腦缺血再灌注損傷大鼠Beclin-1與Bcl-xL、Caspase-2的表達(dá)及Cystatin C干預(yù)作用的影響

陳 萌， 梁秀軍， 王愛(ài)樂(lè)， 常曉棟， 楊嘉磊

腦缺血再灌注損傷大鼠Beclin-1與Bcl-xL、Caspase-2的表達(dá)及Cystatin C干預(yù)作用的影響

陳 萌1， 梁秀軍2， 王愛(ài)樂(lè)3， 常曉棟4， 楊嘉磊4

目的探討大鼠腦缺血再灌注后自噬蛋白Beclin-1與凋亡蛋白Bcl-xL、Caspase-2表達(dá)的變化以及Cystatin C對(duì)其的干預(yù)作用。方法Sprague-Dawley大鼠雄性60只隨機(jī)分成假手術(shù)組(sham)、模型組(model)、Cystatin C低(low)、中(middle)、高(high)濃度組，每組12只。用線栓法制備大鼠右側(cè)局灶性腦缺血2 h再灌注24 h模型。各組大鼠進(jìn)行神經(jīng)損傷嚴(yán)重程度評(píng)分(mNSS)，Western Blot檢測(cè)損傷區(qū)腦皮質(zhì)組織中凋亡相關(guān)蛋白Bcl-xL、Caspase-2的表達(dá)；免疫熒光法檢測(cè)Beclin-1蛋白表達(dá)的平均熒光強(qiáng)度；TUNEL法觀察神經(jīng)細(xì)胞的凋亡指數(shù)(AI)。結(jié)果與模型組相比，Cystatin C低、中濃度組中Bcl-xL的表達(dá)較模型組明顯升高(P<0.05)，Caspase-2的表達(dá)降低(P<0.05)；而Cystatin C高濃度組Bcl-xL表達(dá)明顯降低，Caspase-2的表達(dá)則顯著上升(P<0.05)；Cystatin C低、中、高濃度組Beclin-1的表達(dá)逐漸升高(P<0.05)。結(jié)論應(yīng)用低、中濃度的Cystatin C干預(yù)腦缺血再灌注損傷大鼠后，自噬的增強(qiáng)能夠促進(jìn)Bcl-xL的表達(dá)，抑制Caspase-2的表達(dá)；而高濃度的Cystatin C使Caspase-2的表達(dá)增強(qiáng)，Bcl-xL的表達(dá)降低。

腦缺血再灌注； 自噬； Caspase-2； Bcl-xL； Beclin-1

Abstract：ObjectiveTo investigate the expressions of autophagy related proteins Beclin-1 and apoptosis related proteins Bcl-xL、Caspase-2 after focal cerebral ischemia-reperfusion with Cystatin C pretreatment in rats.Methods60 male SD rats were randomly divided into sham operation group，the model group and Cystatin C pretreatment group(Cystatin C 2 mg/l，5 mg/l，10 mg/l，respectively)，12 rats in each group. The model of right middle cerebral artery occlusion(MCAO) was established by thread embolism. After ischemia for 2 h and reperfusion 24 h，the Modified neurological severity scores (mNSS) were tested. All rats were killed at 24 h after MCAO. The brains were removed and using Western Blot method to detect apoptosis related proteins Bcl-xL and Caspase-2，located in the center area of the cerebral cortex tissue injury；Beclin-1 protein expression was detected by immunofluorescence method，and TUNEL method was used to evaluate the apoptosis of neuron.ResultsCompared with model group，the expression of Bcl-xL had different degree of increase in the Cys low and Cys middle group(P<0.05)，the expression of Caspase-2 decreased(P<0.05)；While the expression of Caspase-2 in the Cys high group was higher than the Cys low and Cys middle group(P<0.05)，the Bcl-xL was obviously lesser(P<0.05)；the expression of Beclin-1 protein in the each concentration Cystatin C group increased gradually(P<0.05).ConclusionLow and middle concentration of Cystatin C intervention ischemia reperfusion injury in rats，the activity of autophagy increased could promote the pression of Bcl-xL，inhibit the expression of Caspase-2.While high concentration of Cystatin C (reach a certain degree of autophagy flow) could inhibit the expression of Bcl-xL，promote the expression of Caspase-2.

Keywords： Cerebral ischemia reperfusion； Autophagy； Beclin-1； Bcl-xL； Caspase-2

腦卒中(Stroke)又叫腦血管意外，是一種突然起病的腦血液循環(huán)障礙性疾病，臨床上分為缺血性腦卒中和出血性腦卒中。在國(guó)內(nèi)的腦血管疾病患者中，缺血性腦卒中患者可達(dá)66.4%[1]。腦缺血后繼發(fā)性腦損傷將嚴(yán)重影響患者預(yù)后并導(dǎo)致病情加重，其主要參與原因包括炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡、興奮性氨基酸毒性、自噬及鈣超載等等。自噬在缺血再灌注損傷時(shí)是一把雙刃劍，當(dāng)細(xì)胞啟動(dòng)適度的自噬來(lái)清除受損細(xì)胞器時(shí)，對(duì)細(xì)胞主要起保護(hù)作用，但當(dāng)不完全或過(guò)度自噬發(fā)生時(shí)可能導(dǎo)致細(xì)胞死亡[2]。半胱氨酸蛋白酶抑制劑C(Cystatin C，Cys C)已證實(shí)可以誘導(dǎo)細(xì)胞自噬，從而保護(hù)小鼠皮質(zhì)神經(jīng)元[3]。本實(shí)驗(yàn)預(yù)先給予大鼠不同濃度的Cystatin C進(jìn)行處理，然后建立局灶性腦缺血再灌注損傷模型，研究其對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷后神經(jīng)細(xì)胞自噬蛋白Beclin-1和凋亡蛋白Bcl-xL、Caspase-2表達(dá)的影響。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物分組及處理 清潔級(jí)SD雄性大鼠60只，體質(zhì)量260～280 g。購(gòu)自北京維通利華生物技術(shù)有限公司。大鼠隨機(jī)分為5組：假手術(shù)組、模型組、Cystatin C低、中、高濃度組，每組12只。Cystatin C各組分別于術(shù)前1h經(jīng)鼠尾靜脈給予Cystatin C 2 mg/L，5 mg/L，10 mg/L，假手術(shù)組和模型組給予等量的生理鹽水。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品及試劑 半胱氨酸蛋白酶抑制劑C (Cystatin C，purified) (瑞士Enzo life Science，貨號(hào)BML-SE479-0100)；鼠抗Bcl-xL單克隆IgG抗體(美國(guó)Santa Cruze，貨號(hào)sc-8392 )、Caspase-2羊多克隆抗體IgG(美國(guó)Santa Cruze，貨號(hào)sc-1217)和兔抗Beclin-1試劑(日本 MBL，貨號(hào) PD017)；HRP 標(biāo)記的羊抗小鼠IgG(北京中杉金橋，貨號(hào) ZB-2305)；HRP 標(biāo)記的驢抗羊IgG(美國(guó)Santa Cruze，貨號(hào)sc-2020)；BCA 法蛋白定量試劑盒 (杭州聯(lián)科生物技術(shù)股份有限公司，貨號(hào)70-M-PQ0012)。垂直電泳系統(tǒng)(Bio-Rad，USA)；石蠟切片機(jī)(德國(guó)Leica，型號(hào) RM2235)；倒置熒光顯微鏡(德國(guó)Leica，型號(hào) DMI4000B)。

1.3 方法

1.3.1 大鼠大腦中動(dòng)脈阻塞(MCAO)模型制備 SD大鼠經(jīng)適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w后，禁食12 h，自由飲水。用10%的水合氯醛腹腔麻醉(300 mg/kg)。模型組和Cystatin C各組采用線栓法制備MCAO模型。大鼠常規(guī)麻醉、消毒，取頸部正中切口，分離右側(cè)頸總動(dòng)脈(common carotid artery，CCA)、頸外動(dòng)脈(external carotid arter，ECA)和頸內(nèi)動(dòng)脈(internal carotid artery，ICA)。用微動(dòng)脈夾夾閉CCA和ICA，在ECA殘端用眼科剪剪一小口，將制備好的線栓通過(guò)ECA殘端插入，去掉ICA的微動(dòng)脈夾后，插入ICA的顱內(nèi)段。注意觀察線栓方向避免誤入翼腭動(dòng)脈，線栓進(jìn)入(18.5±0.5) mm，當(dāng)有輕微阻力時(shí)停止。線栓正好進(jìn)入顱內(nèi)大腦前動(dòng)脈，阻塞大腦中動(dòng)脈的開口。術(shù)后將大鼠單籠飼養(yǎng)，燈照保暖至大鼠蘇醒。血流阻斷2 h后拔出線栓，實(shí)現(xiàn)再灌注。假手術(shù)組大鼠僅分離右側(cè)血管，不插入漁線。

1.3.2 神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分 各組大鼠于術(shù)后24 h分別進(jìn)行改良神經(jīng)損傷嚴(yán)重程度評(píng)分(modified neurological severity scores，mNSS)。該評(píng)分包括運(yùn)動(dòng)、感覺(jué)、反射等方面，依據(jù)其損傷程度分為0分到18分：0分表示無(wú)神經(jīng)功能缺損，18分表示功能缺損最嚴(yán)重。神經(jīng)功能損傷的程度隨分值增大而逐漸加重。評(píng)價(jià)模型制備成功率。

1.3.3 Western Blot檢測(cè)大鼠腦皮質(zhì)組織中Bcl-xL和Caspase-2蛋白水平 將各組大鼠經(jīng)10%水合氯醛麻醉后，預(yù)冷0.01 mol/L PBS心臟灌流后，斷頭取腦。分離缺血再灌注損傷側(cè)腦皮質(zhì)組織，假手術(shù)組取相應(yīng)部位腦組織。加入RIPA裂解液1 ml進(jìn)行裂解、于冰上勻漿，4 ℃離心后取上清液，BCA法進(jìn)行蛋白定量。每道蛋白40 μg上樣，經(jīng)過(guò)SDS-PAGE電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉、分別加入TBST稀釋的一抗：鼠抗Bcl-xL單克隆抗體(1∶500)、Caspase-2羊多克隆抗體(1∶500)、小鼠抗β-actin單克隆抗體(1∶1000)。4 ℃孵育過(guò)夜。次日洗膜后分別加入對(duì)應(yīng)的二抗：辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記的羊抗小鼠IgG(1∶2000)，辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記的驢抗羊IgG(1∶2000)，室溫孵育1 h。使用增強(qiáng)型免疫發(fā)光法(ECL)曝光顯影條帶。采用Image-Pro-Plus 6.0軟件對(duì)條帶進(jìn)行分析，以目的蛋白與內(nèi)參β-actin的積分光密度(IOD)比值作為目的蛋白的相對(duì)表達(dá)水平。

1.3.4 免疫熒光法檢測(cè)Beclin-1的表達(dá) 大鼠經(jīng)斷頭取腦后置于4%多聚甲醛中繼續(xù)固定24 h。冠狀切下腦組織塊，常規(guī)脫水，石蠟包埋。切片厚約為5 μm的薄片，經(jīng)二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化后，加入0.25%TrionX-100室溫處理破膜。PBS搖洗3次，蒸餾水浸泡切片5 min，將切片放入檸檬酸緩沖液中(95～98 ℃) 20 min進(jìn)行抗原修復(fù)，恢復(fù)至室溫后取出切片，PBS浸泡5 min，10%正常山羊血清封閉60 min。加入一抗兔抗Beclin-1多克隆抗體(1∶100稀釋)，室溫孵育1 h后4 ℃過(guò)夜。次日取出常溫放置30 min，PBS洗片后滴加(1∶200稀釋)Alexa Fluor?594-羊抗兔IgG熒光二抗，暗室孵育60 min。PBS避光搖洗5min × 3次，加入Hoechst(1∶1000)，室溫10 min，PBS搖洗3次終止染色。50%緩沖甘油封片，倒置熒光顯微鏡下觀察并拍照。用PBS代替一抗、熒光二抗作為陰性對(duì)照，其余步驟同上。于高倍視野下拍攝5個(gè)互不重疊視野下的照片，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目，取其平均數(shù)。

1.3.5 TUNEL法檢測(cè)神經(jīng)細(xì)胞凋亡 采用脫氧核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶(TdT)介導(dǎo)的原位末端標(biāo)記法(TUNEL)檢測(cè)凋亡細(xì)胞。標(biāo)本預(yù)處理后經(jīng)蛋白酶K室溫孵育15 min，PBS沖洗3次，滴加50 μl的TUNEL反應(yīng)混合物后于37 ℃孵育60 min。PBS沖洗3次，滴加轉(zhuǎn)化劑37 ℃孵育30 min進(jìn)行信號(hào)轉(zhuǎn)化。PBS沖洗3次，加入DBA底物室溫孵育8 min。PBS沖洗3次后蘇木素復(fù)染，蒸餾水沖洗，梯度乙醇脫水、二甲苯透明，中性樹膠封片。每張切片隨機(jī)選取不重復(fù)5個(gè)于200倍視野下進(jìn)行凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)。計(jì)算凋亡細(xì)胞指數(shù)，結(jié)果取其均數(shù)。凋亡細(xì)胞指數(shù)(AI)=陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù) × 100%。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠進(jìn)行神經(jīng)損傷嚴(yán)重程度評(píng)分 各組大鼠模型制備前mNSS評(píng)分均為0分。假手術(shù)組mNSS評(píng)分差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，評(píng)分多為0～2分；模型組大鼠24 h均出現(xiàn)缺血側(cè)同側(cè)Horner征及對(duì)側(cè)肢體的典型偏癱癥狀，表現(xiàn)為：站立不穩(wěn)，向左側(cè)傾倒或轉(zhuǎn)圈，提起鼠尾可見左前肢屈曲，mNSS評(píng)分在10～13分，評(píng)分?jǐn)?shù)值明顯高于假手術(shù)組(P<0.05)，提示模型組大鼠神經(jīng)功能受損嚴(yán)重。與模型組比，模型組大鼠mNSS評(píng)分明顯減少(P<0.05)，而Cystatin C高濃度組mNSS評(píng)分與模型組無(wú)明顯差別(P>0.05)。說(shuō)明Cystatin C低、中濃度可改善腦缺血再灌注后大鼠神經(jīng)功能缺損癥狀，促進(jìn)運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)；而Cystatin C高濃度組大鼠神經(jīng)功能缺損癥狀明顯(見表1)。

組別劑量(mg/kg)神經(jīng)損傷嚴(yán)重程度評(píng)分假手術(shù)組模型組CysC低濃度組CysC中濃度組CysC高濃度組25101.00±0.73911.33±1.0739.42±1.165a8.33±0.651ab12.00±0.953c

a：P<0.01 vs 模型組；b：P<0.05 vs Cys C 低濃度組；c：P>0.05 vs 模型組

2.2 Western Blot檢測(cè)Bcl-xL和Caspase-2表達(dá)情況 Western Blot檢測(cè)結(jié)果顯示：假手術(shù)組有少量Bcl-xL表達(dá)；模型組Bcl-xL的表達(dá)升高，Caspase-2表達(dá)也增高；Cystatin C低、中濃度組Bcl-xL表達(dá)較模型組有不同程度的增加(P<0.05)，Caspase-2表達(dá)較模型組有所降低(P<0.05)；而Cystatin C高濃組Bcl-xL的表達(dá)較Cystatin C低、中濃度組有所降低，Caspase-2表達(dá)較低、中濃度組表達(dá)明顯增加(P<0.05)(見圖1)。

假手術(shù)組 模型組 Cys C低 Cys C中 Cys C高

假手術(shù)組 模型組 Cys C低 Cys C中 Cys C高

假手術(shù)組 模型組 Cys C低 Cys C中 Cys C高

n=6，a：P<0.01 vs 假手術(shù)組，b：P<0.05 vs 模型組，c：P<0.05 vs Cys C 低濃度組，d：P<0.05 vs Cys C中濃度組

圖1 每組大鼠Bcl-xL、Caspase-2的蛋白印跡結(jié)果

2.3 免疫熒光染色檢測(cè)腦皮質(zhì)Beclin-1平均熒光強(qiáng)度 免疫熒光染色結(jié)果顯示：Beclin-1蛋白主要分布在細(xì)胞質(zhì)，在腦皮質(zhì)呈彌散性分布，陽(yáng)性物質(zhì)呈紅光，藍(lán)光顯示的為Hoechst染的細(xì)胞核。假手術(shù)組Beclin-1的熒光強(qiáng)度較弱，模型組Beclin-1的熒光強(qiáng)度較假手術(shù)組有所增強(qiáng)；不同濃度的Cys C各組Beclin-1的熒光強(qiáng)度呈現(xiàn)出逐漸增高的趨勢(shì)(P<0.05)(見表2、圖2)。

2.4 TUNEL法檢測(cè)神經(jīng)細(xì)胞凋亡結(jié)果 光學(xué)顯微鏡下觀察：TUNEL染色陽(yáng)性細(xì)胞核呈棕黃色，正常細(xì)胞染成藍(lán)色。假手術(shù)組幾乎沒(méi)有陽(yáng)性凋亡細(xì)胞，模型組細(xì)胞凋亡數(shù)目明顯增多，凋亡指數(shù)較高(P<0.01)；Cystatin C低、中濃度組凋亡指數(shù)較模型組有所降低(P<0.05)，而Cystatin C高濃度組細(xì)胞凋亡指數(shù)較低、中濃度組明顯增高(P<0.05)(見表2、圖3)。

組別Beclin-1凋亡指數(shù)(%)假手術(shù)組模型組CysC低濃度組CysC中濃度組CysC高濃度組0.0305±0.00330.0585±0.0047acd0.0868±0.0056abd0.1151±0.0380abc0.1456±0.0352abcd1.14±0.0228.95±1.68acd18.40±0.81abd15.96±0.60abc22.86±1.04abcd

a：P<0.01 vs 模型組；b：P<0.05 vs 模型組；c：P<0.05 vs Cys C低濃度組；d：P<0.05 vs Cys C中濃度組

3 討 論

細(xì)胞凋亡是一種程序性細(xì)胞死亡，它的主要功能是清除機(jī)體內(nèi)損傷或過(guò)多的細(xì)胞，從而有助于機(jī)體的存活。Caspase為天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶，是一類進(jìn)化上高度保守的半胱氨酸蛋白酶家族。Caspase依賴的凋亡途徑是細(xì)胞程序性死亡的一種重要方式，其中Caspase-2是最保守的Caspase家族成員之一。

有文獻(xiàn)報(bào)道Caspase-2位于Caspase-3的上游，在凋亡的發(fā)生中其先于Caspase-3被激活[4～6]。Imre等[7]發(fā)現(xiàn)Caspase-2為凋亡啟動(dòng)因子并促使細(xì)胞發(fā)生凋亡，當(dāng)Caspase-2的表達(dá)下調(diào)可抑制細(xì)胞凋亡。Bcl-2蛋白家族通過(guò)線粒體通透性繼而引起Caspase活化，在應(yīng)激誘發(fā)的凋亡中Caspase-2對(duì)Bax轉(zhuǎn)位到線粒體是必須的，說(shuō)明線粒體的通透性受到Caspase-2的調(diào)控[8，9]；在Fas抗體誘發(fā)的凋亡中，Caspase-8的活化和下游Bid酶切活化、DNA片段化均需Caspase-2的存在?；罨腃aspase-2可以直接或者間接通過(guò)酶切Bid誘發(fā)線粒體中凋亡相關(guān)蛋白Cyt-C、Smac和AIF釋放，且呈劑量依賴關(guān)系[10]。其中Cyt-C與Apaf-1和proCaspase-9形成凋亡信號(hào)復(fù)合體使Caspase-9活化，繼而下游效應(yīng)Caspase活化引發(fā)細(xì)胞凋亡[11]。

Bcl-xL是Bcl-2家族中重要的凋亡抑制基因。Bcl-xL作為上游凋亡相關(guān)因子能夠抑制Caspase的激活及調(diào)控活性氧的毒性發(fā)揮和維持線粒體膜電位來(lái)阻止細(xì)胞凋亡[12]，也可以通過(guò)抑制死亡誘導(dǎo)信號(hào)復(fù)合體組裝抑制Caspase的活化[13]。Beclin-1是一種可以引導(dǎo)自噬蛋白定位于自噬小體，從而幫助其形成自噬小體雙層膜結(jié)構(gòu)的蛋白，也被稱為自噬相關(guān)蛋白-6(autophagyrelatedgene-6，ATG-6)。主要參與哺乳動(dòng)物自噬體的早期形成，也可以促進(jìn)自噬小體水解蛋白。另外Beclin-1存在BH3結(jié)構(gòu)域蛋白，Bcl-2蛋白家族中的Bcl-2、Bcl-xL、Bcl-w能與BH3結(jié)構(gòu)域結(jié)合，抑制其抗凋亡作用；Bcl-2蛋白的功能受其蛋白產(chǎn)物Bax和Bcl-xL蛋白的調(diào)控。因此，Beclin-1是一個(gè)參與自噬與凋亡雙重途徑的調(diào)節(jié)因子，它參與調(diào)節(jié)途徑的不同最終決定細(xì)胞在外界刺激下是進(jìn)入自噬還是凋亡。

有文獻(xiàn)表明，經(jīng)凋亡誘導(dǎo)劑處理的過(guò)表達(dá)Bcl-2細(xì)胞中有自噬體大量出現(xiàn)，提示在Bcl-2高表達(dá)時(shí)會(huì)激活自噬[14]；在Bcl-2/Bcl-xL過(guò)表達(dá)的細(xì)胞系中，缺血也能夠誘導(dǎo)自噬的發(fā)生[15]；Xu等[16]發(fā)現(xiàn)，自噬的激活伴隨著Bcl-2蛋白的上調(diào)，增加的Bcl-2可能阻止?fàn)I養(yǎng)剝奪條件下的自噬的過(guò)度激活和細(xì)胞死亡。Tang等[17]在研究脊髓損傷時(shí)發(fā)現(xiàn)，損傷大鼠經(jīng)腹腔注射mTOR抑制劑Rapamycin后能增強(qiáng)自噬蛋白Beclin-1和LC3的表達(dá)，促進(jìn)脊髓損傷神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞中自噬的發(fā)生。其對(duì)神經(jīng)修復(fù)的主要發(fā)生機(jī)制為：自噬的抑制能夠抑制Bcl-2的表達(dá)，促進(jìn)Bax的表達(dá)，自噬的增強(qiáng)能夠促進(jìn)Bcl-2的表達(dá)，抑制Bax的表達(dá)。這些結(jié)果說(shuō)明Bcl-2并不是在所有條件下都抑制自噬的激活。所以抗凋亡蛋白Bcl-2家族和自噬之間的關(guān)系還需要進(jìn)一步的研究。

Cystatin C是一種蛋白酶抑制劑，可以抑制mTOR通路誘導(dǎo)功能性自噬，有實(shí)驗(yàn)證明對(duì)腦損傷有保護(hù)作用[18]。在我們的前期研究結(jié)果中也發(fā)現(xiàn)，

圖2 各組大鼠Beclin-1 免疫熒光染色結(jié)果(×400)

假手術(shù)組 模型組 Cys C低濃度組 Cys C中濃度組 Cys C高濃度組

圖3 各組大鼠TUNEL染色結(jié)果(×200)

Cystatin C在一定濃度范圍內(nèi)可使腦缺血再灌注損傷大鼠的神經(jīng)功能缺損癥狀明顯減輕，腦梗死區(qū)體積減少(P<0.01)，而高濃度的Cystatin C則引起自噬過(guò)度激活致腦損傷加重[19]。在本實(shí)驗(yàn)中探討Cystatin C預(yù)處理后對(duì)Beclin-1和相關(guān)凋亡蛋白的影響機(jī)制，應(yīng)用低、中濃度的Cystatin C預(yù)處理后，可增強(qiáng)神經(jīng)細(xì)胞自噬蛋白Beclin-1的表達(dá)，使神經(jīng)細(xì)胞凋亡數(shù)目減少，Bcl-xL的表達(dá)增加，Caspase-2的表達(dá)降低，從而對(duì)損傷的神經(jīng)細(xì)胞起到保護(hù)作用；而高濃度Cystatin C預(yù)處理后則Bcl-xL的表達(dá)降低，Caspase-2的表達(dá)升高，神經(jīng)細(xì)胞凋亡數(shù)目明顯增加，導(dǎo)致腦損傷加重。Bcl-2蛋白及其家族成員在腦缺血再灌注損傷神經(jīng)元凋亡與自噬的病理機(jī)制中起著非常重要的作用，其在不同組織和細(xì)胞相關(guān)信號(hào)通路中所產(chǎn)生的的協(xié)調(diào)或拮抗作用機(jī)制，尚需進(jìn)一步的研究。找準(zhǔn)作用靶點(diǎn)，以此治療和挽救腦卒中患者的神經(jīng)功能缺失癥狀，可能會(huì)成為將來(lái)臨床治療中新的思路和治療理念。

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EffectsofCystatinCpretreatmentonautophagyproteinBeclin-1andapoptosisrelatedproteinBcl-xL、Caspase-2aftercerebralischemia-reperfusioninrats

CHENMeng，LIANGXiujun，WANGAile，etal.

(DepartmentofElectronMicroscopeofBasicMedicalCollege，Chengde067000，China)

1003-2754(2017)09-0801-06

2017-03-20；

2017-06-20

河北省自然科學(xué)青年基金項(xiàng)目(No. H2015406046)；承德醫(yī)學(xué)院大學(xué)生科研項(xiàng)目(No. 201510)

(1.承德醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院電鏡室，河北 承德 067000；2.承德醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所，河北 承德 067000；3.承德市中醫(yī)院ICU室，河北 承德 067000；4.承德醫(yī)學(xué)院2014級(jí)本科，河北 承德 067000)

陳 萌，E-mail：chenmeng05@126.com

R743.3

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