載黑色素脂質(zhì)納泡的制備及體外多模態(tài)顯像實(shí)驗(yàn)研究

張 亮，姚元志，楊 珂，王 穎，曹 陽(yáng)，汪朝霞，王志剛，李崇雁，王 冬*

(1.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院超聲科 兒童發(fā)育疾病研究教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 兒童發(fā)育重大疾病國(guó)家國(guó)際科技合作基地 兒科學(xué)重慶市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶 400014；2.重慶醫(yī)科大學(xué)超聲分子影像研究所 重慶市超聲分子影像重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶 400010；3.重慶市腫瘤醫(yī)院超聲科 重慶市腫瘤研究所 重慶市癌癥中心，重慶 400030；4.重慶醫(yī)科大學(xué)超聲醫(yī)學(xué)工程研究所，重慶 400016)

載黑色素脂質(zhì)納泡的制備及體外多模態(tài)顯像實(shí)驗(yàn)研究

張 亮1,2，姚元志3，楊 珂1,2，王 穎1,2，曹 陽(yáng)2，汪朝霞1，王志剛2，李崇雁4，王 冬1,2*

(1.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院超聲科 兒童發(fā)育疾病研究教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 兒童發(fā)育重大疾病國(guó)家國(guó)際科技合作基地 兒科學(xué)重慶市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶 400014；2.重慶醫(yī)科大學(xué)超聲分子影像研究所 重慶市超聲分子影像重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶 400010；3.重慶市腫瘤醫(yī)院超聲科 重慶市腫瘤研究所 重慶市癌癥中心，重慶 400030；4.重慶醫(yī)科大學(xué)超聲醫(yī)學(xué)工程研究所，重慶 400016)

目的制備一種包載黑色素的多模態(tài)脂質(zhì)納泡(MNBs)造影劑，觀察其體外超聲、光聲、MR顯影效果。方法采用三氯甲烷注入—冷凍干燥—全氟丙烷充氣法制備MNBs和普通脂質(zhì)納泡(NBs)，檢測(cè)MNBs的一般特性(形態(tài)、粒徑、黑色素裝載量、穩(wěn)定性)，對(duì)不同濃度MNBs進(jìn)行體外超聲、光聲、MR成像并進(jìn)行定量對(duì)比分析。結(jié)果MNBs形態(tài)規(guī)則，粒徑分布均勻，透射電鏡顯示MNBs成功包裹黑色素顆粒。黑色素的載藥量為90.53 μg/mg。體外顯影實(shí)驗(yàn)示隨MNBs和NBs濃度的增加，超聲造影效果明顯增強(qiáng)，MNBs和NBs的超聲造影表現(xiàn)無(wú)明顯差異，相對(duì)信號(hào)強(qiáng)度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；隨MNBs濃度的增加，光聲和MRI顯影效果增強(qiáng)，NBs無(wú)光聲和MRI顯影效果。結(jié)論成功制備出一種包載黑色素的多模態(tài)脂質(zhì)納泡造影劑，可明顯增強(qiáng)超聲、光聲、MR顯影效果。

脂質(zhì)納泡；黑色素；超聲檢查；光聲成像；磁共振成像

目前，由于單一模式的影像學(xué)成像不能全面地獲取病灶信息，為獲取更加全面、豐富、精準(zhǔn)的影像信息，提高疾病的檢出率，多種影像成像方法的融合成為當(dāng)前影像技術(shù)的發(fā)展趨勢(shì)之一[1]。黑色素是一種生物源性的多聚烴類化合物，可作為光聲成像和MR成像的理想靶標(biāo)，與傳統(tǒng)多模態(tài)成像介質(zhì)相比，黑色素具有良好的生物相容性和生物降解能力[2-5]。超聲、光聲、MR成像技術(shù)均是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的無(wú)創(chuàng)成像技術(shù)。本研究將具備增強(qiáng)光聲成像和MR成像功能的黑色素包裹在具有超聲造影功能的脂質(zhì)納泡(NBs)中，構(gòu)建一種具有超聲/光聲/MR多模態(tài)顯像功能的脂質(zhì)納泡造影劑(MNBs)，評(píng)估其體外超聲、光聲、MRI效果。

1 材料與方法

1.1 主要材料與設(shè)備 二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、二硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇 2000(DSPE-mPEG2000)、二棕櫚酰磷脂酰甘油(DPPG)、膽固醇、黑色素(Sigma公司)；全氟丙烷(C3F8，天津核工業(yè)理化工程研究所)；超聲破碎儀(VCX-130，Sonic公司)；XL2020聲振儀(Heat System Inc)；Malvern激光粒徑檢測(cè)儀(美國(guó)Zetasize公司)；UV-2500紫外-可見分光光度計(jì)(Shimadzu公司，日本)；正置光學(xué)顯微鏡(Olympus公司，日本)；冷凍干燥機(jī)；細(xì)胞計(jì)數(shù)板；Esaote Mylab90彩色超聲診斷儀；Vevo?LAZR光聲成像系統(tǒng)；DFY-Ⅱ型超聲圖像定量分析診斷儀(重慶醫(yī)科大學(xué)超聲影像學(xué)研究所)；布魯克7.0T小動(dòng)物磁共振成像儀。

1.2 MNBs的制備 采用三氯甲烷注入—冷凍干燥—全氟丙烷充氣法制備MNBs，將10 mg DSPC、5 mg DSPE-mPEG2000、3 mg DPPG和3 mg膽固醇溶解于10 ml CHCl3中，超聲破碎儀聲振5 min，使脂質(zhì)充分溶解于CHCl3。將2 mg黑色素粉末加入2 ml NaOH(pH=12.9)中至其完全溶解，然后裝入透析袋(分子量12 000 kD)，用HCl (0.01 mol/L)將其pH調(diào)至7.4，獲得黑色素溶液。將黑色素溶液預(yù)熱至65℃，在65℃恒溫磁珠攪拌下逐滴加入脂質(zhì)CHCl3溶液，控制滴速為0.2 ml/min，隨著CHCl3的揮發(fā)，由于溶解在有機(jī)溶劑的磷脂特殊的自組裝特性，將黑色素溶液包裹，形成包載黑色素溶液的脂質(zhì)體微球。然后聲振(100 W)2 min使脂質(zhì)體微球變小，再用超濾離心管(MWCO=100 kDa)高速離心3次(10 000轉(zhuǎn)/分，20 min)去除未包載的黑色素溶液，收集脂質(zhì)體，冷凍干燥后充入C3F8，即獲得MNBs凍干粉。在制備過(guò)程中，用等量的雙蒸水代替黑色素溶液，即可制得NBs凍干粉。

1.3 MNBs一般性質(zhì)檢測(cè) 取少量MNBs溶解于雙蒸水，透射電鏡觀察其形態(tài)、分布，激光粒徑檢測(cè)儀檢測(cè)其粒徑大小和分布。采用電子天平稱取MNBs凍干粉的質(zhì)量。用紫外-可見光分光光度法測(cè)定不同濃度的黑色素光吸收特性、測(cè)定MNBs中的黑色素含量。配置3 mg/ml的MNBs的溶液，于0、6、12、24 h測(cè)量其濃度(利用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù))、粒徑、分散性。

1.4 MNBs體外超聲顯像 將不同濃度MNBs、NBs的PBS溶液(1、2、3 mg/ml)和PBS加入自制的凝膠模型中，采用EC123高頻線陣探頭，于諧波模式下觀察體外超聲顯影情況，并采用DFY-Ⅱ型超聲圖像定量分析診斷儀分析各靶區(qū)相對(duì)信號(hào)強(qiáng)度，即造影劑聲強(qiáng)與PBS聲強(qiáng)之比。

1.5 MNBs體外光聲顯像 將2 mg/ml MNBs的PBS溶液加入自制的凝膠模型，光聲成像參數(shù)設(shè)定：Priority 98%，Brightness 50，Contrast 50，PA Gain 40 dB，2D Gain 18 dB，F(xiàn)requency 21 MHz。采用波長(zhǎng)680～970 nm脈沖激光輻照，以5 nm波長(zhǎng)幅度遞增，采集光聲信號(hào)，繪制MNBs的吸收光譜曲線。

將不同濃度MNBs的PBS溶液(1、2、3 mg/ml)注入凝膠空洞，700 nm波長(zhǎng)的脈沖激光輻照，采集不同濃度下光聲圖像并記錄光聲信號(hào)值。

1.6 MNBs體外磁共振顯像 配制0.625、1.250、2.500、5.000、10.000 mg/ml MNBs的PBS溶液作為實(shí)驗(yàn)組Ⅲ～Ⅶ，取10 mg/ml NBs和PBS作為對(duì)照組Ⅰ、Ⅱ。采用布魯克7.0T小動(dòng)物MR成像儀行T1WI掃描和T1 mapping掃描。T1WI參數(shù)：TR 600 ms，TE 6 ms，層厚1 mm，F(xiàn)OV 40 mm×40 mm。T1 mapping掃描參數(shù)：TR 400、800、1 200、2 400、3 600、4 800 ms，TE 8.0 ms，層厚1 mm，F(xiàn)OV 40 mm×40 mm。沿各管內(nèi)徑勾畫ROI，測(cè)得信號(hào)強(qiáng)度(signal intensity, SI)和T1值，計(jì)算1/T1。

圖1 MNBs造影劑光學(xué)顯微鏡圖(A)、透射電鏡圖(B)、粒徑分布圖(C)及黑色素紫外-可見光吸收光譜圖(D)

圖2 MNBs體外超聲顯像 A.不同濃度載黑色素脂質(zhì)納泡和空白脂質(zhì)納泡諧波顯像; B.MNBs和NBs溶液相對(duì)信號(hào)強(qiáng)度值

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)分析軟件。對(duì)各參數(shù)均行正態(tài)性檢驗(yàn)，計(jì)量資料以±s表示，不同濃度MNBs時(shí)，光聲信號(hào)值、1/T1的比較采用單因素方差分析；MNBs濃度和1/T1進(jìn)行Pearson相關(guān)分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MNBs一般性質(zhì) 制備的MNBs外觀呈棕色粉末，在水溶液中為均勻的乳液。光學(xué)顯微鏡觀察納泡呈圓形，大小均一，分散性好(圖1A)。透射電鏡見MNBs形態(tài)規(guī)則，內(nèi)見大小均一的高密度顆粒(圖1B)。激光粒徑檢測(cè)儀測(cè)其分散性好，平均粒徑(247.30±65.20)nm(圖1C)。紫外—可見光吸收光譜波長(zhǎng)230～800 nm增大時(shí)，黑色素溶液的吸收值逐漸降低(圖1D)。將波長(zhǎng)設(shè)定為430 nm，選擇吸光度在0.2～0.8范圍內(nèi)的點(diǎn)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為Y=0.015 50X+0.006 027(R2=0.998 8)；根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算黑色素的裝載量為90.53 μg/mg。0、6、12、24 h時(shí)，MNBs溶液的濃度和粒徑變化不大，各時(shí)間點(diǎn)分散性良好。

2.2 MNBs體外超聲顯像 體外超聲顯像示，MNBs和NBs溶液均呈高回聲(圖2A)，而PBS溶液呈無(wú)回聲；MNBs和NBs溶液回聲強(qiáng)度隨造影劑濃度的增加而提高，相同濃度的MNBs和NBs溶液的相對(duì)信號(hào)強(qiáng)度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，如圖2B。

2.3 MNBs體外光聲顯像 在680～970 nm激光發(fā)射波長(zhǎng)下，MNBs造影劑均可表現(xiàn)出光聲信號(hào)，700 nm處有最大吸收峰，從700 nm開始，隨脈沖激光波長(zhǎng)的增加，MNBs造影劑的光聲信號(hào)逐漸降低(圖3A)。700 nm激發(fā)波長(zhǎng)下，隨MNBs造影劑溶液濃度的增加，其光聲信號(hào)也增強(qiáng)(圖3B、3C)。NBs造影劑無(wú)明顯光聲顯像效果(圖3C)。

2.4 MNBs體外磁共振顯像 體外磁共振顯像示，NBs和PBS在T1WI呈低信號(hào)，MNBs呈高信號(hào)(圖4A)，MNBs濃度和1/T1線性回歸方程為：Y=0.052 2X+0.348 3(R2=0.991，P<0.05；圖4B)，信號(hào)強(qiáng)度隨造影劑濃度的增加而增加(圖4C)。

圖3 MNBs體外光聲顯像 A.2 mg/ml MNBs在680～970 nm波長(zhǎng)內(nèi)光聲信號(hào)值變化; B.不同濃度的MNBs和NBs(3 mg/ml)造影劑光聲顯像; C.不同濃度的MNBs定量光聲信號(hào)強(qiáng)度

圖4 MNBs體外MR顯像 A.對(duì)照組(Ⅰ、Ⅱ)和實(shí)驗(yàn)組(Ⅲ～Ⅶ)T1WI圖像; B.MNBs濃度與1/T1值的線性相關(guān)圖; C.對(duì)照組(Ⅰ、Ⅱ)、實(shí)驗(yàn)組(Ⅲ～Ⅶ)的信號(hào)強(qiáng)度

3 討論

目前，分子影像在疾病的診斷和治療中發(fā)揮越來(lái)越重要的作用，為獲取豐富、準(zhǔn)確的影像信息，筆者制備了一種包載黑色素的脂質(zhì)納泡造影劑，同時(shí)具備超聲、光聲和MR造影效果。脂質(zhì)納泡造影劑因粒徑小、穿透力強(qiáng)、穩(wěn)定性較高、血液循環(huán)時(shí)間長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn)，作為超聲分子探針、藥物及基因載體等成為研究熱點(diǎn)[6-7]。多模態(tài)成像介質(zhì)如金納米材料[8]，碳納米材料[9]和染料[10]是目前最常見的光聲成像造影劑，雖然臨床安全性已獲得FDA的認(rèn)證，但其遠(yuǎn)期安全性和體內(nèi)清除仍有待進(jìn)一步研究。黑色素廣泛存在于動(dòng)物、植物及微生物，是一種多聚芳香烴類化合物，含較多的苯環(huán)結(jié)構(gòu)，含很多自由基和不成對(duì)電子[11]，由于其高度的共軛效應(yīng)，在廣闊的光譜區(qū)內(nèi)均具有強(qiáng)烈的光吸收能力，也具有抗輻射、抗氧化、抗病毒、抗衰老及免疫功能，因此其成為各領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)[12-14]。有研究[12]表明，黑色素可提高光聲成像的顯像效果，將黑色素包被于白蛋白內(nèi)，發(fā)現(xiàn)可明顯增強(qiáng)光聲信號(hào)。Stritzker等[4]將黑色素基因插入溶瘤牛痘病毒株的基因組中，通過(guò)黑色素基因表達(dá)產(chǎn)生的黑色素作為診斷及治療的介質(zhì)，在未添加任何底物的情況下即可進(jìn)行深部組織光聲顯像及MR顯像。表明黑色素在MRI上具有特征性的短T1信號(hào)，可增強(qiáng)T1WI成像。具有超聲顯像功能的脂質(zhì)納泡造影劑包裹黑色素顆粒形成的MNBs同時(shí)具備增強(qiáng)超聲顯影、光聲成像、MR成像的功能。

本實(shí)驗(yàn)選擇具有良好生物安全性的磷脂作為殼材，C3F8氣體及生物源性的黑色素作為內(nèi)核。磷脂是生物膜的重要組分，經(jīng)各種磷脂酶分解代謝，其代謝產(chǎn)物參與糖代謝、β氧化等[15]。人體大部分黑色素隨表皮角質(zhì)層細(xì)胞的脫落外，也有部分黑色素受角朊細(xì)胞內(nèi)溶酶體作用被降解，被吞噬細(xì)胞所吞噬降解，或在血液循環(huán)中分解經(jīng)腎排出[16]。少量C3F8氣體可經(jīng)肺排出。因此，MNBs具有高度的生物相容性和生物降解能力，安全性高。本實(shí)驗(yàn)所制備的MNBs造影劑大小均一，粒徑較小，分散性良好；透射電鏡顯示脂質(zhì)體成功包載了黑色素。將本實(shí)驗(yàn)所制備的MNBs保存于密封的充滿全氟丙烷氣體的玻璃瓶，可長(zhǎng)期保存。MNBs分散于水溶液24 h內(nèi)其數(shù)目、粒徑無(wú)明顯改變，穩(wěn)定性好；體外超聲實(shí)驗(yàn)顯示，MNBs和NBs均具有良好的超聲顯影效果，表明MNBs和NBs內(nèi)成功包載了全氟丙烷氣體；MNBs和NBs的回聲強(qiáng)度無(wú)明顯差異，提示包載的黑色素對(duì)MNBs的超聲顯影無(wú)明顯影響；體外光聲顯影實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，MNBs在700～970 nm波長(zhǎng)的激光作用下，隨著波長(zhǎng)的增加，光聲信號(hào)逐漸減弱；在700 nm波長(zhǎng)的激光作用下，隨MNBs濃度的增加，光聲信號(hào)也隨之增強(qiáng),而NBs在激光作用下無(wú)光聲信號(hào)，表明光聲信號(hào)的產(chǎn)生源于黑色素而非脂質(zhì)納泡和全氟丙烷；體外MRI結(jié)果顯示MNBs可顯著增強(qiáng)T1WI而NBs不能增強(qiáng)T1WI，表明T1WI信號(hào)的增強(qiáng)與黑色素密切相關(guān)。

本實(shí)驗(yàn)的不足：未對(duì)黑色素的載入量進(jìn)行優(yōu)化，黑色素載入量越高，光聲成像和MRI效果越好，但在MNBs體積一定的情況下，全氟丙烷氣體的含量越少，超聲造影效果越差。將在后續(xù)試驗(yàn)中制備不同大小的載不同質(zhì)量黑色素納泡，評(píng)估其多模態(tài)造影效果。

總之，本實(shí)驗(yàn)成功制備了包載黑色素的多模態(tài)脂質(zhì)納泡造影劑MNBs，其具備超聲造影、光聲成像和MRI顯像功能；該造影劑的成分為生物來(lái)源的黑色素和磷脂，生物相容性好，安全性高。

[1] 王志剛.多模態(tài)超聲造影劑研究進(jìn)展.中國(guó)醫(yī)學(xué)影像技術(shù),2010,26(增刊):91-94.

[2] Wilson K, Homan K, Emelianov S. Biomedical photoacoustics beyond thermal expansion using triggered nanodroplet vaporization for contrast-enhanced imaging. Nat Commun, 2012,3:618.

[3] Jathoul AP, Laufer J, Ogunlade O, et al. Deep in vivo photoacoustic imaging of mammalian tissues using a tyrosinase-based genetic reporter. Nat Photon, 2015,9(4):239-246.

[4] Stritzker J, Kirscher L, Scadeng M, et al. Vaccinia virus-mediated melanin production allows MR and optoacoustic deep tissue imaging and laser-induced thermotherapy of cancer. Proc Natl Acad Sci U S A, 2013,110(9):3316-3320.

[5] Zhang R, Fan Q, Yang M, et al. Engineering melanin nanoparticles as an efficient drug-delivery system for imaging-guided chemotherapy. Adv Mater, 2015,27(34):5063-5069.

[6] 姚元志,王志剛,王冬,等.對(duì)比觀察脂質(zhì)納泡與微泡在高強(qiáng)度聚焦超聲消融兔肝中的增效作用.中國(guó)介入影像與治療學(xué),2015,12(8):493-498.

[7] Yang HL, Cai WB, Xu L, et al. Nanobubble-affibody: Novel ultrasound contrast agents for targeted molecular ultrasound imaging of tumor. Biomaterials, 2015,37:279-288.

[8] 夏瓊,冉海濤,王志剛,等.VCAM-1靶向雙模態(tài)光聲/超聲納米級(jí)分子探針的制備及其體外尋靶實(shí)驗(yàn).中國(guó)醫(yī)學(xué)影像技術(shù),2016,32(3):333-337.

[9] Jian J, Liu C, Gong Y, et al. India ink incorporated multifunctional phase-transitionnanodroplets for photoacoustic/ultrasound dual-modality imaging and photoacoustic effect based tumor therapy. Theranostics, 2014,4(10):1026-1038.

[10] 陳澄,宮玉萍,王志剛,等.制備包裹吲哚菁綠和液態(tài)氟碳的納米級(jí)雙模態(tài)造影劑.中國(guó)醫(yī)學(xué)影像技術(shù),2015,31(2):186-190.

[11] Butler MJ, Day AW. Fungalmelanins: A review. Can J Microbiol, 1998,44(12):1115-1136.

[12] Sim C, Kim H, Moon H, et al. Photoacoustic-based nanomedicine for cancer diagnosis and therapy. J Control Release, 2015,203:118-125.

[13] Fan Q, Cheng K, Hu X, et al. Transferring biomarker into molecular probe: Melanin nanoparticle as a naturally active platform for multimodality imaging. J Am Chem Soc, 2014,136(43):15185-15194.

[14] Huang S, Pan Y, Gan D, et al. Antioxidant activities and UV-protective properties of melanin from the berry of Cinnamomumburmannii and Osmanthus fragrans. Med Chem Res, 2011,20(4):475-481.

[15] 李斯.試論磷脂代謝的問題探究.生物技術(shù)世界,2016,1:238.

[16] ElObeid AS, Kamal-Eldin A, Abdelhalim MAK, et al. Pharmacological properties of melanin and its function in health. Basic Clin Pharmacol Toxicol, 2017,120(6):515-522.

消 息

《中國(guó)醫(yī)學(xué)影像技術(shù)》作者投稿請(qǐng)登錄本刊網(wǎng)站(www.cjmit.com)主頁(yè)，點(diǎn)擊左上角“作者登錄”進(jìn)入，第一次投稿需完成作者注冊(cè)；專家審稿請(qǐng)點(diǎn)擊“審稿登錄”進(jìn)入。

為了便于廣大作者、讀者查閱本刊文獻(xiàn)，本站提供從1985年起的過(guò)刊和現(xiàn)刊的全文檢索。

Preparationofmelanin-basedlipidnanobubblesforenhancingmultimodalimaginginvitro

ZHANGLiang1,2,YAOYuanzhi3,YANGKe1,2,WANGYing1,2,CAOYang2,WANGZhaoxia1,WANGZhigang2,LIChongyan4,WANGDong1,2*
(1.DepartmentofUltrasound,Children'sHospitalofChongqingMedicalUniversity,MinistryofEducationKeyLaboratoryofChildDevelopmentandDisorders,ChinaInternationalScienceandTechnologyCooperationBaseofChildDevelopment,ChongqingKeyLaboratoryofPediatrics,Chongqing400014,China; 2.InstituteofUltrasoundImaging,ChongqingMedicalUniversity，ChongqingKeyLaboratoryofUltrasoundMolecularImaging,Chongqing400010,China; 3.DepartmentofUltrasound,ChongqingCancerHospital,ChongqingCancerInstitute,ChongqingCancerCenter,Chongqing400030,China; 4.InstituteofUltrasonicEngineeringinMedicalofChongqingMedicalUniversity,Chongqing400016,China.)

ObjectiveTo prepare multi-modality melanin-based lipid nanobubbles (MNBs) contrast agents, and to investigate their manifestations of ultrasound (US), photoacoustic (PA) and MRI in vitro.MethodsMNBs and lipid nanobubbles (NBs) were prepared with the method of CHCl3-injection, freeze-drying and C3F8-inflation. The characteristics (shape, grain diameter, loading capacity of melanin and stability) of MNBs were obseved. US, PA and MRI were detected in vitro and the images were quantitatively analyzed.ResultsMNBs presented with homogenized size distribution, and transmission electron microscope (TEM) images demonstrated that the melanin particles were successfully entrapped into nanobubbles. Meanwhile, the loading capacity of melanin was 90.53 μg/mg. US signal increased in vitro with the rise of MNBs and NBs concentration. The ultrasonic manifestations of MNBs and NBs were the same, and the relative signal enhancement had no significant difference (P>0.05). With the increased concentration of MNBs, the PA and MRI signals were stronger, but NBs showed no evident enhancement.ConclusionMulti-modality MNBs contrast agents are prepared successfully, which can enhance US, PA and MR imaging.

Lipid nanobubbles; Melanin; Ultrasonography; Photoacoustic imaging; Magnetic resonance imaging

10.13929/j.1003-3289.201704096

R445

A

1003-3289(2017)10-1458-05

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81571688、81401503、81771845)、中國(guó)博士后特別資助項(xiàng)目(2015T80963)、重慶市博士后科研項(xiàng)目特別資助(Xm2014052、Xm2015089)。

張亮(1990—)，男，湖北麻城人，在讀碩士。研究方向：超聲分子顯像與治療研究。E-mail: zhangliangcq338@163.com

王冬，重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院超聲科 兒童發(fā)育疾病研究教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 兒童發(fā)育重大疾病國(guó)家國(guó)際科技合作基地 兒科學(xué)重慶市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，400014;重慶醫(yī)科大學(xué)超聲分子影像研究所 重慶市超聲分子影像重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，400010。E-mail: wang57554@163.com

2017-04-19

2017-08-31