• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    miRNA378*表達(dá)對(duì)柯薩奇B3病毒感染乳鼠心肌細(xì)胞凋亡、網(wǎng)腔鈣結(jié)合蛋白、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激伴侶蛋白表達(dá)的影響*

    2017-10-14 07:44:11劉曉翠崔曉雪邱祥春魏成喜
    關(guān)鍵詞:柯薩奇乳鼠肌細(xì)胞

    趙 明, 劉曉翠, 崔曉雪, 邱祥春, 王 羽,3△, 魏成喜,3△

    (1. 內(nèi)蒙古民族大學(xué)第一臨床醫(yī)院, 2. 內(nèi)蒙古民族大學(xué), 3. 內(nèi)蒙古民族大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥物化學(xué)與藥理學(xué)研究所, 通遼 028000)

    miRNA378*表達(dá)對(duì)柯薩奇B3病毒感染乳鼠心肌細(xì)胞凋亡、網(wǎng)腔鈣結(jié)合蛋白、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激伴侶蛋白表達(dá)的影響*

    趙 明1, 劉曉翠2, 崔曉雪2, 邱祥春1, 王 羽2,3△, 魏成喜2,3△

    (1. 內(nèi)蒙古民族大學(xué)第一臨床醫(yī)院, 2. 內(nèi)蒙古民族大學(xué), 3. 內(nèi)蒙古民族大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥物化學(xué)與藥理學(xué)研究所, 通遼 028000)

    目的研究沉默miRNA378*表達(dá)對(duì)柯薩奇B3病毒(CVB3)感染心肌細(xì)胞凋亡、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、網(wǎng)腔鈣結(jié)合蛋白(calumenin)影響。方法原代培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞分為:對(duì)照組(正常細(xì)胞)、柯薩奇病毒感染組(正常細(xì)胞+柯薩奇B3病毒)、miRNA378*沉默對(duì)照組(正常細(xì)胞+柯薩奇B3病毒+轉(zhuǎn)染miRNA378*空質(zhì)粒)、miRNA378*沉默組(正常細(xì)胞+柯薩奇B3病毒+轉(zhuǎn)染miRNA378*沉默質(zhì)粒),各組細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染和感染處理后置37℃、CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3 d。檢測(cè)細(xì)胞α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)、細(xì)胞凋亡率、網(wǎng)腔鈣結(jié)合蛋白、葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(GRP78)及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號(hào)通路因子激活轉(zhuǎn)錄因子6(ATF6)、轉(zhuǎn)錄因子C/EBP同源蛋白(CHOP)的表達(dá)。結(jié)果通過(guò)檢測(cè)ɑ-SMA蛋白,證實(shí)分離乳鼠細(xì)胞為心室肌細(xì)胞。TUNEL法檢測(cè)不同組心室細(xì)胞凋亡情況發(fā)現(xiàn),柯薩奇病毒感染組心室肌細(xì)胞凋亡明顯,與柯薩奇病毒感染組心肌細(xì)胞相比較,miRNA378*沉默組心肌細(xì)胞凋亡細(xì)胞量明顯減少。與柯薩奇病毒感染組比較, Calumenin表達(dá)減少(P<0.01),而GRP78、ATF6、CHOP表達(dá)增加(P<0.01)。結(jié)論CVB3病毒感染心肌細(xì)胞作用與miRNA378*,引發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激并激活信號(hào)通路因子,心肌細(xì)胞凋亡增加。

    心肌細(xì)胞;乳鼠;miRNA378*;柯薩奇B3病毒;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激;網(wǎng)腔鈣結(jié)合蛋白 ;凋亡

    病毒性心肌炎(viralmyocarditis, VMC)是由病毒(主要由柯薩奇病毒)感染引起的心肌局限性或彌漫性的急性或慢性炎性病變[1],病變可累及心肌細(xì)胞實(shí)質(zhì)和/或間質(zhì),導(dǎo)致心肌收縮力減低,射血分?jǐn)?shù)下降甚至無(wú)效射血,最終導(dǎo)致心力衰竭[2]。研究發(fā)現(xiàn)心力衰竭患者心臟中存在心肌細(xì)胞凋亡, 致使存活的心肌工作細(xì)胞數(shù)量減少,心臟射血能力降低,導(dǎo)致心力衰竭[3]。心肌細(xì)胞凋亡途徑眾多,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)通過(guò)其凋亡信號(hào)通路所介導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡是新近發(fā)現(xiàn)的凋亡途徑[4]。 網(wǎng)腔鈣結(jié)合蛋白(calumenin)是一種位于心肌細(xì)胞肌漿網(wǎng)中具有調(diào)節(jié)鈣穩(wěn)態(tài)作用的鈣離子結(jié)合蛋白。microRNAs (miRNAs)是由內(nèi)源基因編碼的一類長(zhǎng)約22個(gè)核苷酸的非編碼單鏈分子RNA, 參與轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)調(diào)控,抑制靶mRNA轉(zhuǎn)錄后的表達(dá)[5]。文獻(xiàn)報(bào)道:miRNA-378*能夠抑制H9c2心肌細(xì)胞calumenin表達(dá)[6]。但miRNA-378*對(duì)于柯薩奇B組病毒感染的心肌細(xì)胞中的凋亡、calumenin、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及其凋亡信號(hào)通路是否具有作用以及是否通過(guò)抑制靶蛋白轉(zhuǎn)錄后的表達(dá)來(lái)影響心肌細(xì)胞凋亡的整個(gè)通路尚不明確。本實(shí)驗(yàn)擬上調(diào)CVB3病毒感染心肌細(xì)胞miRNA-378*表達(dá),觀察其對(duì)細(xì)胞凋亡、calumenin、ERS及其信號(hào)通路因子影響,進(jìn)一步揭示病毒性心肌炎并發(fā)心力衰竭發(fā)病機(jī)制,為在臨床工作提供新的理論基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 動(dòng)物藥品與儀器

    1~3 d Balb/c新生乳鼠購(gòu)置吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心, 許可證號(hào):scxk(吉)2011-0004; Calumenin antibody購(gòu)于Bioss公司, GRP78 antibody,PERK antibody,P-PERK antibody,eIF2ɑ antibody,ATF4 antibody,CHOP antibody,購(gòu)于Boster公司,內(nèi)參抗體β-actin購(gòu)于wanleibio公司,慢病毒轉(zhuǎn)染miRNA-378*沉默質(zhì)粒由沈陽(yáng)萬(wàn)類生物科技公司合成;柯薩奇B3病毒,Woodruf親心肌株由吉林大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院提供。

    1.2 乳鼠心肌細(xì)胞的分離與培養(yǎng)

    將乳鼠心臟放入培養(yǎng)皿中,將清洗后的心臟組織剪碎至1~3 mm3小塊。加入0.1%Ⅱ型膠原酶以及0.1%胰蛋白酶混合液,37℃消化25 min。離心7 min去上清。用PBS重懸沉淀,離心5 min,用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,過(guò)200目篩網(wǎng)去除大塊組織。離心去上清后加入1 ml的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,放置到培養(yǎng)板中。2 h差速貼壁法可去除大量的成纖維細(xì)胞,將剩余較純的心肌細(xì)胞放置在培養(yǎng)板。24 h后按實(shí)驗(yàn)內(nèi)容將細(xì)胞接種于6孔板中,細(xì)胞濃度為5×104cells/ml,置于37℃,5% CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)過(guò)夜,24 h可進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

    1.3 免疫組織化學(xué)方法鑒定乳鼠培養(yǎng)心肌細(xì)胞

    各組乳鼠培養(yǎng)心肌細(xì)胞進(jìn)行免疫組化鑒定: 0.1%TritonX-100孵育;3%過(guò)氧化氫孵育;血清封閉; 一抗孵育;二抗孵育;辣根酶標(biāo)記;DAB顯色;蘇木素復(fù)染;鏡檢。

    1.4 細(xì)胞接種與培養(yǎng)

    細(xì)胞培養(yǎng)于10%胎牛血清的DMEM完全培養(yǎng)基中,置于37℃,5% CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。隔天換液處理,接種密度為70%為宜,便于病毒感染。

    1.5 慢病毒轉(zhuǎn)染

    (1)準(zhǔn)備病毒:取出4℃保存的病毒,使用前輕輕搖勻。(2)感染目的細(xì)胞:病毒準(zhǔn)備好之后,從培養(yǎng)箱中拿出細(xì)胞開始實(shí)驗(yàn)。(3)使用移液器吸取準(zhǔn)確體積(病毒數(shù)與細(xì)胞數(shù)比值為100∶ 1)的病毒液加入準(zhǔn)備好的培養(yǎng)基中。(4)在培養(yǎng)基中加入ploybrene(6 μg/ml)來(lái)提高病毒的感染效率。(5)吸去細(xì)胞中剩的培養(yǎng)基,在目的細(xì)胞和對(duì)照組細(xì)胞中分別加入計(jì)算好的病毒液。(6)混勻后放于37℃,5% CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)孵育過(guò)夜。(7)24 h后將含有慢病毒的培養(yǎng)液更換成正常培養(yǎng)液(含有10%血清的DMEM培養(yǎng)基),37℃、5% CO2繼續(xù)培養(yǎng)。

    1.6 感染CVB3的乳鼠心肌細(xì)胞及實(shí)驗(yàn)分組

    乳鼠心肌細(xì)胞按照細(xì)胞濃度為5×104cells/ml接種于6孔板,并將其置于37℃,5% CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),心肌細(xì)胞隨機(jī)分成4組,每組3孔,對(duì)照組(正常細(xì)胞)、柯薩奇病毒感染組(正常細(xì)胞+柯薩奇B3病毒)、miRNA378*沉默對(duì)照組(正常細(xì)胞+柯薩奇B3病毒+轉(zhuǎn)染miRNA378*空質(zhì)粒)、miRNA378*沉默組(正常細(xì)胞+柯薩奇B3病毒+轉(zhuǎn)染miRNA378*沉默質(zhì)粒)。其中兩組細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染miRNA378*空質(zhì)粒和miRNA378*沉默質(zhì)粒,處理24 h后,取3組細(xì)胞(1組正常細(xì)胞和2組轉(zhuǎn)染后細(xì)胞)與100 PFU的CVB3共同孵育1 h,棄上清,加入正常培養(yǎng)液作為CVB感染組;設(shè)立細(xì)胞對(duì)照組(僅加入培養(yǎng)液,不進(jìn)行病毒感染),將4組心肌細(xì)胞在37℃,置于CO2培養(yǎng)箱中3 d。

    1.7 TUNEL法檢測(cè)各組心肌細(xì)胞凋亡

    各組心肌細(xì)胞經(jīng)過(guò)TUNEL法標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)步驟:透化;PBS漂洗;封閉;滴加TUNEL反應(yīng)液50 μl;保濕、避光、37℃孵育60 min;滴加Converter-POD 50 μl;保濕、37℃孵育30 min;DAB顯色:加DAB底物50 μl;蘇木素復(fù)染;顯微鏡下觀察染色效果,400×鏡下拍照。

    1.8Westernblot檢測(cè)各組心肌細(xì)胞calumenin蛋白、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激伴侶蛋白GRP78及ATF6、CHOP表達(dá)

    各組乳鼠心肌細(xì)胞經(jīng)下列實(shí)驗(yàn)步驟:蛋白質(zhì)抽提;蛋白質(zhì)定量;取15 μl的樣品進(jìn)行SDS-PAGE;轉(zhuǎn)印至PVDF膜;封閉;孵育一抗;孵育二抗;ECL底物發(fā)光;圖像保存。普通抗體的封閉液、一抗孵育液、二抗孵育液為5%脫脂奶粉溶液。檢測(cè)各組心肌細(xì)胞calumenin蛋白(1∶1 000)、葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucose regulated protein 78, GRP78)(1∶1 000)及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號(hào)通路因子激活轉(zhuǎn)錄因子6(activation transcription factor 6, ATF6)(1∶1 000)、轉(zhuǎn)錄因子C/EBP同源蛋白(transcription factors c/ebp homologue protein,CHOP)(1∶1 000)表達(dá)。

    1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    2 結(jié)果

    2.1 乳鼠心肌細(xì)胞鑒定

    培養(yǎng)的乳鼠心肌細(xì)胞經(jīng)免疫組化實(shí)驗(yàn),檢測(cè)出心肌細(xì)胞特有的ɑ-SMA蛋白,確定為心室肌細(xì)胞(圖1)

    Fig.1Mouse myocardium celle(×400) A: Primary culture observed under microscope; B: Immunocytochemistry of culturing myocardial cell

    2.2 心肌細(xì)胞凋亡的比較

    用TUNEL 法檢測(cè)對(duì)照組心肌細(xì)胞僅有少量凋亡的細(xì)胞(凋亡率6.83%±0.71%),柯薩奇病毒感染組心肌細(xì)胞凋亡明顯,凋亡率60.37%±7.20% (P<0.01), 與柯薩奇病毒感染組心肌細(xì)胞相比較,miRNA378*沉默組心肌細(xì)胞凋亡細(xì)胞量明顯減少,凋亡率為46.6%±8.3%(P<0.01,圖2)。

    Fig.2Myocardial apoptosis in each group(×200) A: Control group; B: Coxsackie virus B3 infecton group; C: miRNA378*silence control group; D: miRNA378*silence group

    2.3心肌細(xì)胞calumenin蛋白、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激伴侶蛋白GRP78及ATF6、CHOP表達(dá)

    與對(duì)照組相比較,柯薩奇病毒感染組心肌細(xì)胞calumenin蛋白表達(dá)減少(P<0.01),GRP78、ATF6、CHOP表達(dá)增加(P<0.01);與柯薩奇病毒感染組相比較,miRNA378*沉默組calumenin蛋白表達(dá)顯著減少(P<0.01); miRNA378*沉默組GRP78、ATF6、CHOP表達(dá)顯著增加(P<0.01,圖3,表1)。

    Fig.3Expression change of Calumenin, GRP78 ATF6 and CHOP A: Control group; B: Coxsackie virus B3 infecton group; C: miRNA378*silence control group; D: miRNA378*silence group; GRP78: Glucose regulated protein 78; ATF-6: Activation transcription factor 6; CHOP: Transcription factors c/ebp homologue protein

    GroupCalumeninGRP78 ATF6 CHOP A2265±192880±79753±82673±42B1335±119??1693±141??1355±121??1288±137??C1541±1341625±1331091±117716±126D613±42##2502±315##2611±221##2698±244##

    A: Control group; B: Coxsackie virus B3 infecton group; C:miRNA378*silence control group; D: miRNA378*silence group; GRP78: Glucose regulated protein 78; ATF6: Activation transcription factor 6; CHOP: Transcription factors c/ebp homologue protein

    **P<0.01vsA group;##P<0.01vsB group

    3 討論

    心肌細(xì)胞calumenin與RyR2通道及鈣泵(SERCA2a) 相互作用來(lái)調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞鈣釋放、回?cái)z與儲(chǔ)存,共同維持鈣循環(huán)穩(wěn)態(tài)[7]。文獻(xiàn)報(bào)道,病毒性心肌炎時(shí),心肌細(xì)胞calumenin蛋白不但表達(dá)明顯減少,而且與SERCA2a結(jié)合能力減弱,從而使心肌細(xì)胞鈣循環(huán)穩(wěn)態(tài)失衡,心臟功能降低[8]。同時(shí),病毒性心肌炎又可以導(dǎo)致心肌細(xì)胞發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS),并激活ERS凋亡信號(hào)通路引起心肌細(xì)胞凋亡,引發(fā)心力衰竭[9]。研究發(fā)現(xiàn)calumenin可以緩解心肌細(xì)胞ERS并減少ERS介導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡數(shù)量[10],重度心力衰竭患者miRNA-378*表達(dá)顯著下降,隨著患者心功能好轉(zhuǎn),miRNA-378*表達(dá)也明顯增加[11]。

    miRNA-378 和miRNA-378*是一個(gè)基因出來(lái)的產(chǎn)物,叫正義鏈和反義鏈 。microrna前體有發(fā)卡結(jié)構(gòu),在成熟過(guò)程中發(fā)卡結(jié)構(gòu)被剪掉,形成miRNA-378 和miRNA-378*,也叫左臂和右臂。通常正義鏈有功能,反義鏈無(wú)功能被降解。但是近年來(lái),人們發(fā)現(xiàn)反義鏈有時(shí)候有功能,可以協(xié)助正義鏈功能,也可以拮抗正義鏈,或者和正義鏈功能毫無(wú)關(guān)系。本研究根據(jù)上述資料和本課題組研究結(jié)果,提出如下科學(xué)假說(shuō):柯薩奇B3病毒通過(guò)干預(yù)心肌細(xì)胞miRNA-378*表達(dá)來(lái)影響calumenin表達(dá),進(jìn)而引起ERS并通過(guò)ERS凋亡信號(hào)通路:ATF6→CHOP介導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡。

    本實(shí)驗(yàn)在成功培養(yǎng)原代培養(yǎng)乳鼠的心室肌細(xì)胞的基礎(chǔ)上,采用干擾技術(shù)下調(diào)miRNA-378*的表達(dá),并與CVB3病毒感染處理后的心室肌細(xì)胞。TUNEL檢測(cè)發(fā)現(xiàn)感染CVB3病毒的心室肌細(xì)胞凋亡率提高,而下調(diào)miRNA-378*后,心室肌細(xì)胞的凋亡率有所下降。證明下調(diào)miRNA-378*的表達(dá)可緩解CVB3病毒所致的心室肌細(xì)胞凋亡。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是誘發(fā)凋亡的機(jī)制之一。本研究進(jìn)一步探討miRNA-378*的作用是否與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān),檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激分子伴侶GRP78及效應(yīng)蛋白ATF6,CHOP,發(fā)現(xiàn)GRP78,ATF6,CHOP在CVB3病毒感染的心室肌細(xì)胞中均上調(diào),而下調(diào)miRNA-378*后,3個(gè)蛋白表達(dá)量增加。說(shuō)明miRNA-378*緩解心室肌細(xì)胞凋亡不通過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路。最后,calumenin蛋白的表達(dá)也進(jìn)行了檢測(cè),下調(diào)miRNA-378*的心室肌細(xì)胞可提高因感染CVB3病毒而導(dǎo)致的表達(dá)減少。本研究結(jié)果部分揭示miRNA-378*可緩解病毒性心肌炎所致的凋亡,而與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激無(wú)關(guān),具體作用還需以后的實(shí)驗(yàn)中進(jìn)一步闡明。

    [1] 劉 磊, 王洪軍, 趙 明, 等. 病毒性心肌炎所致小鼠心力衰竭心肌組織內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)的凋亡關(guān)系的研究[J]. 中國(guó)應(yīng)用生理學(xué)雜志, 2014, 30(4): 465-468.

    [2] 牛曉峰, 趙雅君, 趙 明, 等. 黃芪總黃酮通過(guò)抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對(duì)小鼠病毒性心肌炎保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 臨床心血管病雜志, 2015, 31(2): 129-132.

    [3] Boon RA, Dimmeler S. MicroRNAs in myocardial infarction[J].NatRevCardiol, 2015, 12(3): 135-142.

    [4] 周曉敏, 陶謝鑫, 趙 明, 等. 黃芪總黃酮與丹參酮ⅡA磺酸鈉對(duì)病毒性心肌炎小鼠心肌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)伴侶蛋白及L-型鈣通道表達(dá)的作用[J]. 臨床心血管病雜志, 2015, 31(3): 254-256.

    [5] 黃 俠, 邱祥春, 趙 明. 網(wǎng)腔鈣結(jié)合蛋白的研究進(jìn)展[J]. 生理科學(xué)進(jìn)展, 2015, 46(6): 458-460.

    [6] Mallat Y, Tritsch E, Ladouce R,etal. Proteome modulation in H9c2 cardiac cells by microRNAs miR-378 and miR-378*[J].MolCellProteomics, 2014, 13(1): 18-29.

    [7] 趙雅君, 王伊林, 趙 明, 等. 阿霉素致心肌細(xì)胞凋亡時(shí)網(wǎng)腔鈣結(jié)合蛋白的變化[J]. 臨床心血管病雜志, 2015, 31(8): 895-898.

    [8] Zhou X, Xin Q, Wang Y,etal. Total flavonoids of astragalus plays a cardioprotective role in viral myocarditis[J].ActaCardiolSin, 2016, 32(1): 81-88.

    [9] 王洪軍, 于 淼, 趙 明, 等. 黃芪總黃酮對(duì)柯薩奇B3病毒感染心肌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及促凋亡信號(hào)因子作用實(shí)驗(yàn)研究[J]. 臨床心血管病雜志, 2016, 32(1): 70-73.

    [10]Lee JH, Kwon EJ, Kim DH,etal. Calumenin has a role in the alleviation of ER stress in neonatal rat cardiomyocytes[J].BiochemBiophysResCommun, 2013, 439(3): 327-332.

    [11]Ooi JY, Bernardo BC, McMullen JR. The therapeutic potential of miRNAs regulated in settings of physiological cardiac hypertrophy[J].FutureMedChem, 2014, 6(2): 205-222.

    ThecorrelationresearchonmiRNA378*andcalumenin,endoplasmicreticulumstress,apoptosisinsucklingmousemyocardialcellsinfectedwithcoxsackievirusB3

    ZHAO Ming1, LIU Xiao-cui2, CUI Xiao-xue2, QIU Xiang-chun1, WANG Yu2,3△, WEI Cheng-xi2,3△

    (1. The Inner-Mongolia National University First Clinical Hospital, 2. The Inner-Mongolia National University, 3. The Inner-Mongolia National University Medical Chemistry and Pharmacology Institute, Tongliao 028000, China)

    Objective: To investigate the effects of silencing miRNA378*on apoptosis, endoplasmic reticulum stress and calumenin of cardiomyocyte with coxsackie virus B3 (CVB3) infection.MethodsPrimary cultured suckling mouse myocardium were divided into control group (normal cell), coxsackie virus infection group (normal cell and coxsackie virus B3), miRNA378*control group (normal cell +coxsackie virus B3+miRNA378*empty plasmid), miRNA378*silencing plasmid group(normal cells + coxsackie virus B3 + miRNA378*silencing plasmid). Four groups of cells were transfected, infected and treated in CO2incubator at 37℃. The α-SMA protein, cell apoptosis rate, calumenin, glucose regulated protein 78 (GRP78) , activation transcription factor 6(ATF6) and transcription factors c/ebp homologue protein (CHOP) in endoplasmic reticulum were analyzed.ResultsBy detecting α-SMA protein, the isolated suckling mouse ventricular myocardium were confirmed. TUNEL detection of different groups of ventricular cell apoptosis found that coxsackie virus group of ventricular myocytes apoptosis was significant. Compared with the coxsackie virus infection group of myocardial cells, miRNA378*silencing plasmid expression of cardiomyocyte apoptosis cells significantly reduced(P<0.01). The expressions of GRP78, ATF6 and CHOP were increased compared with those infected by Coxsackie virus infection (P<0.01), while the expressions of calumenin were decreased (P<0.01).ConclusionCVB3 infected myocardial cells effected miRNA378*expression. It can trigger endoplasmic reticulum stress and activates signaling pathway factor and increase myocardial cell apoptosis.

    cardiomyocytes; suckling mice; miRNA378*; coxsackie virus B3; endoplasmic reticulum stress; calumenin; apoptosis

    R331.3;R-332

    A

    1000-6834(2017)04-304-04

    內(nèi)蒙古自治區(qū)自然科學(xué)基金(2015MS08153)

    2016-06-07

    2016-11-21

    Tel: 0475-8314234; E-mail: shen348@126.com; weichengxi1224@163.com

    10.12047/j.cjap.5461.2017.074

    猜你喜歡
    柯薩奇乳鼠肌細(xì)胞
    基于AMPK/mTOR自噬通路研究甘草酸二銨對(duì)柯薩奇病毒B3病毒性心肌炎小鼠的保護(hù)作用
    中草藥(2023年12期)2023-06-19 03:33:16
    漢防己甲素對(duì)先天性巨結(jié)腸乳鼠炎癥的改善作用及對(duì)JAK2/STAT3通路的影響
    2019年云南省文山州柯薩奇病毒A16型的基因特征
    改良無(wú)血清法培養(yǎng)新生SD乳鼠原代海馬神經(jīng)元細(xì)胞
    苦參素對(duì)缺氧/復(fù)氧損傷乳鼠心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡的影響
    柯薩奇病毒A6型手足口病所致全身性皰疹并累及頸髓1例
    河南省安陽(yáng)地區(qū)手足口病患兒柯薩奇病毒A16型與EV-71病毒檢測(cè)結(jié)果分析
    Caspase12在糖尿病大鼠逼尿肌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激中的表達(dá)
    豚鼠乳鼠心房肌細(xì)胞體外培養(yǎng)的探討*
    秦香止瀉方對(duì)HRV腹瀉乳鼠小腸黏膜一氧化氮濃度的影響
    www.精华液| 嫩草影视91久久| 国产精品国产av在线观看| 国产在线视频一区二区| 久久九九热精品免费| 欧美黄色淫秽网站| 国产成人av激情在线播放| 一二三四在线观看免费中文在| 午夜精品国产一区二区电影| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 成人手机av| av网站在线播放免费| 人妻人人澡人人爽人人| 涩涩av久久男人的天堂| 国产精品一区二区在线观看99| 国产熟女午夜一区二区三区| 一级毛片精品| 嫩草影视91久久| 亚洲精品粉嫩美女一区| 久久性视频一级片| 高清在线国产一区| 亚洲精品第二区| 午夜福利视频在线观看免费| 性色av乱码一区二区三区2| 三级毛片av免费| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 久久久精品免费免费高清| 天堂中文最新版在线下载| 少妇人妻久久综合中文| 精品国产国语对白av| 999精品在线视频| 成年动漫av网址| 免费观看人在逋| 免费不卡黄色视频| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 国产精品国产三级国产专区5o| 日韩精品免费视频一区二区三区| 51午夜福利影视在线观看| 两人在一起打扑克的视频| 91精品伊人久久大香线蕉| 黄色 视频免费看| 欧美黑人欧美精品刺激| 一区在线观看完整版| 人人澡人人妻人| 日韩一区二区三区影片| 蜜桃在线观看..| 午夜福利在线观看吧| 高清av免费在线| 不卡av一区二区三区| 免费黄频网站在线观看国产| 国产伦人伦偷精品视频| 久久久久精品国产欧美久久久 | 91av网站免费观看| 人妻久久中文字幕网| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 亚洲欧美一区二区三区久久| 十八禁高潮呻吟视频| 午夜福利在线免费观看网站| 一本色道久久久久久精品综合| 精品久久久精品久久久| 男女无遮挡免费网站观看| 国产福利在线免费观看视频| 黑人猛操日本美女一级片| 老司机在亚洲福利影院| 午夜福利,免费看| 91国产中文字幕| 欧美久久黑人一区二区| 免费在线观看影片大全网站| 大陆偷拍与自拍| 亚洲熟女精品中文字幕| 丝袜美足系列| 亚洲欧美色中文字幕在线| 天堂中文最新版在线下载| 久久久久国产一级毛片高清牌| 五月天丁香电影| 欧美97在线视频| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 搡老乐熟女国产| 国产精品国产三级国产专区5o| 午夜福利,免费看| 波多野结衣一区麻豆| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 国产精品影院久久| 久久人妻熟女aⅴ| 大码成人一级视频| 国产亚洲av高清不卡| 久久中文看片网| 亚洲熟女精品中文字幕| 美国免费a级毛片| 国产精品久久久av美女十八| 又大又爽又粗| 黄色怎么调成土黄色| 亚洲精品国产av蜜桃| 亚洲人成77777在线视频| 免费不卡黄色视频| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 一区福利在线观看| 久9热在线精品视频| 亚洲色图综合在线观看| av在线老鸭窝| 最近最新免费中文字幕在线| 一级毛片女人18水好多| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 99精国产麻豆久久婷婷| 夫妻午夜视频| 中文字幕制服av| 天天添夜夜摸| 可以免费在线观看a视频的电影网站| www日本在线高清视频| avwww免费| 亚洲一区二区三区欧美精品| 日日爽夜夜爽网站| 国产在线观看jvid| 亚洲五月婷婷丁香| 国产免费一区二区三区四区乱码| av欧美777| 18在线观看网站| 天堂8中文在线网| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 成人亚洲精品一区在线观看| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 国产高清视频在线播放一区 | 欧美日韩精品网址| 老汉色av国产亚洲站长工具| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 在线 av 中文字幕| 久久久久精品人妻al黑| 午夜激情久久久久久久| 国产一级毛片在线| 性色av乱码一区二区三区2| 国产精品 欧美亚洲| 亚洲中文字幕日韩| 久久中文字幕一级| 两个人看的免费小视频| 午夜精品国产一区二区电影| 欧美激情高清一区二区三区| 久久影院123| 日韩 亚洲 欧美在线| 久久av网站| 日本一区二区免费在线视频| 水蜜桃什么品种好| 日韩三级视频一区二区三区| 夜夜夜夜夜久久久久| 我要看黄色一级片免费的| avwww免费| 久久九九热精品免费| 99久久综合免费| 国产精品久久久av美女十八| 两性夫妻黄色片| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 久久精品国产亚洲av高清一级| 国产精品欧美亚洲77777| 激情视频va一区二区三区| 性高湖久久久久久久久免费观看| 人妻久久中文字幕网| 韩国高清视频一区二区三区| 免费观看av网站的网址| 午夜免费鲁丝| 亚洲国产看品久久| 在线观看免费午夜福利视频| 一本综合久久免费| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 久久久久国产一级毛片高清牌| 日韩 亚洲 欧美在线| 老汉色av国产亚洲站长工具| 亚洲avbb在线观看| 久久人人97超碰香蕉20202| 最近中文字幕2019免费版| 国产男女内射视频| 韩国精品一区二区三区| 久久久久国内视频| 午夜福利视频精品| 国产精品国产av在线观看| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 国产精品一区二区精品视频观看| 大香蕉久久网| 日韩中文字幕视频在线看片| 免费在线观看影片大全网站| 久久免费观看电影| 午夜福利影视在线免费观看| 欧美激情 高清一区二区三区| 女警被强在线播放| 亚洲熟女毛片儿| 国产在线视频一区二区| 爱豆传媒免费全集在线观看| 国产高清视频在线播放一区 | 超碰97精品在线观看| 国产免费现黄频在线看| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 日韩视频在线欧美| 香蕉国产在线看| 99九九在线精品视频| 80岁老熟妇乱子伦牲交| e午夜精品久久久久久久| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 黄片播放在线免费| 美女中出高潮动态图| tocl精华| 一级a爱视频在线免费观看| 岛国毛片在线播放| 中文字幕最新亚洲高清| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 欧美日韩视频精品一区| 欧美精品亚洲一区二区| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 一区二区三区四区激情视频| 1024香蕉在线观看| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 人妻一区二区av| 亚洲一码二码三码区别大吗| 十八禁人妻一区二区| 男女之事视频高清在线观看| 欧美黄色淫秽网站| 亚洲国产精品成人久久小说| 老司机靠b影院| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 午夜老司机福利片| 在线观看免费高清a一片| 韩国高清视频一区二区三区| 欧美黑人欧美精品刺激| 亚洲精品自拍成人| 9色porny在线观看| 色婷婷久久久亚洲欧美| 一个人免费看片子| 亚洲av欧美aⅴ国产| 久久久久国产一级毛片高清牌| 啦啦啦在线免费观看视频4| 秋霞在线观看毛片| av欧美777| 国产精品九九99| 色精品久久人妻99蜜桃| 亚洲国产精品一区三区| 在线观看www视频免费| 国产亚洲欧美在线一区二区| av片东京热男人的天堂| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 女人精品久久久久毛片| 国产精品久久久久成人av| 日韩精品免费视频一区二区三区| 久久精品成人免费网站| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 久久人人爽人人片av| www.999成人在线观看| 欧美成狂野欧美在线观看| xxxhd国产人妻xxx| 99久久99久久久精品蜜桃| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 国产精品一区二区在线观看99| 亚洲成国产人片在线观看| 午夜日韩欧美国产| 亚洲成人免费av在线播放| 性高湖久久久久久久久免费观看| 视频区图区小说| 午夜免费鲁丝| 久久国产精品影院| 国产精品久久久人人做人人爽| 一级片免费观看大全| av天堂久久9| 亚洲成人免费电影在线观看| 午夜福利,免费看| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 嫩草影视91久久| 欧美激情高清一区二区三区| 2018国产大陆天天弄谢| 又紧又爽又黄一区二区| 亚洲,欧美精品.| 亚洲国产av新网站| 一级片'在线观看视频| a级毛片在线看网站| 男女高潮啪啪啪动态图| 男人舔女人的私密视频| 国产免费现黄频在线看| 亚洲综合色网址| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 一区福利在线观看| 欧美在线一区亚洲| 久久久久精品国产欧美久久久 | 国产深夜福利视频在线观看| 久久av网站| 69精品国产乱码久久久| 午夜91福利影院| 国产在线一区二区三区精| 日韩人妻精品一区2区三区| 欧美国产精品一级二级三级| 亚洲一区中文字幕在线| 亚洲国产看品久久| 51午夜福利影视在线观看| 亚洲国产中文字幕在线视频| 久热爱精品视频在线9| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 新久久久久国产一级毛片| 丰满少妇做爰视频| 岛国在线观看网站| 高清视频免费观看一区二区| 欧美日韩精品网址| 另类亚洲欧美激情| 成人黄色视频免费在线看| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 精品少妇久久久久久888优播| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 亚洲精品粉嫩美女一区| 两人在一起打扑克的视频| 欧美国产精品va在线观看不卡| 18禁国产床啪视频网站| 国产国语露脸激情在线看| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 美女主播在线视频| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 高清黄色对白视频在线免费看| 人妻久久中文字幕网| 亚洲五月色婷婷综合| 国产欧美日韩一区二区三 | av国产精品久久久久影院| 国产在线一区二区三区精| 啪啪无遮挡十八禁网站| 9色porny在线观看| 波多野结衣av一区二区av| a级毛片在线看网站| 精品一区二区三区av网在线观看 | 欧美老熟妇乱子伦牲交| 视频区欧美日本亚洲| 国产高清videossex| 婷婷成人精品国产| 国产av一区二区精品久久| 美女主播在线视频| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 成年av动漫网址| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 久久影院123| 国产一区有黄有色的免费视频| 制服诱惑二区| 下体分泌物呈黄色| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 欧美日韩黄片免| 9191精品国产免费久久| 12—13女人毛片做爰片一| 51午夜福利影视在线观看| 日本av手机在线免费观看| 韩国精品一区二区三区| 99国产综合亚洲精品| 国产人伦9x9x在线观看| 激情视频va一区二区三区| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 国产麻豆69| 高清在线国产一区| 亚洲专区中文字幕在线| 国产成人精品久久二区二区91| 中文字幕av电影在线播放| 日韩欧美一区视频在线观看| 高清黄色对白视频在线免费看| 中国美女看黄片| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 天天添夜夜摸| 中国国产av一级| 天天影视国产精品| 精品国产一区二区久久| 国产精品久久久久久精品电影小说| 大陆偷拍与自拍| 免费在线观看日本一区| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 国产精品欧美亚洲77777| 午夜福利视频在线观看免费| 视频区图区小说| 亚洲成人手机| 国产日韩欧美视频二区| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 正在播放国产对白刺激| 蜜桃国产av成人99| 成年美女黄网站色视频大全免费| 国产高清国产精品国产三级| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 久久热在线av| 精品亚洲成a人片在线观看| 久久久久久久久久久久大奶| 亚洲色图综合在线观看| 青春草视频在线免费观看| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 亚洲一区中文字幕在线| 成年人免费黄色播放视频| 亚洲国产欧美在线一区| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 亚洲成人国产一区在线观看| 女人精品久久久久毛片| 一二三四在线观看免费中文在| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 午夜久久久在线观看| 激情视频va一区二区三区| 欧美xxⅹ黑人| av在线播放精品| 1024香蕉在线观看| 色综合欧美亚洲国产小说| 久久人人97超碰香蕉20202| 丝袜美腿诱惑在线| 黑人欧美特级aaaaaa片| 午夜视频精品福利| 国产在线免费精品| a级毛片在线看网站| 国产精品 欧美亚洲| 丝袜喷水一区| 久久久久国内视频| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| www.999成人在线观看| 这个男人来自地球电影免费观看| av不卡在线播放| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 国产欧美日韩一区二区精品| 色婷婷久久久亚洲欧美| 亚洲精品粉嫩美女一区| 欧美国产精品一级二级三级| av线在线观看网站| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 一本大道久久a久久精品| 国产一区二区激情短视频 | 搡老岳熟女国产| 一区在线观看完整版| 另类精品久久| 丝袜人妻中文字幕| 男人爽女人下面视频在线观看| 久久中文字幕一级| 日韩免费高清中文字幕av| 五月开心婷婷网| 国产成人av激情在线播放| 国产精品久久久人人做人人爽| 国产成人啪精品午夜网站| 成人av一区二区三区在线看 | 亚洲中文av在线| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 亚洲精品国产av蜜桃| 成人手机av| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 久久久国产精品麻豆| 色视频在线一区二区三区| av视频免费观看在线观看| 成人三级做爰电影| 午夜免费成人在线视频| 日韩有码中文字幕| 欧美 日韩 精品 国产| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 大片电影免费在线观看免费| 国产又爽黄色视频| 男女下面插进去视频免费观看| 99久久国产精品久久久| 美女视频免费永久观看网站| 桃红色精品国产亚洲av| 狂野欧美激情性bbbbbb| 天堂中文最新版在线下载| 国产在视频线精品| 一个人免费在线观看的高清视频 | 亚洲 国产 在线| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 亚洲精品第二区| 超色免费av| 激情视频va一区二区三区| 免费人妻精品一区二区三区视频| 大香蕉久久成人网| 久久久精品区二区三区| 丝袜人妻中文字幕| 午夜激情av网站| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 99热国产这里只有精品6| 超碰97精品在线观看| 国产欧美日韩一区二区精品| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 天堂中文最新版在线下载| av电影中文网址| 黄色视频,在线免费观看| 亚洲国产欧美网| 女人久久www免费人成看片| 淫妇啪啪啪对白视频 | 久久性视频一级片| 麻豆乱淫一区二区| 伊人亚洲综合成人网| 女性被躁到高潮视频| 精品免费久久久久久久清纯 | 日韩有码中文字幕| 久久久久久久大尺度免费视频| 人成视频在线观看免费观看| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 国产有黄有色有爽视频| 搡老熟女国产l中国老女人| 成人亚洲精品一区在线观看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 久久久久精品人妻al黑| 日本av手机在线免费观看| 老汉色av国产亚洲站长工具| 亚洲色图综合在线观看| av有码第一页| 精品国内亚洲2022精品成人 | 欧美少妇被猛烈插入视频| 少妇精品久久久久久久| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 极品少妇高潮喷水抽搐| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 国产精品一区二区免费欧美 | 国产精品欧美亚洲77777| 成年人午夜在线观看视频| 久久精品国产亚洲av高清一级| 免费在线观看日本一区| 成年人免费黄色播放视频| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 男女床上黄色一级片免费看| 午夜激情久久久久久久| 久久狼人影院| 美女扒开内裤让男人捅视频| 搡老岳熟女国产| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 亚洲精品成人av观看孕妇| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 美女中出高潮动态图| 国产男人的电影天堂91| 91成人精品电影| 极品人妻少妇av视频| 看免费av毛片| 成人亚洲精品一区在线观看| 国产高清国产精品国产三级| 久久中文看片网| 日韩制服骚丝袜av| 亚洲成人免费av在线播放| 中文字幕人妻熟女乱码| 12—13女人毛片做爰片一| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 精品人妻1区二区| 少妇人妻久久综合中文| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 精品一区二区三区四区五区乱码| 黄色 视频免费看| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 极品少妇高潮喷水抽搐| 久久久久国产一级毛片高清牌| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 狂野欧美激情性xxxx| 精品一区二区三卡| 午夜久久久在线观看| 亚洲第一青青草原| 久久久久久久精品精品| 女人久久www免费人成看片| 搡老熟女国产l中国老女人| 欧美xxⅹ黑人| 老熟妇乱子伦视频在线观看 | 久久香蕉激情| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 999久久久精品免费观看国产| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 搡老熟女国产l中国老女人| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 操美女的视频在线观看| av片东京热男人的天堂| 涩涩av久久男人的天堂| 国产一区二区在线观看av| 国产xxxxx性猛交| 久久香蕉激情| 新久久久久国产一级毛片| av网站在线播放免费| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 制服人妻中文乱码| 在线观看免费视频网站a站| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 高清视频免费观看一区二区| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 午夜福利乱码中文字幕| www.精华液| 欧美黑人欧美精品刺激| 咕卡用的链子| 国产黄色免费在线视频| 成人国产一区最新在线观看| 色综合欧美亚洲国产小说| 一区福利在线观看| 热99re8久久精品国产| 久久人人97超碰香蕉20202| 狂野欧美激情性xxxx| 另类亚洲欧美激情| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 99精国产麻豆久久婷婷| 黄色视频在线播放观看不卡| 伊人亚洲综合成人网| 黄色怎么调成土黄色| 亚洲精品第二区| 国产精品偷伦视频观看了| 99久久人妻综合| 色婷婷av一区二区三区视频| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 国产男女内射视频| 亚洲精品美女久久av网站| 亚洲中文日韩欧美视频| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 日韩一区二区三区影片| 精品国产乱码久久久久久小说| 亚洲少妇的诱惑av| 国产男女内射视频| 国产不卡av网站在线观看| av一本久久久久| 在线天堂中文资源库| 搡老熟女国产l中国老女人| 最近最新中文字幕大全免费视频| 亚洲中文字幕日韩| 最黄视频免费看| 在线观看一区二区三区激情| 两个人看的免费小视频| 亚洲人成77777在线视频| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久 | 人妻久久中文字幕网| 精品少妇黑人巨大在线播放| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 色94色欧美一区二区| 一级a爱视频在线免费观看| 国产成人一区二区三区免费视频网站| av在线老鸭窝|