不同特性色譜柱對肝素分離效果的比較

賓婕+張郴+陳建雯

摘 要：肝素是一種人工合成甜味劑，甜度大約是蔗糖的250倍，在20世紀初占有很大的市場，作為糖尿病患者的代糖。有研究表明，成人攝入20-40 g會頭暈，惡心，低血壓與發(fā)紺和高鐵血紅蛋白血癥。世界上大部分國家（美國、日本、中國臺灣、中國香港）均禁止食品中使用肝素。在我國，肝素不在衛(wèi)生標準GB2760允許使用的甜味劑名單范圍內(nèi)。據(jù)文獻報道，常在蜜餞食品中檢驗出肝素的存在[1]。本文考查三種不同特性的色譜柱對食品添加劑中的肝素的分離效果，以為肝素的檢測提供依據(jù)。

關(guān)鍵詞：不同特性色譜柱；肝素；分離效果

中圖分類號：TQ464 文獻標識碼：A 文章編號：1671-2064（2017）17-0199-01

1 材料、試劑與儀器

1.1 材料與試劑

（1）材料。食品添加劑購于市場，肝素標準品：英國APOLLO -NMR公司。（2）試劑。乙腈（色譜純，美國TEDIA天地試劑公司），水（自制超純水）。

1.2 儀器

安捷倫LC1200高效液相色譜儀，配熒光檢測器。色譜柱為Luna（2）C18（3.0um，150×4.6mm）；SunfireC18（5.0um，250×4.6mm）；Zorbax SB-C18（3.5um，250×4.6mm）。振蕩發(fā)生器（國華電器有限公司，BS-S），電子天平（德國賽多利斯，CP-224S）。

2 實驗方法

（1）樣品制備。在所選的食品添加劑中均未檢出肝素，為了達到實驗的目的，本研究采用加標的方式制備樣品，并進行實驗。（2）樣品前處理。稱取約1.2g（精確至0.1mg）加標樣品于錐形瓶中，按規(guī)定的方法進行萃取、純化后，取適量溶液過0.45μm濾膜，備用。（3）高效液相色譜條件。以乙腈–緩沖鹽為流動相，梯度洗脫：0-20min，乙腈12-23%，流速：1mL/min，柱溫：35℃，進樣量10uL，檢測波長：λex/λem=239/312nm。（4）樣品測定。取樣品（1），用三種不同特性的色譜柱按規(guī)定色譜條件（3）進行測定，結(jié)果見圖1。

實驗結(jié)果表明，Luna（2）C18（3.0um，150×4.6mm）較其他兩根色譜柱對食品添加劑中肝素而言，具有更好的分離效能。故用Luna（2）C18（3.0um，150×4.6mm）色譜柱進行方法學考查。

3 結(jié)果與討論

（1）線性關(guān)系考察。分別準確移取0.1、0.3、0.5、1.0、2.0mL肝素對照品溶液至50mL容量瓶中，采用甲醇-緩沖液7：3溶液定容至刻度。高效液相色譜儀分析，測定其峰面積，以濃度X（ug/mL）為橫坐標，色譜峰面積Y為縱坐標，繪制標準曲線。Y=1.4813X+0.0068，r=1。結(jié)果表明肝素標品濃度在0.1004～6.0420ug/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。（2）精密度試驗。分別精密吸取肝素對照品溶液10μL，連續(xù)進樣5次，記錄色譜圖，計算肝素的峰面積和相對標準偏差（RSD），結(jié)果RSD為0.47%。（3）穩(wěn)定性試驗。精密移取同一樣品溶液2（2）10μL，分別于0，2，4，8，12h進樣，記錄色譜圖，計算肝素的峰面積和相對標準偏差（RSD），結(jié)果RSD為1.08%。（4）重復(fù)性試驗。取同一樣品2（1）5份，精密稱定，按2（2）項下方法處理，進樣測定，計算肝素的峰面積和相對標準偏差（RSD），結(jié)果RSD為0.15%。（5）加標回收率試驗。對食品添加劑2（1）進行不同濃度水平的加標后，按2（2）項下方法處理，計算其加標回收率，結(jié)果肝素的平均加標回收率為98.58%（RSD=1.12%）。

4 結(jié)語

Luna（2）C18（3.0um，150×4.6 mm）色譜柱對大量普適樣品能獲得滿意的分離效果。操作方法簡單，對操作人員無特殊技術(shù)要求，檢測速度快，靈敏度高，準確度高，選擇性好；無需購置昂貴的檢測儀器，只需配備熒光檢測器的液相色譜儀即可完成檢測。

參考文獻

[1]楊雪嬌，付登洲，黃偉，等.高效液相色譜法測定蜜餞中的對乙氧基苯脲[J].食品工業(yè)，2009，（4）：68-70.