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    飼料復(fù)合微生物發(fā)酵菌種比例的篩選研究

    2017-10-18 03:44:09王小明楊在賓劉曉明李兆勇李祥明
    豬業(yè)科學(xué) 2017年9期
    關(guān)鍵詞:發(fā)酵飼料枯草酵母菌

    王小明,楊在賓*,劉曉明,李兆勇,李祥明

    (1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院,山東 泰安 271018;2.北京科為博生物科技有限公司,北京 100193;3.山東省飼料質(zhì)量檢驗(yàn)所,山東 濟(jì)南 250022)

    飼料復(fù)合微生物發(fā)酵菌種比例的篩選研究

    王小明1,楊在賓1*,劉曉明1,李兆勇2,李祥明3

    (1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院,山東 泰安 271018;2.北京科為博生物科技有限公司,北京 100193;3.山東省飼料質(zhì)量檢驗(yàn)所,山東 濟(jì)南 250022)

    本文旨在研究乳酸菌、酵母菌和枯草芽孢桿菌復(fù)合發(fā)酵對(duì)飼料pH、干物質(zhì)回收率(DMR)和還原糖含量的影響,探討菌種的適宜添加比例。以乳酸菌、酵母菌和枯草芽孢桿菌的不同添加比例為因素(每個(gè)因素3個(gè)水平),設(shè)計(jì)9組發(fā)酵模型,35~37 ℃固態(tài)發(fā)酵,每12 h檢測(cè)一次pH,取發(fā)酵0 h、24 h、48 h和72 h樣品進(jìn)行還原糖含量和DMR的檢測(cè)。結(jié)果表明:在相同時(shí)間內(nèi),乳酸菌、酵母菌和枯草芽孢桿菌添加比例為2∶2∶2或2∶2∶3,飼料pH較低,發(fā)酵進(jìn)程較快(P<0.05);添加比例為2∶2∶2、2∶2∶3或3∶3∶3,飼料發(fā)酵后還原糖的含量顯著提高(P<0.05);發(fā)酵72 h,各處理之間飼料DMR差異不顯著(P>0.05),飼料干物質(zhì)損失平均為6.15%。本試驗(yàn)條件下,乳酸菌、酵母菌和枯草芽孢桿菌復(fù)合發(fā)酵的適宜添加比例為2∶2∶2。

    復(fù)合微生物發(fā)酵;pH;還原糖;干物質(zhì)回收率

    微生物發(fā)酵產(chǎn)生的大量有機(jī)酸和消化酶,能夠抑制或殺死有害菌,維持動(dòng)物腸道菌群的生態(tài)平衡,促進(jìn)腸道健康和飼料消化,提高動(dòng)物的生產(chǎn)性能[1-2]。研究報(bào)道,枯草芽孢桿菌、酵母菌和乳酸菌組合發(fā)酵豆粕,能夠提高豆粕的氨基酸含量[3];植物乳酸桿菌、芽胞桿菌和酵母菌復(fù)合發(fā)酵能夠改善飼料營(yíng)養(yǎng)成分,提高飼料營(yíng)養(yǎng)消化率[4]。微生物群落的生物多樣性,可以影響發(fā)酵系統(tǒng)的功能,且發(fā)酵基質(zhì)中各菌群彼此間相互依存、共同作用[5]。復(fù)合益生菌發(fā)酵不僅能夠提高飼料消化率,而且由于益生菌大量繁殖,使發(fā)酵飼料兼有益生菌添加劑的特點(diǎn)[6]。目前的研究重點(diǎn)主要集中在微生物發(fā)酵單一原料及發(fā)酵后營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的變化分析,對(duì)于應(yīng)用乳酸菌、酵母菌和枯草芽孢桿菌復(fù)合發(fā)酵配合飼料及研究其添加比例的報(bào)道較少,且大部分試驗(yàn)研究參數(shù)是基于實(shí)驗(yàn)室條件,與實(shí)際生產(chǎn)需求存在一定差距。因此,本試驗(yàn)?zāi)M實(shí)際生產(chǎn)條件,通過(guò)研究微生物復(fù)合發(fā)酵對(duì)飼料pH、還原糖含量和干物質(zhì)回收率的影響,探討乳酸菌、酵母菌和枯草芽孢桿菌復(fù)合發(fā)酵的適宜添加比例,為發(fā)酵飼料的科學(xué)生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    發(fā)酵菌種:乳酸菌(Lactobacillus),5×109CFU/g; 酵 母 菌(Yeast),4.6×109CFU/g;枯 草 芽 孢 桿 菌(Bacillus subtilis),1.9×1010CFU/g;北京科為博生物科技有限公司提供。

    發(fā)酵基質(zhì):玉米-豆粕型基礎(chǔ)日糧,日糧配方設(shè)計(jì)參照NRC(1998)生長(zhǎng)豬標(biāo)準(zhǔn)配制,日糧配方組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

    表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ),%)

    表2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

    表3 復(fù)合微生物發(fā)酵飼料pH的變化規(guī)律

    1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

    以乳酸菌、酵母菌和枯草芽孢桿菌的添加比例為3個(gè)因素,每個(gè)因素3個(gè)水平,設(shè)計(jì)9組發(fā)酵模型(表2)。

    1.3 試驗(yàn)方法

    將發(fā)酵菌種與發(fā)酵基質(zhì)混合,加水調(diào)節(jié)至水分含量為45%,攪拌均勻,裝入塑料桶(20 kg),密封發(fā)酵,發(fā)酵溫度控制在30~35 ℃。每個(gè)處理8個(gè)重復(fù),0 h開始,每12 h取樣檢測(cè)pH(每個(gè)重復(fù)3個(gè)平行),連續(xù)測(cè)定8次。取發(fā)酵0 h、24 h、48 h和72 h樣品,進(jìn)行還原糖含量和干物質(zhì)回收率(dry matter recovery,DMR) 的測(cè)定。

    1.4 樣品檢測(cè)

    1)pH:根據(jù)AACC(2000)的方法[7],稱取10 g發(fā)酵樣品,放入三角瓶中,加入90 mL蒸餾水。用磁力攪拌器攪拌30 min,靜置10 min后用pH計(jì)測(cè)定。重復(fù)3次取平均值。

    2)還原糖(reducing sugar)含量:采用3,5-二硝基水楊酸(DNS)比色法測(cè)定[8]。

    3)干物質(zhì)回收率(dry matter recovery,DMR):按飼料發(fā)酵前后重量和干物質(zhì)(DM)含量計(jì)算[9]。

    1.5 數(shù)據(jù)處理

    數(shù)據(jù)處理采用SAS 9.2的ANOVA進(jìn)行方差分析,Duncan 氏進(jìn)行多重比較;采用Origin 9.1進(jìn)行二次線性擬合(f(x)=ax2+bx+c),a為二次項(xiàng)系數(shù),b為一次項(xiàng)系數(shù),c為常數(shù)項(xiàng)。P<0.05為差異顯著。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 飼料pH的變化

    各組飼料pH的變化規(guī)律見表3、表4。從表中可以看出:不同處理組的飼料pH逐漸降低,隨著發(fā)酵的進(jìn)行降低逐漸減緩,且均呈現(xiàn)二次曲線規(guī)律(P<0.001)。飼料pH擬合方程的二次項(xiàng)系數(shù)a和一次項(xiàng)系數(shù)b,各處理之間差異極顯著(P<0.01);常數(shù)項(xiàng)c值,各組之間差異不顯著(P>0.05)。其中,A2和A5組a值略高于其他組,但二者之間差異不顯著(P>0.05)。從發(fā)酵開始到飼料pH基本穩(wěn)定,擬合方程的二次項(xiàng)系數(shù)a值越大,降低相同pH所需的時(shí)間越短。由以上分析可知,乳酸菌、酵母菌和枯草芽孢桿菌的添加比例為2∶2∶2或2∶2∶3,在相同時(shí)間內(nèi),飼料pH較低,發(fā)酵進(jìn)程較快。

    表4 復(fù)合微生物發(fā)酵飼料pH擬合曲線變化規(guī)律

    表5 復(fù)合微生物發(fā)酵飼料還原糖含量的分析 %

    表6 復(fù)合微生物發(fā)酵飼料干物質(zhì)回收率的分析 %

    2.2 飼料還原糖含量的變化

    飼料還原糖含量的測(cè)定結(jié)果見表5。由表5可知:在發(fā)酵過(guò)程中添加不同比例的乳酸菌、酵母菌和枯草芽孢桿菌,能夠顯著提高發(fā)酵后飼料的還原糖含量(P<0.05),隨著發(fā)酵的進(jìn)行還原糖含量的增加減緩。其中,A2組、A3組和A5組相比較,飼料還原糖含量差異不顯著(P>0.05),但顯著高于其他處理組(P<0.05)。由此可知,乳酸菌、酵母菌和枯草芽孢桿菌的添加比例為2∶2∶2、2∶2∶3或3∶3∶3,均能夠明顯提高飼料發(fā)酵后還原糖的含量。

    2.3 飼料DMR的變化

    乳酸菌、酵母菌和枯草芽孢桿菌復(fù)合發(fā)酵,飼料DMR的比較分析見表6。從表中可以看出:飼料經(jīng)過(guò)微生物發(fā)酵后,具有一定程度的干物質(zhì)損失,隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)干物質(zhì)損失增加緩慢。其中,飼料發(fā)酵24 h,各組間的飼料DMR無(wú)顯著差異(P<0.05);發(fā)酵48 h,A9組飼料DMR顯著低于其他組(P<0.05);發(fā)酵72 h各組的飼料DMR彼此之間差異不顯著(P>0.05),干物質(zhì)的損失量平均為6.15%。

    3 討論

    3.1 復(fù)合微生物發(fā)酵對(duì)飼料pH的影響

    發(fā)酵過(guò)程中酸含量的增加有利于飼料的長(zhǎng)期保存,且飼料pH的降低與酸含量的增加有直接關(guān)系[5,10],因此pH能夠反映飼料發(fā)酵后的酸含量水平。乳酸菌在發(fā)酵過(guò)程中能夠利用碳水化合物等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),產(chǎn)生乳酸、醋酸等有機(jī)酸,降低底物的pH[10]。Alvarez-Martin等[11]通過(guò)混合培養(yǎng)研究酵母菌和乳酸菌的生長(zhǎng)活動(dòng)及其相互作用,發(fā)現(xiàn)酵母菌和乳酸菌混合發(fā)酵可以調(diào)控代謝產(chǎn)物的變化,酵母菌能夠通過(guò)與乳酸菌的共生作用刺激乳酸菌活動(dòng),從而促進(jìn)乳酸的產(chǎn)生及pH的降低??莶菅挎邨U菌能夠代謝產(chǎn)生乳酸等有機(jī)酸,同時(shí)消耗環(huán)境中的游離氧,創(chuàng)造厭氧條件,促進(jìn)乳酸菌的大量繁殖并產(chǎn)生乳酸,降低pH[12]。本試驗(yàn)研究結(jié)果表明,添加乳酸菌、酵母菌和枯草芽孢桿菌后,隨著發(fā)酵時(shí)間的增加,飼料pH逐漸降低,并呈二次曲線的規(guī)律。其中,乳酸菌、酵母菌和枯草芽孢桿菌的添加比例為2∶2∶2或2∶2∶3時(shí),飼料的pH降低速度最快,發(fā)酵進(jìn)程最快。從而推測(cè)乳酸菌、酵母菌和枯草芽孢桿菌按照一定的比例組合混合發(fā)酵,能夠充分利用彼此間的協(xié)同性、互補(bǔ)性,發(fā)揮組合正效應(yīng),促進(jìn)乳酸等有機(jī)酸的產(chǎn)生,降低飼料pH。隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng),pH下降緩慢,維持在一定水平。這可能是隨著pH的降低,發(fā)酵產(chǎn)生的有機(jī)酸積累到一定程度,優(yōu)勢(shì)菌群(乳酸菌等)的生存受到的酸抑制作用增強(qiáng),活性逐漸減弱,從而造成產(chǎn)酸能力下降。

    3.2 復(fù)合微生物發(fā)酵對(duì)飼料還原糖的影響

    微生物在生長(zhǎng)過(guò)程中產(chǎn)生的酶可以降解飼料中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),部分與氨基酸結(jié)合的還原糖得到釋放,從而提高碳水化合物的利用率。枯草芽孢桿菌在發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生纖維素酶,降解發(fā)酵基質(zhì)中的纖維素,提高還原糖含量。微生物發(fā)酵產(chǎn)生的淀粉酶可以有效降解淀粉為單糖,提高還原糖的含量[13]。閆亞婷等[14]利用枯草芽孢桿菌發(fā)酵玉米粉,發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比玉米粉的中性洗滌纖維下降了4.67%,酸性洗滌纖維下降了41.63%,發(fā)酵產(chǎn)物中還原糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)提高了2.1倍。Chumchuere[15]等、Wang[16]等 人 研究報(bào)道,隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng),豆粕中葡萄糖、果糖和半乳糖等還原糖的含量會(huì)增加趨緩。本研究結(jié)果表明,飼料經(jīng)微生物發(fā)酵后,還原糖的含量顯著提高,且乳酸菌、酵母菌和枯草芽孢桿菌的添加比例為2∶2∶2、2∶2∶3或3∶3∶3,飼料的還原糖含量最高。按一定比例組合的乳酸菌、酵母菌和枯草芽孢桿菌,隨著發(fā)酵進(jìn)行,溫度升高,pH下降,產(chǎn)酸增加,酶促反應(yīng)加快,促進(jìn)纖維素和淀粉的降解,進(jìn)一步提高單糖等還原糖的含量,提高飼料的利用率。隨著時(shí)間的延長(zhǎng),飼料還原糖的增加趨緩,最終維持穩(wěn)定??赡艿脑蚴请S著飼料pH的降低,枯草芽孢桿菌、酵母菌和乳酸菌的活性受到抑制,分泌的酶類減少,同時(shí)纖維素酶和淀粉酶等的降解能力受到抑制。

    3.3 復(fù)合微生物發(fā)酵對(duì)飼料DMR的影響

    干物質(zhì)損失是指微生物消耗發(fā)酵基質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)用于維持自身的生長(zhǎng)繁殖,部分能量在轉(zhuǎn)化過(guò)程中以熱能的形式散失[13]。DMR表示發(fā)酵過(guò)程中養(yǎng)分的損失程度,其數(shù)值越高,說(shuō)明發(fā)酵損失越小,營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的降解越少。本研究中,發(fā)酵72 h,各處理組間的飼料DMR并無(wú)顯著差異,但平均干物質(zhì)的損失量在6.15%。這與丁雪等[17]的研究結(jié)果基本相符,隨著時(shí)間的延長(zhǎng),干物質(zhì)損失持續(xù)增加,最大的干物質(zhì)損失為19.73%。

    4 結(jié)論

    在本試驗(yàn)條件下,復(fù)合微生物能夠有效加快發(fā)酵進(jìn)程,提高飼料還原糖含量,發(fā)揮出組合正效應(yīng)。相同時(shí)間內(nèi),乳酸菌、酵母菌和枯草芽孢桿菌添加比例為2∶2∶2或2∶2∶3,飼料pH最低,發(fā)酵進(jìn)程最快;添加比例為2∶2∶2、2∶2∶3或3∶3∶3時(shí),能夠顯著提高飼料發(fā)酵后的還原糖含量;發(fā)酵72 h后,飼料的干物質(zhì)回收率差異并不明顯,干物質(zhì)損失量平均在6.15%。

    綜上所述,在本試驗(yàn)條件下,乳酸菌、酵母菌和枯草芽孢桿菌復(fù)合發(fā)酵飼料的適宜添加比例為2∶2∶2。

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    2017-07-05)

    山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系生豬創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)建設(shè)項(xiàng)目SDAIT-08-04

    * 通訊作者:楊在賓(1961-),男,教授,博士生導(dǎo)師,研究方向:動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料科學(xué),E-mail:yzb204@163.com

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