甘肅省瑪曲牦牛雙芽巴貝斯蟲血清學(xué)調(diào)查及風(fēng)險(xiǎn)因素分析

秦思源，初 冬，吳長(zhǎng)江，孫賀廷，耿海東，解林紅，殷銘陽(yáng)，譚啟東,3，周東輝

（1. 國(guó)家林業(yè)局野生動(dòng)物疫源疫病監(jiān)測(cè)總站，沈陽(yáng)110034；2. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所 家畜疫病病原生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，蘭州730046；3. 北京出入境檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)物隔離場(chǎng)，北京101312）

甘肅省瑪曲牦牛雙芽巴貝斯蟲血清學(xué)調(diào)查及風(fēng)險(xiǎn)因素分析

秦思源1,2，初 冬1，吳長(zhǎng)江1，孫賀廷1，耿海東1，解林紅1，殷銘陽(yáng)2，譚啟東2,3，周東輝2

（1. 國(guó)家林業(yè)局野生動(dòng)物疫源疫病監(jiān)測(cè)總站，沈陽(yáng)110034；2. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所 家畜疫病病原生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，蘭州730046；3. 北京出入境檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)物隔離場(chǎng)，北京101312）

本研究旨在調(diào)查甘肅省瑪曲地區(qū)牦牛雙芽巴貝斯蟲病的流行情況并對(duì)可能影響其感染的因素進(jìn)行深入分析。本試驗(yàn)采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）方法對(duì)該地區(qū)的600份牦牛血清樣品進(jìn)行檢測(cè)，隨后運(yùn)用流行病學(xué)、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)可能影響牦牛雙芽巴貝斯蟲感染的因素進(jìn)行全面分析。調(diào)查結(jié)果表明，該地區(qū)牦牛雙芽巴貝斯蟲抗體陽(yáng)性率為22.33%，其中性別和采樣季節(jié)兩個(gè)因素對(duì)牦牛雙芽巴貝斯蟲感染的影響均不具備顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而年齡因素對(duì)牦牛雙芽巴貝斯蟲感染的影響具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。綜上所述，甘肅省瑪曲地區(qū)牦牛雙芽巴貝斯蟲普遍流行并具有較高的感染率，存在向牧區(qū)其他放養(yǎng)牦牛及野生動(dòng)物傳播該病的風(fēng)險(xiǎn)隱患。因此相關(guān)部門應(yīng)針對(duì)該地區(qū)牦牛雙芽巴貝斯蟲感染情況采取有效的預(yù)防、控制措施，嚴(yán)防該病擴(kuò)散蔓延，保證當(dāng)?shù)丶爸苓叢孛耜笈ｐB(yǎng)殖的經(jīng)濟(jì)效益。

雙芽巴貝斯蟲；流行病學(xué)；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)；牦牛；甘肅省

Abstract:The present study aimed to investigate the seroprevalence of Babesia bigemina infection and analyse the relevant factors in yaks in Maqu area，Gansu province. ELISA methed was used to detect antibodies against Babesia bigemina in 600 yak serum samples.Then, epidemiological and statistical metheds were used to analyze the risk factors. The survey results showed that the overall positive rate was 22.33%. In addition, sampling season and gender of yaks were not signi fi cantly different for Babesia bigemina infection（P＞0.05) except the age of yaks. In conclusion, the prevalence of Babesia bigemina infection in yaks in Maqu area was high, which posted the potential risks of transmitting it to other wild animals. Therefore，effective strategies and measures should be taken to control and preventBabesia bigemina infection in yaks in this region for economic bene fi t for the local and surrounding Tibetans.

Key words:Babesia bigemina; seroprevalence; enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA); Yak; Gansu province

雙芽巴貝斯蟲是一種寄生在血液內(nèi)的原蟲，可感染牛并引發(fā)牛的巴貝斯蟲病，該病的發(fā)生通常伴隨有發(fā)熱、貧血、黃疸及血色蛋白尿等臨床癥狀[1,2]。高發(fā)病率和高死亡率是雙芽巴貝斯蟲病的一大特征，并且該病嚴(yán)重影響到牦牛的生長(zhǎng)發(fā)育，導(dǎo)致其體重下降，給牦牛養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失[3]。牛雙芽巴貝斯蟲病的傳染源可能來(lái)自亞臨床感染、慢性感染和已治愈的牛[4]。

血液涂片法通常用于診斷急性巴貝斯蟲病，但是由于其敏感性較低，難以在慢性感染期和臨床癥狀不明顯時(shí)檢測(cè)到該寄生蟲，該方法仍存在諸多不足[5]。相比之下，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzymelinked immunosorbent assay，ELISA）不僅能夠檢測(cè)到該病原體所攜帶的特異性抗體，還適用于大量血清樣品的檢測(cè)，因此被廣泛應(yīng)用于流行病學(xué)調(diào)查研究[6-8]。

近年來(lái)，我國(guó)多地報(bào)道牛感染雙芽巴貝斯蟲病事件，包括湖南省、湖北省及新疆維吾爾族地區(qū)，但是有關(guān)牦牛感染雙芽巴貝斯蟲的報(bào)道仍然較少[9-11]。我國(guó)牦牛養(yǎng)殖數(shù)量大約為130萬(wàn)頭，約占世界牦?？倲?shù)的90%[12]。甘肅省瑪曲縣位于甘南藏族自治州，海拔3000 m以上，不僅是當(dāng)?shù)夭孛竦木幼〉?，又是牦牛養(yǎng)殖的重要地區(qū)。眾所周知，牦牛肉、牦牛乳及其他制品是當(dāng)?shù)夭孛袢粘Ｉ钪胁豢苫蛉钡闹匾M成部分，因此，牦牛雙芽巴貝斯蟲感染與否不僅關(guān)系到其自身生長(zhǎng)發(fā)育問題，甚至?xí)绊懙疆?dāng)?shù)夭孛竦慕】蛋踩珕栴}。本研究旨在調(diào)查甘肅省瑪曲地區(qū)牦牛雙芽巴貝斯蟲抗體陽(yáng)性率，評(píng)估影響其陽(yáng)性率的相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)因素，以期為更好地防治該病提供基本的流行病學(xué)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 血清樣品2013年在甘肅省瑪曲縣的4個(gè)牧場(chǎng)共采集牦牛血清600份，其中春季、夏季、秋季和冬季分別采集了208份、81份、226份和85份樣品。血液樣品經(jīng)1000×g離心10 min后將上清液移到新的滅菌離心管中，置于-20℃保存。對(duì)牦牛的性別、年齡及采樣季節(jié)等信息做詳細(xì)記錄。

1.2 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)抗體ELISA商業(yè)試劑盒（Svanova Biotech，Uppsala，Sweden）購(gòu)自瑞典。嚴(yán)格按照試劑盒所提供的檢測(cè)說(shuō)明書進(jìn)行抗體檢測(cè)[7]。每板設(shè)陰、陽(yáng)性及空白對(duì)照各2孔，對(duì)可疑孔則進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)。

1.3 數(shù)據(jù)分析采用二元邏輯回歸分析方法探究性別、年齡及采樣季節(jié)對(duì)牦牛雙芽巴貝斯蟲抗體陽(yáng)性率的影響，確定牦牛雙芽巴貝斯蟲感染的風(fēng)險(xiǎn)因素。以P＜0.05時(shí)作為具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的判斷標(biāo)準(zhǔn)。本實(shí)驗(yàn)中所有數(shù)據(jù)均采用統(tǒng)計(jì)軟件PASW Statistics 18.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，進(jìn)而得到結(jié)果的優(yōu)勢(shì)比（odds ratio，OR）和95%的置信區(qū)間（95%confidence interval，95%CI）。當(dāng)OR值＝1，表示該因素不起作用；OR值＞1，表示該因素屬于危險(xiǎn)因素；OR值＜1，表示該因素屬于保護(hù)因素。

2 結(jié)果與討論

本研究對(duì)甘肅瑪曲地區(qū)600份牦牛血清樣品進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)，其中發(fā)現(xiàn)134份雙芽巴貝斯蟲抗體陽(yáng)性樣品，總體陽(yáng)性率為22.33%（表1）。該結(jié)果明顯高于Saravanan等[13]使用PCR方法調(diào)查的印度阿魯納恰爾邦地區(qū)牦牛雙芽巴貝斯蟲感染率（5.32%），也高于Qin等[14]采用ELISA方法檢測(cè)的甘肅天祝地區(qū)白牦牛雙芽巴貝斯蟲抗體陽(yáng)性率（17.76%），與杜曉杰等[15]采用ELISA方法檢測(cè)的新疆地區(qū)牦牛雙芽巴貝斯蟲感染結(jié)果（19.05%）接近。以上不同的調(diào)查結(jié)果可能是由于各地傳播媒介蜱的分布、調(diào)查的種群數(shù)量、檢測(cè)方法的特異性和敏感性、氣候條件和牧場(chǎng)管理方式的差異造成的。

在不同性別分組中，公牦牛和母牦牛雙芽巴貝斯蟲感染率基本持平，分別為22.47%和22.99%。結(jié)果顯示不同性別牦牛感染雙芽巴貝斯蟲的結(jié)果差異性不顯著，該分析結(jié)果與Qin等[14]的調(diào)查結(jié)論一致。初步推測(cè)，瑪曲牧區(qū)牦牛飼養(yǎng)方式為粗放型自由放養(yǎng)，公牦牛和母牦牛長(zhǎng)時(shí)間頻繁接觸，增大了雙芽巴貝斯蟲在公、母牦牛間互傳的風(fēng)險(xiǎn)，導(dǎo)致公、母牦牛雙芽巴貝斯蟲感染率異常接近。但是要獲得更加科學(xué)、全面的原因仍需大量實(shí)驗(yàn)做進(jìn)一步調(diào)查研究。

在不同采樣季節(jié)分組中，發(fā)現(xiàn)夏季牦牛感染雙芽巴貝斯蟲的陽(yáng)性率最高（28.40%），其次分別為春季（25.96%）、秋季（19.91%）和冬季（14.12%）（表1）。結(jié)果分析表明，不同季節(jié)牦牛雙芽巴貝斯蟲感染的結(jié)果存在有規(guī)律的變化，相比秋冬季節(jié)，春夏季節(jié)牦牛雙芽巴貝斯蟲感染率較高，屬于易感季節(jié)。導(dǎo)致上述原因可能是由于春季和夏季溫暖、濕潤(rùn)的氣候條件更加適合傳播媒介蜱的生存和繁殖，而秋季和冬季寒冷、干燥的氣候條件不利于蜱的傳播和擴(kuò)散，從而降低了牦牛雙芽巴貝斯蟲的感染率[16]。

不同年齡段的牦牛均可感染雙芽巴貝斯蟲，且牦牛雙芽巴貝斯蟲感染率為16.27%～27.53%，其中1歲＜年齡≤2歲的牦牛感染率最高，而0歲＜年齡≤1歲的牦牛感染率最低（表1）。本試驗(yàn)采用二元logistic回歸分析方法對(duì)此次檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)現(xiàn)只有年齡是牦牛巴貝斯蟲感染的風(fēng)險(xiǎn)因素（P＜0.05），該分析結(jié)果與Costa等[17]報(bào)道的結(jié)果一致。各個(gè)年齡段牦牛均有不同程度雙芽巴貝斯蟲感染，感染率最大相差10%以上。統(tǒng)計(jì)分析顯示，2歲＜年齡≤4歲和1歲＜年齡≤2歲的牦牛獲得雙芽巴貝斯蟲感染的風(fēng)險(xiǎn)均是0歲＜年齡≤1歲耗牛參考值的2.0倍（OR＝1.955，95% CI＝1.085～3.522，P＜0.05），但年齡＞4歲和0歲＜年齡≤1歲之間在牦牛雙芽巴貝斯蟲感染結(jié)果上不具有顯著性差異（P＞0.05）（表2）。研究結(jié)果表明，年齡是牦牛雙芽巴貝斯蟲感染的誘發(fā)因子，在一定年齡范圍內(nèi)，牦牛雙芽巴貝斯蟲感染率隨著年齡的增長(zhǎng)而相應(yīng)升高。

綜上所述，甘肅瑪曲地區(qū)牦牛雙芽巴貝斯蟲感染的總陽(yáng)性率為22.33%。表明該地區(qū)牦牛雙芽巴貝斯蟲感染的總體情況較嚴(yán)重，應(yīng)該引起人們的高度重視。建議有關(guān)部門對(duì)雙芽巴貝斯蟲病流行地區(qū)采取有效的防控措施以避免其擴(kuò)散傳播，確保當(dāng)?shù)夭孛竦慕?jīng)濟(jì)效益。

表1 甘肅瑪曲地區(qū)牦牛雙芽巴貝斯蟲感染結(jié)果Table 1 Seroprevalence of Babesia bigemina infection in yaks in Maqu，Gansu province

表2 影響牦牛雙芽巴貝斯蟲感染的年齡風(fēng)險(xiǎn)因素統(tǒng)計(jì)結(jié)果Table 2 Odds ratios for ages of yaks as risk factors for Babesia bigemina seroprevalence

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SEROPREVALENCE INVESTIGATION AND RISK FACTORS OF BABESIA BIGEMINA INFECTION IN YAKS IN MAQU AREA, GANSU PROVINCE

QIN Si-yuan1,2, CHU dong1, WU Chang-jiang1, SUN He-ting1, GENG Hai-dong1, XIE Lin-hong1,YIN Ming-yang1, TAN Qi-dong2,3, ZHOU Dong-hui2

(1. General Station for Surveillance of Wildlife Diseases & Wildlife Borne Diseases, State Forestry Administration (SFA), Shenyang 110034,China; 2. State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology, Lanzhou Veterinary Research Institute, CAAS, Lanzhou 730046, China; 3.Animal Quarantine Station of Beijing Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Beijing 101312, China)

S852.723

B

1674-6422（2017）04-0056-04

2016-11-17

國(guó)家公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專項(xiàng)經(jīng)費(fèi)項(xiàng)目（201303037）

秦思源，男，碩士，助理工程師，主要從事野生動(dòng)物疫源疫病監(jiān)測(cè)管理與研究工作

周東輝，E-mail：zhoudonghui@caas.cn