不同黃顙魚家系組注射嗜水氣單胞菌后免疫相關(guān)指標的比較研究

秦 欽，王明華，陳校輝，蔣廣震， 張世勇，鐘立強，潘建林，劉文斌

(1.江蘇省淡水水產(chǎn)研究所，南京 210017；2.南京農(nóng)業(yè)大學無錫漁業(yè)學院，江蘇無錫 214081；3.南京農(nóng)業(yè)大學動物科技學院，江蘇省水產(chǎn)動物營養(yǎng)重點實驗室，南京 210095)

不同黃顙魚家系組注射嗜水氣單胞菌后免疫相關(guān)指標的比較研究

秦 欽1，2，王明華1，陳校輝1，蔣廣震3， 張世勇1，鐘立強1，潘建林1，劉文斌3

(1.江蘇省淡水水產(chǎn)研究所，南京 210017；2.南京農(nóng)業(yè)大學無錫漁業(yè)學院，江蘇無錫 214081；3.南京農(nóng)業(yè)大學動物科技學院，江蘇省水產(chǎn)動物營養(yǎng)重點實驗室，南京 210095)

為了探究不同黃顙魚(Pelteobagrusfulvidraco)家系組的免疫性能，選?、?G♂×G♀)、Ⅱ(S♂×S♀)、Ⅲ(T♂×T♀)，Ⅳ(G♂×S♀)和V(S♂×T♀)5個家系組130日齡的魚種300尾/家系，試驗魚體重為(8.5±1.0)g，開展注射嗜水氣單胞菌攻毒試驗。在攻毒0 h及攻毒后6、24、48 h采樣。測定累積死亡率(CM)及血漿、肝臟免疫相關(guān)指標，包括血漿總蛋白(TP)、乳酸(LA)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酶(AKP)；肝臟超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)。結(jié)果顯示：各家系組間黃顙魚種感染嗜水氣單胞菌后，除血漿AKP之外的指標都表現(xiàn)出組間顯著差異。攻毒48 h后，CM由高到低順序為Ⅱ> V> Ⅲ> Ⅳ> I。攻毒24 h后血漿TP達到高峰然后逐步下降。在攻毒48 h后，家系組Ⅰ、Ⅳ保持了較高TP含量，與其他試驗組差異顯著。各家系組血漿LA指標呈先升高后降低的變化趨勢，48 h家系組Ⅰ、Ⅳ的血漿LA顯著低于其他家系組。攻毒后各家系組血漿轉(zhuǎn)氨酶含量急劇上升，家系組Ⅰ、Ⅱ血漿ALT在24 h首先恢復到攻毒前水平。攻毒24 h后，肝臟中SOD水平達到頂峰，48 h家系組V肝臟中SOD水平最高，顯著高于其他家系組。肝臟MDA水平呈逐漸升高的變化趨勢，攻毒后6 h，家系組Ⅰ肝臟的MDA水平顯著低于其他組，48 h家系組Ⅲ肝臟的MDA顯著高于家系組Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ。結(jié)果表明：各家系組表現(xiàn)出明顯的免疫差別。家系組I(G♂×G♀)表現(xiàn)出較強的抗應激、非特異性免疫、肝臟抗氧化能力，在抗嗜水氣單胞菌方面表現(xiàn)出抗病優(yōu)勢。

黃顙魚(Pelteobagrusfulvidraco)；家系；嗜水氣單胞菌；注射；免疫指標

Abstract：In order to explored the immunity performance of different family groups,fivePelteobagrusfulvidracofamily groups:I(G♂×G♀),Ⅱ(S♂×S♀),Ⅲ(T♂×T♀),Ⅳ(G♂×S♀)and V(S♂×T♀)were selected as research items.300 juveniles per family group of 130 days were injectedAeromonashydrophila.At 0 h,6 h,24 h and 48 h points after injection,juveniles were observation and sampled for determined the Cumulative mortality rate(CM)and the biochemical parameters of serum and liver,containing Total protein(TP),lactic acid(LA),alanine aminotransferase(ALT),aspartate aminotransferase(AST),alkaline phosphatase(AKP)of serum and superoxide dismutase(SOD),malondialdehyde(MDA)of liver.The results showed that,all biochemical parameters except AKP were significantly different among the five groups after injection.At 48 h-point after injection,CM in the order from high to low is group Ⅱ>V>Ⅲ>Ⅳ>I.The serum TP level peaked at 24 h-point after injection,and then gradually decreased.At 48 h-point,TP levels of family group I and Ⅳ were significantly higher than the others.After injection,the serum LA index of each group showed a trend of increasing first and then decreasing.At 48 h-point,the serum LA of group Ⅳ and I were significantly lower than others.The serum transaminase levels increased sharply after injection.At 24 h-point,the ALT level of group I and Ⅱ recovered to 0 h level.The liver SOD level peaked at 24 h-point after injection.At 48 hour-point,the SOD of group V was the highest among all test groups.At 6 h-point,the liver MDA of group I was significantly lower than others.At 48 h-point,MDA of group Ⅲ was significantly higher than group I,Ⅱ and Ⅳ.The results indecated that the family groups ofP.fulvidracohad significant differences in immune levels.Family group I(G♂×G♀)in CM,TP,LA,ALT and MDA indicators showed strong anti-stress,nonspecific immunity,liver antioxidant ability,and showed resistance advantage in anti-A.hydrophila.

Keywords：Pelteobagrusfulvidraco;family;injecting；Aeromonashydrophila；immune parameter

黃顙魚(Pelteobagrusfulvidraco)作為優(yōu)質(zhì)的淡水魚類養(yǎng)殖品種，因其肉嫩味美、營養(yǎng)價值豐富、少肌間刺等特點，深受國內(nèi)外廣大消費者喜愛。市場銷售價格一直高于大宗魚類。隨著黃顙魚集約化養(yǎng)殖規(guī)模的擴大，人工放養(yǎng)密度的增加，養(yǎng)殖水體的污染，種質(zhì)衰退等因素影響，魚體的免疫力逐漸下降，病害頻發(fā)，成為黃顙魚養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)發(fā)展新的制約因素。

隨著魚類選育工作的逐步深入，人們越來越關(guān)心魚類的抗病力，選擇抗病能力強的新品種，成為魚類養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的需要。Gjedrem等[1]自20世紀20年代開始利用選育的方法對魚類進行遺傳改良研究，培育魚類抗病新品種。Haskin等[2]選擇培育的第四代美洲牡蠣的抗單孢子蟲病(MSX)品系，其抗病能力較野生群體提高了8～9倍。目前，具有明顯抗病力優(yōu)勢的成熟品種仍然較少。

致病性嗜水氣單胞菌可引起黃顙魚細菌性敗血癥，該菌被認為是我國淡水養(yǎng)殖魚類暴發(fā)性傳染病的主要病原菌，我國每年因嗜水氣單胞菌引起的細菌性敗血癥已經(jīng)給淡水魚類養(yǎng)殖戶帶來了巨大的經(jīng)濟損失[3]。本研究擬通過對5個黃顙魚家系組注射嗜水氣單胞菌后生理生化指標的比較，為選育抗病能力強的黃顙魚新品系提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗家系構(gòu)建及苗種培育

2014年6-7月，選取滆湖(G)、石臼湖(S)和太湖(T)3個地理群體野生黃顙魚2～3齡親魚3批，每批親魚數(shù)量40～60尾。要求魚體體形、體色正常，體質(zhì)健壯，無疾病傷殘。采用混合催產(chǎn)劑催產(chǎn)親魚，使親本同時達到排卵、排精效應期。設(shè)計建立5個繁育家系組，分別為群體內(nèi)繁育組合I(G♂×G♀)、Ⅱ(S♂×S♀)和Ⅲ(T♂×T♀)，群體間繁育組合Ⅳ(G♂×S♀)、V(S♂×T♀)。采取濕法受精的方式進行人工授精，受精卵靜水充氣分別孵化，孵化水溫27～30 ℃，孵化用水溶解氧在6 mg/L以上，每組卵的孵化時間約48 h。建立家系組的編號及父、母本地理群體及生物學數(shù)據(jù)。隨機選取1 000尾/家系苗種，投入培育車間的中間培育池(3.0 m×0.8 m×0.6 m)，分別流水沖氣培育，3～5 d以浮游動物做開口餌料，5～10 d開始逐步誘食人工配合粉料。整個培育過程中，注意保持培育環(huán)境和培育條件的一致性，消除環(huán)境誤差。

1.2 試驗設(shè)計與飼養(yǎng)管理

在家系魚苗70 d時，挑選體格健壯、規(guī)格整齊(初始體質(zhì)量(2.39±0.02) g)黃顙魚幼魚600尾/家系，每家系設(shè)3個平行。另隨機選取幼魚20尾/家系，-20 ℃冷凍保存，用于測定體組成。在室內(nèi)流水培育池(規(guī)格為3.0 m×0.8 m×0.6 m)中養(yǎng)殖試驗魚，試驗所用飼料為天邦牌黃顙魚1號人工配合飼料。每天定時投喂3次，每次投喂時間為40 min，保證飼料被魚充分攝食，剩餌撈出烘干，統(tǒng)計各養(yǎng)殖池的攝食量，養(yǎng)殖期為60 d。水溫(27±3)℃，pH值7.3～7.5，保證溶解氧充足。

1.3 攻毒試驗

菌種(AeromonashydrophilaHoshina)由江蘇省淡水水產(chǎn)研究所魚病室提供。為從患敗血癥的黃顙魚脾臟中分離的嗜水氣單胞菌，并通過16 S rDNA基因序列分析確定。病原菌先期開展預試驗，確定半數(shù)致死濃度。將菌種在營養(yǎng)肉湯瓊脂培養(yǎng)基中復壯2次。在菌體對數(shù)生長期，4 000 r/min離心1 min，沉淀菌體，使用滅菌生理鹽水清洗菌體，再收集菌體梯度稀釋，制備600 nm下吸光度OD值為0.2的菌體懸液(約5×107CFU/mL)，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

攻毒試驗選取養(yǎng)殖試驗末各家系組中規(guī)格基本一致的魚種，體重范圍(8.5±1.0)g，按家系組分組，每組設(shè)3個平行，60尾魚/平行，每個家系組180尾，置于15個室內(nèi)養(yǎng)殖缸內(nèi)(規(guī)格為0.8 m×0.6 m×0.6 m)。按每100 g魚腹腔注射菌液1.2 mL的比例進行攻毒，觀察魚體癥狀，記錄死亡尾數(shù)。不投餌，水體充氣、不循環(huán)。試驗持續(xù)48 h，在攻毒前(0 h)及攻毒后6 、24、48 h采樣，在每個采樣時間點，隨機取魚3尾/缸，尾靜脈采血。血樣于4 ℃制備血漿，-20 ℃凍存。采血后立即剖開魚腹腔，取肝臟，-20 ℃保存，用于常規(guī)分析。

另選擇規(guī)格基本一致的魚，每個家系組120尾，分4個平行，其中3個缸按每100 g魚腹腔注射菌液1.2 mL的比例進行攻毒，另外 1個缸腹腔注射等量的生理鹽水。分別放養(yǎng)于室內(nèi)另外20個水族箱中(規(guī)格為0.8 m×0.6 m×0.6 m)，保證充足的溶氧，觀察魚體出現(xiàn)癥狀，并及時撈出死亡個體，記錄死亡尾數(shù)，在 0、6、24、34和48 h時間點統(tǒng)計魚的累積死亡率(Cumulative mortality rate,CM)。

1.4 測定指標與方法

使用測定生化指標試劑盒(南京建成生物工程有限公司)和UV-752型紫外可見分光光度計測定各項生化指標，各樣品指標均測3個重復。

1.4.1 血液生化指標

福林-酚試劑法測定血漿總蛋白(TP)含量[4]。乳酸(LA)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)采用賴氏法，堿性磷酸酶(AKP)采用磷酸苯二鈉法等。

1.4.2 肝臟生化指標測定

肝臟抗氧化指標超氧化物歧化酶(SOD)活性測定采用鄰苯三酚自氧化測定法；丙二醛(MDA)采用硫代巴比妥酸反應(Thiobarbituric acid,TBA)比色法測定。

1.5 結(jié)果計算

試驗參數(shù)的計算公式如下：

累積死亡率CM =(攻毒試驗結(jié)束時死亡魚尾數(shù)/攻毒魚尾數(shù))×100%。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

采用SPSS 13.0 軟件處理數(shù)據(jù)，以家系和采樣時間為影響因子，對數(shù)據(jù)作單因素方差分析(One-way ANOVA)，并進行Duncan’s多重比較。試驗結(jié)果用“平均數(shù)±標準差(Mean±SD)”表示。P<0.05表明差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 黃顙魚攻毒后發(fā)病情況和CM

試驗黃顙魚經(jīng)腹腔注射嗜水氣單胞菌菌液后，大部分魚體出現(xiàn)不同程度的感染表現(xiàn)，細菌毒力和致病力在黃顙魚組織器官內(nèi)迅速生長繁殖，產(chǎn)生大量的毒力因子，裂解血液中的紅細胞，損傷機體的毛細血管系統(tǒng)，出現(xiàn)典型的細菌性敗血癥的癥狀，鰭基、鰓蓋及口部充血，眼球外突，腸道空泡，肛門紅腫，貧血，內(nèi)臟充血，肝呈灰白色伴有出血點，腹腔積水，腎臟腫大。

試驗黃顙魚在注射菌液6 h后各家系組均未見明顯死亡現(xiàn)象，6 h后每個家系組的CM呈逐漸升高的變化趨勢，見圖1所示。不同家系組黃顙魚于攻毒后的24、34和48 h，CM由高到低排序為Ⅱ> V> Ⅲ> Ⅳ> Ⅰ。至攻毒后48 h，家系組Ⅰ、Ⅳ、Ⅲ的CM分別為38.89%、50.00%和63.33%；家系組Ⅱ、V的CM分別為91.11%和78.89%。各家系組間的CM比較存在顯著的統(tǒng)計學差異(P<0.05)。

圖1 各家系組黃顙魚魚種注射嗜水氣單胞菌后的累積死亡率Fig.1 CM of Yellow catfish infected A.hydrophilain each family group

2.2 黃顙魚攻毒后血漿中TP、LA和AKP變化

各家系組黃顙魚魚種感染嗜水氣單胞菌后血漿中TP、LA和AKP的變化見圖2 A、2 B和表1所示。從圖2 A可知，攻毒后，隨著時間的延長，血漿中TP含量呈先升高后降低的變化趨勢，攻毒后24 h，血漿中TP含量達到頂峰，后逐漸降低，48 h恢復至攻毒前(0 h)水平。同一家系組在不同時間點比較，家系組Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ攻毒后24 h，血漿中的TP含量最高，與其他時間點比較具有顯著性差異。同一時間的不同家系組間比較，攻毒后0、6 h各組間TP的含量無顯著性差異；攻毒后24 h，家系組Ⅰ、Ⅳ的血漿中TP含量顯著高于其他三組；48 h家系組Ⅳ血漿中TP含量最高，顯著高于其他家系組。

從圖2 B可知，黃顙魚感染嗜水氣單胞菌后，血漿中LA含量也呈先升高后降低的變化趨勢，攻毒后6 h，血漿中LA含量達峰值，后逐漸降低，48 h恢復至攻毒前(0 h)水平。同一家系組在不同時間點比較顯示，家系組Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ在攻毒后6 h，血漿中的LA含量最高，與其他時間點比較具有顯著性差異。同一時間的不同家系組間比較，攻毒后0 h、6 h和24 h各家系組間血漿中LA含量比較無顯著性差異；攻毒后48 h，家系組Ⅳ血漿中LA含量最低，與家系組Ⅰ比較差異不顯著，但顯著低于其他家系組。從表1可知，攻毒后，血漿中AKP的含量變化不顯著，各家系組間和不同時間點取樣所測得的試驗結(jié)果比較無統(tǒng)計學差異。

表1 各家系組黃顙魚魚種感染嗜水氣單胞菌后血漿中AKP含量變化Tab.1 Change of serum AKP of yellow catfish infected with A.hydrophila in each family group U/L

圖2 各家系組黃顙魚魚種感染嗜水氣單胞菌后血漿中TP(A)、LA(B)含量的變化Fig.2 Changes of serum TP(A)and LA(B)of different family groups of Yellow catfish infected with A.hydrophila注：不同大寫字母表示同一組在不同時間點差異顯著(P<0.05)；不同小寫字母表示不同組在同一時間點差異顯著(P<0.05)。圖3、4同

2.3 黃顙魚攻毒后肝臟抗氧化力SOD和MDA變化

各家系組黃顙魚魚種感染嗜水氣單胞菌后肝臟抗氧化能力SOD和MDA的變化見圖3 A和3 B。從圖3 A可知，黃顙魚感染嗜水氣單胞菌后，肝臟中SOD水平呈先升高然后降低的變化趨勢，攻毒后24 h，肝臟中SOD水平達到頂峰，后逐漸降低。同一家系組在不同時間點比較，家系組Ⅳ不同時間點比較無顯著性差異；家系組Ⅰ、V在攻毒后24 h顯著高于其他時間點。同一時間的不同家系組間比較，攻毒后24 h和48 h，家系組V肝臟中SOD水平最高，顯著高于其他家系組；攻毒后48 h，家系組Ⅰ的SOD水平最低，與家系組Ⅱ、Ⅲ間無顯著差異，但是顯著低于家系組Ⅳ和V，攻毒后48 h，家系組V的SOD水平最高，顯著高于其他家系組。

從圖3 B可知，黃顙魚感染嗜水氣單胞菌后，隨著時間的延長，肝臟中MDA水平呈逐漸升高的變化趨勢。同一時間的不同家系組間比較，攻毒后0、24 h各家系組間肝臟中MDA水平無顯著性差異；攻毒后6 h，家系組Ⅰ的MDA水平顯著低于其他組；攻毒后48 h，家系組Ⅲ的MDA水平最高，顯著高于家系組Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ，與家系組V比較差異不顯著，家系組Ⅰ和Ⅱ此時MDA的水平較低。

2.4 黃顙魚攻毒后血漿中ALT和AST活性變化

各家系組黃顙魚魚種感染嗜水氣單胞菌后血漿中ALT和AST活性的變化見圖4A和4B。從圖4A可知，黃顙魚在感染嗜水氣單胞菌后，隨著時間的延長，血漿中AST活性呈逐漸升高的變化趨勢。同一家系組在不同時間點比較，家系組Ⅰ、Ⅳ在攻毒后24 h，血漿中AST活性最高。同一時間的不同家系組間比較，經(jīng)攻毒后24 h，各家系組間血漿中AST活性無顯著性差異，攻毒后48 h，家系組Ⅳ的AST活性最低，與家系組Ⅰ比較差異不顯著，但顯著高于家系組Ⅱ、Ⅲ、V的AST活性。

從圖4 B可知，黃顙魚在感染嗜水氣單胞菌后，血漿中ALT活性呈先升高后降低的變化趨勢。同一家系組在不同時間點比較，家系組Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ在不同時間點血漿中ALT活性比較無顯著性差異，家系組Ⅰ在攻毒后的6 h血漿中ALT活性顯著高于其他時間點。同一時間的不同家系組間比較，經(jīng)攻毒后6 h，各家系組間血漿中的ALT活性比較無顯著性差異；攻毒后24 h，家系組Ⅰ、Ⅱ首先恢復至攻毒前(0 h)水平，且家系組Ⅰ的ALT活性最低。攻毒后48 h，家系組Ⅰ、Ⅱ的ALT活性顯著低于Ⅲ、Ⅳ、V。

圖3 各家系組黃顙魚魚種感染嗜水氣單胞菌后血漿中SOD(A)、MDA(B)含量的變化Fig.3 Changes of serum SOD(A)and MDA(B)of different family groups of yellow catfish infected with A.hydrophila

圖4 各家系組黃顙魚魚種感染嗜水氣單胞菌后血漿中AST(A)、ALT(B)含量的變化Fig.4 Changes of serum AST(A)and ALT(B)of different family groups of yellow catfish infected with A.hydrophila

3 討論

3.1 不同家系黃顙魚攻毒后CM分析

本研究觀察了生長性能較好的5個家系組對嗜水氣單胞菌的抗感染能力，家系組Ⅰ在注射嗜水氣單胞菌后48 h的CM僅為38.89%，表現(xiàn)出了對嗜水氣單胞菌很好的抵抗力。而家系組Ⅱ在攻毒后48 h，CM高達91.11%，一方面說明不同家系組對嗜水氣單胞菌的抵抗力差異明顯，在家系組選育過程中，針對抗病力的篩選可能獲得較好的效果。另一方面，我們僅對不同地域親本的子一代進行比較，并僅比較了3個地區(qū)5個子一代樣本，即發(fā)現(xiàn)了抗病力的差異，說明魚類基因庫大，優(yōu)良性狀范圍廣。當然，相關(guān)抗病基因能否穩(wěn)定遺傳，還需要大量的試驗來驗證。

3.2 黃顙魚攻毒后血漿中TP、LA和AKP變化分析

TP含量反應了魚體的基本代謝水平，對病原感染前后血漿TP含量的比較，一定程度上可以體現(xiàn)魚體非特異性免疫水平?，F(xiàn)有的報道關(guān)于TP水平在病原感染后高低情況不一，可能和試驗魚種類、試驗條件等因素有關(guān)。魚類發(fā)生病菌感染后，魚體發(fā)生免疫應激，短時間內(nèi)大量免疫蛋白分泌到血液中，而后蛋白合成能力下降。不同品種在不同條件下血漿中TP水平達到高峰的時間不同，維持高水平的時間也有差異，這就導致了試驗檢測結(jié)果的不同。陳寅兒等[5]對鱸(Lateolabraxjaponicus)的研究發(fā)現(xiàn)，感染溶藻弧菌病后血漿中的TP水平升高，而郭松林等[6]報道美洲鰻鱺(Anguillarostrata)在感染后血漿中TP水平顯著下降。本試驗中，我們在攻毒后連續(xù)觀察了48 h，在24 h血漿中TP水平達到高峰，然后逐步下降。家系組Ⅱ、V在攻毒后48 h恢復到攻毒前水平，家系組Ⅲ攻毒后48 h血漿中TP水平低于攻毒前水平。結(jié)果表明不同家系組對嗜水氣單胞菌造成的免疫應激具有不同的反應，家系組Ⅰ可能利用血漿中較高的免疫蛋白，抑制了外源菌，使得免疫力提高，增加了存活率。

血漿中LA含量是魚體無氧代謝情況的直接表現(xiàn)，魚體處于應激狀態(tài)下，可以充分的表現(xiàn)魚體對應激情況的響應能力。本試驗中，黃顙魚在攻毒后，各家系組血漿中LA含量先顯著上升，而后逐漸恢復到攻毒前水平。表明試驗中各家系組對嗜水氣單胞菌均表現(xiàn)出免疫應激反應，機體合成代謝大量增加，耗氧量增加，呼吸作用減弱，致使無氧酵解水平上升。在攻毒24 h后，家系組Ⅰ、Ⅳ血漿LA含量顯著下降，首先恢復到攻毒前水平，表明試驗魚有氧呼吸作用恢復，LA被進一步降解，家系組Ⅰ、Ⅳ與其他家系組比較具有更強的對抗免疫應激能力。

AKP可直接參與磷酸基團的轉(zhuǎn)移和鈣磷代謝過程，對魚類營養(yǎng)物質(zhì)吸收利用也有重要作用。AKP還能通過改變病原體的表面結(jié)構(gòu)，增強機體對病原體的識別和吞噬能力。攻毒后，黃顙魚各家系組間的AKP水平差異均不顯著，可能嗜水氣單胞菌對黃顙魚AKP合成作用影響較小，且在不同家系組表現(xiàn)差異較小。

3.3 黃顙魚攻毒后血漿中ALT和AST活性變化分析

ALT和AST主要存在于肝臟中，血漿中含量極其微量。但在疾病、應激等條件下，肝細胞受損，ALT和AST釋放到血液中[7]。本試驗中，黃顙魚在感染嗜水氣單胞菌后，各家系組血漿轉(zhuǎn)氨酶含量急劇上升，表明肝細胞受損發(fā)生。而家系組Ⅰ、Ⅱ血漿中ALT在攻毒后24 h首先恢復到攻毒前水平，說明家系組Ⅰ對抗嗜水氣單胞菌導致的肝損傷方面強于其他家系組，這也與CM數(shù)據(jù)相一致。

3.4 黃顙魚攻毒后肝臟中SOD和MDA變化分析

同一家系組黃顙魚魚種感染嗜水氣單胞菌后，肝臟中SOD水平呈先升高然后降低的變化趨勢，攻毒后24 h，肝臟中SOD水平達到頂峰。攻毒后24 h、48 h，家系組V肝臟中SOD水平最高，顯著高于其他家系組(P<0.05)。各家系組黃顙魚魚種感染嗜水氣單胞菌后，肝臟中MDA水平呈逐漸升高的變化趨勢。攻毒后48 h，家系組Ⅲ的MDA水平最高，與家系組V間比較差異不顯著(P>0.05)，但顯著高于其他家系組(P<0.05)，表明家系組Ⅲ、V兩個家系組感染嗜水氣單胞菌后受損較大。

4 結(jié)論

各家系組黃顙魚感染嗜水氣單胞菌后，表現(xiàn)出明顯的免疫差別。家系組Ⅰ在CM、TP、LA、ALT、MDA等指標方面表現(xiàn)出較強的抗應激、非特異性免疫、肝臟抗氧化能力，在抗嗜水氣單胞菌方面表現(xiàn)出較強的抗病優(yōu)勢。

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AcomparativestudyofimmuneparametersondifferentfamilygroupsofPelteobagrusfulvidracobyinjectingAeromonashydrophila

QIN Qin1,2,WANG Ming-hua1,CHEN Xiao-hui1,JIANG Guang-zhen3,ZHANG Shi-yong1,ZHONG Li-qiang1,PAN Jian-lin1,LIU Wen-bin3

(1.JiangsuInstituteofFreshwaterFisheries,Nanjing210017,China;2.WuxiFishetiesCollege,NanjingAgriculturalUniversity,Wuxi214081,JiangsuChina;3.KeyLabofAquaticAnimalNutritionandFeedScienceofJiangsuProvince,CollegeofAnimalScienceandTechnology,NanjingAgriculturalUniversity,Nanjing210095,China)

2017-01-10；

2017-08-02

現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系專項資金(CARS-46)；江蘇省農(nóng)業(yè)科技自主創(chuàng)新資金項目(CX(11)1036)

秦 欽(1980- )，副研究員，主要從事水產(chǎn)動物遺傳育種及生態(tài)養(yǎng)殖方面研究。E-mail:qinqinapple1980@163.com

劉文斌。E-mail:wbliu@njau.edu.cn

S941.42

A

1000-6907-(2017)05-0040-07