固相萃取-液相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定動(dòng)物源食品中二氫吡啶的殘留

□ 戎筱卿 蘇州衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院

固相萃取-液相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定動(dòng)物源食品中二氫吡啶的殘留

□ 戎筱卿 蘇州衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院

本文利用固相萃取技術(shù)對(duì)動(dòng)物源食品進(jìn)行凈化、富集，并通過(guò)高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，建立肉源食品中二氫吡啶的檢測(cè)方法。

二氫吡啶；固相萃取；高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用

自2008年三聚氰胺事件的爆發(fā)，國(guó)內(nèi)各種食品安全事故接連不斷，一時(shí)間沸沸揚(yáng)揚(yáng)，食品安全越來(lái)越受到大家的關(guān)注。從早期的瘦肉精克倫特羅到2017年的3.15晚會(huì)，新的飼料添加劑喹乙醇、二氫吡啶、硫酸黏菌素又被不法分子大劑量添加到的動(dòng)物飼料中，通過(guò)肉類食品進(jìn)入了人們的餐桌。

喹乙醇，商品名為倍育諾、快育靈，長(zhǎng)期使用，會(huì)蓄積在動(dòng)物體內(nèi)，產(chǎn)生毒性，對(duì)很多動(dòng)物有明顯的致畸作用。此外，抗生素的濫用會(huì)造成耐藥性[1]，其他添加劑的大量和過(guò)量使用，均會(huì)部分蓄積在動(dòng)物的體內(nèi)，造成動(dòng)物源食品中過(guò)量殘留，給人類身體健康帶來(lái)很多潛在危害。

二氫吡啶又名多犢錠、吉盧金，化學(xué)名稱為2,6-二甲基- 3,5-二乙酯基-1,4-二氫吡啶，淡黃色結(jié)晶物。是一種新型多功能的飼料添加劑，具有廣泛的生物學(xué)功能，在醫(yī)學(xué)上用作心血管疾病的防治保健藥物，有治療脂肪肝、中毒性肝炎、抗衰老、防早熟等作用[2]。二氫吡啶最初由前蘇聯(lián)科學(xué)家合成并應(yīng)用，因其具有天然抗氧化劑Vc的某些作用，最早在20世紀(jì)30年代，主要用作動(dòng)植物油的抗氧化劑。20世紀(jì)70年代，前蘇聯(lián)拉托維亞專家發(fā)現(xiàn)其具有促進(jìn)畜禽生長(zhǎng)作用以來(lái)，世界各國(guó)相繼展開(kāi)了相關(guān)研究，并發(fā)現(xiàn)二氫吡啶有促進(jìn)畜禽生長(zhǎng)、改善畜禽產(chǎn)品品質(zhì)、提高畜禽繁殖性能及防病等功能[3,4]，現(xiàn)作為新興的飼料添加劑，應(yīng)用廣泛。

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（liquid Chromatograph Mass Spectrometer）， 簡(jiǎn)稱LC-MS，是液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用的儀器。它既有液相色譜儀有效分離熱不穩(wěn)性及高沸點(diǎn)化合物的分離能力，又具有質(zhì)譜儀的鑒定組分的能力。LC-MS已成為有機(jī)物分析實(shí)驗(yàn)室、藥品/食品檢驗(yàn)室、生產(chǎn)過(guò)程、質(zhì)量檢驗(yàn)等部門必不可少的分析工具。目前，串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)已成為痕量殘留物質(zhì)檢測(cè)的主流技術(shù)，該方法靈敏度高、選擇性和特異性好。

根據(jù)文獻(xiàn)調(diào)研發(fā)現(xiàn)，測(cè)定二氫吡啶的分析方法的研究很少，一般是測(cè)定藥品中的有效成分含量[5,6]。例如，二氫吡啶片劑的含量測(cè)定等，多數(shù)使用的是現(xiàn)有的主流分析方法——高效液相色譜法，但沒(méi)有查到肉源食品中二氫吡啶含量測(cè)定的相關(guān)研究。由于肉源食品基質(zhì)復(fù)雜、形態(tài)多樣化，但是目標(biāo)化合物含量低。因此，簡(jiǎn)單的浸提法會(huì)存在假陽(yáng)性干擾、靈敏度不高等問(wèn)題，不適用對(duì)肉類食品基質(zhì)的研究[7,8]。在近期的文獻(xiàn)報(bào)道中，測(cè)定食品中禁用、限用成份大多采用溶劑提取結(jié)合固相萃取技術(shù)對(duì)樣品進(jìn)行前處理[9,10]。本項(xiàng)目在參考國(guó)內(nèi)外有關(guān)文獻(xiàn)方法的基礎(chǔ)上，擬采用固相萃取技術(shù)對(duì)樣品進(jìn)行凈化、富集，并通過(guò)高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，建立肉源食品中二氫吡啶的檢測(cè)方法。

1 研究?jī)?nèi)容

（1）考察不同性質(zhì)的溶劑（混合溶劑）和不同品牌的固相柱對(duì)肉類食品中二氫吡啶的提取效果，通過(guò)溶劑對(duì)肉源產(chǎn)品二氫吡啶的溶解性，在固相萃取柱上的保留情況、固相萃取柱的洗脫情況，確定提取、上樣、淋洗、洗脫的最佳條件和最適合的固相萃取柱。

（2）考察不同品牌的C18柱色譜柱對(duì)待測(cè)物的保留情況，通過(guò)流動(dòng)相、柱溫、進(jìn)樣量、流速等條件的優(yōu)化，找出二氫吡啶的特征離子，建立二氫吡啶的液相色譜-質(zhì)譜條件。

（3）考察上述方法中二氫吡啶的液相色譜-質(zhì)譜的線性范圍，按照陰性樣品出峰位置的3倍信噪比和10倍信噪比，測(cè)定檢出限及定量限。

（4）選擇肉源樣品，對(duì)其進(jìn)行方法準(zhǔn)確度、重現(xiàn)性考察，添加水平為0.5*MRL、1*MRL、1.5*MRL，平行做6個(gè)樣品，計(jì)算回收率與精密度。

（5）按照建立的樣品提取、凈化方法對(duì)陰性空白樣品提取、凈化后，加標(biāo)準(zhǔn)品溶液（相當(dāng)于添加水平0.5*MRL），進(jìn)行測(cè)定，平行測(cè)定3次。通過(guò)公式ME(%)=B/A×100，計(jì)算二者相對(duì)比值來(lái)評(píng)價(jià)其基質(zhì)效應(yīng)。

圖1 固相萃取-質(zhì)譜法測(cè)定動(dòng)物源食品中二氫吡啶的工藝路線圖

2 研究目標(biāo)

（1）建立肉源食品中二氫吡啶的提取及純化方法。

（2）建立二氫吡啶的液相色譜-質(zhì)譜條件。

（3）建立二氫吡啶的工作曲線，確定檢出限和定量限。

（4）確定該液相色譜-質(zhì)譜方法的回收率和精密度。

（5）評(píng)價(jià)該液相色譜-質(zhì)譜測(cè)定方法的基質(zhì)效應(yīng)。

3 工藝路線

從肉源食品中提取二氫吡啶，通過(guò)固相萃取法進(jìn)行凈化和富集，再用HPLC-MS法進(jìn)行含量測(cè)定，獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得到檢出限、定量限、回收率和精密度，并用基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行評(píng)價(jià)。固相萃取-質(zhì)譜法測(cè)定動(dòng)物源食品中二氫吡啶的工藝路線，如圖1所示。

4 結(jié)語(yǔ)

我們將建立肉源食品中二氫吡啶的提取及純化方法，并建立二氫吡啶的液相色譜-質(zhì)譜條件，確定檢出限和定量限，回收率和精密度，最后評(píng)價(jià)該液相色譜-質(zhì)譜測(cè)定方法的基質(zhì)效應(yīng)。

[1]薛恒平.醫(yī)用抗生素作為飼料添加劑的負(fù)面效應(yīng)及對(duì)策[J].飼料工業(yè),1998(9):22-24.

[2]房興堂,沈露露,孫建梅.二氫吡啶的研究進(jìn)展及應(yīng)用前景[J].飼料工業(yè),2002(7):14-16.

[3]Hisar O, Yanik T, Kocaman E M,et al. Effects of diludine supplementation on growth performance, liver antioxidant enzyme activities and muscular trace elements of rainbow trout(Oncorhynchus mykiss)juveniles at a low water temperature[J].Aquaculture Nutrition, 2012(2):211-219.

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[5]金甌,鄭之詹,郭慧.HPLC法測(cè)定二氫吡啶的含量[J].飼料研究,2007(12):24-25.

[6]陳國(guó)權(quán),雷毅.高效液相色譜法測(cè)定降血壓類健康產(chǎn)品中的6種二氫吡啶類成分[J].理化檢驗(yàn):化學(xué)分冊(cè),2016(7):770-773.

[7]程建華.微波輔助提取與基質(zhì)固相分散提取在食品中農(nóng)獸藥和添加劑殘留檢測(cè)中的應(yīng)用[D].長(zhǎng)春:吉林大學(xué),2009.

[8]湛嘉.動(dòng)物源性食品中多類別有機(jī)小分子污染物的快速篩查技術(shù)的研究[D].杭州:浙江大學(xué),2014.

[9]Duan Z.J., Yi J.H., Fang G.Z. et al. A sensitive and selective imprinted solid phase extraction coupled to HPLC for simultaneous detection of trace quinoxaline-2- carboxylic acid and methyl-3-quinoxaline-2- carboxylic acid in animal muscles[J]. Food Chemistry,2013(1-4):274-280.

[10]葉培,岳振峰,肖陳貴,等.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)豬肉中28種β2-受體激動(dòng)劑[J].食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào),2013(3):682-688.

本文系蘇州衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院科研項(xiàng)目“固相萃取-液相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定動(dòng)物源食品中二氫吡啶的殘留”（編號(hào)：szwzy201706）。