• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    白花蛇舌草總黃酮提取工藝及其抗氧化活性研究

    2017-10-30 10:30:13張俊霞王應玲姜寧
    湖北農(nóng)業(yè)科學 2017年18期

    張俊霞 王應玲 姜寧

    摘要:研究白花蛇舌草(Hedyotis diffusa Willd)總黃酮的提取工藝及其體外抗氧化活性。以白花蛇舌草總黃酮提取率為評價參數(shù),通過單因素試驗、正交試驗優(yōu)化提取工藝;測定了總還原力及Fe2+螯合力、羥自由基和超氧陰離子清除能力研究白花蛇舌草總黃酮的抗氧化活性。結果表明,用95%乙醇與白花蛇舌草粉末按40∶1(mL∶g),在90 ℃下提取180 min,此時提取率最高,達(2.22±0.01)%。體外抗氧化活性結果顯示白花蛇舌草總黃酮具有較強的總還原力,F(xiàn)e2+螯合率最高為90%,羥自由基和超氧陰離子的清除率分別達79%、77%。白花蛇舌草總黃酮具有顯著的體外抗氧化活性,具有進一步開發(fā)利用的價值。

    關鍵詞:白花蛇舌草(Hedyotis diffusa Willd);總黃酮;正交試驗;體外抗氧化

    中圖分類號:R285.5 文獻標識碼:A 文章編號:0439-8114(2017)18-3523-05

    DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.18.033

    Abstract: This study was to optimize the conditions of extraction of total flavonoids from Hedyotis diffusa Willd and detect their antioxidant activities in vitro. Using extraction rate as the evaluation index,single factor experiments and orthogonal test were adopted to optimze the extraction process. Then,four antioxidant parameters of total flavonoids from Hedyotis diffusa Willd,including total reducing power,F(xiàn)e2+ chelating,hydroxy radical scavenging,and superoxide anion radical scavenging capacities,were measured. The results showed that the optimum conditions of extraction were as following:ethanol concentration was 95%,the ratio of liquid to solid was 40∶1(mL∶g); extraction time 180 min and temperature,90 ℃. Under these conditions,the extrction ratio was(2.22±0.01)%. The total flavonoids from Hedyotis diffusa Willd had showed high total reducing power,their chelating rate of Fe2+ reached 90%,the radical scavenging activities against hydroxyl radical and superoxide anion were 79% and 77%,respectively. So the antioxidant activities in vitro of flavonoids from Hedyotis diffusa Willd is obvious,which is worth further being developed and utilized.

    Key words: Hedyotis diffusa Willd; total flavonoids; orthogonal test; antioxidant activities

    白花蛇舌草(Hedyotis diffusa Willd)屬于茜草科耳草屬,全草含三萜類、環(huán)烯醚萜、蒽酮類、黃酮類化合物、有機酸及酯類等化合物[1,2],具有抗腫瘤、抗炎、提高免疫力、抗氧化、抗化學誘變、保護胃黏膜損傷等作用[3-12]。

    黃酮類化合物是大多數(shù)植物的次生代謝產(chǎn)物,分布廣泛,是一種新發(fā)現(xiàn)的營養(yǎng)元素,對人體具有重要的生理保健功效[13,14]。黃酮類化合物具有多種生理活性且對人體的不良反應較少,是一種對人類健康有促進作用的化合物。臨床上常用于治療心血管疾病、糖尿病、腫瘤等[15-20]。目前,關于如何高效獲得白花蛇舌草總黃酮及其抗氧化作用的報道較少。本試驗就乙醇浸提法研究白花蛇舌草總黃酮提取工藝,以4個指標評價其抗氧化活性,為白花蛇舌草活性成分的進一步開發(fā)提供依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    白花蛇舌草購于來鳳縣地產(chǎn)中藥材綜合開發(fā)有限責任公司,經(jīng)60 ℃烘干粉碎,過60目篩;抗壞血酸、EDTA-Na2、三羥甲基氨基甲烷(Tris)、焦性沒食子酸、鐵氰化鉀、三氯乙酸、三氯化鐵、水楊酸等試劑購自天津市光復科技發(fā)展有限公司;亞硝酸鈉、氫氧化鈉片、無水乙醇、硝酸鋁、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、硫酸亞鐵等試劑購自天津市福晨化學試劑廠;菲咯嗪購自日本東京化成工業(yè)株式會社,以上藥品均為分析純。蘆丁標準品購自國藥集團化學試劑有限公司。

    1.2 儀器與設備

    GZX-9140 MBE型數(shù)顯鼓風干燥箱、HHS型電熱恒溫水浴鍋(上海博訊實業(yè)有限公司),ITDL80-2B型臺式離心機(上海安亭科學儀器廠制造),TU-1810型紫外分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司),BC-R501C型旋轉蒸發(fā)器(上海貝凱生物化工設備有限責任公司)。endprint

    1.3 方法

    1.3.1 總黃酮含量測定 參照2015版《中華人民共和國藥典》[21]采用NaNO2-Al(NO3)3法建立標準曲線。以吸光度為縱坐標,蘆丁濃度c(μg/mL)為橫坐標,繪出蘆丁標準曲線圖,并得回歸方程:y=9.809 6x+0.000 9,R2=0.999 2。按如下公式計算總黃酮含量:

    總黃酮含量=■×100%

    式中,c為樣品溶液質量濃度(μg/mL)、A為稀釋倍數(shù)、V為提取液體積(mL)、m為白花蛇舌草質量(mg)。

    1.3.2 單因素試驗

    1)液固比對總黃酮提取率的影響。稱取適量的白花蛇舌草粉末,分別按液固比10∶1、20∶1、30∶1、 40∶1、50∶1(mL∶g,下同)加入70%乙醇于80 ℃水浴120 min,然后將提取液于3 500 r/min離心15 min,測定上清液中總黃酮含量。

    2)提取時間對總黃酮提取率的影響。稱取適量白花蛇舌草粉末,按液固比20∶1加入70%乙醇于80 ℃水浴鍋中水浴,水浴時間分別為30、60、90、120、150、180 min。3 500 r/min離心15 min,測定上清液中總黃酮含量。

    3)提取溫度對總黃酮提取率的影響。稱取適量白花蛇舌草粉末,按液固比20∶1加入70%乙醇分別于50、60、70、80、90 ℃水浴120 min。相同條件下將提取液離心后測定上清液中總黃酮含量。

    4)乙醇濃度對總黃酮提取率的影響。稱取適量的白花蛇舌草粉末,按液固比20∶1分別加入60%、70%、80%、90%、95%的乙醇于80 ℃水浴120 min,然后提取液離心,測定上清液中總黃酮含量。

    1.3.3 正交試驗 綜合單因素試驗結果,設計了4因素3水平正交試驗L9(34),因素與水平設計見表1。

    1.4 白花蛇舌草總黃酮抗氧化活性測定

    1.4.1 總還原力的測定 總還原力的測定參照Oyaizu等[22]的方法。以抗壞血酸為陽性對照,比較相同濃度下白花蛇舌草總黃酮和抗壞血酸還原力的強弱。吸光度越大,表示總還原力越強。

    1.4.2 鐵離子螯合力的測定 Fe2+螯合力的測定參照Fan等[23]的研究方法。以EDTA-Na2為對照,比較濃度為0.062 5、0.125、0.25、0.5、1.0、2.0 mg/mL時白花蛇舌草總黃酮和EDTA-Na2螯合金屬離子能力的強弱,所有試驗均重復3次。鐵離子螯合率=[1-(A1-A2)/A0]×100%,其中,A0、A1、A2分別為不加樣品溶液體系,加樣品和菲咯嗪溶液體系,加樣品和不加菲咯嗪溶液體系的吸光度。

    1.4.3 羥自由基清除力的測定 通過水楊酸鈉法[24]測定羥自由基清除力。以抗壞血酸為陽性對照,設置不加水楊酸鈉的體系為陰性對照,測定反應液在510 nm的吸光度,并將結果用羥自由基清除能力表示,所有試驗均重復3次。羥自由基清除率=[1-(A1-A2)/A0]×100%,式中,A0、A1、A2分別為不加樣品溶液體系,加樣品和水楊酸鈉溶液體系,陰性對照的吸光度。

    1.4.4 超氧陰離子清除力的測定 采用鄰苯三酚自氧化法[25],以抗壞血酸作為陽性標準品,利用濃鹽酸終止反應,比較白花蛇舌草總黃酮和抗壞血酸抑制超氧陰離子生成的能力,結果用超氧陰離子清除率表示,所有試驗均重復3次。超氧陰離子清除率=[1-(A1-A2)/A0]×100%,其中,A0、A1、A2分別為不加樣品溶液體系,加樣品和鄰苯三酚溶液體系,加樣品和稀鹽酸體系的吸光度。

    1.5 數(shù)據(jù)處理

    用Origin 8.0進行單因素和體外抗氧化數(shù)據(jù)分析,數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標準差(Standard deviation,SD)表示,組間多重比較采用Tukey法;正交試驗及數(shù)據(jù)分析采用SPSS 16.0軟件。

    2 結果與分析

    2.1 白花蛇舌草總黃酮干物質組分分析

    白花蛇舌草浸膏真空干燥后為即為其總黃酮粗品,粗品總黃酮含量可達96.2%,為粗品的主要成分。因此,總黃酮為白花蛇舌草體外抗氧化的物質基礎。

    2.2 白花蛇舌草總黃酮提取工藝優(yōu)化

    2.2.1 單因素試驗結果 液固比對白花蛇舌草總黃酮提取率有一定的影響,在一定范圍內(nèi),增大液固比能提高白花蛇舌草總黃酮的提取率,當液固比達到40∶1時,總黃酮提取率不再顯著提高(圖1A)。圖1B顯示,提取時間較短時白花蛇舌草總黃酮提取率呈增加狀態(tài),但變化并不顯著,當水浴時間達到150 min時提取率顯著上升,隨后有下降趨勢。高溫能促進白花蛇舌草總黃酮的溶出。從圖1C可以看出,在適當?shù)臏囟确秶鷥?nèi)升高溫度總黃酮提取率顯著提高,超過該溫度后提取率變化不明顯。圖1D表明乙醇濃度升高能促進白花蛇舌草總黃酮溶出,且作用顯著,在乙醇濃度達到90%后作用效能減弱。因此,以液固比30∶1、40∶1、50∶1,水浴時間120、150、180 min,水浴溫度70、80、90 ℃,乙醇濃度80%、90%、95%為正交試驗的3個水平。

    2.2.2 乙醇浸提白花蛇舌草總黃酮的結果 正交試驗結果如表2所示。由表2可以看出,最優(yōu)工藝為A2B3C3D3,即用95%的乙醇以40∶1的液固比在90 ℃下提取180 min。表3為正交試驗方差分析,浸提溫度和溶劑濃度對產(chǎn)物溶出率的影響,均為顯著(P<0.05),而提取溶劑加入的比例和浸提時間對總黃酮的溶出作用并不明顯。比較F值可知,試驗因素的主次順序與極差分析一致。對正交試驗結果進行驗證,總黃酮的提取率可達(2.22±0.01)%。

    2.3 白花蛇舌草總黃酮體外抗氧化活性

    2.3.1 總還原力測定 白花蛇舌草總黃酮的總還原力在一定濃度范圍內(nèi)逐漸增大,當達到一定濃度后,總還原力達到最大,不再上升。比較VC和白花蛇舌草總黃酮的總還原力發(fā)現(xiàn),在相同濃度下的作用效果,低濃度時白花蛇舌草總黃酮的總還原力較VC弱,隨著溶液濃度的升高,白花蛇舌草總黃酮的總還原力上升幅度大于VC,并超過VC的總還原力,二者濃度在1.0 mg/mL時達到最大(圖2)。endprint

    2.3.2 鐵離子螯合力的測定 白花蛇舌草總黃酮具有較強的鐵離子螯合力。由圖3可以得知,EDTA-Na2和白花蛇舌草總黃酮對鐵離子螯合率均具有劑量依賴性。低濃度時,鐵離子螯合率隨著濃度增大而增幅較快,其后隨著溶液濃度的增大,螯合率的變化逐漸減小直至極值。低濃度的白花蛇舌草總黃酮對鐵離子的螯合能力大于相同濃度EDTA-Na2的螯合能力;當濃度超過1.0 mg/mL后,EDTA-Na2的螯合能力略大于白花蛇舌草總黃酮的鐵離子螯合力。

    2.3.3 羥自由基清除力的測定 白花蛇舌草總黃酮對羥自由基有明顯的清除作用,但該作用較同濃度VC弱。VC和白花蛇舌草總黃酮對羥自由基的清除效率隨濃度的升高作用越來越大,直至濃度達到2.0 mg/mL時VC對該自由基的清除作用達到最大,為99%,此時白花蛇舌草總黃酮的清除效率為80%;當白花蛇舌草總黃酮的濃度大于1.0 mg/mL時其對羥自由基的清除能力變化不再明顯,相同濃度相同條件下VC對羥自由基的清率始終大于白花蛇舌草總黃酮(圖4)。

    2.3.4 超氧陰離子清除力的測定 白花蛇舌草總黃酮具有較強的清除超氧陰離子的作用,白花蛇舌草黃總酮的超氧陰離子清除能力在一定濃度范圍內(nèi)呈劑量依賴性。比較VC與白花蛇舌草黃總酮二者的超氧陰離子清除能力,發(fā)現(xiàn)高濃度的VC對超氧陰離子的清除率接近100%,而白花蛇舌草總黃酮對超氧陰離子的清除率在達到70%后不再增大(圖5)。

    3 結論

    本試驗研究了影響溶液浸提法的4個因素——液固比、提取時間、提取溫度及乙醇濃度對白花蛇舌草總黃酮溶出率的影響。結果表明,用95%乙醇與白花蛇舌草粉末按40∶1,在90 ℃下提取180 min,總黃酮提取率可達(2.22±0.01)%。白花蛇舌草總黃酮具有較強的總還原力和Fe2+螯合力,對羥自由基和超氧陰離子自由基有較強的清除能力。白花蛇舌草總黃酮潛在的抗氧化活性有望使其開發(fā)為新的抗氧劑。

    參考文獻:

    [1] 張 軻.白花蛇舌草化學成分研究[D].北京:中國中醫(yī)科學院,2016.

    [2] 馬 河,李方麗,王 芳,等.白花蛇舌草化學成分研究[J].中藥材,2016,39(1):98-102.

    [3] 李方麗.白花蛇舌草化學成分及其體外抗腫瘤活性研究[D].濟南:山東中醫(yī)藥大學,2016.

    [4] 紀寶玉,范崇慶,裴莉昕,等.白花蛇舌草的化學成分及藥理作用研究進展[J].中國實驗方劑學雜志,2014,20(19):235-240.

    [5] 毛 宇,徐 芳,徐小娟,等.白花蛇舌草抗腫瘤成分及其作用機理研究進展[J].現(xiàn)代預防醫(yī)學,2015,42(17):3128-3132.

    [6] 李文婷,戴紫函,程海波,等.白花蛇舌草活性成分及其協(xié)同抗腫瘤機制研究進展[J].世界科學技術-中醫(yī)藥現(xiàn)代化,2015,17(3):670-674.

    [7] 肖 云,伍治平,金從國,等.白花蛇舌草提取物抗小鼠結直腸癌血管生成的實驗研究[J].昆明醫(yī)科大學學報,2013(10):53-57.

    [8] 文雪梅,陳 瑛,李 婷,等.白花蛇舌草對宮頸癌細胞增殖、凋亡及Ki-67表達的影響[J].中國老年學雜志,2017,37(3):561-563.

    [9] 吳逢選,周郁鴻,葉寶東.白花蛇舌草抗腫瘤機制研究進展及其在血液病中的應用[J].中華中醫(yī)藥雜志,2015(1):167-169.

    [10] 楊真真,姜夢麗,賴宏強,等.白花蛇舌草抗炎作用及優(yōu)選組分處方[J].福建中醫(yī)藥大學學報,2014,24(3):49-51.

    [11] 王洪鴿,湯 承,王 航,等.白花蛇舌草多糖對小鼠免疫功能和生長發(fā)育的影響[J].中國畜牧獸醫(yī),2013,40(10):140-143.

    [12] 樸紅梅,宋秋紅,金延燕,等.白花蛇舌草對哮喘模型小鼠Th1/Th2免疫平衡的影響[J].中國醫(yī)院藥學雜志,2013,33(17):1381-1385.

    [13] 劉星雨,周 敏,孫體健.天然黃酮類化合物的藥理活性及分離提取[J].中國藥物與臨床,2014,14(5):621-624.

    [14] 胡云霞,樊金玲,武 濤.黃酮類化合物分類和生物活性機理[J].棗莊學院學報,2014,31(2):72-78.

    [15] 張懷民,楊 虹,鄭海洲.天然黃酮類化合物防治心腦血管疾病的研究進展[J].中國新藥與臨床雜志,2016(10):704-708.

    [16] 李湘洲,欒芳菲,張 勝,等.黃酮類化合物的抗腫瘤和抗血管生成作用研究進展[J].食品與機械,2016(1):199-201,206.

    [17] 孫曉潤,陳蘋蘋,林 悅,等.天然黃酮類化合物抗腫瘤作用靶點研究進展[J].中國實驗方劑學雜志,2017,23(6):218-228.

    [18] 李 丹,彭 成,謝曉芳.黃酮類化合物治療糖尿病及其并發(fā)癥的研究進展[J].中國實驗方劑學雜志,2014,20(11):239-242.

    [19] 董麗紅,張瑞芬,蘇東曉,等.食源性黃酮類化合物改善脂質代謝作用及其機制研究進展[J].中國細胞生物學學報,2016, 38(1):81-90.

    [20] 徐學君,張秀芳,徐德琴,等.黃酮類化合物調節(jié)血脂作用的研究進展[J].中國藥房,2016,27(1):114-117.

    [21] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(2015版)一部[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2015.

    [22] OYAIZU,M. Studies on products of browning reaction-antioxidative activities of products of browning reaction prepared from glucosamine[J].The Janpanese Journal of nutrition,1986, 44:307-315.

    [23] FAN L P,LI J W,DENG K Q,et al. Effects of drying methods on the antioxidant activities of polysaccharides extracted from Ganoderma lucidum[J].Carbohydrate Polymers,2012,87:1849-1854.

    [24] 邰 超,鄒 洪,谷學新,等.Fenton反應產(chǎn)生的羥自由基及其清除的電化學方法測定[J].分析測試學報,2002,21(5):30-32.

    [25] SUN C,WANG J W,F(xiàn)ANG L. Free radical scavenging and antioxidant activities of EPS2,an exopolysaccharide produced by a marine filamentous fungus Keissleriella sp.YS 4108[J].Life Sciences,2004,75:1063-1073.endprint

    久久免费观看电影| 亚洲成人手机| 免费观看av网站的网址| 午夜福利免费观看在线| 欧美av亚洲av综合av国产av| 欧美av亚洲av综合av国产av| 男人添女人高潮全过程视频| 日本欧美视频一区| 国产精品久久久av美女十八| 国产亚洲精品第一综合不卡| av线在线观看网站| 在线观看一区二区三区激情| 99re6热这里在线精品视频| 色精品久久人妻99蜜桃| 一级毛片电影观看| 国产精品免费视频内射| 精品一品国产午夜福利视频| 天天操日日干夜夜撸| bbb黄色大片| 一级毛片女人18水好多 | 免费少妇av软件| 国产高清不卡午夜福利| 亚洲精品乱久久久久久| 在线 av 中文字幕| 在线观看人妻少妇| 成在线人永久免费视频| 女警被强在线播放| 日日爽夜夜爽网站| 黄色 视频免费看| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 男人操女人黄网站| 国产免费视频播放在线视频| 999久久久国产精品视频| 99re6热这里在线精品视频| 国产精品偷伦视频观看了| 一级毛片电影观看| 欧美日韩黄片免| 免费看不卡的av| 久久久亚洲精品成人影院| www.精华液| 国产片特级美女逼逼视频| 欧美av亚洲av综合av国产av| 日韩人妻精品一区2区三区| 2018国产大陆天天弄谢| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 国产日韩欧美亚洲二区| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 多毛熟女@视频| 午夜激情av网站| 国产淫语在线视频| 18在线观看网站| 国产视频首页在线观看| 老汉色∧v一级毛片| 欧美人与善性xxx| 中文欧美无线码| 久久影院123| 国产亚洲一区二区精品| 久久鲁丝午夜福利片| 麻豆国产av国片精品| 国产成人av激情在线播放| 激情视频va一区二区三区| 亚洲第一青青草原| av福利片在线| 国产1区2区3区精品| 纯流量卡能插随身wifi吗| 亚洲国产精品999| 中国美女看黄片| 成人影院久久| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 欧美日韩综合久久久久久| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 亚洲av片天天在线观看| 波多野结衣av一区二区av| 精品国产乱码久久久久久男人| 国产97色在线日韩免费| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 亚洲av欧美aⅴ国产| www.精华液| 亚洲五月色婷婷综合| 免费看不卡的av| 久久99精品国语久久久| 国产成人a∨麻豆精品| 亚洲图色成人| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 日本vs欧美在线观看视频| 久久精品国产综合久久久| 丁香六月天网| 久久精品成人免费网站| 亚洲精品av麻豆狂野| 三上悠亚av全集在线观看| 国产一区二区激情短视频 | 啦啦啦视频在线资源免费观看| 999久久久国产精品视频| 亚洲人成77777在线视频| 亚洲伊人久久精品综合| a级毛片黄视频| 两个人免费观看高清视频| 国产精品国产三级专区第一集| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲图色成人| 电影成人av| 国产人伦9x9x在线观看| 999精品在线视频| 国产精品九九99| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 亚洲中文日韩欧美视频| 一区福利在线观看| 亚洲熟女精品中文字幕| 精品少妇内射三级| avwww免费| 嫁个100分男人电影在线观看 | 午夜福利在线免费观看网站| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 国产精品国产av在线观看| 香蕉国产在线看| 高清不卡的av网站| 欧美97在线视频| 国产黄色免费在线视频| 亚洲av片天天在线观看| 少妇被粗大的猛进出69影院| bbb黄色大片| 亚洲精品国产av成人精品| 亚洲国产看品久久| 波多野结衣一区麻豆| 午夜日韩欧美国产| 精品人妻在线不人妻| 男女免费视频国产| 亚洲欧洲国产日韩| 一级片'在线观看视频| 亚洲成国产人片在线观看| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 亚洲av美国av| 天天添夜夜摸| 国产一区二区三区av在线| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 国产1区2区3区精品| 国产精品一二三区在线看| 搡老岳熟女国产| 久久国产精品大桥未久av| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 亚洲精品久久午夜乱码| 亚洲图色成人| 日韩大码丰满熟妇| 黄色毛片三级朝国网站| 午夜福利乱码中文字幕| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 免费日韩欧美在线观看| 老汉色av国产亚洲站长工具| 成年女人毛片免费观看观看9 | 夫妻性生交免费视频一级片| 91麻豆av在线| 午夜精品国产一区二区电影| 国产免费福利视频在线观看| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 99国产精品一区二区蜜桃av | 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 国产成人影院久久av| 一区二区三区四区激情视频| 亚洲成人免费av在线播放| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 热re99久久国产66热| 国产成人系列免费观看| 波多野结衣一区麻豆| 一本综合久久免费| 国产午夜精品一二区理论片| 亚洲av男天堂| 超碰97精品在线观看| 天天添夜夜摸| 色视频在线一区二区三区| 97在线人人人人妻| 国产精品国产三级专区第一集| 一区二区三区四区激情视频| 亚洲人成网站在线观看播放| 首页视频小说图片口味搜索 | 操出白浆在线播放| 狂野欧美激情性bbbbbb| 最近中文字幕2019免费版| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 国产高清视频在线播放一区 | 大码成人一级视频| 亚洲三区欧美一区| 久久99一区二区三区| 天堂8中文在线网| 国产野战对白在线观看| 国产精品一国产av| 下体分泌物呈黄色| 国产男女超爽视频在线观看| 亚洲欧洲日产国产| 悠悠久久av| 看免费成人av毛片| 欧美精品一区二区免费开放| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| www日本在线高清视频| 久久精品国产a三级三级三级| 看免费成人av毛片| 亚洲熟女精品中文字幕| 久久综合国产亚洲精品| 亚洲中文字幕日韩| 少妇被粗大的猛进出69影院| 日韩av在线免费看完整版不卡| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 老司机亚洲免费影院| 国产亚洲精品第一综合不卡| 国产有黄有色有爽视频| 亚洲av男天堂| 亚洲欧美清纯卡通| 国产成人系列免费观看| 男女之事视频高清在线观看 | 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 一边摸一边做爽爽视频免费| 亚洲九九香蕉| 日本av手机在线免费观看| 国产亚洲精品第一综合不卡| 欧美日韩福利视频一区二区| 欧美成人午夜精品| 久久精品国产亚洲av高清一级| 亚洲情色 制服丝袜| 免费黄频网站在线观看国产| 中文欧美无线码| 不卡av一区二区三区| 国产精品二区激情视频| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 亚洲欧美激情在线| 国产成人精品在线电影| 久久久国产一区二区| 亚洲专区中文字幕在线| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 99九九在线精品视频| 国产91精品成人一区二区三区 | 国产黄频视频在线观看| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 看免费成人av毛片| 欧美久久黑人一区二区| 午夜福利乱码中文字幕| 国产精品亚洲av一区麻豆| 亚洲精品在线美女| 亚洲精品自拍成人| 咕卡用的链子| 看免费成人av毛片| 丰满迷人的少妇在线观看| 亚洲欧美色中文字幕在线| 亚洲 国产 在线| 免费看十八禁软件| 午夜福利影视在线免费观看| 在线精品无人区一区二区三| www.熟女人妻精品国产| 男人添女人高潮全过程视频| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 欧美日韩黄片免| 国产成人精品无人区| 国产成人a∨麻豆精品| 亚洲精品一二三| 久9热在线精品视频| 丝袜脚勾引网站| 久久国产精品大桥未久av| 国产精品一区二区免费欧美 | 国产有黄有色有爽视频| 亚洲成人手机| 深夜精品福利| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 精品亚洲成国产av| 老司机午夜十八禁免费视频| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 观看av在线不卡| 欧美日韩精品网址| 国产成人精品久久二区二区91| 91老司机精品| 人妻 亚洲 视频| 少妇人妻久久综合中文| 飞空精品影院首页| 青草久久国产| 色婷婷久久久亚洲欧美| 在线观看免费视频网站a站| 亚洲一区二区三区欧美精品| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 妹子高潮喷水视频| 岛国毛片在线播放| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 国产精品久久久久成人av| 美女午夜性视频免费| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| av电影中文网址| 久久久欧美国产精品| 69精品国产乱码久久久| www.熟女人妻精品国产| 午夜福利影视在线免费观看| 国产在线一区二区三区精| 人体艺术视频欧美日本| 亚洲国产中文字幕在线视频| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 美女高潮到喷水免费观看| 女人精品久久久久毛片| 亚洲国产精品成人久久小说| kizo精华| 国产黄频视频在线观看| 亚洲av片天天在线观看| 男人添女人高潮全过程视频| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 色视频在线一区二区三区| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 成人免费观看视频高清| 久久久久视频综合| 九色亚洲精品在线播放| 欧美人与善性xxx| 七月丁香在线播放| 少妇 在线观看| 黄色视频不卡| 国产99久久九九免费精品| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 99久久综合免费| 久久久久精品人妻al黑| 看免费av毛片| 国产欧美亚洲国产| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| kizo精华| 国产一区二区 视频在线| 成人午夜精彩视频在线观看| 性少妇av在线| 亚洲专区国产一区二区| 九草在线视频观看| 国产成人91sexporn| 水蜜桃什么品种好| 欧美日本中文国产一区发布| 国产麻豆69| 无限看片的www在线观看| 国产不卡av网站在线观看| 99热国产这里只有精品6| 在现免费观看毛片| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 少妇人妻久久综合中文| 国产精品一区二区精品视频观看| 亚洲,欧美,日韩| 成人国产av品久久久| 亚洲av欧美aⅴ国产| 国产99久久九九免费精品| 国产又爽黄色视频| 一区在线观看完整版| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 国产伦理片在线播放av一区| 亚洲av男天堂| 亚洲成人免费av在线播放| 亚洲伊人久久精品综合| 男女午夜视频在线观看| 最新在线观看一区二区三区 | 成人手机av| 亚洲精品第二区| 日韩av在线免费看完整版不卡| 久久久久网色| 日韩一本色道免费dvd| 水蜜桃什么品种好| 日韩大码丰满熟妇| 另类精品久久| 美女主播在线视频| 18禁观看日本| 老司机午夜十八禁免费视频| 在线观看人妻少妇| 亚洲综合色网址| 日韩视频在线欧美| 男女边吃奶边做爰视频| kizo精华| 亚洲精品久久午夜乱码| 五月开心婷婷网| 啦啦啦在线免费观看视频4| 在线天堂中文资源库| 日日夜夜操网爽| 九草在线视频观看| 国产成人精品久久二区二区免费| 国产av精品麻豆| 午夜91福利影院| 国产精品av久久久久免费| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 国产成人精品在线电影| 婷婷色综合www| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 老司机亚洲免费影院| 香蕉丝袜av| 又黄又粗又硬又大视频| 欧美在线一区亚洲| 97精品久久久久久久久久精品| 中文字幕制服av| 中文字幕人妻熟女乱码| 欧美+亚洲+日韩+国产| 亚洲国产av新网站| 免费黄频网站在线观看国产| 高清av免费在线| 久久狼人影院| www.精华液| 另类亚洲欧美激情| 黄色a级毛片大全视频| 精品少妇黑人巨大在线播放| 真人做人爱边吃奶动态| 精品国产乱码久久久久久男人| 午夜福利影视在线免费观看| 永久免费av网站大全| 水蜜桃什么品种好| 国产色视频综合| 飞空精品影院首页| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 午夜免费成人在线视频| 国产一区亚洲一区在线观看| 国产又爽黄色视频| av一本久久久久| 亚洲第一青青草原| 欧美激情高清一区二区三区| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| av网站免费在线观看视频| 97精品久久久久久久久久精品| 又大又爽又粗| 黄色 视频免费看| 日本一区二区免费在线视频| 丝袜喷水一区| 欧美国产精品一级二级三级| 亚洲精品一二三| 日本av手机在线免费观看| 国产精品九九99| 9191精品国产免费久久| 日本a在线网址| 97人妻天天添夜夜摸| 18在线观看网站| 999精品在线视频| 视频区图区小说| 好男人电影高清在线观看| e午夜精品久久久久久久| tube8黄色片| 大码成人一级视频| 国产野战对白在线观看| 又大又黄又爽视频免费| 一边摸一边抽搐一进一出视频| www.av在线官网国产| 夫妻午夜视频| 日韩一区二区三区影片| 夫妻性生交免费视频一级片| 我的亚洲天堂| 久久亚洲精品不卡| 首页视频小说图片口味搜索 | 久久精品国产亚洲av高清一级| 99国产精品99久久久久| 国产成人一区二区在线| 黑人猛操日本美女一级片| 亚洲专区中文字幕在线| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 久久综合国产亚洲精品| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 精品第一国产精品| 亚洲成人国产一区在线观看 | 欧美 日韩 精品 国产| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 美女国产高潮福利片在线看| 伊人亚洲综合成人网| 五月天丁香电影| 欧美xxⅹ黑人| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 国产在线视频一区二区| 伦理电影免费视频| 人妻 亚洲 视频| 国产激情久久老熟女| 欧美av亚洲av综合av国产av| 国产熟女午夜一区二区三区| 亚洲成人免费电影在线观看 | 在线观看免费高清a一片| 国产不卡av网站在线观看| www.精华液| 国产淫语在线视频| 狂野欧美激情性xxxx| 涩涩av久久男人的天堂| 少妇人妻 视频| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 欧美精品一区二区免费开放| 亚洲三区欧美一区| 国产精品国产三级专区第一集| 手机成人av网站| 男女之事视频高清在线观看 | 精品亚洲成国产av| 老司机午夜十八禁免费视频| 亚洲中文日韩欧美视频| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 成年动漫av网址| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 精品亚洲成a人片在线观看| 亚洲欧洲国产日韩| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 性高湖久久久久久久久免费观看| 9色porny在线观看| 蜜桃在线观看..| 国产高清videossex| 欧美黑人精品巨大| 高清av免费在线| 国产成人系列免费观看| 精品国产乱码久久久久久小说| 国产视频一区二区在线看| 一级,二级,三级黄色视频| a级毛片黄视频| 满18在线观看网站| 免费日韩欧美在线观看| 国产福利在线免费观看视频| 欧美国产精品va在线观看不卡| 极品少妇高潮喷水抽搐| 久久人妻熟女aⅴ| 色婷婷久久久亚洲欧美| 美女大奶头黄色视频| 一级黄色大片毛片| 日韩av在线免费看完整版不卡| 97精品久久久久久久久久精品| 国产黄色免费在线视频| 久久久久久免费高清国产稀缺| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 美女国产高潮福利片在线看| 久久99一区二区三区| 一本综合久久免费| 色网站视频免费| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 久久亚洲国产成人精品v| www.精华液| 久久亚洲精品不卡| 黑人猛操日本美女一级片| 久久毛片免费看一区二区三区| 国产精品 欧美亚洲| 在线观看免费视频网站a站| 午夜久久久在线观看| avwww免费| 欧美另类一区| 国产精品国产av在线观看| 国产精品一区二区在线不卡| 国产欧美日韩一区二区三 | 欧美在线一区亚洲| 97人妻天天添夜夜摸| 1024视频免费在线观看| 国产视频一区二区在线看| 国产精品成人在线| 久久精品久久久久久久性| 视频区图区小说| 精品人妻在线不人妻| 亚洲中文日韩欧美视频| 久久精品成人免费网站| 新久久久久国产一级毛片| 中文字幕最新亚洲高清| 久久人妻福利社区极品人妻图片 | 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 国产一区有黄有色的免费视频| 91老司机精品| 亚洲一码二码三码区别大吗| 999久久久国产精品视频| 多毛熟女@视频| 亚洲av电影在线进入| 国产视频一区二区在线看| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 亚洲av美国av| 老司机影院成人| 操出白浆在线播放| 午夜福利一区二区在线看| 99久久综合免费| 国产精品国产三级专区第一集| av在线app专区| 久久综合国产亚洲精品| 男女免费视频国产| 三上悠亚av全集在线观看| 国产精品 欧美亚洲| 免费高清在线观看日韩| 97精品久久久久久久久久精品| 日韩制服骚丝袜av| a级片在线免费高清观看视频| 欧美大码av| 日本黄色日本黄色录像| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 在线观看人妻少妇| 欧美人与善性xxx| 久久精品亚洲av国产电影网| 丝袜在线中文字幕| 午夜老司机福利片| 久久精品国产a三级三级三级| 国产精品av久久久久免费| 久久久久国产一级毛片高清牌| 精品少妇内射三级| av网站免费在线观看视频| 另类精品久久| 日韩制服骚丝袜av| 美女中出高潮动态图| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 国产91精品成人一区二区三区 | 大陆偷拍与自拍| a级毛片黄视频| 十八禁人妻一区二区| 在线观看www视频免费| 成人手机av| 十八禁高潮呻吟视频| √禁漫天堂资源中文www| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 久久精品国产综合久久久| 高清黄色对白视频在线免费看| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 91国产中文字幕| 国产高清视频在线播放一区 | 亚洲人成电影免费在线| 乱人伦中国视频| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 久久久久久久大尺度免费视频| 操美女的视频在线观看| 久久天堂一区二区三区四区| 国产成人免费无遮挡视频| 大陆偷拍与自拍| 午夜福利影视在线免费观看| 亚洲av日韩在线播放| 国产黄色视频一区二区在线观看| 亚洲一区二区三区欧美精品| 久久久久久免费高清国产稀缺| av片东京热男人的天堂| 熟女av电影| 国产在视频线精品| 黄频高清免费视频| 精品福利观看|