| netflix在线观看网站| 嫩草影视91久久| 成人免费观看视频高清| 国产区一区二久久| 美女国产高潮福利片在线看| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 亚洲精品美女久久av网站| 狠狠狠狠99中文字幕| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 韩国av一区二区三区四区| 97碰自拍视频| 香蕉丝袜av| 首页视频小说图片口味搜索| 中文字幕精品免费在线观看视频| 亚洲第一av免费看| 亚洲精品久久国产高清桃花| 日韩欧美国产在线观看| 999久久久精品免费观看国产| 黄片小视频在线播放| 嫁个100分男人电影在线观看| 中文在线观看免费www的网站 | 久久天堂一区二区三区四区| 免费看十八禁软件| 国产99久久九九免费精品| 12—13女人毛片做爰片一| 欧美黄色片欧美黄色片| 真人一进一出gif抽搐免费| 黄色a级毛片大全视频| 亚洲精品中文字幕在线视频| 日韩三级视频一区二区三区| 在线观看日韩欧美| 亚洲一区二区三区不卡视频| 亚洲美女黄片视频| 男女视频在线观看网站免费 | 不卡av一区二区三区| 成人三级黄色视频| 满18在线观看网站| 两个人看的免费小视频| 91字幕亚洲| a级毛片a级免费在线| 亚洲欧美激情综合另类| 超碰成人久久| 欧美黑人精品巨大| 国产熟女午夜一区二区三区| 黄色毛片三级朝国网站| 欧美在线黄色| 国产精华一区二区三区| 亚洲国产欧美网| 男女午夜视频在线观看| 大型av网站在线播放| 亚洲精品国产一区二区精华液| 日本熟妇午夜| 在线永久观看黄色视频| a在线观看视频网站| 亚洲在线自拍视频| 最好的美女福利视频网| 麻豆av在线久日| 两个人看的免费小视频| 国产三级在线视频| 18美女黄网站色大片免费观看| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 一边摸一边做爽爽视频免费| 亚洲,欧美精品.| 久久午夜亚洲精品久久| 一本大道久久a久久精品| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 亚洲精华国产精华精| a级毛片在线看网站| 欧美黑人巨大hd| 男人操女人黄网站| 色av中文字幕| 国产1区2区3区精品| 欧美日韩精品网址| 欧美激情 高清一区二区三区| 青草久久国产| 国产成人精品久久二区二区免费| 久久久国产欧美日韩av| 久久久久国内视频| 一级毛片高清免费大全| av在线播放免费不卡| 中国美女看黄片| 我的亚洲天堂| 97碰自拍视频| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 亚洲国产中文字幕在线视频| 熟女电影av网| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 日本免费一区二区三区高清不卡| 国产精品精品国产色婷婷| 91麻豆av在线| 欧美亚洲日本最大视频资源| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 人妻久久中文字幕网| 一级黄色大片毛片| 亚洲男人天堂网一区| 操出白浆在线播放| 国产黄片美女视频| 亚洲av美国av| 亚洲一区高清亚洲精品| 999久久久精品免费观看国产| www.999成人在线观看| 黄色片一级片一级黄色片| 中文字幕高清在线视频| 两个人免费观看高清视频| 大香蕉久久成人网| 久久久久久久久中文| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 啪啪无遮挡十八禁网站| 脱女人内裤的视频| 久久狼人影院| 免费在线观看黄色视频的| 国产伦一二天堂av在线观看| 国产主播在线观看一区二区| 久久午夜亚洲精品久久| 国产精品乱码一区二三区的特点| 91麻豆精品激情在线观看国产| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 99热这里只有精品一区 | 国产精品久久久久久精品电影 | 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 俄罗斯特黄特色一大片| 国产精品 欧美亚洲| 999精品在线视频| 极品教师在线免费播放| xxx96com| 久久国产乱子伦精品免费另类| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 免费在线观看日本一区| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 后天国语完整版免费观看| 99久久99久久久精品蜜桃| 国产高清激情床上av| 国产欧美日韩一区二区精品| 欧美日本视频| 黄片小视频在线播放| 老司机午夜十八禁免费视频| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 深夜精品福利| 成熟少妇高潮喷水视频| 久久精品人妻少妇| a在线观看视频网站| 亚洲国产欧美网| 婷婷六月久久综合丁香| 日韩有码中文字幕| 麻豆成人av在线观看| 久久精品影院6| 精品久久蜜臀av无| 老汉色∧v一级毛片| 国产黄色小视频在线观看| 精品第一国产精品| av在线播放免费不卡| 久久久国产成人免费| 国产免费男女视频| 国产一区二区激情短视频| 精品午夜福利视频在线观看一区| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 久久久精品欧美日韩精品| 欧美国产日韩亚洲一区| 日韩精品青青久久久久久| 夜夜爽天天搞| 91在线观看av| www.999成人在线观看| www国产在线视频色| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 俄罗斯特黄特色一大片| 啦啦啦韩国在线观看视频| 欧美在线黄色| 99久久精品国产亚洲精品| 国产亚洲av高清不卡| 久久久精品欧美日韩精品| 国产av一区在线观看免费| 日韩欧美国产一区二区入口| 最近最新免费中文字幕在线| 亚洲中文日韩欧美视频| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 亚洲成国产人片在线观看| 欧美日韩黄片免| 精品免费久久久久久久清纯| 日本一本二区三区精品| 国产成人系列免费观看| 日本一区二区免费在线视频| av免费在线观看网站| 90打野战视频偷拍视频| 午夜免费鲁丝| 国产欧美日韩一区二区三| 精品无人区乱码1区二区| 一二三四在线观看免费中文在| 91成年电影在线观看| 国产av一区在线观看免费| av中文乱码字幕在线| 久久久久九九精品影院| 曰老女人黄片| 男女床上黄色一级片免费看| 欧美一级毛片孕妇| 男人舔女人的私密视频| 精品欧美国产一区二区三| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 国产激情久久老熟女| www.自偷自拍.com| 真人一进一出gif抽搐免费| 婷婷亚洲欧美| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 亚洲在线自拍视频| 91麻豆精品激情在线观看国产| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 国产成人av激情在线播放| 日韩欧美 国产精品| 国产黄色小视频在线观看| 亚洲 欧美一区二区三区| 久久狼人影院| 精品久久蜜臀av无| 久久人人精品亚洲av| 久久九九热精品免费| 欧美乱色亚洲激情| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 国产久久久一区二区三区| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 精品欧美国产一区二区三| 欧美日韩精品网址| 午夜福利18| 大香蕉久久成人网| 精品不卡国产一区二区三区| 黄频高清免费视频| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 88av欧美| 观看免费一级毛片| 久久精品国产清高在天天线| 中出人妻视频一区二区| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 男人的好看免费观看在线视频 | 国产又色又爽无遮挡免费看| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 国产高清视频在线播放一区| 色精品久久人妻99蜜桃| 国产免费男女视频| 免费看美女性在线毛片视频| 一级毛片精品| 丰满的人妻完整版| 亚洲免费av在线视频| 日韩欧美 国产精品| 日韩大码丰满熟妇| 国产亚洲av高清不卡| 大型av网站在线播放| 亚洲专区国产一区二区| 亚洲真实伦在线观看| 午夜福利在线观看吧| 一本综合久久免费| 听说在线观看完整版免费高清| 淫妇啪啪啪对白视频| av欧美777| 成年免费大片在线观看| 国产精品综合久久久久久久免费| 日韩高清综合在线| 欧美不卡视频在线免费观看 | 久久精品成人免费网站| 在线观看66精品国产| 亚洲七黄色美女视频| 亚洲午夜理论影院| 波多野结衣高清作品| 国产成人啪精品午夜网站| 久久人人精品亚洲av| 国产成人av教育| 免费在线观看影片大全网站| 一本久久中文字幕| 成人特级黄色片久久久久久久| 亚洲国产精品成人综合色| 在线观看舔阴道视频| 日韩三级视频一区二区三区| 人人澡人人妻人| 在线永久观看黄色视频| 国产av一区在线观看免费| 精品国产一区二区三区四区第35| av片东京热男人的天堂| 亚洲真实伦在线观看| 女警被强在线播放| 成人国产一区最新在线观看| 91成年电影在线观看| 亚洲美女黄片视频| 两人在一起打扑克的视频| 91字幕亚洲| 麻豆成人午夜福利视频| 老汉色∧v一级毛片| 一区二区三区精品91| 国产精品免费视频内射| 免费看十八禁软件| 午夜两性在线视频| 色精品久久人妻99蜜桃| 成年版毛片免费区| 夜夜爽天天搞| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 欧美zozozo另类| 亚洲专区字幕在线| 亚洲av第一区精品v没综合| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 亚洲无线在线观看| 色综合婷婷激情| 国产亚洲欧美在线一区二区| 国产精品电影一区二区三区| www.999成人在线观看| 国产精品一区二区免费欧美| 国产精品久久久久久精品电影 | 搡老岳熟女国产| 女人被狂操c到高潮| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 久久这里只有精品19| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 亚洲人成伊人成综合网2020| 此物有八面人人有两片| 欧美色欧美亚洲另类二区| 神马国产精品三级电影在线观看 | 热re99久久国产66热| 国产三级黄色录像| 亚洲午夜理论影院| 日韩欧美免费精品| 757午夜福利合集在线观看| 51午夜福利影视在线观看| 中文字幕精品免费在线观看视频| 制服丝袜大香蕉在线| 国产精品亚洲美女久久久| 叶爱在线成人免费视频播放| 国产亚洲精品av在线| 精品久久久久久久毛片微露脸| 亚洲av片天天在线观看| 丝袜美腿诱惑在线| av电影中文网址| 丝袜美腿诱惑在线| 亚洲国产精品合色在线| 母亲3免费完整高清在线观看| 中文字幕精品免费在线观看视频| 黄频高清免费视频| 女性被躁到高潮视频| 久久精品国产亚洲av高清一级| 不卡av一区二区三区| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 欧美精品啪啪一区二区三区| 日本a在线网址| 亚洲最大成人中文| 亚洲黑人精品在线| 91麻豆精品激情在线观看国产| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 国产爱豆传媒在线观看 | 国产日本99.免费观看| 亚洲成人久久性| 久久精品91无色码中文字幕| 日本熟妇午夜| 黑丝袜美女国产一区| 一本精品99久久精品77| 在线观看一区二区三区| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 身体一侧抽搐| 这个男人来自地球电影免费观看| 日韩精品中文字幕看吧| av在线天堂中文字幕| 国产激情偷乱视频一区二区| 在线观看一区二区三区| 免费看日本二区| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 一本一本综合久久| 日本成人三级电影网站| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 欧美黄色片欧美黄色片| 成人欧美大片| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 老司机深夜福利视频在线观看| 亚洲七黄色美女视频| 亚洲av五月六月丁香网| 亚洲精品久久国产高清桃花| 国产一级毛片七仙女欲春2 | 中文字幕人成人乱码亚洲影| 国产激情久久老熟女| 黄色女人牲交| 高潮久久久久久久久久久不卡| 哪里可以看免费的av片| 色综合婷婷激情| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 国产精品国产高清国产av| 一级片免费观看大全| 亚洲专区国产一区二区| 麻豆国产av国片精品| 大型黄色视频在线免费观看| 国产视频内射| avwww免费| 中文字幕最新亚洲高清| 哪里可以看免费的av片| 欧美乱码精品一区二区三区| 国产成人精品无人区| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 两性夫妻黄色片| 999久久久国产精品视频| 亚洲人成伊人成综合网2020| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 亚洲国产毛片av蜜桃av| 高清在线国产一区| 啦啦啦 在线观看视频| 亚洲av片天天在线观看| 99国产精品一区二区蜜桃av| 女同久久另类99精品国产91| 麻豆国产av国片精品| 久久欧美精品欧美久久欧美| 欧美一级毛片孕妇| 亚洲成人国产一区在线观看| 窝窝影院91人妻| 免费高清在线观看日韩| 又黄又爽又免费观看的视频| 日韩高清综合在线| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 性欧美人与动物交配| 一区福利在线观看| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 久久久国产精品麻豆| 91在线观看av| 日本 欧美在线| 999精品在线视频| 老司机午夜十八禁免费视频| 久久狼人影院| 欧美一级a爱片免费观看看 | 欧美丝袜亚洲另类 | 亚洲黑人精品在线| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 黑人操中国人逼视频| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 国产伦一二天堂av在线观看| 亚洲五月天丁香| 国产99白浆流出| 免费在线观看成人毛片| 国产一区在线观看成人免费| 久久午夜综合久久蜜桃| 男女下面进入的视频免费午夜 | 桃红色精品国产亚洲av| 日韩欧美 国产精品| 国产亚洲欧美98| 一区福利在线观看| 免费观看精品视频网站| 91av网站免费观看| 一级a爱视频在线免费观看| 好男人在线观看高清免费视频 | 高清在线国产一区| 国产精品日韩av在线免费观看| av电影中文网址| 麻豆av在线久日| 午夜福利高清视频| 午夜福利成人在线免费观看| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 中文资源天堂在线| 这个男人来自地球电影免费观看| www.自偷自拍.com| 日韩欧美在线二视频| 天堂√8在线中文| 一本综合久久免费| 高清毛片免费观看视频网站| 亚洲精品在线观看二区| 高清在线国产一区| a级毛片a级免费在线| 白带黄色成豆腐渣| 亚洲人成电影免费在线| 国产真人三级小视频在线观看| 久久人妻av系列| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 黄频高清免费视频| 在线观看www视频免费| e午夜精品久久久久久久| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 日日夜夜操网爽| 亚洲七黄色美女视频| 久久久久久免费高清国产稀缺| 久久这里只有精品19| 日韩欧美一区视频在线观看| 午夜免费鲁丝| 51午夜福利影视在线观看| 精品一区二区三区视频在线观看免费| aaaaa片日本免费| 少妇被粗大的猛进出69影院| 在线国产一区二区在线| 精品久久久久久久末码| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产成人啪精品午夜网站| 黄色视频不卡| 婷婷亚洲欧美| 亚洲成人久久爱视频| av欧美777| 黄色毛片三级朝国网站| 免费搜索国产男女视频| 亚洲全国av大片| 99热这里只有精品一区 | 97碰自拍视频| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 亚洲中文av在线| 国产乱人伦免费视频| 在线观看免费午夜福利视频| 日本 av在线| 国产激情偷乱视频一区二区| 国产精品 国内视频| 嫩草影视91久久| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 国语自产精品视频在线第100页| 日韩有码中文字幕| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 精品高清国产在线一区| 久久精品成人免费网站| 最好的美女福利视频网| 亚洲人成网站高清观看| 国产亚洲精品久久久久5区| 999久久久精品免费观看国产| 亚洲人成伊人成综合网2020| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 成熟少妇高潮喷水视频| 美女高潮到喷水免费观看| 欧美精品亚洲一区二区| 99热6这里只有精品| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 中文字幕高清在线视频| 精品久久久久久久末码| 人人妻人人澡欧美一区二区| 黄色丝袜av网址大全| 极品教师在线免费播放| 国产一级毛片七仙女欲春2 | 男女做爰动态图高潮gif福利片| 亚洲中文日韩欧美视频| 99riav亚洲国产免费| 午夜影院日韩av| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 久久久久久九九精品二区国产 | 国产亚洲av高清不卡| 亚洲免费av在线视频| 天堂动漫精品| 成人国产综合亚洲| 中文字幕精品亚洲无线码一区 | 精品久久久久久成人av| 久久久久久大精品| 一区二区三区激情视频| 国产v大片淫在线免费观看| 啦啦啦 在线观看视频| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 国产成年人精品一区二区| 亚洲最大成人中文| 黄色片一级片一级黄色片| 91麻豆精品激情在线观看国产| 又黄又粗又硬又大视频| 成人手机av| av在线播放免费不卡| 色播在线永久视频| 午夜福利视频1000在线观看| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 波多野结衣巨乳人妻| 日韩高清综合在线| 一级a爱片免费观看的视频| 看片在线看免费视频| 俺也久久电影网| 一级a爱片免费观看的视频| 麻豆一二三区av精品| 99riav亚洲国产免费| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 中文字幕人妻丝袜一区二区| 日韩精品中文字幕看吧| 免费在线观看亚洲国产| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 白带黄色成豆腐渣| 国产亚洲欧美98| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 精品不卡国产一区二区三区| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 亚洲中文av在线| 日本黄色视频三级网站网址| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 长腿黑丝高跟| 亚洲五月色婷婷综合| 99久久综合精品五月天人人| a级毛片a级免费在线|