對(duì)VITEK 2-Compact肺炎鏈球菌GP68藥敏卡的性能評(píng)估

熊安英， 黃 鸝， 馬 莉， 黃 梅

對(duì)VITEK 2-Compact肺炎鏈球菌GP68藥敏卡的性能評(píng)估

熊安英， 黃 鸝， 馬 莉， 黃 梅

目的評(píng)估VITEK 2-Compact肺炎鏈球菌GP68藥敏卡的性能，以E試驗(yàn)為參比方法。方法收集2015年1－12月98株肺炎鏈球菌，采用VITEK 2-Compact AST-GP68藥敏卡進(jìn)行藥敏測(cè)定，結(jié)果與E試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行對(duì)照。結(jié)果按CLSI標(biāo)準(zhǔn)，98株肺炎鏈球菌中青霉素的分類符合率（CA）為80.6%、嚴(yán)重錯(cuò)誤（VME）為0、重大錯(cuò)誤（ME）為12.2%、微小錯(cuò)誤（mE）為7.1%；頭孢曲松CA為90.8%、VME為0、ME為4.1%、mE為5.1%；頭孢噻肟CA為91.8%、VME為0、ME為5.1%、mE為3.1%；美羅培南CA為85.7%、VME為0、ME為2.0%、mE為12.2%；阿莫西林、厄他培南、紅霉素、四環(huán)素、氯霉素、泰利霉素、利奈唑胺、萬(wàn)古霉素、喹諾酮類（莫西沙星、氧氟沙星、左氧氟沙星）、甲氧芐啶-磺胺甲唑CA為100%。結(jié)論VITEK 2-Compact AST-GP68由于檢測(cè)原理缺陷使其對(duì)某些抗菌藥物如青霉素、頭孢曲松、頭孢噻圬、美羅培南等的藥敏試驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)假耐藥現(xiàn)象，臨床在遇到此類現(xiàn)象時(shí)，需采用其他方法進(jìn)行復(fù)核確認(rèn)。

VITEK 2-Compact； 肺炎鏈球菌； 性能評(píng)估

Abstract: ObjectiveTo evaluate the performance of GP68 Antibiotic Susceptibility Testing card in testing the susceptibility ofStreptococcus pneumoniaeon VITEK 2-Compact system, taking E-test as reference.MethodsA total of 98 strains ofS.pneumoniaewere collected and subjected to susceptibility testing using E-test and VITEK 2-Compact (AST-GP68) in Luzhou People’s Hospital form January 1 to December 31, 2015.ResultsAccording to the breakpoints of Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), category agreement (CA) of penicillin was 80.6%. Very major error (VME) was 0. Major error (ME) was 12.2%, minor error (mE) was 7.1%. CA of ceftriaxone was 90.8%, VME 0, ME 4.1%, mE 5.1%. CA of cefotaxime was 91.8%, VME 0,mE 5.1%, mE 3.1%. CA of meropenem was 85.7%, VME 0, ME 2.0%, mE 12.2%. CA of other antibiotics (amoxicillin, ertapenem,erythromycin, tetracycline, chloramphenicol, telithromycin, linezolid, vancomycin, moxi fl oxacin, o fl oxacin, levo fl oxacin) was 100%.ConclusionsAST-GP68 on VITEK 2-Compact system may have false results of antimicrobial resistance to some antibiotics such as penicillin, ceftriaxone, cefepime, meropenem due to the defects of the underlying principle. Such false results should be veri fi ed by other methods in clinical practice.

Key words:VITEK 2-Compact;Streptococcus pneumoniae; performance evaluation

肺炎鏈球菌是引發(fā)社區(qū)獲得性肺炎、急性中耳炎、鼻竇炎、血流感染、支氣管炎以及侵襲性感染的重要病原菌之一[1-2]。在兒童和老年人以及免疫力低下者中有極高發(fā)病率和死亡率[3]。據(jù)報(bào)道，由于抗菌藥物的廣泛使用，近年來(lái)肺炎鏈球菌對(duì)青霉素類、紅霉素、碳青霉烯類、喹諾酮等抗菌藥物耐藥率居高不下，呈現(xiàn)逐年增加的趨勢(shì)[4]，使治療面臨困難，因此合理選用抗菌藥物已成為臨床醫(yī)師亟需解決的問(wèn)題，而準(zhǔn)確、快速的藥物敏感性測(cè)試能極大地滿足臨床治療的需要。因此本課題就自動(dòng)化的微生物鑒定藥敏分析儀對(duì)肺炎鏈球菌藥敏測(cè)定卡GP68的靈敏度和準(zhǔn)確度進(jìn)行評(píng)估，為臨床合理用藥提供一定的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 菌株

收集瀘州市人民醫(yī)院2015年1－12月臨床送檢標(biāo)本中的肺炎鏈球菌共98株，質(zhì)控菌株ATCC49619來(lái)源于四川省臨床檢驗(yàn)中心。

1.2 主要試劑與儀器

試驗(yàn)VITEK 2-Compact全自動(dòng)微生物鑒定藥敏分析儀（生物梅里埃公司），E試驗(yàn)條購(gòu)自生物梅里埃診斷產(chǎn)品公司，肺炎鏈球菌的鑒定與藥敏用生物梅里埃的VITEK 2-Compact儀及其配套鑒定卡和藥敏卡，細(xì)菌分離培養(yǎng)用哥倫比亞瓊脂平皿。

1.3 檢測(cè)流程

所有肺炎鏈球菌均接種于哥倫比亞瓊脂，35 ℃，5% CO2中培養(yǎng)20～24 h后并挑取單個(gè)菌落傳代1次，于35 ℃ CO2培養(yǎng)18～24 h。以0.45%NaCl 3 mL無(wú)菌液制備0.50～0.63麥?zhǔn)暇鷳乙?。以配套加樣器吸取肺炎鏈球菌菌懸液，加入另一含? mL無(wú)菌鹽水的試管中，混勻。其余步驟按說(shuō)明書操作進(jìn)行。同時(shí)以E試驗(yàn)法為參比方法，測(cè)定肺炎鏈球菌對(duì)抗菌藥物的敏感性。對(duì)出現(xiàn)嚴(yán)重錯(cuò)誤（VME）或重大錯(cuò)誤（ME）者進(jìn)行重復(fù)測(cè)定。

1.4 結(jié)果分析

2種方法所測(cè)結(jié)果均按照美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（CLSI）所提供的折點(diǎn)判讀為敏感、中介和耐藥。①分類符合率（CA）：2種方法分類結(jié)果一致者；② VME：參比方法結(jié)果為耐藥，測(cè)試方法結(jié)果為敏感，即假敏感；③ME：參比方法結(jié)果為敏感，測(cè)試方法結(jié)果為耐藥，即假耐藥；④微小錯(cuò)誤（mE）：參比方法結(jié)果為中介，測(cè)試方法結(jié)果為敏感或耐藥，或參比方法結(jié)果為敏感或耐藥，而測(cè)試方法結(jié)果為中介。

2 結(jié)果

2.1 藥敏結(jié)果

以E試驗(yàn)法結(jié)果為參比，VITEK 2-Compact藥敏卡對(duì)紅霉素、氯霉素、萬(wàn)古霉素、四環(huán)素、甲氧芐啶-磺胺甲唑、厄他培南、泰利霉素、左氧氟沙星、氧氟沙星、莫西沙星、利奈唑胺的CA為100%，青霉素（以非腦膜炎折點(diǎn)計(jì)算）的CA為77.6%，頭孢曲松、頭孢噻肟、阿莫西林和美羅培南的CA分別為90.8%、91.8%、92.9%和85.7%，見(jiàn)表1。

2.2 GP68藥敏卡所測(cè)青霉素與E試驗(yàn)藥敏結(jié)果比較。

在98株肺炎鏈球菌菌株中，GP68所測(cè)青霉素的MIC在0.06～1 mg/L58株，用E試驗(yàn)復(fù)核后結(jié)果全部≤1 mg/L，其CA為100%；而GP68測(cè)的青霉素MIC≥2 mg/L 40株，用E試驗(yàn)復(fù)核后結(jié)果有一半以上為敏感或者中介，使其CA只有45.0%、ME達(dá)37.5%、mE達(dá)17.5%。

3 討論

肺炎鏈球菌是上呼吸道的正常寄生菌，當(dāng)機(jī)體防御機(jī)制發(fā)生改變就有可能引起嚴(yán)重感染如肺炎、腦膜炎、血流感染。近年來(lái)，肺炎鏈球菌對(duì)青霉素等多種抗菌藥物的耐藥程度呈逐年增加趨勢(shì)，加重了臨床治療的難度，引起國(guó)內(nèi)外學(xué)者的密切關(guān)注。當(dāng)前全球有15%～30%的肺炎鏈球菌為多重耐藥（MDR）菌株，即對(duì)3類及3類以上抗菌藥物耐藥[5]。有研究報(bào)道，肺炎鏈球菌的高耐藥率與大量使用抗菌藥物和抗菌藥物使用劑量不足有關(guān)[6]。因此正確的藥敏結(jié)果可以幫助臨床醫(yī)師合理選用抗菌藥物，減緩細(xì)菌耐藥性產(chǎn)生。

藥敏試驗(yàn)方法有紙片擴(kuò)散法、微量肉湯稀釋法、瓊脂稀釋法和E試驗(yàn)法。E試驗(yàn)法作為一種檢測(cè)細(xì)菌或真菌對(duì)抗菌藥物敏感性試驗(yàn)的方法，其結(jié)果可與微量肉湯稀釋法具有良好的一致性[7]。在98株肺炎鏈球菌-抗菌藥物組合中，青霉素CA為80.6%，ME為12.2%，mE為7.1%。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，當(dāng)GP68測(cè)得青霉素的MIC在0.06～1 mg/ L，用E試驗(yàn)復(fù)核后結(jié)果全部≤1 mg/ L，其標(biāo)準(zhǔn)符合率為100%；當(dāng)測(cè)得青霉素MIC≥2mg/ L以后，用E試驗(yàn)復(fù)核后結(jié)果有一半以上為敏感或者中介，使其標(biāo)準(zhǔn)符合率只有45.0%，而ME高達(dá)37.5%，mE達(dá)17.5%。出現(xiàn)此現(xiàn)象的原因可能與VITEK 2-Compact系統(tǒng)檢測(cè)原理有關(guān)，一般只檢測(cè)3～4個(gè)抗生素濃度，就可以推算出6種獨(dú)立的生長(zhǎng)模式，從而報(bào)告出6種不同的MIC值。因此藥敏卡中3～4個(gè)抗生素濃度并不是傳統(tǒng)意義上的折點(diǎn)濃度，在GP68卡中青霉素有0.03、0.06、0.25、0.5 （mg/ L）4個(gè)藥敏濃度，但結(jié)果卻能通過(guò)推測(cè)覆蓋到2 mg/ L，正如前文所示，由GP68所得到的MIC并不是真正意義上的MIC，是通過(guò)其檢測(cè)原理推測(cè)出來(lái)的。按照CLSI的折點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)，中介為4 mg/ L，耐藥為≥8 mg/L，應(yīng)用自動(dòng)藥敏系統(tǒng)報(bào)告的耐青霉素肺炎鏈球菌中就包括了敏感菌株、中介菌株以及耐藥菌株，因此就出現(xiàn)了肺炎鏈球菌對(duì)青霉素耐藥率增加，這與龔松迪等[5]描述的結(jié)果相符。當(dāng)出現(xiàn)較多的ME 和 mE時(shí)就會(huì)導(dǎo)致青霉素的中介和耐藥率假性升高，這可能與卡片上抗生素濃度覆蓋不夠?qū)е滤幟艚Y(jié)果出現(xiàn)漂移，從而導(dǎo)致對(duì)青霉素有10.2%假耐藥。目前全國(guó)范圍肺炎鏈球菌對(duì)青霉素的耐藥率大約為4.0%[5]，本研究中用E試驗(yàn)法復(fù)核后耐藥率大約為2.0%，與全國(guó)肺炎鏈球菌對(duì)青霉素耐藥率符合。同樣出現(xiàn) ME 和 mE還有美羅培南、頭孢曲松和頭孢噻肟。龔迪松等[5]指出，頭孢曲松和頭孢噻肟的敏感率有較大幅度下降與第三代頭孢菌素折點(diǎn)值的調(diào)整和藥敏方式從紙片擴(kuò)散法更改為細(xì)菌自動(dòng)鑒定系統(tǒng)有重要關(guān)系。而GP68藥敏卡中其余抗菌藥物MIC與E試驗(yàn)相比其標(biāo)準(zhǔn)符合率都為100%。

表1 98株肺炎鏈球菌VITEK 2-Compact藥敏結(jié)果與E試驗(yàn)法藥敏結(jié)果比較Table 1 The results of susceptibility testing of 98 strains ofStreptococcus pneumoniaeby VITEK 2-Compact AST-GP68 and E-test

CLSI規(guī)定，當(dāng)青霉素對(duì)于非腦膜炎肺炎鏈球菌分離株的MIC ≤ 0.06 mg/L（或苯唑西林抑菌圈直徑≥ 20 mm）時(shí)，可預(yù)報(bào)下列β內(nèi)酰胺類藥物為敏感：氨芐西林（口服或注射的）、氨芐西林-舒巴坦、阿莫西林、阿莫西林-克拉維酸、頭孢克洛、頭孢地尼、頭孢托侖、頭孢吡肟、頭孢噻肟、頭孢泊肟、頭孢丙烯、頭孢洛林、頭孢唑肟、頭孢曲松、頭孢呋辛、多利培南、厄他培南、亞胺培南、氯碳頭孢、美羅培南和青霉素（口服的或注射的），即只要儀器法的青霉素MIC ≤ 0.06 mg/L時(shí)，對(duì)上述抗生素應(yīng)為敏感。因此，當(dāng)在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)肺炎鏈球菌對(duì)青霉素的結(jié)果呈中介或耐藥時(shí)，需用其他方法進(jìn)行復(fù)核確認(rèn)。

臨床治療細(xì)菌感染性疾病以細(xì)菌藥敏報(bào)告結(jié)果作為主要依據(jù)，藥敏結(jié)果的準(zhǔn)確與否直接關(guān)系到治療效果，由于本研究中菌株數(shù)量有限，國(guó)內(nèi)尚無(wú)關(guān)于對(duì)VITEK 2-Compact AST-GP68藥敏卡的性能評(píng)估報(bào)道，因此有必要對(duì)導(dǎo)致假耐藥如青霉素、頭孢曲松、頭孢噻圬、美羅培南等抗菌藥物結(jié)果的準(zhǔn)確性進(jìn)行進(jìn)一步測(cè)定。上文提到的措施可獲得較為準(zhǔn)確的藥敏結(jié)果，為臨床治療提供用藥依據(jù)和減少抗菌藥物的濫用，保質(zhì)保量地把檢驗(yàn)結(jié)果反饋給臨床，更好地為臨床服務(wù)。

[1] BOKAEIAN M， KHAZAEI HA， JAVADIMEHR M.Nasopharyngeal carriage， antibiotic resistance and serotype distribution ofStreptococcus pneumoniaeamong healthy adolescents in Zahedan[J]. Iran Red Crescent Med J， 2011，13（5）：328-333.

[2] BOGAERT D， DE GROOT R， HERMANS PW.Streptococcus pneumoniaecolonisation： the key to pneumococcal disease[J]. J Lancet Infect Dis，2004，4（3）：144-154.

[3] VASOO S， SINGH K， HSU LY， et al. Increasing antibiotic resistance inStreptococcus pneumoniaecolonizing children attending day-care centres in Singapore[J]. Respirology， 2011，16（8）：1241-1248.

[4] 姚開(kāi)虎，張敬仁. 國(guó)內(nèi)耐藥肺炎鏈球菌的流行現(xiàn)狀[J].傳染病信息，2011，24（2）：120-124.

[5] 龔松迪，華春珍，李建平，等. 2006—2014年我院1109例肺炎鏈球菌感染及其耐藥模式分析[J]. 中國(guó)抗生素雜志，2015，40（11）：859-864，880.

[6] 王偲，劉嵐，謝偉，等.全自動(dòng)微生物系統(tǒng)在臨床肺炎鏈球菌藥敏試驗(yàn)中的應(yīng)用[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2009，32（8）：931-934.

[7] 張曉冬，徐莉. E-test法和NCCLS微量法檢測(cè)念珠菌對(duì)氟康唑的敏感性[J].中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志，2006，20（4）：243-244.

Performance evaluation of the GP68 Antibiotic Susceptibility Testing card in testing the susceptibility of Streptococcus pneumoniae on VITEK 2-Compact system

XIONG Anying, HUANG Li, MA Li, HUANG Mei. （Department of Laboratory Medicine, Luzhou People's Hospital, Luzhou Sichuan 646000, China）

R378.14

A

1009-7708 ( 2017 ) 05-0558-04

10.16718/j.1009-7708.2017.05.014

2016-09-26

2017-04-24

瀘州市科技局課題 [2013-S-46(2/6)]。

瀘州市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川瀘州 646000。

熊安英（1982—），女，碩士研究生，主要從事細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)。

黃梅，E-mail：326785086@qq.com。