青海地區(qū)胃癌組織中P53、P21、PTEN 的表達(dá)及臨床意義 ※

薛曉紅，王亞平，朱智勇，李曉林，馬穎才

(青海省人民醫(yī)院消化內(nèi)科，西寧 810007)

青海地區(qū)胃癌組織中P53、P21、PTEN的表達(dá)及臨床意義※

薛曉紅，王亞平§，朱智勇，李曉林，馬穎才

(青海省人民醫(yī)院消化內(nèi)科，西寧 810007)

目的通過(guò)檢測(cè)青海地區(qū)胃癌組織、癌旁組織及正常胃組織中P53、P21、PTEN蛋白表達(dá)水平并分析其相互關(guān)系，為青海地區(qū)胃癌的診斷和預(yù)后的評(píng)估提供依據(jù)。方法使用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)78例胃癌組織、癌旁組織及30例正常胃組織中P53、P21、PTEN的蛋白表達(dá)水平并行相關(guān)分析。結(jié)果胃癌組織中P53蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為44.87%，P21蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為52.56%，PTEN蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為47.44%。與正常胃組織相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。胃癌組織中，P53表達(dá)與患者年齡、性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度及PTNM分期無(wú)關(guān)(P>0.05)，與腫瘤分化程度有關(guān)(P<0.05)。P21表達(dá)與患者年齡、性別、浸潤(rùn)深度無(wú)關(guān)，與腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及PTNM分期有關(guān)(P<0.05)。PTEN表達(dá)與患者年齡、性別、分化程度、浸潤(rùn)深度無(wú)關(guān)，與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和PTNM分期有關(guān)(P<0.05)。胃癌組織中P53與P21表達(dá)存在關(guān)聯(lián)，其列聯(lián)系數(shù)為0.323(P<0.05)。P53與PTEN，P21與PTEN之間均存在一定的相關(guān)性，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論青海地區(qū)患者胃癌組織中P53與P21表達(dá)存在關(guān)聯(lián)。P53與PTEN、P21與PTEN相關(guān)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

P53 P21 PTEN 青海 胃癌

胃癌的發(fā)生與癌基因、抑癌基因及多階段累積等均密切相關(guān)。抑癌基因P53、P21、PTEN被認(rèn)為是細(xì)胞周期調(diào)控的重要負(fù)性調(diào)控因子，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。本研究應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)青海地區(qū)P53、P21和PTEN三種蛋白在胃癌中的表達(dá)水平及其相互關(guān)系，為青海地區(qū)胃癌的診斷和預(yù)后評(píng)估提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

收集青海省人民醫(yī)院外科自2015年6月至2015年12月經(jīng)病理學(xué)證實(shí)且僅接受手術(shù)治療的胃癌患者胃癌組織、癌旁組織?；颊咧心?2例、女36例，年齡29～80歲(62.2±14.3)歲；高中分化腺癌28例、低分化腺癌50例；其中無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者49例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者29例；PTNM分期Ⅰ期6例，Ⅱ期13例，Ⅲ期31例，Ⅳ期28例。并取同期行胃切除術(shù)非癌患者的正常胃黏膜組織30例作為正常對(duì)照。

1.2 檢測(cè)方法

運(yùn)用免疫組化(EnVision二步法)。P53、P21、PTEN單抗均為羅氏公司提供的鼠抗人單抗，免疫組織化學(xué)試劑盒由上海生工生物公司提供。對(duì)照組以PBS代替一抗，已知陽(yáng)性的胃癌切片作為P53、P21、PTEN蛋白的陽(yáng)性對(duì)照片。P53、P21的陽(yáng)性染色主要定位于癌細(xì)胞腺體細(xì)胞核，呈黃色至棕褐色顆粒，PTEN的陽(yáng)性染色主要定位于癌細(xì)胞腺體細(xì)胞質(zhì)，呈黃色至棕褐色顆粒。將染色程度分級(jí)和染色細(xì)胞百分比分級(jí)相乘，表達(dá)陽(yáng)性者乘積≥4 。其中，染色程度：基本不著色為0級(jí)，呈淡黃色著色為1級(jí)，呈黃色著色為2級(jí)，呈棕褐色著色為3級(jí)。分級(jí)：陽(yáng)性著色細(xì)胞占計(jì)數(shù)細(xì)胞百分比≤5%為0級(jí)，6%～25%為1 級(jí)，26%～50%為2級(jí)，≥51%為3級(jí)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 P53、P21、PTEN蛋白在青海地區(qū)胃癌組織中的表達(dá)

胃癌組織中P53、P21蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于癌旁組織和正常組織，PTEN表達(dá)率明顯低于癌旁組織和正常組織(P<0.05)。見(jiàn)表1、圖1-3。

表1 P53、P21、PTEN蛋白在胃癌組織中的表達(dá)

Table 1 The Expressions of P53， P21 and PTEN Protein in Gastric Carcinoma

a：與胃癌組織比較，P<0.05，b：與癌旁組織比較，P≤0.05.

圖1 P53蛋白在胃癌組織中的表達(dá)圖(SP×200)

圖2 P21蛋白在胃癌組織中的表達(dá)圖(SP×200)

圖3 PTEN蛋白在胃癌組織中的表達(dá)圖(SP×200)

2.2 P53、P21、PTEN表達(dá)與青海地區(qū)胃癌臨床病理特征的關(guān)系

青海地區(qū)胃癌組織中，P53表達(dá)與患者年齡、性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度、PTNM分期無(wú)關(guān)(P>0.05)，與腫瘤分化程度有關(guān)(P<0.05)。P21表達(dá)與患者年齡、性別、浸潤(rùn)深度無(wú)關(guān)，與腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、PTNM分期有關(guān)(P<0.05)。PTEN表達(dá)與患者年齡、性別、分化程度、浸潤(rùn)深度無(wú)關(guān)，與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及PTNM分期有關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 P53、P21、PTEN表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系

Table 2 The Clinical Significance of P53， P21 and PTEN Protein in Gastric Carcinoma

續(xù)表：

病理特征例數(shù)P53陽(yáng)性數(shù)(%)χ2PP21陽(yáng)性數(shù)(%)χ2PPTEN陽(yáng)性數(shù)(%)χ2P分化程度中高分化5520(36．4)5．4580．01934(61．8)6．4060．01126(47．3)0．0020．964低分化2315(65．2)7(30．4)11(47．8)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)4921(42．9)0．2160．64230(61．2)3．9640．04630(61．2)10．0490．002有2914(48．3)11(37．9)7(24．1)浸潤(rùn)深度未達(dá)漿膜218(38．1)0．5330．46514(66．7)2．2920．1309(42．9)0．2420．623侵入漿膜5727(47．4)27(47．4)28(49．1)PTNM分期Ⅰ期62(33．3)0．687?5(83．3)<0．001?6(100．0)<0．001?Ⅱ期136(46．2)12(92．3)10(76．9)Ⅲ期3112(38．7)17(54．8)16(51．6)Ⅳ期2815(53．6)7(25．0)5(17．9)

*：fisher確切概率值.

2.3 青海地區(qū)胃癌組織中P53、P21、PTEN表達(dá)關(guān)聯(lián)分析

青海地區(qū)胃癌組織中P53與PTEN的表達(dá)相互獨(dú)立，無(wú)關(guān)聯(lián)(χ2=0.033，P=0.856)，P21與PTEN表達(dá)相互獨(dú)立，亦不存在關(guān)聯(lián)(χ2=2.453，P=0.117)。見(jiàn)表3。本研究發(fā)現(xiàn)青海地區(qū)胃癌組織中P53與P21表達(dá)相互關(guān)聯(lián)(χ2= 9.061，P=0.003)，其列聯(lián)系數(shù)C=0.323。見(jiàn)表4。

表3胃癌組織中P53、P21與PTEN表達(dá)的比較

Table 3 The comparison of P53， P21 and PTEN Protein expression in Gastric Carcinoma

表4胃癌組織中P53與P21表達(dá)的比較

Table 4 The comparison of P53 and P21 Protein expression in Gastric Carcinoma

3 討論

本研究通過(guò)檢測(cè)青海地區(qū)胃癌組織、癌旁組織及正常胃組織中P53、P21、PTEN蛋白表達(dá)水平并分析其相互關(guān)系，為青海地區(qū)胃癌的診斷和預(yù)后的評(píng)估提供依據(jù)。結(jié)果顯示：青海地區(qū)胃癌患者P53、P21表達(dá)水平顯著增高、PTEN表達(dá)水平顯著降低，與平原地區(qū)報(bào)道的表達(dá)水平一致：程智勇等[1]報(bào)道，60例胃癌組織中P53蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為48.33%，癌旁正常組織中P53蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為5.00%，兩者比較差異顯著(P<0.05)。張鳳艷等[2]報(bào)道，胃癌組織中，P53和P21蛋白表達(dá)顯著高于正常胃黏膜組織(P<0.01)。劉雷等[3]報(bào)道，P21蛋白在130例胃癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率為70.0%，在248例癌旁組織中為37.1%，組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。且P21蛋白陽(yáng)性表達(dá)率從正常胃組織—慢性非萎縮性胃炎—慢性萎縮性胃炎—腸上皮化生—異型增生至胃癌，大致呈上升趨勢(shì)。羅文等[4]報(bào)道，PTEN 在正常組織的陽(yáng)性表達(dá)率為85.94%顯著高于癌前病變(51.85%)和胃癌(20.71%)(P<0.05)。譚莉莉等[5]報(bào)道胃癌組織中PTEN 陽(yáng)性率(8.82%)顯著高于癌旁組織(61.9%)，亦顯著低于萎縮性胃炎組織(100%)(P<0.01)。

青海地區(qū)地處高原，地域相對(duì)封閉，當(dāng)?shù)鼐用耩B(yǎng)成特有的飲食習(xí)慣，具體表現(xiàn)為多飲酒、多食肉、多食腌制品、少食植物纖維等，加之受到高海拔、低壓、低氧的氣候條件影響，導(dǎo)致胃癌P53、P21、PTEN蛋白表達(dá)水平及其相互關(guān)系可能存在特異性。本研究顯示：青海地區(qū)胃癌組織中，P53表達(dá)與腫瘤分化程度顯著相關(guān)；P21表達(dá)與腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、PTNM分期顯著相關(guān)；PTEN表達(dá)與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、PTNM分期顯著相關(guān)。檢測(cè)P53、P21、PTEN蛋白水平對(duì)青海地區(qū)胃癌的診斷及預(yù)后可提供較好針對(duì)性依據(jù)。

目前的研究發(fā)現(xiàn)，P53基因是最為廣泛的抑癌基因之一，也是突變率最高的抑癌基因之一[6]。P53基因的異常表達(dá)和胃黏膜細(xì)胞的癌變關(guān)系密切，突變型 P53 蛋白表達(dá)與胃癌的分化、轉(zhuǎn)移和浸潤(rùn)等相關(guān)。Muller等報(bào)道[7]，正常胃粘膜、萎縮性胃炎及腸上皮化生組織等非癌組織中，未發(fā)現(xiàn)P53蛋白的表達(dá)；發(fā)生癌變后，P53表達(dá)水平顯著增高，且陽(yáng)性表達(dá)率和病程惡化程度密切相關(guān)。劉曉文[8]等報(bào)道，在中國(guó)P53陽(yáng)性表達(dá)和胃癌患者的性別、年齡、Borrmann 分型、腫瘤部位、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)進(jìn)展無(wú)顯著相關(guān)性，與本研究結(jié)果一致，但相關(guān)數(shù)據(jù)存在差異。

P21作為重要的細(xì)胞周期調(diào)控蛋白，能夠廣泛抑制激酶活性，限制細(xì)胞進(jìn)入S期[9]，從而抑制細(xì)胞的增殖。如果P21基因突變，則會(huì)使細(xì)胞增殖與分化受到影響，從而引起組織惡變。仰麗麗等報(bào)道[10]P21陽(yáng)性表達(dá)率在高中分化胃癌中明顯高于低分化胃癌，在高TNM分期和發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例中，P21表達(dá)亦顯著下降。張宏等[11]證實(shí)胃癌RasP21蛋白表達(dá)越強(qiáng)，惡性程度越高，轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)越大，預(yù)后越差。均與本研究結(jié)果一致。

PTEN存在于人10號(hào)染色體上，是一種腫瘤抑制基因，抑制特異性磷酸酶活性，不僅參與細(xì)胞周期調(diào)控，還可作用于細(xì)胞膜參與細(xì)胞間的交互與黏附功能[12，13]。PTEN 與多種惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切，能夠顯著調(diào)控細(xì)胞凋亡和遷移[14]。孫曉春等[15]發(fā)現(xiàn)，PTEN不與性別、年齡、分化程度、腫瘤浸潤(rùn)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等顯著相關(guān)。甘偉平等[16]發(fā)現(xiàn)，不同分化程度、分期、預(yù)后及有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者癌組織中PTEN表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。賈海江[17]等發(fā)現(xiàn)，PTEN的表達(dá)均與胃癌的浸潤(rùn)深度、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。結(jié)果與本研究均有差異，這可能與研究病例數(shù)及操作方法不盡相同有關(guān)。

本研究經(jīng)χ2配對(duì)檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，胃癌組織中P53與P21表達(dá)呈正相關(guān)，P53與PTEN，P21與PTEN之間均存在一定的相關(guān)性。張鳳艷等[2]報(bào)道，P21蛋白表達(dá)水平與P53蛋白表達(dá)呈正相關(guān)，其相關(guān)系數(shù)為0. 213(P<0．01)；謝智惠等[18]報(bào)道，P53與PTEN共同表達(dá)陽(yáng)性為24.62%，共同表達(dá)陰性為12.3%，兩者間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，胃癌中P53與PTEN表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.251，P=0.044)；鄧昊等[19]研究發(fā)現(xiàn)PTEN和p21ras呈正相關(guān)關(guān)系。均與本研究一致。以上結(jié)果提示P53、P21和PTEN蛋白表達(dá)在評(píng)價(jià)胃癌的發(fā)生發(fā)展上具有協(xié)同作用，其具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，檢測(cè)青海地區(qū)P53、P21、PTEN蛋白在胃癌組織中的表達(dá)及相互關(guān)系，可為青海地區(qū)胃癌的診斷及預(yù)后評(píng)估提供針對(duì)性解決方案。

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ExpressionsandClinicalSignificanceofP53，P21andPTENinGastricCarcinomainQinghaiArea※

XUE Xiao-hong，WANG Ya-ping§，ZHU Zhi-yong，LI Xiao-lin，MA Ying-cai

(Digestive Department of Qinghai Provincial People′s Hospital，Xining，Qinghai 810007)

ObjectiveTo support clinical diagnosis of gastric carcinoma by examining the protein levels of P53，P21 and PTEN in gastric carcinoma tissues，the tissues adjacent to carcinoma and normal gastric tissues in Qinghai Area.Methods78 cases of protein levels of P53，P21 and PTEN in gastric carcinoma tissues，the tissue adjacent to carcinoma and normal gastric tissues were detected by immunohistochemical method，and analyzed their correlations.ResultsThe protein expressions of P53，P21 and PTEN in gastric carcinoma were all higher than those of normal gastric tissues，the positive rates were 44.87%，52.56% and 47.44%，respectively，and the difference was statistically significant(P<0.05).The positive expressions rate of P53 protein in gastric cancer was correlated with differentiation，the difference was statistically significant(P<0.05).The positive expressions rate of P53 protein in gastric cancer has no correlation with age，gender，lymph node metastasis，invasion depth and the PTNM staging，the difference was not statistically significant(P>0.05).The positive expressions rate of P21 protein in gastric cancer was correlated with lymph node metastasis，invasion depth and the PTNM staging，the difference was statistically significant(P<0.05).The positive expressions rate of P21 protein in gastric cancer has no correlation with age，gender，differentiation，the difference was not statistically significant(P>0.05).The positive expressions rate of PTEN protein in gastric cancer was correlated with lymph node metastasis and the PTNM staging，the difference was statistically significant(P<0.05).The positive expressions rate of PTEN protein in gastric cancer has no correlation with age，gender，differentiation，invasion depth，the difference was not statistically significant(P>0.05).The expression of P53 was correlated with P21，the coefficient of contingency was 0.323 (P<0.05)，the expression of P53 and PTEN，P21 and PTEN has no statistical correlation(P>0.05).ConclusionThe expression of P53 was correlated with P21，the expression of P53 and PTEN，P21 and PTEN has no statistical correlation in Qinghai Area.

P53 P21 PTEN Qinhai Gastric Carcinoma

R741

A

10.13452/j.cnki.jqmc.2017.03.008

2016-9-8

※：青海省科學(xué)技術(shù)廳科技促進(jìn)新農(nóng)村計(jì)劃(2013-N-526)；§：通信作者，博士，副主任醫(yī)師，Email-rose19820721@126.com 薛曉紅(1984～)，女，漢族，青海籍，碩士，主治醫(yī)師