豬繁殖與呼吸障礙綜合征研究進(jìn)展

師麗剛，鄭　巖，周　飛（.洛陽市動物疫病預(yù)防控制中心，河南洛陽　4700；.河南省畜牧獸醫(yī)服務(wù)中心；.洛陽市動物衛(wèi)生監(jiān)督所）

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豬繁殖與呼吸障礙綜合征研究進(jìn)展

師麗剛1，鄭巖2，周飛3
（1.洛陽市動物疫病預(yù)防控制中心，河南洛陽471002；2.河南省畜牧獸醫(yī)服務(wù)中心；3.洛陽市動物衛(wèi)生監(jiān)督所）

豬繁殖與呼吸障礙綜合征（PRRS）是由豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒（PRRSV）所引起的一種豬的急性傳染性疾病，因其可引起患豬耳朵發(fā)藍(lán)而俗稱“豬藍(lán)耳病”。自1987年P(guān)RRSV首次出現(xiàn)以來，PRRSV已廣泛流行于世界大部分地區(qū)，給世界養(yǎng)豬業(yè)造成了極大的經(jīng)濟(jì)損失。我國在1996年由郭寶清等首次從疑似發(fā)病豬群中分離出PRRSV，證明了該病毒在我國的存在，隨后，該病在我國各地廣泛傳播，呈現(xiàn)地方流行趨勢。目前，該病還沒有特效的治療措施，只有采取綜合的防制措施。

1　病原學(xué)特點(diǎn)

PRRS為屬于套式病毒目、動脈炎病毒科、動脈炎病毒屬成員，有囊膜的單股正鏈的RNA病毒。PRRSV對溫度、PH、脂質(zhì)溶劑等比較敏感。目前，根據(jù)PRRSV基因組和抗原性的差異，可將其分為歐洲型和美洲型兩個(gè)基因型，兩種基因型毒株間在抗原性上存在著顯著的差異，兩者只有很少的交叉反應(yīng)。

2　流行特點(diǎn)

豬是該病的唯一天然宿主，一年四季均可發(fā)生，各種年齡和品種的豬均易感，但主要侵害仔豬和繁殖母豬，育肥豬一般耐過，不表現(xiàn)出臨床癥狀。發(fā)病豬和帶毒豬是PRRS的傳染源，耐過豬可長期帶毒并不斷向外排毒。豬群一旦有PRRSV感染，則很難消除。PRRS的主要傳播方式包括垂直和水平傳播等。PRRSV主要經(jīng)呼吸道感染，傳播速度較快。

PRRS目前無特效藥治療，主要采取綜合防制和對癥治療。但最根本的辦法是將病豬、帶毒豬進(jìn)行隔離，對環(huán)境進(jìn)行消毒，以去除傳染源，切斷傳播途徑，并長期堅(jiān)持，同時(shí)還需要加強(qiáng)飼養(yǎng)管理并進(jìn)行科學(xué)的免疫接種。

3　臨床癥狀及病理變化

3.1臨床表現(xiàn)

PRRSV可以引起各種年齡的豬群發(fā)生疾病，但是其表現(xiàn)各不相同，其中最為典型的兩種臨床表現(xiàn)就是母豬的繁殖障礙和斷奶前后仔豬的呼吸系統(tǒng)疾病。同時(shí)該綜合征又以急性型、慢性型、亞臨診型三種表現(xiàn)形式更為普遍。

急性型：患豬首先發(fā)熱和厭食，肛溫超過40℃。進(jìn)入發(fā)病高峰期，母豬表現(xiàn)早產(chǎn)、死胎、木乃伊胎，弱胎多，即使出生并存活下來的仔豬尤其是早產(chǎn)豬也會非常虛弱，產(chǎn)后1周內(nèi)死亡率明顯增高。仔豬發(fā)病表現(xiàn)出典型的呼吸道癥狀，呼吸困難，急促，腹瀉。耐過豬生長緩慢，且易繼發(fā)其他疾病。育肥豬易感性較差，臨診癥狀表現(xiàn)為輕度呼吸困難和咳嗽。公豬感染了該病以后，除表現(xiàn)與母豬相同外，還有就是性欲缺乏、精液品質(zhì)的一時(shí)性的降低、精液產(chǎn)量的降低。

慢性型：慢性型是目前規(guī)?；B(yǎng)豬場PRRS的主要表現(xiàn)形式。豬群表現(xiàn)為生產(chǎn)性能下降，生長緩慢，母豬產(chǎn)胎率會下降，仔豬隨母源抗體下降，易受到PRRSV的感染而成為帶毒豬。豬群免疫功能下降，易繼發(fā)感染病原。

亞臨診型：感染豬群不發(fā)病。

3.2病理變化及致病機(jī)理

新生豬和哺乳仔豬感染PRRSV后，肺呈紅褐色，不塌陷。淋巴結(jié)腫大，呈褐色，成為PRRSV診斷的標(biāo)志。在顯微鏡下，可以看到間質(zhì)性肺炎。淋巴組織表現(xiàn)為淋巴樣增生和局部性濾泡樣壞死。

豬肺泡巨噬細(xì)胞是病毒入侵的關(guān)鍵，PRRSV經(jīng)過內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)不斷增殖，最終導(dǎo)致細(xì)胞崩解，病毒釋放出來，隨淋巴液和血液到達(dá)全身，并在相應(yīng)的組織內(nèi)增殖，導(dǎo)致全身淋巴結(jié)感染和病毒血癥的發(fā)生，造成組織器官損傷。

4　PRRSV的檢測與診斷技術(shù)

不同豬場和個(gè)體感染PRRSV后，臨床癥狀有很大的差異，慢性病例越來越多，因此PRRS的確診需要借助實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)。

近年來建立了許多PRRSV的檢測與診斷技術(shù)，如病毒分離與鑒定、ELISA方法檢測抗體、RT-PCR技術(shù)、間接免疫熒光抗體試驗(yàn)（IFA）、膠體金免疫層析法、核酸探針原位雜交技術(shù)以及基因序列分析等。其中ELISA檢測方法具有經(jīng)濟(jì)、快速、靈敏以及半自動化等特點(diǎn)，結(jié)果通過儀器自動顯出，適用于短時(shí)間內(nèi)大量血清樣品的檢測，是一種臨床上廣泛使用的可靠的PRRS診斷方法。RT-PCR也廣泛應(yīng)用，是用于病原檢測的一種十分快速、靈敏的方法。病毒分離是診斷PRRS最為確切的方法之一，但該方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力，不適用于臨床大量診斷。間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)（IFA）需要細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)及特殊的熒光顯微鏡觀察，檢測結(jié)果不能自動顯示，觀察到的結(jié)果受機(jī)器、實(shí)驗(yàn)人員觀察等影響。膠體金技術(shù)是一種將膠體金作為追蹤標(biāo)記物應(yīng)用于抗原抗體的新型免疫標(biāo)記技術(shù)。該方法具有操作簡便、快速、特異性強(qiáng)、靈敏度高、結(jié)果易于判斷等優(yōu)點(diǎn)。核酸探針原位雜交技術(shù)是利用核酸分子單鏈之間堿基互補(bǔ)配對的原理，將有放射性標(biāo)記或其他標(biāo)記的探針與目的序列結(jié)合，以鑒定、定位目的核酸。

5　PRRS疫苗研究進(jìn)展

目前豬藍(lán)耳病還沒有有效可靠的治療方法，除加強(qiáng)飼養(yǎng)管理外，僅能依靠疫苗進(jìn)行防控來確保豬群的穩(wěn)定。除了市場上廣泛使用的PRRS滅活疫苗和弱毒活疫苗外，還有新型的基因工程苗在不斷出現(xiàn)。

5.1 PRRS滅活疫苗

滅活疫苗具有安全、不散毒、無毒力返強(qiáng)以及運(yùn)輸方便、便于保存，且對母源抗體不具有干擾作用等優(yōu)點(diǎn)，是一種理想的疫苗選擇之一。滅活疫苗所產(chǎn)生的免疫主要以體液免疫為主，誘導(dǎo)細(xì)胞免疫的能力很低，不能有效清除感染豬體內(nèi)的病毒，從而造成免疫效果不理想。就PRRS而言，雖然PRRS滅活苗安全，但是，使用PRRS滅活苗后豬群應(yīng)激比較大，且抗體產(chǎn)生時(shí)間比較晚，抗體水平比較低，達(dá)不到對豬群免疫保護(hù)的水平。用滅活疫苗免疫豬群，其免疫力產(chǎn)生期較長，不但免疫劑量大，而且免疫次數(shù)多，不適合仔豬的免疫。在PRRS滅活疫苗使用中，如果沒有合適的高效的免疫佐劑，免疫效果會更差?？傊捎诙喾矫娴脑?，目前PRRS滅活疫苗在我國已不再提倡作為政府采購并強(qiáng)制性免疫的疫苗。

5.2 PRRS弱毒活疫苗

PRRS弱毒疫苗的免疫效果要明顯優(yōu)于滅活疫苗，其接種后免疫產(chǎn)生快，持續(xù)時(shí)間較長，保護(hù)力強(qiáng)，可以給豬體建立一定的免疫力。弱毒疫苗還可以通過對母豬的免疫使仔豬獲得被動免疫的效果。有研究表明，PRRS弱毒疫苗免疫仔豬后的第110天采用同源強(qiáng)毒攻擊，可得到完全保護(hù)；架子豬接種7 d后即可激發(fā)保護(hù)性免疫應(yīng)答，并可持續(xù)16周以上。弱毒活苗也是目前市場上使用最多的PRRSV疫苗。

弱毒活苗也有自身的缺點(diǎn)，散毒、毒力返強(qiáng)、安全性差、保存條件要求較高等。Botner等報(bào)道，在丹麥經(jīng)PRRS弱毒疫苗免疫的PRRS陰性豬群爆發(fā)了PRRS，從流產(chǎn)的胎兒及死胎中分離到疫苗株病毒。Nielsen J等人在死胎、胎兒，以及死亡仔豬中分離到疫苗株，證明疫苗毒株能夠在豬體內(nèi)持續(xù)存在，并導(dǎo)致豬發(fā)病。由于弱毒活疫苗存在明顯的安全隱患，國外一些國家禁止使用弱毒活疫苗去預(yù)防PRRS。此外，PRRS毒株眾多，疫苗免疫效果根據(jù)疫苗株與野毒株之間同源性的高低而不同，對變異較大的病毒株交叉免疫保護(hù)性較低，免疫效果不理想。

5.3 PRRS新型疫苗

目前研究的新型疫苗主要是指基因工程疫苗，包括DNA疫苗、亞單位疫苗和活載體疫苗等。此類疫苗的研制已成為當(dāng)今的主流并展現(xiàn)出其廣闊的發(fā)展前景。

DNA疫苗能夠同時(shí)誘導(dǎo)動物機(jī)體產(chǎn)生一定水平的體液免疫和細(xì)胞免疫。GP5是PRRSV重要的糖基化膜結(jié)構(gòu)蛋白，含有重要的中和抗原位點(diǎn)，有該蛋白誘導(dǎo)產(chǎn)生的中和抗體，對清除豬體內(nèi)的PRRSV至關(guān)重要。2013年梁欠欠等人構(gòu)建的基于假病毒復(fù)制子的PRRS DNA疫苗能夠誘導(dǎo)動物機(jī)體產(chǎn)生一定水平的體液免疫和細(xì)胞免疫，有望成為PRRS標(biāo)記疫苗。

亞單位疫苗是利用單一蛋白質(zhì)抗原分子來誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的，因此，在研制亞單位疫苗時(shí)，首先要尋找到免疫活性較高的特定抗原。P4、GP5和M蛋白可產(chǎn)生中和抗體，GP3蛋白雖不能刺激產(chǎn)生中和抗體，但它能提供對仔豬的保護(hù)。Plana-Duran等用重組桿狀病毒表達(dá)并純化了西班牙Olot/91株表達(dá)的GP5、GP3、GP2和N蛋白，對懷孕母豬進(jìn)行免疫保護(hù)試驗(yàn)的結(jié)果表明，ORF3和ORF5單獨(dú)或者聯(lián)合使用的表達(dá)產(chǎn)物可以作為研究PRRS亞單位疫苗的良好抗原。

由于活載體疫苗兼具滅活苗和活苗的優(yōu)點(diǎn)，不僅啟動了機(jī)體的體液免疫，還激活了細(xì)胞免疫應(yīng)答，同時(shí)可以構(gòu)建多聯(lián)、多價(jià)疫苗，進(jìn)而達(dá)到一苗防多病的效果，具有很好的應(yīng)用前景。首例PRRS活病毒載體疫苗是利用傳染性胃腸炎病毒（TGEV）輔助表達(dá)系統(tǒng)構(gòu)建的表達(dá)GP5的重組TGEV，免疫結(jié)果可檢測到很高的GP5特異性ELISA抗體，但未檢測到中和抗體。

作為一種新型疫苗，基因工程疫苗兼具傳統(tǒng)滅活苗和弱毒活苗的優(yōu)點(diǎn)，成為當(dāng)前研究PRRS疫苗的熱點(diǎn)方向之一。但是目前其對人和動物的安全性、生產(chǎn)工藝要求、生產(chǎn)成本等問題需要得到解決與完善，距實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用還有一定的距離?！?/p>

收稿日期：（2016-03-20）

中圖分類號：S858.28+9.6

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B

文章編號：1004-5090201604-0047-02