振腹干預(yù)對2型糖尿病大鼠血糖的調(diào)節(jié)作用與對其HPA軸影響的相關(guān)性

王 鶴，肖星蕾，趙方曉，陳幼楠，林彩霞

（北京中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院，北京，100029）

振腹干預(yù)對2型糖尿病大鼠血糖的調(diào)節(jié)作用與對其HPA軸影響的相關(guān)性

王 鶴，肖星蕾，趙方曉，陳幼楠*，林彩霞

（北京中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院，北京，100029）

目的 研究振腹干預(yù)對2型糖尿病大鼠血糖的調(diào)節(jié)與對其HPA軸的影響是否具有相關(guān)性。方法 將60只大鼠隨機分為對照組10只、模型組50只，對模型組以鏈脲佐菌素（STZ）腹腔注射合并高糖高脂飼料喂養(yǎng)的方式進行造模，后將符合納入標準的模型組大鼠分為模型組12只，治療組12只。對治療組大鼠行振腹干預(yù)，干預(yù)結(jié)束后將大鼠處死，取材并進行相應(yīng)檢測，對所得數(shù)據(jù)進行整理分析。結(jié)果 治療結(jié)束后，治療組與模型組相比，F(xiàn)BG水平明顯降低，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），腎上腺指數(shù)水平明顯降低，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），腎上腺CORT濃度明顯降低，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），下丘腦CRH濃度明顯降低，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。治療組與對照組相比，F(xiàn)BG水平及腎上腺指數(shù)仍較高（P＜0.05）。結(jié)論 振腹干預(yù)能有效降低2型糖尿病大鼠的FBG水平，且其腎上腺皮質(zhì)分泌功能、HPA軸活性也相應(yīng)降低，說明振腹法調(diào)節(jié)2型糖尿病大鼠糖代謝可能與其改善了腎上腺皮質(zhì)分泌功能及HPA軸功能有關(guān)。

2型糖尿??；振腹干預(yù)；HPA軸；FBG；CORT；CRH

Abstract:?Objective Study on whether the regulation of vibration abdominal intervention on type 2 diabetes mellitus rats of blood sugar and the effects on the HPA axis is relevant or not.Methods 60 rats were randomly divided into normal control group 10 and model group 50.Make models with STZ injection combining with high sugar and high fat feeding in the model group.And pick out the rats which comply with the inclusion criteria to divide 12 into model group and 12 into treatment group.Give vibration abdominal intervention to the treatment group rats, then kill them for test.Collect and analyze the data.Results 1.After the treatment, compared with model group, the FBG level of treatment group significantly reduced (P＜0.05), the adrenal index level of treatment group significantly reduced(P＜0.05), the adrenal CORT concentration of treatment group significantly decreased (P＜0.05) and the hypothalamus CRH concentration of treatment group significantly decreased (P＜0.05).2.Compared with normal control group,the FBG level of treatment group is still higher (P＜0.05) and the adrenal index level of treatment group is still higher(P＜0.05).Conclusion Vibration abdominal intervention can effectively reduce the level of FBG in type 2 diabetic rats.It means Vibration abdominal intervention has therapeutic effect on type 2 diabetic rats.The level of secretion of adrenocortical function and activity of HPA axis of the type 2 diabetic rats also reduced accordingly, which means that the regulating effect of type 2 diabetic rats glucose metabolism may be related to improve the secretion of adrenocortical function and the function of HPA axis.

Keywords:?type 2 diabetes mellitus; vibration abdominal intervention; HPA axis; FBG; CORT; CRH

北京中醫(yī)藥大學(xué)臧?？平淌谠谏蟼€世紀80年代提出振腹療法(vibration abdominal Intervention)，其方法是以神闕穴為中心，用手掌置于腹部并釋放腕痙攣作用于腹部。中醫(yī)認為振腹法通過刺激任脈、帶脈、脾經(jīng)、胃經(jīng)、腎經(jīng)的經(jīng)穴達到滋補陰津、強腎健脾的功效。振腹手法覆蓋的穴位包括神闕、天樞、氣海、關(guān)元，神闕穴居中下焦之間，具有氣通百脈，布五臟六腑的功能，天樞、氣海、關(guān)元各穴也均有不同作用[1]，經(jīng)振腹刺激，能夠激發(fā)經(jīng)氣，調(diào)和百脈，培元固本，強運化、促輸布，又可調(diào)和臟腑，調(diào)理腸胃、理氣和營、溫腎助陽、化氣生血，使經(jīng)絡(luò)通暢，氣機調(diào)達，陰陽平衡[2]。臨床報道[3-12]表明，振腹法能夠通過糾正內(nèi)分泌而對多種疾病起效，其對糖尿病的治療效果也得到了臨床研究證實[5-6]。本課題組前期的試驗研究也已證明振腹法對T2DM大鼠脂代謝及血糖水平均有顯著調(diào)節(jié)作用，血清游離脂肪酸、三酰甘油、血糖水平及胰島素指數(shù)均得到明顯改善[13-15]。研究還發(fā)現(xiàn)，T2DM患者常伴有不同程度的下丘腦－垂體－腎上腺軸（HPA軸)功能失調(diào)，具體表現(xiàn)以基礎(chǔ)活性增加、促糖皮質(zhì)激素晝夜節(jié)律紊亂、皮質(zhì)醇分泌性亢進為主。本實驗即由HPA軸入手，研究振腹法對2型糖尿病大鼠血糖的調(diào)節(jié)作用與其對HPA軸的影響是否具有相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 選用健康7周齡SPF級雄性Wistar大鼠60只，體質(zhì)量（250±10）g，北京斯貝福實驗動物科技有限公司提供，合格號：SCXK（京）2011-0004。飼養(yǎng)條件：溫度18～25 ℃，濕度50%～60 %，日光燈光照，自由飲用自來水。普通飼料：清潔級普通大鼠飼料（北京科澳協(xié)力有限公司）。高糖高脂飼料[16]：主要成分為66 %基礎(chǔ)飼料、15 %豬油、10 %白糖、6 %酪蛋白、3 %蛋黃粉（北京科澳協(xié)力有限公司）。

1.1.2 主要試劑 鏈脲佐菌素（STZ）：美國Sigma公司提供。STZ溶液配制方法：一水合檸檬酸、二水合檸檬酸鈉配制成0.1 mmol/L檸檬酸－檸檬酸鈉緩沖液，調(diào)節(jié)pH至4.4，高壓蒸汽滅菌后4 ℃冷藏保存，注射前在避光狀態(tài)下與STZ配制成2%的STZ溶液，于配置30 min內(nèi)使用完畢。羅氏全活力型血糖儀及配套血糖試紙：北京健力園醫(yī)療器械有限公司提供。ELISA皮質(zhì)酮試劑盒：德國DRG公司生產(chǎn)，批號：61K025。

1.1.3 儀器設(shè)備 振腹治療儀：課題組根據(jù)振腹法原理進行設(shè)計，北京拓普斯樂有限公司提供技術(shù)支持。儀器構(gòu)成：振子、束縛帶、主機盒、電源線。振子上下振動幅度約2 mm，振動頻率為300次/min，220 v交流電源供電。

1.2 方法

1.2.1 分組與造模 60只大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，采用隨機分組法分為對照組10只和模型組50只。對照組大鼠采用普通飼料飼養(yǎng)，模型組大鼠采用高糖高脂飼料飼養(yǎng)，6周后，進行藥物造模，所有大鼠禁食不禁水12 h，模型組大鼠腹腔一次性快速注射STZ溶液 30 mg/kg，對照組大鼠腹腔注射同等體積的檸檬酸－檸檬酸鈉緩沖液。對照組大鼠采用普通飼料飼養(yǎng)，模型組大鼠仍然采用高糖高脂飼料飼養(yǎng)，其中，模型組大鼠給予飲用葡萄糖水，以避免低血糖，降低死亡率。造模3 d后檢測模型組大鼠隨機血糖，對不符合成模標準的大鼠再次腹腔注射STZ 25 mg/kg，方法同上。1周后，所有大鼠禁食不禁水12 h，檢測空腹血糖(FBG)，將符合成模標準的大鼠納入分組。

1.2.2 納入標準 對照組：空腹血糖在正常范圍內(nèi)的大鼠。模型組：1）參考美國糖尿病協(xié)會（ADA）人類糖尿病的診斷標準[17]，隨機血糖≥16.7 mmol/L且穩(wěn)定7 d及以上；2）禁食不禁水12 h后測量大鼠空腹血糖，并對大鼠進行OGTT測試?？崭寡呛筒秃笱蔷黠@升高者納入造模組。納入完成后，將符合模型標準的大鼠隨機分為模型組12只，治療組12只。

1.2.3 振腹干預(yù) 對照組始終給予普通飼料喂養(yǎng)，不進行振腹干預(yù)。模型組始終給予高糖高脂飼料喂養(yǎng)，不進行振腹干預(yù)。治療組始終給予高糖高脂飼料喂養(yǎng)，參照《實驗針灸學(xué)》選取臨床振腹法作用部位，將儀器的振子覆蓋于腹部任脈、左右胃經(jīng)、腎經(jīng)循行部位，包括神闕、關(guān)元、下脘、滑肉門、大橫穴等穴位，以束縛帶固定，進行振腹干預(yù)。治療隔日1次，持續(xù)15 min/次，連續(xù)治療6周。

1.3 取材及指標檢測

1.3.1 空腹血糖 測量時間：飲食造模前、藥物造模后干預(yù)開始前、實驗結(jié)束后，分別測量1次。測量方法：20：00撤食，禁食不禁水12 h后，采血針在大鼠尾靜脈距末端0.5～1 cm處點刺取第2滴血，用羅氏血糖儀及血糖檢測試紙快速檢測，具體操作按說明書要求進行。

1.3.2 腎上腺皮質(zhì)醇（ CORT） 治療周期結(jié)束后，早8：00 — 8：30將大鼠處死，在冰盤上取出完整左側(cè)腎上腺，迅速置于液氮中冷藏，測量時使用ELISA皮質(zhì)酮試劑盒，采用ELISA平衡競爭法進行檢測（由北京北方生物技術(shù)研究所代為檢測）。

1.3.3 下丘腦促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（CRH） 治療周期結(jié)束后，早8：00 — 8：30將大鼠處死，破壞顱底骨，將下丘腦作為一團塊取出，前面限制在視交叉2 mm，后面至乳頭體，側(cè)面從下丘腦裂紋至離其底3 mm的組織，迅速置于液氮中冷藏，測量時使用CRH試劑盒，采用RIA法進行檢測（由北京北方生物技術(shù)研究所代為檢測）。

1.3.4 腎上腺指數(shù) 治療周期結(jié)束，早8：00—8：30將大鼠處死，在冰盤上取出右側(cè)腎上腺，將脂肪等組織剝離干凈，且不破壞腎上腺皮質(zhì)，稱重。根據(jù)腎上腺指數(shù)公式計算出結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 實驗數(shù)據(jù)采用軟件SPSS 20.0進行統(tǒng)計學(xué)處理，結(jié)果以均數(shù)±標準差（x± s ）描述。組間比較，若數(shù)據(jù)符合正態(tài)性分布且方差齊，則采用F檢驗，若方差不齊，則進行Welch檢驗或者K個獨立樣本非參數(shù)檢驗，若不符合正態(tài)性分布，則采用K個獨立樣本非參數(shù)檢驗；組內(nèi)比較，若差值d符合正態(tài)性分布，則進行配對t檢驗，若不符合正態(tài)性分布，則進行Wilcoxon檢驗，檢驗結(jié)果以P＜0.05為具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 振腹干預(yù)對各組大鼠FBG的影響 見表1。

表1 各組大鼠FBG比較(x± s ） mmol/L

2.2 振腹干預(yù)對各組大鼠腎上腺CORT的影響 見表2。

表2 各組大鼠腎上腺CORT濃度比較(x± s ）ng/mg

2.3 振腹干預(yù)對各組大鼠下丘腦CRH的影響 見表3。

表3 各組大鼠下丘腦CRH濃度比較(x± s ） pg/mg

2.4 振腹干預(yù)對各組大鼠腎上腺指數(shù)的影響 見表4。

表4 各組大鼠腎上腺指數(shù)比較(x± s ） mg/g

3 討論

各組大鼠FBG的結(jié)果表明，振腹法能有效的降低2型糖尿病大鼠的FBG，對其糖代謝紊亂具有一定的調(diào)節(jié)作用。但治療后與對照組相比，治療組大鼠的FBG仍然較高，說明雖然振腹法具有一定的降糖作用，但不能完全將血糖恢復(fù)至正常水平。

各組大鼠腎上腺CORT、下丘腦CRH的結(jié)果顯示，2型糖尿病大鼠存在HPA基礎(chǔ)功能亢進，治療后，治療組大鼠的腎上腺CORT濃度、下丘腦CRH濃度較模型組明顯降低，進一步表明了振腹法可以調(diào)節(jié)T2DM大鼠CORT、CRH的合成分泌，對其HPA軸的活性具有調(diào)節(jié)作用。研究表明，慢性應(yīng)激時存在腎上腺增大，當HPA軸功能亢進時，CORT分泌增加，腎上腺皮質(zhì)功能活動增強，從而造成組織肥大、重量增加，而當腎上腺皮質(zhì)的功能活動減弱時，會出現(xiàn)組織萎縮、重量減輕，因此，腎上腺重量的改變，可以粗略地反映腎上腺皮質(zhì)功能的情況及HPA軸活性改變。本實驗選用腎上腺重量與體質(zhì)量比，即腎上腺指數(shù)來大體衡量HPA軸功能的變化。實驗結(jié)果顯示，模型組腎上腺指數(shù)明顯高于對照組，說明該實驗中2型糖尿病大鼠模型腎上腺皮質(zhì)功能活動增強，存在HPA功能紊亂的現(xiàn)象，治療后，治療組大鼠腎上腺指數(shù)較模型組明顯降低，表明治療組大鼠的腎上腺皮質(zhì)功能活動下調(diào)，HPA軸功能得到改善，在一定程度上說明振腹法對HPA軸活性具有調(diào)節(jié)作用。

綜上所述，振腹干預(yù)能有效降低2型糖尿病大鼠的FBG水平，且其腎上腺皮質(zhì)分泌功能、HPA軸活性也相應(yīng)降低，推測振腹法調(diào)節(jié)2型糖尿病大鼠糖代謝可能與其改善了腎上腺皮質(zhì)分泌功能及HPA軸功能有關(guān)，但該機制尚不明確，還需進一步研究。

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Regulating effect of vibration abdominal intervention on type 2 diabetic rats’blood glucose and the correlation study of the impact of the HPA Axis

WANG He, XIAO Xinglei, ZHAO Fangxiao, CHEN Younan*, LIN Caixia
（School of Acupuncture-Moxibustion and Tuina, Beijing University of Chinese Medicine,Beijing 100029, China）

R285.5

A

1003-5699(2017)09-0699-04

2017-02-13）

10.13463/j.cnki.cczyy.2017.05.004

國家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金項目“振腹法振頻對HPA軸的調(diào)節(jié)作用及其對Ⅱ型糖尿病兔血糖的影響”（81202772）。

王 鶴（1990 -），女，碩士研究生，主要從事推拿學(xué)治療內(nèi)科疾病機理研究。

*通信作者：陳幼楠，女，副教授，碩士研究生導(dǎo)師，電話-13810123910，電子信箱- chenyounan2010@163.com