糖尿病患者進(jìn)行洗滌式自體血回輸過(guò)程中紅細(xì)胞滲透脆性的研究*

孫豐偉 李 鐵 李 逵

(1.泰山醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，山東 泰安 271000； 2. 新泰市天寶中心衛(wèi)生院，山東 泰安 271200)

糖尿病患者進(jìn)行洗滌式自體血回輸過(guò)程中紅細(xì)胞滲透脆性的研究*

孫豐偉1李 鐵1李 逵2

(1.泰山醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，山東 泰安 271000； 2. 新泰市天寶中心衛(wèi)生院，山東 泰安 271200)

目的 觀(guān)察洗滌式自體血回輸過(guò)程中糖尿病患者回收紅細(xì)胞的滲透脆性的變化，以及由此帶來(lái)的機(jī)械性損傷。方法 擇期術(shù)中采用血液回輸機(jī)進(jìn)行自體血回輸?shù)幕颊?0例。根據(jù)有無(wú)合并糖尿病分為糖尿病組(D組，n=30)，和對(duì)照組(C組，n=30)，監(jiān)測(cè)手術(shù)前、洗滌前、洗滌后紅細(xì)胞的滲透脆性，測(cè)量回收血靜置2 h、4 h、6 h、12 h、24 h后游離血紅蛋白濃度和血鉀水平。結(jié)果 同一處理?xiàng)l件下，手術(shù)前、洗滌D組患者的紅細(xì)胞在0.36%～0.68%低滲液中的溶血率均高于C組(P<0.05)，洗滌后差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，洗滌后回收血液靜置時(shí)間越長(zhǎng)游離血紅蛋白和血鉀濃度越高，與洗滌后即刻比較有明顯差異(P<0.05)，但在回收后同一時(shí)間點(diǎn)上，兩組間指標(biāo)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。結(jié)論 洗滌式自體回輸過(guò)程中沒(méi)有加重糖尿病患者紅細(xì)胞的損傷程度，糖尿病患者使用自體血回輸是安全的，但是回收血液應(yīng)盡早回輸，以減少紅細(xì)胞溶血的發(fā)生。

糖尿??；自體血液回輸；紅細(xì)胞；滲透脆性

紅細(xì)胞是血液中最主要的有形成分，約占血液體積的一半，紅細(xì)胞的變化對(duì)血液循環(huán)，特別是微循環(huán)有重要的影響。1886年自體輸血的概念被首次提出，直至1921年為臨床接受。術(shù)中洗滌式自體血回輸是通過(guò)回收手術(shù)野失血、洗滌、回輸?shù)囊环N適于急救、快捷的輸血技術(shù)，該技術(shù)能明顯減少異體血輸入，降低感染、免疫抑制及輸血反應(yīng)等不良反應(yīng)，在心血管手術(shù)、整形外科、神經(jīng)外科、器官移植及急救創(chuàng)傷等領(lǐng)域已得到廣泛應(yīng)用[1]。糖尿病能引起紅細(xì)胞變形指數(shù)降低，聚集指數(shù)增加，從而使紅細(xì)胞滲透脆性增加，粘滯度增加，嚴(yán)重影響患者微循環(huán)，帶來(lái)末梢循環(huán)、末梢神經(jīng)損傷性疾病[2]。有研究表明，紅細(xì)胞的存活率與滲透脆性改變相關(guān)[3]，那么在糖尿病病人病理改變的基礎(chǔ)上進(jìn)行洗滌式自體血回輸對(duì)紅細(xì)胞滲透脆性是否影響有待觀(guān)察。本研究對(duì)糖尿病患者在洗滌過(guò)程中的紅細(xì)胞滲透脆性進(jìn)行了評(píng)估，以期為糖尿病患者應(yīng)用自體血回輸技術(shù)提供科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料

擇期手術(shù)治療且需要洗滌式自體血液回輸技術(shù)的患者60例，年齡18～65歲，平均(33±5.5)歲，排除心、肝、腎功能障礙病例；糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)參照年美國(guó)《糖尿病學(xué)會(huì)指南》[4]，確診Ⅱ型糖尿病3～10年，無(wú)糖尿病并發(fā)癥。根據(jù)有無(wú)合并糖尿病分為糖尿病組(n=30)合對(duì)照組(n=30)。經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，征得家屬同意并簽署知情同意書(shū)。

1.2自體血回收方法

回輸方法[5]：本組采用北京京精公司生產(chǎn)的ZT-2000型血液回收機(jī)。自體血液回收方法：(1)手術(shù)全過(guò)程將體腔積血及手術(shù)野出血收集到儲(chǔ)血器中，輸入抗凝劑(500 ml生理鹽水加入低分子肝素100 mg)與回收血液混合，防止凝固。然后進(jìn)行分離、生理鹽水或林格氏液洗滌處理。細(xì)胞碎片、游離血紅蛋白及抗凝劑等被分流到廢液袋中，而后將純凈、濃縮的血細(xì)胞保留在血液袋內(nèi)，在術(shù)中直接回輸。

1.3血清學(xué)監(jiān)測(cè)：

1.3.1手術(shù)前(T0)紅細(xì)胞的滲透脆性、游離血紅蛋白濃度和血鉀水平監(jiān)測(cè) 所有患者入手術(shù)室前抽取靜脈血6 ml備檢。

1.3.2洗滌前(T1)紅細(xì)胞的滲透脆性、游離血紅蛋白濃度和血鉀水平監(jiān)測(cè) 回收血袋內(nèi)的血在采血前輕搖動(dòng)使血液混勻后留取血液6ml備檢。

1.3.3洗滌后(T2)紅細(xì)胞的滲透脆性、游離血紅蛋白濃度和血鉀水平監(jiān)測(cè) 洗滌后的紅細(xì)胞懸液即刻取6 ml備檢。

1.3.4靜置2 h、4 h、6 h、12 h、24 h后游離血紅蛋白濃度和血鉀水平監(jiān)測(cè) 分別取洗滌后的紅細(xì)胞懸液6 ml置于5個(gè)試管中靜置2 h、4 h、6 h、12 h、24 h后，利用K5600微量分光光度計(jì)測(cè)量紅細(xì)胞滲透脆性，血?dú)夥治鰞x測(cè)定游離血紅蛋白和血鉀[6,7]。

1.4紅細(xì)胞滲透脆性監(jiān)測(cè)[8]

用天平稱(chēng)取醫(yī)用鹽，按濃度梯度配制0.36%～0.68%低滲鹽溶液各2.5 ml加入試管中，另取2.5 ml生理鹽水和2.5 ml蒸餾水于試管中。分別取各組血液樣本各100 μl加入各低滲溶液試管中，反復(fù)混勻后離心，觀(guān)察各管上清液的顏色，取上清液2 μl，依據(jù)手術(shù)前靜脈血加入生理鹽水試管的上清液為空白對(duì)照，采用K5600微量分光光度計(jì)測(cè)定540 nm波長(zhǎng)處溶血后的吸光度值。計(jì)算溶血率：溶血率=樣本吸光度值÷最大溶血吸光度值×100%。

1.5游離血紅蛋白和血鉀監(jiān)測(cè)

每個(gè)時(shí)間點(diǎn)血液6 ml放入的試管中，立即以3500轉(zhuǎn)/分離心10 min，取上清液做游離血紅蛋白和血鉀檢測(cè)。采用瑞爾達(dá)血漿游離血紅蛋白試劑盒(北京)，按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行檢測(cè)。游離血紅蛋白=測(cè)定管吸光度OD值/標(biāo)準(zhǔn)管吸光度OD值×100%。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1兩組紅細(xì)胞術(shù)前、洗滌前和洗滌后在不同NaCl濃度時(shí)的滲透脆性比較 兩組患者紅細(xì)胞在術(shù)前、洗滌前溶血率組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而洗滌后差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；對(duì)照組組內(nèi)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，糖尿病組洗滌后溶血率較洗滌前有所降低。 說(shuō)明糖尿病患者術(shù)前紅細(xì)胞滲透脆性較正常人高，而洗滌式自體血回輸并不增加糖尿病患者紅細(xì)胞的溶血率(表1)。

表1 兩組紅細(xì)胞不同時(shí)間點(diǎn)在低滲濃度NaCl的滲透脆性比較

注：☆：與對(duì)照組比較P<0.05。

2.2回收血靜置時(shí)間與游離血紅蛋白和血鉀的變化 兩組患者回收血液隨著留置時(shí)間延長(zhǎng)血清游離血紅蛋白濃度和血鉀值逐漸增高，組內(nèi)比較0 h、2 h、4 h、6 h、12 h、24 h差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，同一時(shí)間點(diǎn)兩組之間數(shù)據(jù)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 說(shuō)明糖尿病患者洗滌后血液紅細(xì)胞脆性與正常人無(wú)明顯差異，但洗滌后紅細(xì)胞隨留置時(shí)間越長(zhǎng)紅細(xì)胞破碎越多，提示回收血應(yīng)盡早回輸(表2,3)。

表2 兩組洗滌后血液靜置時(shí)間與游離血紅蛋白的變化

注：a:與0h比較,P<0.05；b：與2h比較,P<0.05。

表3 兩組洗滌后血液靜置時(shí)間與血清鉀的變化

注：a:與0h比較，P<0.05；b：與2h比較，P<0.05。

3 討 論

1900年Lnadsteiner首先發(fā)現(xiàn)了人類(lèi)存在不同血型，為異體輸血奠定了理論基礎(chǔ)。近年來(lái)，隨著治療用血量逐漸增多、血源日益緊張，臨床輸血供需矛盾日漸突出。所以，如何避免大量輸入異體血、減少庫(kù)血輸血量及輸血反應(yīng)成為手術(shù)科室關(guān)注的焦點(diǎn)。自體血回輸自然成為熱門(mén)話(huà)題，在急診患者救治過(guò)程中，血源緊張、配血困難時(shí)，自體血回輸成為搶救患者生命的必然措施，而且，回輸自體血避免了過(guò)敏、溶血等不良反應(yīng)，不失為搶救患者的有效方法[9]。但是，多數(shù)醫(yī)師認(rèn)為自體血回輸方法對(duì)非糖尿病患者紅細(xì)胞影響較小[10]，而糖尿病患者長(zhǎng)期(3～10年)高血糖可以導(dǎo)致紅細(xì)胞膜蛋白變性，使紅細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，導(dǎo)致紅細(xì)胞變形能力降低，膜的滲透脆性增加，洗滌過(guò)程中可能引起紅細(xì)胞碎裂。

紅細(xì)胞的滲透脆性實(shí)驗(yàn)是根據(jù)細(xì)胞在低滲液中，由于水分子內(nèi)滲導(dǎo)致細(xì)胞膨脹破裂的原理來(lái)確定的，當(dāng)紅細(xì)胞置于不同濃度低滲液中，其溶血率大小不同，紅細(xì)胞滲透脆性由細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)及其形狀的變化來(lái)決定，糖尿病引起的紅細(xì)胞膜的過(guò)氧化及紅細(xì)胞表面積增加均可以引起滲透脆性增加，導(dǎo)致紅細(xì)胞變形能力的下降難以通過(guò)微循環(huán)管道，并且在洗滌過(guò)程容易受到破壞。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)兩組患者術(shù)前、洗滌前、洗滌后紅細(xì)胞滲透脆性的變化的研究，提示洗滌式自體血洗滌、回輸過(guò)程對(duì)合并糖尿病的紅細(xì)胞滲透脆性影響較小，原因是自體血洗滌過(guò)程中，滲透脆性高的衰老紅細(xì)胞在高速離心作用下發(fā)生破裂而被清除，獲得的濃縮紅細(xì)胞多數(shù)結(jié)構(gòu)正常[11]，說(shuō)明洗滌式自體血回輸方法可安全用于糖尿病患者的圍手術(shù)期供血。

游離血紅蛋白是紅細(xì)胞裂解產(chǎn)生的蛋白，檢查數(shù)值代表血漿中血紅蛋白的含量，是當(dāng)紅細(xì)胞因?yàn)闈B透脆性增加而破壞時(shí)，游離血紅蛋白和鉀水平自然升高，是檢測(cè)紅細(xì)胞破損程度的一個(gè)重要指標(biāo)，可以間接反映經(jīng)洗滌后的紅細(xì)胞滲透脆性。所以本研究選擇洗滌回輸?shù)募t細(xì)胞靜置不同時(shí)間后監(jiān)測(cè)游離血紅蛋白濃度和血鉀值作為評(píng)估指標(biāo)，結(jié)果顯示洗滌后糖尿病患者紅細(xì)胞的溶血程度較非糖尿病患者紅細(xì)胞無(wú)明顯差異，說(shuō)明經(jīng)過(guò)回輸機(jī)洗滌后糖尿病患者紅細(xì)胞的抗機(jī)械損傷能力接近正常，可較安全地應(yīng)用于臨床輸血。

總之，洗滌式自體血回輸可以安全應(yīng)用于合并糖尿病出血的患者，尤其是Rh陰性患者能及時(shí)提供專(zhuān)門(mén)血型的自體新鮮紅細(xì)胞，為患者的搶救贏(yíng)取時(shí)間，節(jié)約庫(kù)血血源。尤其適合偏遠(yuǎn)地區(qū)取血困難的基層醫(yī)院，特別是艾滋病、傳染病高發(fā)區(qū)更具有不可替代的社會(huì)價(jià)值。

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Research of red blood cell permeates brittleness in washed autologous blood transfusion from diabetics

SUN Feng-wei1LI Tie1LI Kui2

(Affiliated Hospital of Taishan Medical University,Taian 271000,China)

Objective:To observe the changes of the infiltration of red blood cells in patients with diabetes in the process of washing and blood transfusion,and the mechanical damage.Methods:60 cases of autologous blood transfusion were carried out by blood transfusion. According to the presence of diabetes mellitus divided into diabetic group (group D,n=30), and the control group (group C,n=30), to monitoring before the operation, after washing, washing before erythrocyte osmotic fragility, measuring blood recycling let stand for 2 h, 4 h, 6 h, 12 h, 24 h after free hemoglobin concentration and potassium levels.Results:Under the same processing conditions, before the operation, washing group D red blood cells of patients with hemolysis in 0.36%～0.68% low drainage rate were higher than group C (P<0.05), after washing there was no statistically significant difference (P>0.05), after washing recycling the longer incubation time free hemoglobin and blood potassium concentration is higher, compared with immediately after washing with obvious difference (P<0.05), but at the same time point after recycling, index no statistical difference between the two groups (P>0.05).Conclusion:In the process of washing type of autologous doping did not increase the damage degree of red blood cells in diabetic patients, diabetic patients using autologous blood doping is safe, but the recovery of blood should be back as soon as possible, to reduce the hemolysis of red blood cells.

diabetes;autologous blood transfusion;red blood cells;osmotic fragility

孫豐偉(1974—)，男，山東泰安人，講師，本科，主要從事臨床檢驗(yàn)工作。

R446.1

A

1004-7115(2017)10-1098-03

10.3969/j.issn.1004-7115.2017.10.006

2017-06-18)