朝鮮龍膽的生藥學研究

孫紫薇，張 楠，翁麗麗，劉文斌

（1.長春中醫(yī)藥大學，長春 130117；2.吉林省食品藥品認證中心，長春 130062）

朝鮮龍膽的生藥學研究

孫紫薇1，張 楠1，翁麗麗1，劉文斌2*

（1.長春中醫(yī)藥大學，長春 130117；2.吉林省食品藥品認證中心，長春 130062）

目的 對中藥朝鮮龍膽進行生藥學研究，為其品質(zhì)評價提供理論依據(jù)。方法 依據(jù)《中華人民共和國藥典》中龍膽的研究方法對朝鮮龍膽進行性狀鑒定、顯微鑒定；同時測定其水分、灰分、浸出物；采用高效液相色譜法對其主要化學成分龍膽苦苷進行含量測定。結果 2個不同產(chǎn)區(qū)的朝鮮龍膽根中含水量分別為6.50%及6.42%；水溶性浸出物的含量分別為53.43%及40.84%；灰分含量分別為3.55%及4.10%；龍膽苦苷的含量分別為4.20%及5.40%。結論 朝鮮龍膽中龍膽苦苷的含量較高，水溶性浸出物的量亦較高，可作為龍膽新資源開發(fā)利用。

朝鮮龍膽；龍膽苦苷；水分；灰分；浸出物

Abstract:?Objective To study on pharmacognosy of Gentiana uchiyamai Nakai, and provide a theoretical basis for its evaluation of quality.Methods Do research of Gentiana uchiyamai Nakai its identification of traits，microscopic and determine the content determination of its moisture, ash and extract according to “Chinese Pharmacopoeia”.Determine the content of the main chemical constituents of gentiopicroside by using HPLC.Results It showed that these two Gentiana uchiyamai Nakai from different areas had different water content from their roots, which were 6.50% and 6.42%, the water soluble extractive were 53.43% and 40.84%, and ash content were 3.55% and 4.10%respectively, the gentian gentiopicroside contents were 4.20% and 5.40%.Conclusion It showed that the content of gentiopicroside and the water soluble extractive content from gentian diamond were high.Gentiana uchiyamai Nakai can be used as a new resource development and utilization of gentian.

Keywords:?Gentiana uchiyamai Nakai; gentiopicroside; moisture; ash; extract

朝鮮龍膽（Gentiana uchiyamai Nakai）為龍膽科植物，又稱金剛龍膽或斑花龍膽[1]，生于林緣草地。耐寒，喜涼爽，忌炎熱；喜濕潤、肥沃的土壤，不耐干旱；喜光，較耐陰[2]。在我國主要分布于黑龍江、吉林、遼寧等地[3]。

現(xiàn)在市場上的龍膽藥材主要是來自西南的滇龍膽和來自東北的關龍膽[4]。由于各種因素的影響，龍膽的生存環(huán)境不斷遭到破壞、污染，使得龍膽的數(shù)量不斷減少，其在市場上處于供不應求的狀態(tài)[5]。同時龍膽的種類繁多，不同品種龍膽間的質(zhì)量參差不齊。朝鮮龍膽為龍膽同屬植物，在東北地區(qū)具有一定的分布量，其有效化學成分的含量較高，可作為龍膽的新資源開發(fā)利用，因此對朝鮮龍膽進行生藥學研究，為其品質(zhì)評價提供理論基礎。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津高效液相色譜儀Prominence-ILC-2030，島津企業(yè)管理中國有限公司；電子天平JA2603B(d=0.000 1g)，上海天美天平儀器有限公司；電子天平FA1004B (d=0.000 01g)，上海佑科儀器儀表有限公司；紫外可見分光光度計TU-1080，北京普析通用儀器有限責任公司；超聲波清洗器KQ3200E，昆山市超聲儀器有限公司；恒溫水浴鍋HH-2，江蘇金壇市江南儀器廠；Water Purifier 實驗室專用超純水機；電熱鼓風干燥箱DHG-9053A，上海一恒科學儀器有限公司。

1.2 試藥

1.2.1 對照品 龍膽苦苷（規(guī)格：20 mg，購于中國食品藥品鑒定所）。

1.2.2 試劑 蒽酮、硫酸、乙醇、甲醇均為分析純；色譜甲醇；水為超純水。

1.3 藥材 朝鮮龍膽采集于吉林省白山市八道江區(qū)和吉林省延吉市二道白河鎮(zhèn)。

2 方法與結果

2.1 來源鑒定 朝鮮龍膽為多年生草本，莖直立，較粗壯，無毛?；~缺，葉對生，呈披針形，具有3條平行脈，葉兩面均明顯可見，基部無葉柄，頂部漸尖；無花梗，花頂生或上部葉腋；花萼鐘形，花冠呈藍色或藍紫色，花冠筒里可見明顯斑點，故而金剛龍膽又稱為斑花龍膽，裂片不整齊，裂片先端鈍圓稍具突尖。雄蕊具有5個，由黃色花絲和花藥組成，位于冠筒的中央。雌蕊具有1個，呈棕褐色，子房呈類橢圓形，兩端尖中間寬，柄粗，花柱短。

2.2 性狀鑒定 朝鮮龍膽根莖呈不規(guī)則的塊狀，表面灰棕色至深棕色，上端有殘留莖基或莖痕，周圍及下端有多數(shù)細長的根，約為10條。根呈細長圓柱形，表面黃棕色或棕色，上端有多數(shù)明顯的橫皺紋，下端較細，具有縱皺紋和支根痕。質(zhì)脆，易折斷，氣微，味甚苦。

2.3 顯微鑒定

2.3.1 葉表面制片 取朝鮮龍膽葉子1片，分別撕取上、下表皮各1片，置于載玻片上，滴加1～2滴水合氯醛，蓋上蓋玻片，置于顯微鏡下觀察?？梢娚媳砻姹砥ぜ毎?，壁波狀，長為166～185 μm，寬77～88 μm，細胞內(nèi)具有圓形油狀物質(zhì)。下表面表皮細胞有多數(shù)氣孔，副衛(wèi)細胞數(shù)目不定，為不定式氣孔，氣孔長27～42 μm，寬16～21 μm；中間氣孔口長17～21 μm，寬2～6 μm?？梢娒黠@的導管及圓形油狀物質(zhì)。

2.3.2 花粉粒制片 取花粉少許，于載玻片上，滴加1～2滴水合氯醛，蓋上蓋玻片，置于顯微鏡下觀察?？梢姸鄶?shù)呈類圓形的花粉粒，壁上有短刺，直徑75～85 μm。

2.3.3 根粉末制片 取朝鮮龍膽根粉末少許，于載玻片上滴加1～2滴水合氯醛，蓋上蓋玻片，制片完成，置于顯微鏡下觀察。可見內(nèi)皮層細胞表面觀呈類長方形，極大，長106～192 μm，寬63～141 μm，具有明顯橫隔壁將細胞分成若干個子細胞，每個子細胞被縱隔壁分成2～4個小細胞。外皮層細胞表面觀呈紡錘形，長121～187 μm，每一個細胞被橫隔壁分成若干個類長方形的子細胞。導管為螺紋導管或網(wǎng)紋導管，直徑18～63 μm。草酸鈣針晶較多，長21～25 μm。

2.4 水分測定 依照2015版《中華人民共和國藥典》[6]第4部通則（0832第2法水分測定法）測定水分含量。取粉末約2 g，置于稱量瓶中，105 ℃干燥5 h，于干燥器中冷卻，并在上述溫度下再干燥1 h，冷卻，稱重至恒重。以減失的重量為依據(jù)，計算含量（%），即得。

結果吉林省白山市八道江區(qū)的朝鮮龍膽水分含量為6.50%，吉林省延吉市二道白河的朝鮮龍膽水分含量為6.42%。

2.5 浸出物測定 依照2015版《中華人民共和國藥典》第4部通則（2201浸出物測定法熱浸法）取供試品大約2 g，精密稱定，置100 mL錐形瓶中，加水100 mL，密塞，稱重，靜置1 h后，回流提取1 h，過濾，精密量取續(xù)濾液25 mL，置于蒸發(fā)皿中蒸干，105 ℃干燥3 h，冷卻30 min，稱重，計算即得。

結果吉林省白山市八道江區(qū)的朝鮮龍膽浸出物量為53.43%，吉林省延吉市二道白河的朝鮮龍膽浸出物量為40.84%。

2.6 灰分測定 依照2015版《中華人民共和國藥典》第4部通則（2302總灰分測定法）取粉末約2 g，置于坩堝內(nèi)，稱重，加熱至完全碳化，置馬弗爐中灰化。根據(jù)殘渣重量計算含量（%），即得。

結果吉林省白山市八道江區(qū)的朝鮮龍膽灰分含量為3.55%，吉林省延吉市二道白河的朝鮮龍膽灰分含量為4.10%。

2.7 朝鮮龍膽中龍膽苦苷的含量測定

2.7.1 色譜條件 色譜柱為：Agilent Innoval C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇∶水（25：75）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：270 nm；柱溫：室溫；進樣量：10 μL。

2.7.2 對照品溶液的制備 取龍膽苦苷對照品適量，精密稱重，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，即得。

2.7.3 供試品溶液的制備 取朝鮮龍膽粉末約0.5 g，精密稱重，置于50 mL的具塞錐形瓶中，加入甲醇20 mL，精密稱重，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）15 min，稱重，用甲醇補充減失的重量，搖勻，濾過，精密吸取續(xù)濾液2 mL，置于10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.7.4 標準曲線的繪制 取龍膽苦苷對照品溶液，依次進樣 2、4、6、8、10、12、16 μL，按照上述的色譜條件測定相應的峰面積，以龍膽苦苷含量為橫坐標X，縱坐標Y為相應的峰面積，繪制標準曲線，得到回歸方程為Y=1 701 193.02 X+4 737.35，相關系數(shù)r =0.999 9。結果表明，對照品在0.4～3.2 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關系。

2.7.5 精密度試驗 吸取同一“2.7.3”項下朝鮮龍膽供試品溶液，按上述色譜條件連續(xù)進樣6次，每次進樣10 μL記錄峰面積，其值依次為：3 615 458、3 652 645、3 556 751、3 562 106、3 566 679、3 591 035，結果RSD=1.42%，表明儀器具有良好的精密度。

2.7.6 重現(xiàn)性試驗 取朝鮮龍膽樣品按“2.7.3”項下方法制備供試品溶液6份，依次進樣，記錄峰面積，計算龍膽苦苷的含量，其值依次為：4.20%、4.19%、4.21%、4.22%、4.22%、4.20%，結果RSD=0.80%，表明方法的重現(xiàn)性良好。

2.7.7 穩(wěn)定性試驗 取同一朝鮮龍膽供試品溶液，室溫下放置0、2、4、6、12、24 h依法進行測定，記錄峰面積，其值依次為：3 617 247、3 556 102、3 569 948、3 557 937、3 553 484、3 596 530、3 575 207，結果RSD=0.73%，表明供試品溶液中的龍膽苦苷在24 h之內(nèi)穩(wěn)定。

2.7.8 加樣回收率試驗 取朝鮮龍膽樣品6份，精密稱定，加入適量的龍膽苦苷對照品，按“2.7.3”項下方法制備，測定龍膽苦苷的含量，計算回收率，結果平均回收率為99.79%，RSD值為0.33%。

2.7.9 樣品含量測定 分別取不同地區(qū)朝鮮龍膽不同部位的粉末，按上述供試品溶液的制備方法和色譜條件測定龍膽苦苷含量，結果見表1。

表1 朝鮮龍膽中龍膽苦苷含量測定結果

3 小結

本實驗通過查閱相關文獻以及《中華人民共和國藥典》[6]中關于同屬龍膽的生藥學的研究方法，對朝鮮龍膽分別進行了來源鑒定、性狀鑒定、顯微鑒定，并分別對水分、灰分、浸出物進行測定，同時測定了朝鮮龍膽中主要有效化學成分龍膽苦苷。

結果表明，朝鮮龍膽中平均水分含量為6.46%，平均水溶性浸出物的含量為47.14%，平均灰分含量為3.83%，朝鮮龍膽根中龍膽苦苷的平均含量為4.80%，莖葉中平均含量為0.55%，花中平均含量為0.88%，回收率為99.79%。含量測定結果表明，朝鮮龍膽根中龍膽苦苷的含量遠遠高于莖葉和花，實驗儀器的精密度符合要求，實驗的重現(xiàn)性和穩(wěn)定性均良好。

本實驗對朝鮮龍膽的生藥學進行了實驗研究，通過實驗發(fā)現(xiàn)，朝鮮龍膽中具有一定量的龍膽苦苷，同時水溶性浸出物也較高。吉林省朝鮮龍膽具有一定的資源分布量，具有潛在的開發(fā)價值，可作為龍膽的新資源開發(fā)利用。

[1]具誠.高瑋,王魁頤.吉林省生物種類與分布[M].長春：東北師范大學出版社, 1997： 233.

[2]劉延江.新編園林觀賞花卉[M].沈陽： 遼寧科學技術出版社 , 2007： 544.

[3]曹偉, 李翼云.小興安嶺植物區(qū)系與分布[M].北京： 科學出版社 , 2007： 204.

[4]吳立宏.中藥龍膽的應用傳承[J].世界科學技術-中醫(yī)藥現(xiàn)代化 , 2011, 13(2)： 340-347.

[5]沈濤, 金航, 王元忠, 等.中藥龍膽化學成分研究進展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學, 2010, 38(30)： 16868-16870, 16874.

[6]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社, 2015： 96.

Study on pharmacognosy of Gentiana uchiyamai Nakai

SUN Ziwei1, ZHANG Nan1, WENG Lili1, LIU Wenbin2*
（1.Changchun University of Chinese Medicine, Changchun 130117, China；2.Jilin Certification Center for Food and Drug, Changchun 130062, China）

R932

A

2095-6258(2017)05-0720-03

2017-01-05）

10.13463/j.cnki.cczyy.2017.05.011

吉林省中醫(yī)藥科技項目（2014-ZDB）。

孫紫薇（1994 -），女，碩士研究生，主要從事中藥學研究。

*通信作者：劉文斌，男， 助理研究員，電話-13504315728， 電子信箱-525055921@qq.com