• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    灸法早期干預(yù)對(duì)5XFAD轉(zhuǎn)基因小鼠β淀粉樣蛋白1-40表達(dá)的影響

    2017-10-18 03:09:14余靜包燁華張永生楚佳梅
    上海針灸雜志 2017年10期
    關(guān)鍵詞:阿爾茨海默艾灸轉(zhuǎn)基因

    余靜,包燁華,張永生,楚佳梅

    (1.杭州市中醫(yī)院,杭州 310007;2.浙江中醫(yī)藥大學(xué),杭州 310053)

    灸法早期干預(yù)對(duì)5XFAD轉(zhuǎn)基因小鼠β淀粉樣蛋白1-40表達(dá)的影響

    余靜1,包燁華1,張永生2,楚佳梅1

    (1.杭州市中醫(yī)院,杭州 310007;2.浙江中醫(yī)藥大學(xué),杭州 310053)

    目的探討灸法早期干預(yù)對(duì)阿爾茨海默病模型(AD)小鼠腦內(nèi)Aβ1-40的影響,對(duì)艾灸防治AD的作用機(jī)制進(jìn)行探討。方法PCR法鑒定轉(zhuǎn)基因AD傳代小鼠的基因表型,選取1.5月齡雌性轉(zhuǎn)基因陽性Tg6799小鼠隨機(jī)分為模型組9只和治療組8只,同齡、同背景的C57BL/6J野生型雌性小鼠9只為正常組。治療組進(jìn)行雙側(cè)心俞、腎俞麥粒灸治療,治療結(jié)束后,應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)小鼠額葉皮層及海馬區(qū)Aβ1-40的表達(dá)水平。結(jié)果與模型組比較,治療組小鼠大腦額葉皮層和海馬區(qū)Aβ1-40表達(dá)明顯減少(P<0.01,P<0.05)。結(jié)論艾灸療法早期干預(yù)可減少AD模型小鼠腦內(nèi)Aβ1-40的表達(dá),延緩AD病理過程的進(jìn)展。

    阿爾茨海默病;5XFAD轉(zhuǎn)基因小鼠;麥粒灸;早期干預(yù);β淀粉樣蛋白1-40

    阿爾茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是一種漸進(jìn)性的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病,由德國神經(jīng)解剖學(xué)家和精神病醫(yī)生Alois Alzheimer于1906年首次發(fā)現(xiàn)并報(bào)道[1]。AD發(fā)生的比例約占癡呆的 60%~70%,是癡呆中最常見的一種形式[2-4],其起病隱匿,病程呈進(jìn)行性惡化,記憶障礙是該病早期最突出的癥狀,隨著病情的發(fā)展,逐漸出現(xiàn)其他認(rèn)知功能障礙,精神、行為障礙和日常生活能力下降等[5-6]。隨著老齡化社會(huì)的到來,AD的發(fā)病率不斷上升,成為老年人病亡率的第4位,嚴(yán)重威脅著人類健康和社會(huì)發(fā)展[7-8],因此 AD的早期研究、早期防控、對(duì)癥治療具有很大意義[9]。目前,尚缺乏安全、有效、經(jīng)濟(jì)的AD治療藥物,西藥如鹽酸美金剛、鹽酸多奈哌齊均為單一作用靶點(diǎn),長(zhǎng)期使用不良反應(yīng)明顯[10-13]。隨著科學(xué)的發(fā)展,醫(yī)學(xué)發(fā)展也開始著重于以預(yù)防為主,傳承了中醫(yī)學(xué)“治未病”的重要思想[14-16]。艾灸療法作為中醫(yī)特色療法,具有延年益壽、保健及預(yù)防疾病的功效[17-19]。研究發(fā)現(xiàn)艾灸能調(diào)節(jié)內(nèi)分泌系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、自由基代謝等,提高機(jī)體的抗病能力[20-23]。研究表明,Aβ1-40寡聚體能夠通過激活 N-甲基-D-天冬氨酸受體,導(dǎo)致在組建突觸后膜致密體和在突觸囊泡轉(zhuǎn)運(yùn)中起著核心與重要作用的 PSD95(postsynaptic density protein 95,PSD95)和發(fā)動(dòng)機(jī)蛋白(motor proteins, MP)的降解,擾亂突觸的可塑性和完整性,并且能夠加重 Tau蛋白的過度磷酸化,影響 AD小鼠早期行為記憶功能[24]。本實(shí)驗(yàn)通過觀察在AD病理早期介入麥粒灸治療對(duì)可以共同表達(dá)5個(gè)家族性阿爾茨海默病(familial Alzheimer's disease,FAD)基因突變的 5XFAD轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)β淀粉樣蛋白1-40(β-amyloid protein1-40,Aβ1-40)表達(dá)的影響,對(duì)艾灸防治AD的作用機(jī)制進(jìn)行探討。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

    B6SJL-Tg(APPSwFlLon,PSEN1*M146L*L286V)6799 Vas/J品系轉(zhuǎn)基因AD小鼠雜合體種鼠4只,由中科院上海生命科學(xué)院生化所景乃禾研究員惠贈(zèng),配種鼠由中科院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心/上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供[SCXK(滬)2007-0005]。飼養(yǎng)于浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心 SPF級(jí)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物室,并進(jìn)行保種、繁衍后代。繁殖體系為雄性的雜合子小鼠與野生型雌性小鼠交配。出生的子代小鼠在3~4星期后剪尾鑒定。本研究中動(dòng)物實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格遵循實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理審查所依據(jù)的動(dòng)物保護(hù)原則、動(dòng)物福利原則、倫理原則和綜合性科學(xué)評(píng)估原則。

    1.2 主要試劑及儀器

    1.2.1 主要試劑

    艾絨(中國漢醫(yī)艾絨);瓊脂糖凝膠、溴乙錠(EB)(上海生工生物工程有限公司);10%水合氯醛(批號(hào)02030,上海化學(xué)試劑有限公司);PBS磷酸鹽緩沖液(ZLI-9062)(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司);兔抗Aβ1-40(批號(hào)為 bs-0877R,北京博奧森生物技術(shù)有限公司);SP試劑盒(批號(hào)為 13152A10,北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司);濃縮型 DAB試劑盒(ZLI-9032)(批號(hào)為60882801,北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)。

    1.2.2 主要儀器

    PTC-200 PCR擴(kuò)增儀(Biorad公司);臺(tái)式冷凍離心機(jī)(Thermo公司);脫水機(jī)STP120(Micron公司);包埋機(jī) AP280-2(Micron公司);切片機(jī) HM335E(Micron公司)。

    1.3 方法

    1.3.1 PCR法鑒定APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠基因表型

    繁殖所產(chǎn)生雌性后代共29只,3周齡時(shí)剪取小鼠鼠尾(約 0.5 cm)放入 1.5 mL離心管內(nèi)。每管中加入 0.5 mL裂解液,56℃轉(zhuǎn)動(dòng) 2 h以上或過夜。離心20 min,取上清,加入等體積異丙醇混勻,放置30 min; 12000 rmp離心10 min,沉淀DNA。瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè) DNA片段,制備2%瓊脂糖凝膠加溴化乙錠5 μL,加入擴(kuò)增后 DNA10 μL,120 V,30 min 電泳,觀察PCR產(chǎn)物長(zhǎng)度。

    1.3.2 動(dòng)物分組和治療方法

    PCR檢測(cè)結(jié)束后,共有APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因鑒定結(jié)果為陽性的雌性小鼠17只,1.5月齡時(shí)將17只雌性小鼠按隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為模型組和治療組(模型組9只,治療組8只)。同齡、同背景的C57BL/6J陰性純合子(野生型)雌性小鼠9只(1.5月齡)為正常組。

    1.5 月齡時(shí)開始進(jìn)行治療。治療組,人工固定小鼠,以麥粒大小圓錐形艾炷(直徑5 mm,高8 mm)灸雙側(cè)心俞穴和腎俞穴,艾炷燃燒至3/5,即去除,每次灸1壯,每壯時(shí)間約25~30 s。正常組和模型組給予抓取、固定及放置未燃燒的艾炷等刺激。小鼠治療時(shí)間均為每日1次,10次為1個(gè)療程,共治療9個(gè)療程,療程之間間隔2 d(治療全部結(jié)束后小鼠為5月齡)。在治療過程中,治療組小鼠死亡1只,模型組死亡2只,考慮是因體質(zhì)虛弱而死亡。

    1.3.3 樣本取材處理

    治療結(jié)束后,各組小鼠腹腔注射 10%水合氯醛(0.3 mL/100 g)進(jìn)行麻醉,打開胸腔,經(jīng)升主動(dòng)脈及左心室灌注生理鹽水及 4%多聚甲醛,灌注固定后斷頭,完整取出小鼠腦,置4%多聚甲醛中固定24 h后常規(guī)石蠟包埋。包埋完成后,于每只小鼠腦組織包埋蠟塊視交叉前、后連續(xù)冠狀切片。

    1.4 觀察指標(biāo)

    免疫組化法檢測(cè)Aβ1-40表達(dá)。石蠟切片脫蠟至水,3%H2O2孵育10 min;PBS洗 5 min×3次。滴加封閉用正常山羊血清孵育1 h,傾棄,勿洗,滴加適合濃度稀釋的一抗(Aβ1-401:150),移至 4℃冰箱孵育過夜。次日 PBS沖洗,滴加二抗,37℃孵育1 h,PBS洗5 min×3次。滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液(S-A/HRP),37℃孵育1 h,PBS沖洗5 min×3次;滴加DAB顯色劑,顯微鏡下觀察顯色情況,蘇木素復(fù)染,脫水,樹脂封片,顯微鏡觀察。采用Carl Zeiss Imaging Systems圖像分析儀拍照,每張切片海馬區(qū)和額葉皮層各取 6個(gè)視野(×40),采用計(jì)算機(jī)圖像分析軟件Image Pro-plus5.0進(jìn)行分析,測(cè)量其陽性面積(area)、總光密度值(Integrated optical density, IOD)并進(jìn)行匯總。

    1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用SPSSl7.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,各組數(shù)據(jù)結(jié)果描述均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。多組間比較采用單因素方差分析(One-Way-ANOVA),組間兩兩比較,方差齊時(shí)采用LSD檢驗(yàn);方差不齊,采用Dunnett’s T3檢驗(yàn)。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠基因表型鑒定結(jié)果

    本實(shí)驗(yàn)所用的 APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠表型穩(wěn)定,PCR法鑒定子代小鼠基因型,PCR產(chǎn)物長(zhǎng)度為Tg(APP),轉(zhuǎn)基因 377bp,野生型324bp;Tg(PS1),轉(zhuǎn)基因 608bp,野生型324bp。

    圖1 PCR法鑒定APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠的凝膠電泳分析

    所生雌性子代小鼠共29只,其中PCR產(chǎn)物長(zhǎng)度為Tg(APP)377bp、Tg(PS1)608bp的APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因陽性雌性小鼠17只作為本次實(shí)驗(yàn)的研究對(duì)象,隨機(jī)分組為模型組(9只)和治療組(8只)。

    2.2 各組小鼠額葉皮層及海馬區(qū)Aβ1-40表達(dá)的變化

    各組小鼠海馬區(qū)和額葉皮層均可見棕黃色陽性表達(dá),反應(yīng)部位位于細(xì)胞胞漿和胞膜,細(xì)胞核呈陰性。與正常組比較,模型組小鼠額葉皮層及海馬區(qū)Aβ1-40表達(dá)陽性面積明顯增加,差異顯著(P<0.01),總光密度值增高(P<0.01);與模型組比較,艾灸治療后,治療組小鼠海馬區(qū) Aβ1-40表達(dá)顯著下降(P<0.01),額葉皮層Aβ1-40表達(dá)的陽性面積和總光密度值也明顯減少(P<0.05,P<0.01);與正常組比較;治療組小鼠腦內(nèi)Aβ1-40表達(dá)水平無顯著性差異(P>0.05),見圖2、圖3、圖4。

    圖2 各組小鼠額葉皮層Aβ1-40表達(dá)的陽性面積和總光密度比較

    圖3 各組小鼠海馬區(qū)Aβ1-40表達(dá)的陽性面積和總光密度比較

    圖4 各組小鼠額葉皮層及海馬區(qū)Aβ1-40表達(dá)(免疫組化,×40,箭頭示Aβ1-40陽性細(xì)胞)

    3 討論

    β-淀粉樣蛋白(β-amyloid protein,Aβ)異常堆積形成的老年斑(senile plaque,SP)是AD的主要病理特征之一[25]。目前AD的病因及發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明,Hardy JA等[26]提出的“淀粉樣蛋白級(jí)聯(lián)假說”是目前較為公認(rèn)的AD發(fā)病機(jī)制學(xué)說。該學(xué)說認(rèn)為Aβ的產(chǎn)生與清除失衡引起的Aβ沉積是AD病理改變過程的始發(fā)因素和中心環(huán)節(jié),可以引起氧化應(yīng)激、軸突損傷和突觸丟失等一系列級(jí)聯(lián)反應(yīng),最終造成神經(jīng)元死亡,導(dǎo)致癡呆[27-29]。目前很多國內(nèi)外研究都論證了這一學(xué)說,并證明 Aβ可以激活細(xì)胞炎癥因子引起神經(jīng)炎癥反應(yīng),誘發(fā)tau蛋白磷酸化,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,抑制海馬長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng),破壞突觸可塑性[30-31],因此減少或消除 Aβ的形成和沉積,增加 Aβ的清除,延緩或抑制細(xì)胞凋亡的發(fā)生是研究篩選防治AD的重要趨勢(shì)[32]。Aβ作為AD病理過程的一種觸發(fā)分子,它是由淀粉樣前體蛋白(amyloid precursor protein,APP)通過蛋白酶水解途徑裂解而來[33]。在病理情況下,APP在β分泌酶和γ分泌酶的先后作用下形成 Aβ,根據(jù)切割位點(diǎn)不同,可形成不同長(zhǎng)度的Aβ,一般由39~43個(gè)氨基酸組成,其中最常見的類型是 Aβ1-40和 Aβ1-42[34]。Aβ1-42具有很強(qiáng)的聚集能力,神經(jīng)毒性大,是老年斑的主要成份,但其本身并不能形成成熟的老年斑塊,只有在Aβ1-40聚集的作用下,才能形成成熟的具有神經(jīng)毒性的老年斑[35]。Aβ1-40可經(jīng)過血腦屏障轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入腦,促進(jìn) Aβ1-42的積聚,加速 Aβ引起的 AD病理過程[36]。大腦皮質(zhì)和海馬的突觸損傷是AD腦內(nèi)另一個(gè)突出的神經(jīng)病理學(xué)改變,在AD早期即可出現(xiàn)。在AD腦中,突觸數(shù)量減少較神經(jīng)元喪失更顯著,研究發(fā)現(xiàn),不論是可溶性的Aβ1-40還是不可溶性的Aβ1-40與AD腦內(nèi)的突觸損傷均有著很強(qiáng)的相關(guān)性,且引起突觸損傷的相關(guān)性要大于 Aβ1-42[37]。θ節(jié)律被認(rèn)為是與學(xué)習(xí)記憶密切相關(guān)的腦電波,實(shí)驗(yàn)研究表明,Aβ1-40隔閡內(nèi)注射后,不僅可以引起膽堿能神經(jīng)元及谷氨酸能神經(jīng)元的大量丟失,抑制突觸之間的傳遞聯(lián)系,還可以引起海馬區(qū)θ節(jié)律的紊亂,從而造成學(xué)習(xí)記憶能力功能下降[38]。本研究所選用的5XFAD(familial Alzheimer's disease,FAD)轉(zhuǎn)基因小鼠可共表達(dá)β-APP Swedish突變(K670N,M671L)、Florida突變(I716V)、London突變(V717I)以及突變的早老素蛋白 1(Presinilinl,PS1)M146L、L286V 5個(gè)突變位點(diǎn)的基因突變,可全面、快速地模擬AD的病理過程和行為學(xué)特征[39]。5XFAD轉(zhuǎn)基因小鼠能夠在短期內(nèi)產(chǎn)生APP、大量的Aβ沉積、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞增生,并隨年齡的增加逐漸加重,逐漸出現(xiàn)神經(jīng)元死亡、行為學(xué)異常[40]。其中Tg6799模型鼠在1.5月齡時(shí)腦內(nèi)已經(jīng)開始出現(xiàn) Aβ1-42的聚積,隨后逐漸發(fā)生Aβ1-40的顯著聚積,在2月齡時(shí),開始出現(xiàn)明顯可見的淀粉樣蛋白沉積物和膠質(zhì)細(xì)胞過度增生的神經(jīng)炎性反應(yīng),另研究表明,在4~5月齡時(shí),5XFAD轉(zhuǎn)基因小鼠開始表現(xiàn)出空間認(rèn)知功能障礙[39,41]。因此,本研究選擇在5XFAD轉(zhuǎn)基因1.5月齡時(shí)介入麥粒灸治療,探討艾灸早期干預(yù)對(duì)AD病理過程進(jìn)展的影響。

    阿爾茨海默病屬中醫(yī)學(xué)“癡呆”“愚癡”“善忘”“郁證”等范疇[42-44],中醫(yī)學(xué)認(rèn)為“心主神明”“腦為元神之府”,《素問·靈蘭秘典論》:“腎者,作強(qiáng)之官,伎巧出焉?!惫手嗅t(yī)學(xué)認(rèn)為癡呆的發(fā)病與心、腦、腎關(guān)系密切,腎精不足、髓??仗撌瞧涑R姴∫騕45-47],治療上常以培補(bǔ)腎元、填精益髓、健脾養(yǎng)心、補(bǔ)虛扶正為主[48]。艾灸作為傳統(tǒng)特色療法,已有數(shù)千年歷史。在身體尚未出現(xiàn)病癥之前或者還處于初發(fā)病階段,采用艾灸療法,可通過艾葉辛溫之性,激發(fā)人體經(jīng)絡(luò)之氣,溫陽補(bǔ)虛,以達(dá)到補(bǔ)益人體正氣,防病保健“治未病”的目的[49]?,F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明,艾絨燃燒過程中輻射的近紅外線可穿透機(jī)體組織,誘導(dǎo)局部肌肉產(chǎn)生熱休克蛋白,激活機(jī)體的免疫系統(tǒng),達(dá)到治病強(qiáng)身健體的作用[50]。此外,有研究表明,艾灸可以阻止海馬線粒體膜電位的耗散,抑制神經(jīng)元凋亡,抑制氧化應(yīng)激,改善腦能量的代謝障礙[51]。因此本研究選用心俞、腎俞進(jìn)行麥粒灸法早期干預(yù),利用艾灸灸火熱力對(duì)機(jī)體的溫?zé)岽碳そY(jié)合兩穴調(diào)節(jié)臟腑功能的作用以期達(dá)到養(yǎng)心安神、填精益髓之功。

    隨著疾病醫(yī)學(xué)向健康醫(yī)學(xué)的轉(zhuǎn)變,醫(yī)學(xué)發(fā)展的方向也逐漸轉(zhuǎn)向預(yù)防為主,醫(yī)學(xué)的重點(diǎn)將是“防患于未然”“防微杜漸”,傳承了中醫(yī)學(xué)“治未病”的重要思想。“治未病”思想被歷代醫(yī)家奉為行醫(yī)治病的最佳境界,包含著未病先防、既病防變及瘥后防復(fù)三種觀念。在疾病發(fā)生之前,看見疾病征兆,提前介入中醫(yī)傳統(tǒng)治療,可預(yù)防疾病的進(jìn)一步傳變[52]。本研究在5XFAD轉(zhuǎn)基因小鼠1.5月齡時(shí)腦內(nèi)剛開始發(fā)生Aβ聚集的AD病理過程早期介入麥粒灸治療,通過艾灸治療后,與模型組比較,治療組小鼠額葉皮層和海馬區(qū)Aβ1-40的表達(dá)明顯減少。研究結(jié)果表明,艾灸治療AD的機(jī)制可能是通過早期抑制Aβ1-40的產(chǎn)生,進(jìn)一步影響Aβ積聚形成成熟的具有神經(jīng)毒性的產(chǎn)物,從而延緩 AD病理過程進(jìn)展,達(dá)到“既病防變”的目的。

    [1]Graeber MB, Mehraein P. Reanalysis of the first case of Alzheimer’s disease[J].Eur Ar ch Psy chiatry ClinNeurosci, 1999,249(Suppl 3):10-13.

    [2]陳以麗.癡呆與輕度認(rèn)知障礙的流行病學(xué)、發(fā)病機(jī)制和診治分析[J].臨床合理用藥雜志,2017,(1):172-173.

    [3]臧少敏.老年性癡呆的社區(qū)護(hù)理干預(yù)研究[J].護(hù)理實(shí)踐與研究,2015,12(12):20-22.

    [4]馮亞青,田瑞振,孫占用,等.阿爾茨海默病和血管性癡呆患者精神行為癥狀的特點(diǎn)[J].中華老年醫(yī)學(xué)雜志,2006,25(2):132-133.

    [5]Mendiola-Precoma J, Berumen LC, Padilla K,et al.Therapies for prevention and treatment of Alzheimer’s disease[J].Biomed Res Int, 2016:2589276.

    [6]Kar S, Slowikowski SP, Westaway D,et al. Interactions between beta-amyloid and central cholinergic neurons:implications for Alzheimer’s disease[J].J Ps ychiatry Neurosci, 2004,29(6):427-441.

    [7]宋筱靚.老年性癡呆病因病機(jī)探析[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2008,10(6):70-71.

    [8]官紅霞,陳明達(dá),王翔.五行學(xué)說在老年癡呆病人情志護(hù)理中的應(yīng)用[J].護(hù)理研究(中旬版),2010,24(5):1290-1291.

    [9]楊林,劉科,朱葉萌,等.阿爾茨海默病轉(zhuǎn)基因小鼠模型在中藥研究領(lǐng)域的應(yīng)用進(jìn)展[J].實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué),2015,32(4):59-62.

    [10]余夢(mèng)瑤,許曉燕,江南,等.阿爾茨海默癥痰濕蘊(yùn)結(jié)與β-淀粉樣肽聚集及自噬相關(guān)性探討[J].中華中醫(yī)藥雜志,2016,31(9):3632-3635.

    [11]錢燕靜,甄軍麗,衛(wèi)東鋒,等.參芪益智顆粒對(duì)5XFAD轉(zhuǎn)基因小鼠學(xué)習(xí)記憶能力和腦內(nèi)β淀粉樣蛋白1-42含量的影響[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2016,23(5):51-56.

    [12]黃振東.觀察鹽酸美金剛治療老年帕金森病癡呆患者的臨床療效及不良反應(yīng)[J].中國實(shí)用醫(yī)藥,2014,9(18):136-137.

    [13]蘇秋霞,黃寶君,陳良樹,等.鹽酸美金剛聯(lián)合鹽酸多奈哌齊治療阿爾茨海默病的臨床療效研究[J].基層醫(yī)學(xué)論壇,2017,21(22):2928-2930.

    [14]陳平清.中醫(yī)“治未病”在社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中的應(yīng)用分析[J].中國醫(yī)藥指南,2012,10(26):607-608.

    [15]吳翠霞.心腦血管動(dòng)脈硬化癥的中醫(yī)治未病臨床分析[J].醫(yī)學(xué)信息,2013,26(3):91.

    [16]游煥章.治未病在中醫(yī)臨床上的應(yīng)用思路構(gòu)建[J].中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育,2014,12(16):129-130.

    [17]韓麗,趙百孝,劉銅華,等.艾灸防病保健與“長(zhǎng)壽基因”SIRT1[J].中華中醫(yī)藥雜志,2015,(6):2023-2025.

    [18]劉玉平.艾灸神闕在康復(fù)保健中的應(yīng)用[J].中國民間療法,2003,11(4):17-18.

    [19]尹改珍,李晶.淺談艾灸保健[J].新疆中醫(yī)藥,1998,16(4):24-26.

    [20]姜美馳,梁靜,王靜蓉,等.艾灸對(duì) AD大鼠學(xué)習(xí)記憶能力及海馬Aβ、IL-1β、IL-2表達(dá)的影響[J].上海針灸雜志,2016,35(7):870-875.

    [21]沈曉明,杜元灝,胡玲,等.針灸治療更年期綜合征及其機(jī)制研究近況[J].天津中醫(yī)藥,2003,20(4):82-84.

    [22]武鳳琴,陳慶偉,王莖,等.艾灸調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的研究進(jìn)展[J].中醫(yī)藥臨床雜志,201,(4):454-456.

    [23]詹振吉,王健.艾灸對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)的影響[J].中醫(yī)學(xué)報(bào),2016,(3):449-452.

    [24]張嚴(yán).Aβ1-40寡聚體對(duì)阿爾茨海默病小鼠磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶 B信號(hào)通路的影響[D].遵義醫(yī)學(xué)院,2012:21-24.

    [25]García-Osta A, Cuadrado-Tejedor M. Advanced assay monitoring APP-carboxyl-terminal fragments as markers of APP processing in Alzheimer disease mouse models[J].Methods Mol Biol,2016,1303:117-123.

    [26]Hardy JA, Higgins GA. Alzheimer’s disease: the amyloid cascade hypothesis[J].Science, 1992,256(5054):184-185.

    [27]Cummings JL, Zhong K, Kinney JW,et al. Doubleblind, placebo-controlled, proof-of-concept trial of bexarotene Xin moderate Alzheimer’s disease[J].Alzheimers Res Ther, 2016,8:4.

    [28]Storey E, Cappai R. The amyloid precursor protein of Alzheimer s disease and the Aβ peptide[J].Neuropathol Appl Neurobiol, 1999,25(2):81-97.

    [29]劉炫君,楊國帥.β淀粉樣蛋白所致的炎癥反應(yīng)在阿爾茨海默病中的作用機(jī)制[J].醫(yī)學(xué)綜述,2016,22(24):4803-4806.

    [30]Lindhagen-Persson M, Br?nnstr?m K, Vestling M,et al.Amyloid-β oligomer specificity mediated by the IgM isotype--implications for a specific protective mechanism exerted by endogenous auto-antibodies[J].PLoS One,2010,5(11):e13928.

    [31]Zhao L, ZhaoY, Wan Q,et al. Urinary kallidinogenase for the treatment of cerebral arterial stenosis[J].Drug Des Devel Ther, 2015,9:5595-5600.

    [32]于淼,謝寧,關(guān)慧波,等.地黃飲子對(duì) AD模型大鼠腦內(nèi)Aβ生成的干預(yù)機(jī)制[J].中華中醫(yī)藥雜志,2016,31(6):2281-2284.

    [33]Sch?nherr C, Bien J, Isbert S,et a l. Generation of aggregation prone N-terminally truncated amyloid β peptides by meprin β depends on the sequence specificity at the cleavage site[J].Mol Neur odegener,2016,11:19.

    [34]尹文超,曹云鵬.β淀粉樣蛋白與阿爾茨海默病的新觀點(diǎn)[J].國際神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)雜志,2015,42(5):455-458.

    [35]張學(xué)福,曾昭毅,蔣乃昌.擬AD模型大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙和海馬CA1區(qū)Aβ1-40和nNOS的表達(dá)[J].贛南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2007,27(1):3-6.

    [36]Teich AF, Arancio O. Is the amyloid hypothesis of Alzheimer’s disease therapeutically relevant?[J].Biochem J, 2012,446(2):165-177.

    [37]Lue LF, Kuo YM, Roher AE,et al. Soluble amyloid beta peptide concentration as a predictor of synaptic change in Alzheimer’s disease[J].Am J Pathol, 1999,155(3):853-862.

    [38]Colom LV, Casta?eda MT, Ba?uelos C,et al. Medial septal beta-amyloid 1-40 injections alter septo-hippocampal anatomy and function[J].Neurobiol Aging, 2010,31(1):46-57.

    [39]Oakley H, Cole SL, Logan S,et al. Intraneuronal betaamyloid aggregates, neurodegeneration, and neuron loss in transgenic mice with five familial Alzheimer’s disease mutations: potential factors in amyloid plaque formation[J].J Neurosci, 2006,26(40):10129-10140.

    [40]Mariani MM, Malm T, Lamb R,et al. Neuronallydirected effects of RXR activation in a mouse model of Alzheimer’s disease[J].Sci Rep, 2017,7:42270.

    [41]Wang Q, Xiao B, Cui S,et al. Triptolide treatment reduces Alzheimer’s disease (AD)-like pathology through inhibition of BACE1 in a transgenic mouse model of AD[J].Dis Model Mech, 2014,7(12):1385-1395.

    [42]蘇志誠,阮時(shí)寶,褚克丹,等.中醫(yī)方劑治療阿爾茨海默病的進(jìn)展研究[J].中醫(yī)臨床研究,2017,9(8):138-141.

    [43]石瑩瑩,胡曉靈.阿爾茨海默病的中醫(yī)文獻(xiàn)研究[J].新疆中醫(yī)藥,2017,35(1):63-66.

    [44]侯江淇,郭蕾,張俊龍.阿爾茨海默病中醫(yī)辨治探析[J].遼寧中醫(yī)雜志,2017,(2):262-264.

    [45]富雪婷,王堯,巴哈爾·哈德爾.中醫(yī)對(duì)阿爾茨海默病的病機(jī)研究[J].新疆中醫(yī)藥,2016,34(4):133-135.

    [46]劉文奇.阿爾茨海默病的中醫(yī)辨治[J].中國社區(qū)醫(yī)師,2016,32(33):14-15.

    [47]楊瓊芬.阿爾茨海默病的中醫(yī)證治述要[J].新疆中醫(yī)藥,2016,34(1):59-60.

    [48]谷巍,金曉仙,張燕軍,等.針刺治療阿爾茨海默病臨床觀察[J].中國針灸,2014,34(12):1156-1160.

    [49]楊俊麗,郭文海,張婷,等.灸法在中醫(yī)“治未病”中的意義[J].中醫(yī)藥信息,2012,29(6):86-88.

    [50]曹云燕,蔡圣朝,袁衛(wèi)華,等.督脈伏灸治未病的理論探討及臨床應(yīng)用[J].上海針灸雜志,2012,31(10):771-772.

    [51]沈潔,艾炳蔚,沈梅紅.艾灸對(duì)亞健康狀態(tài)的防治作用[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2016,36(13):91-92.

    [52]齊文升,方藥中.淺談對(duì)《金匱要略》治未病的認(rèn)識(shí)及臨床運(yùn)用[J].中醫(yī)研究,1993,6(1):15-17.

    Effect of Early Moxibustion Intervention on the Expression of Amyloid β-protein1-40in 5XFAD Transgenic Mice

    YU Jing1,BAO Y e-hua1,ZHANG Y ong-sheng2,CHU Jia-mei1.1.Hangzhou Hosp ital o f T raditional Chinese Medicine,Hangzhou310007,China; 2.Zhejiang University of Traditional Chinese Medicine,Hangzhou310053,China

    ObjectiveTo explore effect of early moxibustion intervention on cerebral Aβ1-40in a mouse model of Alzheimer disease (AD) and the mechanism of action of moxibusion in preventing and treating AD. Method Gene phenotype in transgenic AD passage mice was identified using PCR. One and a half-month-old female Tg6799 transgenic mice were randomly allocated, including nine mice to a model group and eight mice to a treatment group.Nine C57BL/6J wild type female mice of the same age and background constituted a normal control group.Wheat-grain-sized moxa cone moxibustion on bilateral points Xinshu(BL15) and Shenshu(BL23) was given to the treatment group. After the completion of treatment, Aβ1-40expression in mouse frontal cortex and hippocampal region was determined using the immunohistochemical method.ResultAβ1-40expression in mouse frontal cortex and hippocampal region decreased significantly in the treatment group compared with the model group (P<0.01,P< 0.05).ConclusionEarly moxibustion intervention can decrease cerebral Aβ1-40expression and delay AD pathological process in a mouse model of AD.

    Alzheimer disease; 5XFAD transgenic mice; Wheat-grain-sized moxa cone moxibustion; Early intervention; Amyloid β-protein1-40

    R2-03

    A

    2017-03-12

    1005-0957(2017)10-1253-07

    10.13460/j.issn.1005-0957.2017.10.1253

    浙江省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(LY13H270002)

    余靜(1989—),女,醫(yī)師,碩士,Email:zegnajing@163.com

    包燁華(1972—),女,主任醫(yī)師,碩士,研究方向?yàn)獒樉闹委熌X功能障礙性疾病的基礎(chǔ)與臨床研究,Email:13336101400@163.com

    猜你喜歡
    阿爾茨海默艾灸轉(zhuǎn)基因
    探秘轉(zhuǎn)基因
    阿爾茨海默病的預(yù)防(下)
    中老年保健(2022年2期)2022-08-24 03:21:24
    阿爾茨海默病的預(yù)防(上)
    中老年保健(2022年1期)2022-08-17 06:14:36
    轉(zhuǎn)基因,你吃了嗎?
    艾灸與耳穴治療假性近視
    一款多功能便巧艾灸輔助器
    冬病夏治 三伏艾灸效果好
    睡眠不當(dāng)會(huì)增加阿爾茨海默風(fēng)險(xiǎn)
    奧秘(2018年9期)2018-09-25 03:49:56
    天然的轉(zhuǎn)基因天然的轉(zhuǎn)基因“工程師”及其對(duì)轉(zhuǎn)基因食品的意蘊(yùn)
    CH25H與阿爾茨海默病
    三级毛片av免费| 久久中文字幕人妻熟女| 看免费av毛片| 国产精品免费一区二区三区在线| 日韩欧美在线二视频| av欧美777| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 无遮挡黄片免费观看| 欧美黄色淫秽网站| 久久人妻熟女aⅴ| 午夜福利在线观看吧| 一区在线观看完整版| 欧美黄色淫秽网站| 中国美女看黄片| 久久精品影院6| 午夜免费成人在线视频| 国产精品1区2区在线观看.| 亚洲五月婷婷丁香| 999久久久国产精品视频| 国内精品久久久久久久电影| 亚洲精品一区av在线观看| 国产单亲对白刺激| 在线观看免费视频网站a站| 亚洲精品国产色婷婷电影| 国产成年人精品一区二区| 亚洲在线自拍视频| 国产国语露脸激情在线看| 狠狠狠狠99中文字幕| www.999成人在线观看| 色在线成人网| 亚洲欧美激情在线| 黑人操中国人逼视频| 日韩大尺度精品在线看网址 | 丝袜人妻中文字幕| 久久香蕉精品热| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 亚洲国产精品sss在线观看| 国产成人欧美在线观看| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 亚洲免费av在线视频| 黄色丝袜av网址大全| 欧美乱码精品一区二区三区| 精品不卡国产一区二区三区| 午夜福利18| 在线天堂中文资源库| 99国产综合亚洲精品| a在线观看视频网站| 免费看a级黄色片| 高清在线国产一区| 国产一区二区激情短视频| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 免费看十八禁软件| 大型黄色视频在线免费观看| 久久久久国产一级毛片高清牌| 18禁国产床啪视频网站| 热re99久久国产66热| 亚洲国产精品成人综合色| 国产一区二区三区视频了| 女人精品久久久久毛片| 免费高清在线观看日韩| 亚洲色图综合在线观看| 色哟哟哟哟哟哟| 久久久水蜜桃国产精品网| 午夜精品久久久久久毛片777| 黄片播放在线免费| 亚洲三区欧美一区| 岛国视频午夜一区免费看| 午夜福利影视在线免费观看| 精品国内亚洲2022精品成人| 国产亚洲欧美精品永久| 午夜精品久久久久久毛片777| 搡老妇女老女人老熟妇| 亚洲久久久国产精品| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 国产av一区二区精品久久| 国产三级在线视频| 女警被强在线播放| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 亚洲人成电影免费在线| 美女大奶头视频| 最近最新中文字幕大全电影3 | 亚洲精品av麻豆狂野| 久久人妻熟女aⅴ| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 精品人妻1区二区| 在线播放国产精品三级| 日韩三级视频一区二区三区| 国产亚洲精品一区二区www| 久久精品91无色码中文字幕| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 人妻久久中文字幕网| 亚洲男人天堂网一区| 美国免费a级毛片| 日韩大码丰满熟妇| 午夜免费成人在线视频| 国产av一区在线观看免费| 亚洲无线在线观看| 女性被躁到高潮视频| 欧美精品亚洲一区二区| 久久久久亚洲av毛片大全| 久热这里只有精品99| 精品一品国产午夜福利视频| 脱女人内裤的视频| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 国产精品国产高清国产av| 欧美乱妇无乱码| 免费少妇av软件| 窝窝影院91人妻| 中亚洲国语对白在线视频| 亚洲精品在线观看二区| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 国产精品av久久久久免费| 又紧又爽又黄一区二区| 国内精品久久久久久久电影| 午夜免费观看网址| 无限看片的www在线观看| 欧美成狂野欧美在线观看| 日本欧美视频一区| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 真人做人爱边吃奶动态| 在线观看午夜福利视频| 精品久久久久久,| 久久 成人 亚洲| 日韩高清综合在线| 国产又爽黄色视频| 看片在线看免费视频| 高清毛片免费观看视频网站| 欧美黑人精品巨大| 天堂√8在线中文| 麻豆av在线久日| 性色av乱码一区二区三区2| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 久久中文看片网| 国产午夜精品久久久久久| 激情视频va一区二区三区| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 51午夜福利影视在线观看| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产激情欧美一区二区| 成年人黄色毛片网站| 午夜免费观看网址| 欧美日韩精品网址| 久久久国产成人精品二区| 亚洲无线在线观看| 国产精品二区激情视频| 在线观看午夜福利视频| 在线播放国产精品三级| 亚洲一区中文字幕在线| 波多野结衣av一区二区av| 日韩视频一区二区在线观看| 免费在线观看黄色视频的| 亚洲色图综合在线观看| 欧美日韩黄片免| 亚洲激情在线av| 一夜夜www| 久久久久国产一级毛片高清牌| 又黄又粗又硬又大视频| 婷婷精品国产亚洲av在线| 国产亚洲欧美在线一区二区| 久久久久国内视频| 人妻久久中文字幕网| 亚洲av成人一区二区三| 麻豆久久精品国产亚洲av| 一级a爱片免费观看的视频| 久久久久久久午夜电影| 一区在线观看完整版| 我的亚洲天堂| 午夜两性在线视频| 亚洲第一av免费看| 欧美日韩乱码在线| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 色综合婷婷激情| 国产野战对白在线观看| 黄色视频,在线免费观看| av网站免费在线观看视频| 亚洲一区高清亚洲精品| 一级毛片高清免费大全| 色哟哟哟哟哟哟| 岛国视频午夜一区免费看| 香蕉国产在线看| 美女扒开内裤让男人捅视频| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 黄色a级毛片大全视频| 99国产精品99久久久久| 天天一区二区日本电影三级 | 久久狼人影院| 在线免费观看的www视频| 十八禁网站免费在线| 亚洲九九香蕉| 亚洲国产精品成人综合色| 大型av网站在线播放| 香蕉国产在线看| 少妇的丰满在线观看| 少妇的丰满在线观看| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 制服人妻中文乱码| 丁香六月欧美| 美女国产高潮福利片在线看| 国产精品免费视频内射| 免费在线观看影片大全网站| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 亚洲熟妇熟女久久| 久久久精品欧美日韩精品| 性欧美人与动物交配| 久久伊人香网站| 激情视频va一区二区三区| 亚洲精品美女久久av网站| 日本一区二区免费在线视频| 91精品国产国语对白视频| 99国产极品粉嫩在线观看| 性色av乱码一区二区三区2| 国产人伦9x9x在线观看| 999精品在线视频| 免费看美女性在线毛片视频| 校园春色视频在线观看| 亚洲欧美激情在线| 国产黄a三级三级三级人| 桃色一区二区三区在线观看| 日韩精品中文字幕看吧| 精品人妻在线不人妻| 1024视频免费在线观看| 精品久久久久久成人av| 亚洲专区国产一区二区| 免费在线观看完整版高清| 亚洲成av人片免费观看| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产一区二区三区视频了| 十八禁网站免费在线| 久9热在线精品视频| 色播在线永久视频| 亚洲少妇的诱惑av| 亚洲国产精品成人综合色| 十分钟在线观看高清视频www| 欧美中文综合在线视频| 我的亚洲天堂| 咕卡用的链子| 日本黄色视频三级网站网址| 国产精品久久久久久精品电影 | 国产精品日韩av在线免费观看 | 成人精品一区二区免费| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 国产高清有码在线观看视频 | 大型av网站在线播放| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 村上凉子中文字幕在线| 欧美日韩黄片免| 搡老熟女国产l中国老女人| 亚洲成国产人片在线观看| 国产成年人精品一区二区| 国产伦一二天堂av在线观看| 高清毛片免费观看视频网站| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 人妻久久中文字幕网| 欧美日本中文国产一区发布| 国产精品亚洲美女久久久| 18美女黄网站色大片免费观看| 国产成人欧美| 国产成人欧美在线观看| 宅男免费午夜| netflix在线观看网站| 亚洲精华国产精华精| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 亚洲精品国产区一区二| 欧美乱色亚洲激情| 黄色a级毛片大全视频| 91麻豆av在线| 男人操女人黄网站| 69av精品久久久久久| 日韩三级视频一区二区三区| 在线观看一区二区三区| 欧美+亚洲+日韩+国产| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 亚洲一区二区三区不卡视频| 9色porny在线观看| 色av中文字幕| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 午夜福利视频1000在线观看 | 天堂影院成人在线观看| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 久久精品国产清高在天天线| 人人妻人人澡欧美一区二区 | 亚洲七黄色美女视频| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 日韩欧美一区视频在线观看| 最好的美女福利视频网| 老汉色∧v一级毛片| 老司机在亚洲福利影院| 国产伦一二天堂av在线观看| 窝窝影院91人妻| 精品第一国产精品| 法律面前人人平等表现在哪些方面| bbb黄色大片| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 免费观看人在逋| 视频区欧美日本亚洲| 99热只有精品国产| 日韩精品免费视频一区二区三区| 国产精品影院久久| 成人av一区二区三区在线看| 黄网站色视频无遮挡免费观看| www日本在线高清视频| 亚洲中文日韩欧美视频| 久久青草综合色| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 午夜精品久久久久久毛片777| 桃红色精品国产亚洲av| 一级片免费观看大全| 亚洲七黄色美女视频| 叶爱在线成人免费视频播放| 亚洲av成人av| 深夜精品福利| 黄色片一级片一级黄色片| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 欧美日韩黄片免| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 精品不卡国产一区二区三区| 亚洲av五月六月丁香网| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 丝袜美足系列| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 91大片在线观看| 多毛熟女@视频| 亚洲男人的天堂狠狠| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 美女国产高潮福利片在线看| 精品卡一卡二卡四卡免费| 久久国产亚洲av麻豆专区| 亚洲 欧美一区二区三区| 免费观看精品视频网站| 精品一区二区三区av网在线观看| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 日本三级黄在线观看| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 精品日产1卡2卡| 精品午夜福利视频在线观看一区| 国产单亲对白刺激| 老司机午夜福利在线观看视频| 在线av久久热| 久久久国产成人精品二区| 国产成人欧美在线观看| 老司机午夜福利在线观看视频| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 天堂影院成人在线观看| 女性被躁到高潮视频| 国产av在哪里看| 国产三级黄色录像| 香蕉国产在线看| 亚洲天堂国产精品一区在线| 成人永久免费在线观看视频| 手机成人av网站| 国产精品亚洲一级av第二区| 不卡一级毛片| 久久欧美精品欧美久久欧美| 久久欧美精品欧美久久欧美| 无遮挡黄片免费观看| 国产又色又爽无遮挡免费看| 国产免费av片在线观看野外av| 国产91精品成人一区二区三区| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 国产一区二区三区综合在线观看| 女性生殖器流出的白浆| 香蕉丝袜av| 男女下面插进去视频免费观看| √禁漫天堂资源中文www| 久久香蕉精品热| 婷婷六月久久综合丁香| 国产成人精品久久二区二区91| 欧美黄色淫秽网站| 精品国产国语对白av| 日韩精品青青久久久久久| 亚洲精品粉嫩美女一区| 极品人妻少妇av视频| 国产精品一区二区免费欧美| 亚洲中文日韩欧美视频| 女性被躁到高潮视频| 国产亚洲av高清不卡| ponron亚洲| 丁香欧美五月| 午夜免费观看网址| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 一边摸一边抽搐一进一出视频| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 欧美亚洲日本最大视频资源| 国产av在哪里看| 国产高清激情床上av| 深夜精品福利| 久久久精品欧美日韩精品| 69av精品久久久久久| 香蕉国产在线看| 精品熟女少妇八av免费久了| 免费看十八禁软件| 国产麻豆成人av免费视频| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 黑人欧美特级aaaaaa片| 一区二区三区国产精品乱码| 成人国产综合亚洲| 午夜福利高清视频| 欧美黑人精品巨大| 久久久久久久午夜电影| 人成视频在线观看免费观看| 制服诱惑二区| 国产成人欧美在线观看| 黄色a级毛片大全视频| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 亚洲一区二区三区色噜噜| 美女免费视频网站| АⅤ资源中文在线天堂| 亚洲av熟女| 黄色片一级片一级黄色片| 国产av一区在线观看免费| 99久久99久久久精品蜜桃| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 亚洲少妇的诱惑av| 岛国视频午夜一区免费看| 51午夜福利影视在线观看| 欧美色视频一区免费| 成人三级做爰电影| 男男h啪啪无遮挡| 国产视频一区二区在线看| 亚洲美女黄片视频| 久久久水蜜桃国产精品网| 老鸭窝网址在线观看| 99久久国产精品久久久| 正在播放国产对白刺激| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 午夜福利高清视频| 亚洲激情在线av| 狠狠狠狠99中文字幕| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产精品一区二区免费欧美| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 在线免费观看的www视频| 一边摸一边抽搐一进一小说| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 在线播放国产精品三级| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 国产高清激情床上av| 制服丝袜大香蕉在线| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 亚洲在线自拍视频| 日韩欧美国产在线观看| 黄色a级毛片大全视频| 一区二区三区国产精品乱码| 欧美乱色亚洲激情| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 国产精品一区二区三区四区久久 | 亚洲熟女毛片儿| 午夜福利欧美成人| 国产精品av久久久久免费| 日韩有码中文字幕| 欧美一级a爱片免费观看看 | 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 久久久久久久久久久久大奶| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 99在线视频只有这里精品首页| 在线播放国产精品三级| 激情在线观看视频在线高清| av中文乱码字幕在线| 美女高潮到喷水免费观看| 亚洲成av人片免费观看| 国产成人啪精品午夜网站| 亚洲最大成人中文| 波多野结衣av一区二区av| 久久久久久大精品| 国产极品粉嫩免费观看在线| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 午夜a级毛片| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 欧美激情久久久久久爽电影 | 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 国产高清videossex| 欧美日韩精品网址| 午夜福利欧美成人| 大型av网站在线播放| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 国产亚洲精品av在线| 日韩欧美国产一区二区入口| 色综合站精品国产| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 国产片内射在线| 波多野结衣高清无吗| 母亲3免费完整高清在线观看| 欧美最黄视频在线播放免费| 国产成人系列免费观看| 人人妻人人澡人人看| 搡老熟女国产l中国老女人| 国产又爽黄色视频| 亚洲av熟女| 亚洲精品国产色婷婷电影| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 亚洲国产欧美网| 涩涩av久久男人的天堂| 香蕉丝袜av| 精品久久久久久成人av| 女同久久另类99精品国产91| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 日韩欧美国产一区二区入口| 免费看美女性在线毛片视频| 精品午夜福利视频在线观看一区| 欧美精品亚洲一区二区| 制服丝袜大香蕉在线| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 亚洲无线在线观看| 最近最新中文字幕大全电影3 | 精品国产国语对白av| 免费在线观看完整版高清| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 亚洲专区国产一区二区| 十八禁网站免费在线| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| www日本在线高清视频| 18禁国产床啪视频网站| 在线观看免费午夜福利视频| 精品久久久精品久久久| 亚洲片人在线观看| 国产欧美日韩一区二区精品| 亚洲午夜理论影院| 美女午夜性视频免费| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 男女下面进入的视频免费午夜 | 激情在线观看视频在线高清| 欧美激情 高清一区二区三区| 好男人在线观看高清免费视频 | 国产区一区二久久| 免费观看精品视频网站| 亚洲电影在线观看av| 亚洲性夜色夜夜综合| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 高清在线国产一区| 亚洲全国av大片| 国产成人精品久久二区二区91| 国产在线精品亚洲第一网站| 日韩精品青青久久久久久| 欧美在线一区亚洲| 怎么达到女性高潮| 一级a爱片免费观看的视频| 成人手机av| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 日本 av在线| 亚洲色图综合在线观看| 日韩欧美免费精品| 久久这里只有精品19| 久久久久久久久中文| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 精品国产美女av久久久久小说| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 日韩av在线大香蕉| 校园春色视频在线观看| 女同久久另类99精品国产91| 露出奶头的视频| 欧美色欧美亚洲另类二区 | 无遮挡黄片免费观看| 日本免费a在线| 黄色丝袜av网址大全| 91字幕亚洲| 久久精品国产亚洲av高清一级| 啦啦啦观看免费观看视频高清 | 久久精品人人爽人人爽视色| 最新在线观看一区二区三区| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 99在线人妻在线中文字幕| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 午夜福利一区二区在线看| 免费不卡黄色视频| 国产99白浆流出| 男女下面插进去视频免费观看| 久久久久精品国产欧美久久久| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 免费搜索国产男女视频| 99国产精品99久久久久| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 中文字幕人妻熟女乱码| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 欧美av亚洲av综合av国产av| 欧美另类亚洲清纯唯美| 日韩成人在线观看一区二区三区| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 国产午夜福利久久久久久| 国产精品av久久久久免费| 色综合欧美亚洲国产小说| 男女午夜视频在线观看| 国产亚洲精品久久久久5区| 欧美一级毛片孕妇| 日韩欧美一区视频在线观看| 激情视频va一区二区三区| 久久久久久久精品吃奶| 美国免费a级毛片| 久久久久久大精品| 免费观看精品视频网站| 亚洲激情在线av| 日本 欧美在线| 日本在线视频免费播放| 亚洲专区中文字幕在线| 高清黄色对白视频在线免费看| 一级毛片精品| 国产欧美日韩一区二区三| 精品国产一区二区久久| 在线观看www视频免费| 国产成+人综合+亚洲专区| 免费无遮挡裸体视频| 麻豆成人av在线观看| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 69精品国产乱码久久久| 午夜两性在线视频| 免费看美女性在线毛片视频| 在线播放国产精品三级|