白癜風患者血清中抗酪氨酸酶IgG抗體及抗酪氨酸酶相關(guān)蛋白1 IgG抗體的檢測

韓瑩 李鐵男 劉文力 金春琳 程欣 劉奕 賀莎 吳善東

110003沈陽市第七人民醫(yī)院皮膚科（韓瑩、李鐵男、劉文力、金春林、程欣）；杭州浙大迪迅生物基因工程有限公司（劉奕、賀莎、吳善東）

白癜風患者血清中抗酪氨酸酶IgG抗體及抗酪氨酸酶相關(guān)蛋白1 IgG抗體的檢測

韓瑩 李鐵男 劉文力 金春琳 程欣 劉奕 賀莎 吳善東

110003沈陽市第七人民醫(yī)院皮膚科（韓瑩、李鐵男、劉文力、金春林、程欣）；杭州浙大迪迅生物基因工程有限公司（劉奕、賀莎、吳善東）

目的探討白癜風患者血清中抗酪氨酸酶IgG抗體（TYR IgG）和抗酪氨酸酶相關(guān)蛋白1 IgG抗體（TRP?1 IgG）與白癜風的關(guān)系。方法用酶聯(lián)免疫吸附測定檢測260例白癜風患者和50例健康對照血清中TYR IgG和TRP?1 IgG的含量。結(jié)果白癜風組TYR IgG和（或）TRP?1 IgG陽性率57.31%（149/260），TYR IgG陽性率37.3%（97/260），TRP?1 IgG陽性率33.5%（87/260），均明顯高于對照組（χ2=25.441、21.630，P＜0.01）。TYR IgG陽性與TRP?1 IgG陽性不相關(guān)（r=-0.032，P＞0.05）。白癜風組TYR IgG陽性率男女間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），但TRP?1 IgG陽性率女性高于男性（χ2=5.811，P＜0.05）。白癜風TYR IgG陽性率 ≤ 20歲（35.9%）與＞20歲（38.3%）比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），而TRP?1 IgG陽性率 ≤ 20歲組明顯高于＞20歲組（χ2=6.498，P＜0.05）。結(jié)論檢測TYR IgG和TRP?1 IgG可為白癜風的診斷和治療提供一定依據(jù)。

白癜風；一元酚單氧酶；女性；青少年；抗酪氨酸酶IgG抗體；抗酪氨酸酶相關(guān)蛋白?1 IgG抗體

白癜風是一種常見的皮膚病，其病因有自身免疫、神經(jīng)內(nèi)分泌、自身細胞毒、黑素細胞破壞、遺傳、病毒及其他學說，但沒有一種學說能完整解釋其發(fā)病機制。有研究顯示，白癜風患者體內(nèi)存在高滴度抗酪氨酸酶抗體（anti?tyrosinase IgG antibody，TYR IgG）［1?4］和抗酪氨酸酶相關(guān)蛋白 1 IgG 抗體（anti?tyrosinase?related protein?1 IgG antibody，TRP ?1 IgG）［1，3，5］，揭示白癜風與這 2種抗體水平有關(guān)。本研究檢測了260例白癜風患者血清的TYR IgG和TRP?1 IgG，探討與白癜風的關(guān)系。

一、對象與方法

1.對象：2012年6月至2013年12月，在沈陽市第七人民醫(yī)院皮膚科就診的白癜風患者260例中男132例，女128例，平均26歲（7個月至73歲）；按年齡分為≤20歲組106例，平均12.8歲；＞20歲組154例，平均34.4歲。健康對照組50例為健康體檢者，其中男26例，女24例；≤20歲14例，＞20歲36例，平均24歲（2～62歲）。本研究通過本院醫(yī)學倫理委員會批準，受檢者均簽署知情同意書。

2.試劑和儀器：TYR IgG和TRP?1 IgG試劑盒由杭州浙大迪迅生物基因工程有限公司提供。PW?960型全自動96孔洗板機為深圳市匯松科技發(fā)展有限公司產(chǎn)品，MK3型酶標分析儀為美國Thermo公司產(chǎn)品。

3.方法：取白癜風患者及健康對照組外周血3 ml，分離血清置-70℃冰箱保存。血清中TYR IgG和TRP?1 IgG檢測用酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）法，嚴格按照試劑盒說明書操作。血清50倍稀釋作為樣品，設(shè)立校準品，按常規(guī)ELISA法操作顯色后于450 nm波長下測定吸光度（A值），以校準品濃度為X軸，對應(yīng)的A值為Y軸。根據(jù)校準曲線求得樣品測定濃度，乘以稀釋倍數(shù)即為待測血清的TYR IgG和TRP?1 IgG的濃度。所有標本均檢測3孔，數(shù)值取3孔均值。

4.統(tǒng)計學處理：數(shù)據(jù)用SPSS 19.0軟件進行處理。檢測數(shù)據(jù)用±s表示，陽性率比較用χ2檢驗，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析法，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

二、結(jié)果

白癜風組與健康對照組的性別和年齡構(gòu)成比較，差異無統(tǒng)計學意義（χ2=0.254，2.882，均P＞ 0.05）。健康對照組TYR IgG檢測值為（17.920±4.297）U/ml，TRP?1 IgG為（14.251 ±6.172）U/ml，白癜風組 TYR IgG 檢測值為（29.468±14.532）U/ml，TRP?1 IgG 為（26.159 ± 17.417）U/ml。取健康對照組的x+3×s為陽性閾值，TYR IgG和TRP?1 IgG的陽性閾值分別為30.811和32.767 U/ml。據(jù)此陽性閾值，白癜風組TYR IgG陽性率為37.31%（97/260），TRP?1 IgG的陽性率為33.46%（87/260），健康對照組陽性率均為0，比較差異有統(tǒng)計學意義（χ2=25.441，21.630，均P＜ 0.01）。白癜風組TYR IgG和（或）TRP?1 IgG陽性149例，占57.31%（149/260）。白癜風組TYR IgG陽性率與TRP?1 IgG陽性率比較，差異無統(tǒng)計學意義（χ2=0.841，P＞0.05）。TYR IgG和TRP?1 IgG結(jié)果均為陽性的患者僅為35例，比率為13.5%（35/260）。Spearman相關(guān)性分析表明：TRP?1 IgG與TYR IgG檢測結(jié)果不相關(guān)（r=-0.032，P=0.612）。見表1。

三、討論

研究認為，白癜風的諸多發(fā)病原因中自身免疫占有重要地位［2?4，6］，甚至認為白癜風是一種自身免疫性疾?。?］。白癜風發(fā)病與黑素生物合成密切相關(guān)，黑素是以酪氨酸為基礎(chǔ)物質(zhì)合成的生物聚合體［7］，是一種膠體性色素，與金屬離子有高度親和力［2，8］，合成和沉積于黑素細胞的亞細胞器特殊的溶酶體黑素體內(nèi)［7］。黑素形成需要多步生化反應(yīng)，3種黑素生成相關(guān)酶TYR、TRP?1和TRP?2分別參與催化黑素形成多個反應(yīng)中的3、1、1個不同反應(yīng)，并發(fā)揮各自的作用。這3種蛋白都包含一個跨膜區(qū)和富含組氨酸、半胱氨酸的序列，相互作用，共同形成200 000～700 000的多聚體復合物，共同組成酪氨酸酶基因蛋白家族［7］。

據(jù)報道，白癜風患者TYR IgG陽性率為10.9%（5/46）［4］，36%（7/18）［2］，61%（16/26）［9］；本文為 37.31%，顯著高于健康對照組（P＜0.01）；白癜風患者TRP?1 IgG陽性率為5.7%（3/53）［3］和34%（13/38）［5］，本文為33.46%，顯著高于健康對照組（χ2=21.630，P＜0.01），與上述報道基本一致。各研究中TYR IgG和TRP?1 IgG的陽性率差異較大，可能與不同檢測方法或患者分組［1］、地域、種族差異等原因有關(guān)。本文TYR IgG和（或）TRP?1 IgG陽性率達57.31%（149/260），支持白癜風的自身免疫學說。本文TYR IgG和TRP?1 IgG均陽性僅占13.46%（35/260），且Spearman相關(guān)性分析表明二者陽性不相關(guān)（r=-0.032，P＞0.05），提示TYR IgG與TRP?1 IgG在白癜風發(fā)病的自身免疫機制各自發(fā)揮不同的作用。本文白癜風組TRP?1 IgG陽性率女性高于男性，≤20歲組高于＞20歲組，提示TRP?1 IgG可能是女性和青少年白癜風發(fā)病的一個因素，對TRP?1 IgG相關(guān)的女性和青少年白癜風探討更有效的臨床治療可能有指導意義。本研究僅限于沈陽地區(qū)，標本數(shù)量有限，尚待對白癜風患者的TYR IgG與TRP?1 IgG檢測與白癜風的分型、分期、病程，治療結(jié)果進行比較，研究其相關(guān)性。

表1 白癜風患者性別和年齡段抗酪氨酸酶抗體（TYR IgG）和抗酪氨酸酶相關(guān)蛋白1 IgG抗體（TRP?1 IgG）陽性率比較［例（%）］

［1］Kemp EH,Gavalas NG,Gawkrodger DJ,et al.Autoantibody responses to melanocytes in the depigmenting skin disease vitiligo［J］.Autoimmun Rev,2007,6（3）:138?142.DOI:10.1016/j.autrev.2006.09.010.

［2］Baharav E,Merimski O,Shoenfeld Y,et al.Tyrosinase as an autoantigen in patients with vitiligo［J］.Clin Exp Immunol,1996,105（1）:84?88.DOI:10.1046/j.1365?2249.1996.d01?727.x.

［3］Kemp EH,Waterman EA,Gawkrodger DJ,et al.Autoantibodies to tyrosinase?related protein?1 detected in the sera of vitiligo patients using a quantitative radiobinding assay［J］.Br J Dermatol,1998,139（5）:798?805.DOI:10.1046/j.1365?2133.1998.02503.x.

［4］Kemp EH,Gawkrodger DJ,MacNeil S,et al.Detection of tyrosinase autoantibodies in patients with vitiligo using 35S?labeled recombinant human tyrosinase in a radioimmunoassay［J］.J Invest Dermatol,1997,109（1）:69 ?73.DOI:10.1111/1523 ?1747.ep12276556.

［5］李廷慧,高天文,李春英,等.TRP?1 B細胞表位區(qū)在酵母中的表達純化及生物學活性研究［J］.中國皮膚性病學雜志,2004,18（5）:263?266.DOI:10.3969/j.issn.1001?7089.2004.05.003.

［6］洪為松,尉曉冬,周渭珩,等.白癜風患者血清中抗酪氨酸酶抗體及可溶性細胞間黏附分子1的檢測［J］.中華皮膚科雜志,2005,38（10）:612?614.DOI:10.3760/j.issn.0412?4030.2005.10.005.

［7］del Marmol V,Beermann F.Tyrosinase and related proteins in mammalian pigmentation［J］.FEBS Lett,1996,381（3）:165?168.DOI:10.1016/0014?5793（96）00109?3.

［8］Yaghoobi R,Omidian M,Bagherani N.Vitiligo:a review of the published work［J］.J Dermatol,2011,38（5）:419 ?431.DOI:10.1111/j.1346?8138.2010.01139.x.

［9］Song YH,Connor E,Li YX,et al.The role of tyrosinase in autoimmune vitiligo［J］.Lancet,1994,344（8929）:1049 ?1052.DOI:10.1016/S0140?6736（94）91709?4.

2017中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學術(shù)年會征文通知

經(jīng)中國中西醫(yī)結(jié)合學會批準，中國中西醫(yī)結(jié)合學會皮膚性病專業(yè)委員會定于2017年4月20-24日在珠海維景國際大酒店召開中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學術(shù)年會。此次會議將發(fā)揚歷次年會的優(yōu)良傳統(tǒng)，注重中西醫(yī)結(jié)合治療皮膚病的新方法及新的研究進展等方面的學術(shù)交流，內(nèi)容密切聯(lián)系臨床，切合皮膚科醫(yī)師的實際需求，會議將邀請知名專家做特邀演講，闡述皮膚科相關(guān)領(lǐng)域的最新研究進展，創(chuàng)造形式多樣、內(nèi)容充實、緊張熱烈、活躍互動的學術(shù)交流形式，達到全國皮膚科中醫(yī)、西醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)師共同展現(xiàn)才華、獲取知識和信息、增進友誼的目的，欲參加會議者請仔細閱讀通知并在規(guī)定的時間按要求投稿。

一、投稿要求：①投稿內(nèi)容：皮膚科基礎(chǔ)研究論文、皮膚科臨床診斷和治療等方面的論文、典型與疑難病例等；②投稿方式：中文全文和400字以內(nèi)的中文摘要，請通過電子郵件投稿，Email：pfkxh@126.com。來稿請注明2017會議征文，截稿日期：2017年3月1日；③會議交流形式：特邀講演、大會發(fā)言、分會發(fā)言、書面交流。

二、聯(lián)系方式：上海市黃浦區(qū)成都北路500號峻嶺廣場19樓1908室，上海長征醫(yī)院《中國真菌學雜志》編輯部，郵編200003，Email：pfkxh@126.com，聯(lián)系人：施慧，021-81885497，手機13764560811。

Detection of anti?tyrosinase IgG antibody and anti?tyrosinase?related protein?1 IgG antibody in sera of patients with vitiligo

Han Ying,Li Tienan,Liu Wenli,Jin Chunlin,Cheng Xin,Liu Yi,He Sha,Wu Shandong
Department of Dermatology,Shenyang No.7 People′s Hospital,Shenyang 110003,China（Han Y,Li TN,Liu WL,Jin CL,Cheng X）;Hangzhou Zheda Dixun Biological Gene Engineering Co.,Ltd,Hangzhou 310052,China（Liu Y,He S,Wu SD）

Li Tienan,Email:qiyuanmys@163.com

ObjectiveTo investigate relationships between serum levels of anti?tyrosinase IgG antibody（TYR IgG）as well as anti?tyrosinase?related protein?1 IgG antibody（TRP?1 IgG）and vitiligo.MethodsEnzyme linked immunosorbent assay（ELISA）was performed to detect serum levels of TYR IgG and TRP?1 IgG in 260 patients with vitiligo and 50 health controls.The threshold for defining a positive test result was set at 3 standard deviations above the mean serum level of TYR IgG or TRP?1 IgG in the healthy controls.ResultsThe positive rate of TYR IgG and/or TRP?1 IgG in the vitiligo group was 57.31%（149/260）.The positive rates of TYR IgG and TRP?1 IgG were both significantly higher in the vitiligo group than in the control group（TYR IgG:37.3%［97/260］vs.0,χ2=25.441,P＜ 0.01;TRP?1 IgG:33.5%［87/260］vs.0,χ2=21.630,P＜ 0.01）.The positive rate of TYR IgG was not associated with that of TRP?1 IgG in the vitiligo group（r=-0.032,P＞ 0.05）.Among patients with vitiligo,the positive rate of TRP?1 IgG was significantly higher in females than in males（χ2=5.811,P＜ 0.05）,as well as in patients aged ≤ 20 years than in those aged ＞ 20 years（χ2=6.498,P＜ 0.05）,while the positive rate of TYR IgG didn′t differ between females and males,or between patients aged≤ 20 years and those aged＞20 years（bothP＞0.05）.ConclusionDetection of TYR IgG and TRP?1 IgG may provide some evidence for the diagnosis and treatment of vitiligo.

Vitiligo;Monophenol monooxygenase;Femininity;Adolescent;Anti?tyrosinase IgG antibody;Anti?tyrosinase?related protein?1 IgG antibody

李鐵男，Email：qiyuanmys@163.com

10.3760/cma.j.issn.0412?4030.2017.01.013

沈陽市科技計劃項目（F14?158?9?10）

Fund program:Shenyang Science and Technology Plan Project（F14?158?9?10）

2016?04?13）

（本文編輯：吳曉初）