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    PRRSV與PCV2雙重感染引發(fā)副豬嗜血桿菌感染病例的診斷

    2017-10-18 03:44:05張愛瓊梁海英曾智勇湯德元葉百川何小莉
    豬業(yè)科學(xué) 2017年9期
    關(guān)鍵詞:嗜血圓環(huán)病原

    張愛瓊 ,梁海英,曾智勇*,湯德元,王 彬,黃 濤,徐 國(guó),葉百川,咸 文,何小莉

    (貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院,貴州 貴陽(yáng) 550025)

    PRRSV與PCV2雙重感染引發(fā)副豬嗜血桿菌感染病例的診斷

    張愛瓊 ,梁海英,曾智勇*,湯德元,王 彬,黃 濤,徐 國(guó),葉百川,咸 文,何小莉

    (貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院,貴州 貴陽(yáng) 550025)

    豬圓環(huán)病毒病是指以圓環(huán)病毒2型(PCV2)為主要病原引起的斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)、母豬繁殖障礙、豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)、豬皮炎和腎?。≒DNS)的一系列疾病的總稱[1]。其臨床癥狀主要為體質(zhì)下降、消瘦、生長(zhǎng)緩慢、腹瀉、呼吸困難、母豬繁殖障礙[2]。該病可導(dǎo)致豬群的免疫抑制,從而繼發(fā)細(xì)菌性感染[3]。豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)俗稱豬藍(lán)耳病,是由繁殖與呼吸綜合征病毒引起的一種高度接觸性傳染病,母豬感染導(dǎo)致發(fā)熱、厭食、流產(chǎn)、產(chǎn)死胎和木乃伊胎,仔豬感染出現(xiàn)呼吸系統(tǒng)疾病,仔豬發(fā)病率可高達(dá)100%,死亡率超過50%[4]。副豬嗜血桿菌病又稱多發(fā)性纖維素性漿膜炎和關(guān)節(jié)炎,常常在PCV2和PRRSV發(fā)生時(shí)以繼發(fā)感染的形式出現(xiàn)[5]。

    近年來(lái),PCV2和PRRSV混合感染的情況在養(yǎng)豬業(yè)越來(lái)越普遍[6-8]。王慧等[9]在2010—2011年期間,對(duì)豫魯?shù)貐^(qū)的170份病料進(jìn)行病原檢測(cè)時(shí),發(fā)現(xiàn)發(fā)病豬存在多種混合感染,其雙重感染中PCV2和PRRSV的感染最為嚴(yán)重,總感染率達(dá)到33.33%,其中哺乳仔豬和育肥豬的感染率分別為42.10%和50%。PCV2和PRRSV雙重感染常引起嚴(yán)重的免疫抑制,并繼發(fā)嚴(yán)重的細(xì)菌性感染,臨床表現(xiàn)主要為呼吸系統(tǒng)障礙,病豬出現(xiàn)被毛粗亂、腹瀉、消瘦等病癥,給疫病的診治帶來(lái)很大的困難,同時(shí)也給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

    2017年7 月,貴州六枝特區(qū)某新建豬場(chǎng),在對(duì)引進(jìn)保育豬進(jìn)行疫苗免疫后,部分保育豬陸續(xù)出現(xiàn)腹瀉,咳喘,消瘦最終死亡。為確診病因,故將2只極度消瘦的腹瀉病豬送實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè),現(xiàn)將檢測(cè)診斷結(jié)果報(bào)告如下,以供參考。

    1 臨床及發(fā)病特征

    據(jù)述,該新建豬場(chǎng)于2017年5月份,共引進(jìn)240頭保育豬,隔離觀察1個(gè)月后,先后按程序進(jìn)行了豬瘟(CSFV)、豬偽狂犬(PRV)和豬口蹄疫疫苗免疫。在疫苗免疫2周后,部分保育豬陸續(xù)出現(xiàn)精神委靡、采食量下降、腹瀉、咳喘、消瘦、體溫升高和被毛粗亂等臨床癥狀,因腹瀉、消瘦死亡保育豬已達(dá)80余頭,采用多種抗生素藥物治療未見有效。

    2 病理解剖特征

    2只送檢的病豬極度消瘦,解剖可見腹股溝淋巴結(jié)和頜下淋巴結(jié)腫大、出血,呈褐色;肺臟與胸腔粘連,表面可見纖維素性滲出物,肺尖葉、膈葉部分實(shí)變;心包積液,呈典型的“絨毛心”特征(圖1);結(jié)腸可見大量白色的豬結(jié)節(jié)蟲(圖2),其中一只豬脾臟大面積壞死(圖3);腎臟有瘀斑和點(diǎn)狀出血,其他臟器病變特征不明顯。

    圖1 典型的“絨毛心”?

    圖2 結(jié)腸可見大量白色的豬結(jié)節(jié)蟲

    圖3 脾臟大面積壞死

    3 診斷

    通過對(duì)送檢豬的發(fā)病情況、臨床癥狀和剖檢病理變化觀察,初步診斷送檢豬存在豬結(jié)節(jié)蟲、副豬嗜血桿菌以及病毒的混合感染。根據(jù)送樣要求,對(duì)病豬組織樣品進(jìn)行了CSFV、PRRSV、PRV和PCV2等病毒的RT-PCR/PCR檢測(cè)。

    適量采集2頭送檢病豬心、肝、脾、肺、腎等混合組織1份,反復(fù)研磨凍融3次后12 000 r/ min離心10 min,取上清,應(yīng)用MiniBEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver.5.0核酸提取試劑盒提取核酸,分別進(jìn)行CSFV、PRRSV、PRV和PCV2的 檢 測(cè)。CSFV和PRRSV反應(yīng)體系(50.0 μL):2×1 Step Buffer 25.0 μL, 模 板9.0 μL, 上 下 游 引 物 各 1.0μL,Prime Script 1 Step Enzyme Mix 2.0 μL,RNase Free H2O 12.0 μL,反應(yīng)程 序 為 50 ℃ 40 min ;95 ℃ 5 min ;94 ℃ 30 s,57 ℃ 30 s,72 ℃ 30 s,37個(gè)循環(huán);72 ℃ 10 min 。PRV 和PCV2反應(yīng) 體 系 為(50.0 μL):2×Taq酶25.0 μL,ddH2O 14.0 μL, 上 下 游引物各 1.0 μL,模板 9.0 μL。PRV反應(yīng)程序?yàn)?:94 ℃ 5 min ;94 ℃ 30 s,63 ℃ 30 s,72 ℃ 30 s,38個(gè) 循 環(huán);72 ℃ 10 min。PCV2反 應(yīng) 程 序 為:94 ℃ 5 min ;94 ℃ 1 min,57 ℃ 40 s,72 ℃ 2 min,38 個(gè)循環(huán) ;72 ℃ 10 min。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果如圖4所示,PRRSV、PCV2均為陽(yáng)性,CSFV、PRV均為陰性。

    圖4 病原檢測(cè)結(jié)果

    4 討論

    根據(jù)PCR/RT-PCR檢測(cè)結(jié)果表明,送檢病豬存在PCV2和PRRSV雙重感染,臨床發(fā)病特征、病理剖檢病變表明送檢豬繼發(fā)有副豬嗜血桿菌感染和豬結(jié)節(jié)蟲感染。PCV2感染可引起PMWS,多發(fā)生于5~12周齡的仔豬,初期表現(xiàn)為消化功能降低而后出現(xiàn)食欲不振、被毛粗亂無(wú)光澤、貧血、皮膚蒼白或黃染,同時(shí)出現(xiàn)呼吸和消化系統(tǒng)癥狀,表現(xiàn)為咳嗽和腹瀉[10]。PRRSV感染豬后一般表現(xiàn)為呼吸困難、沉郁,飼料轉(zhuǎn)化率下降,四肢的內(nèi)側(cè)以及腹部的皮膚呈現(xiàn)出藍(lán)紫色等,在發(fā)病的初期,急性病豬的體溫會(huì)迅速升高,且精神委靡不振,而斷奶仔豬表現(xiàn)更為明顯,發(fā)育極其不良,被毛粗糙。PCV2和PRRSV均是免疫抑制性病原,能導(dǎo)致豬體產(chǎn)生免疫抑制、干擾和破壞豬體對(duì)其他病原體的抵抗能力,破壞免疫細(xì)胞,降低豬體的免疫力,從而引起多種病毒或細(xì)菌的混合感染,如PPV、附紅細(xì)胞體和副豬嗜血桿菌等[11],造成復(fù)雜臨床癥狀,使臨床診斷和治療更加困難。副豬嗜血桿菌病主要引起肺、心包、腹腔和四肢關(guān)節(jié)漿膜的纖維素性炎癥,臨床上主要表現(xiàn)咳嗽、呼吸困難、消瘦、跛行、被毛粗亂[12],在養(yǎng)豬過程出現(xiàn)PCV2、PRRSV和CSFV等病毒感染及飼養(yǎng)管理不當(dāng)?shù)纫蛩鼐烧T發(fā)該病的發(fā)生。豬結(jié)節(jié)蟲病是由結(jié)節(jié)蟲寄生在豬的結(jié)腸、盲腸內(nèi)所引起,感染嚴(yán)重時(shí)常見腹瀉,黏膜脫落,豬只極度消瘦,發(fā)育遲緩。本次送檢病豬就存在PCV2、PRRSV、副豬嗜血桿菌和豬結(jié)節(jié)蟲感染多種病原混合感染的情況。

    對(duì)于該豬場(chǎng)PCV2和PRRSV雙重感染繼發(fā)副豬嗜血桿菌和豬結(jié)節(jié)蟲感染的情況,應(yīng)科學(xué)地按照免疫程序,做好PCV2和PRRSV的疫苗免疫接種和抗體監(jiān)測(cè)工作,控制PCV2和PRRSV的感染及蔓延,以降低危害。為預(yù)防繼發(fā)副豬嗜血桿菌和其他細(xì)菌的感染,應(yīng)降低豬群飼養(yǎng)密度、減少溫差等的環(huán)境應(yīng)激因素,注重藥物保健,在飼料中添加適量的抗菌藥物。對(duì)于豬結(jié)節(jié)蟲可采用左旋咪唑、硫苯咪唑、伊維菌素、阿維菌素等抗寄生蟲藥物進(jìn)行治療,定期做好驅(qū)蟲工作。戈登民等[13]2009年對(duì)PCV2與細(xì)菌混合感染采用自擬中藥復(fù)方黃芪25 g、當(dāng)歸10 g、淫羊藿10 g、生地15 g、白芍15 g、板藍(lán)根20 g、蒲公英30 g、紫草10 g、丹參10 g、薤白10 g、瓜蔞10 g、葶藶子15 g、黃芩10 g進(jìn)行治療,發(fā)現(xiàn)使用該中藥復(fù)方具有療程短,療效確切,治愈率高的特點(diǎn)。針對(duì)PRRS,目前市場(chǎng)上尚無(wú)特效藥,只能通過預(yù)防來(lái)減少其帶來(lái)的危害,適當(dāng)使用抗菌藥物以控制豬群的細(xì)菌性繼發(fā)感染,哺乳仔豬在斷奶前后,可在飼料中添加適量的黃芪多糖和抗菌藥物,以提高豬自身抵抗力預(yù)防豬藍(lán)耳病的繼發(fā)感染。

    [1] 孫賢. 豬圓環(huán)病毒2型的流行病學(xué)調(diào)查與綜合防控措施研究[D]. 南京:南京農(nóng)業(yè)大學(xué), 2012.

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    2017-08-14)

    省校合作計(jì)劃項(xiàng)目,黔科合 LH 字 [2014]7670 號(hào)

    張愛瓊,女,在讀碩士,研究方向 :動(dòng)物傳染病病原分子生物學(xué)。E-mail:1147415844@qq.com

    曾智勇(1978-),男,教授,博士,碩士生導(dǎo)師,從事動(dòng)物傳染病病原分子生物學(xué)研究

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