新疆昭蘇縣馬泰勒蟲病的診療及其效果觀察

劉世芳，阿拉西·阿濱，宋瑞其，楊紅霞，巴音查汗*

(1.新疆農業(yè)大學動物醫(yī)學學院,新疆烏魯木齊 830052; 2.昭蘇縣畜牧獸醫(yī)站,新疆昭蘇 835604)

新疆昭蘇縣馬泰勒蟲病的診療及其效果觀察

劉世芳1，阿拉西·阿濱2，宋瑞其1，楊紅霞1，巴音查汗1*

(1.新疆農業(yè)大學動物醫(yī)學學院,新疆烏魯木齊 830052; 2.昭蘇縣畜牧獸醫(yī)站,新疆昭蘇 835604)

為了觀察和探討不同檢測方法及不同藥物對馬泰勒蟲病的臨床診療效果，提高對馬泰勒蟲病臨床診療的防治水平,隨機采集昭蘇縣種馬場128匹疑似馬血樣品，采用臨床癥狀觀察、病原學檢查和PCR檢測等方法確診了12例馬泰勒蟲病病例。將12匹陽性馬隨機分為2組，即處方1組和處方2組，用藥后的5 d內，分別對每組患馬進行臨床癥狀觀察、體溫測定、血涂片檢查和染蟲率統(tǒng)計。結果顯示，血涂片中含有圓形或圓點形的馬泰勒蟲,PCR檢測得到512 bp的目的條帶，與目的片段相符。第1治療組(三氮脒治療組)治愈率為66.7%(4/6)，第2治療組(鹽酸吖啶黃組)治愈率為83.3%(5/6)，第2治療組治愈率高于第1治療組。本試驗發(fā)現(xiàn)，臨床癥狀觀察、病原學檢查和PCR檢測法相結合可準確診斷馬泰勒蟲病；處方2組是2種處方中治療馬泰勒蟲病的最佳處方，以上診療數據可為馬泰勒蟲病的防控提供參考。

馬泰勒蟲?。辉\療；效果觀察

馬泰勒蟲(舊名馬巴貝斯蟲、納氏焦蟲)是寄生于馬屬動物(包括馬、驢、騾和斑馬)紅細胞內所引起的蜱傳性血液原蟲病，其蟲體小于紅細胞半徑。臨床上出現(xiàn)稽留熱、貧血、呼吸困難、黃疸等癥狀，如診治不及時，病死率極高，對現(xiàn)代馬產業(yè)造成極大影響。該病集中分布在熱帶和亞熱帶地區(qū)，而在我國該病主要流行于新疆、內蒙古西部地區(qū)及南方各地，在新疆流行區(qū)域主要包括伊犁、阿爾泰及巴州等[1-5]。本病主要通過硬蜱傳播，因此，該病的流行具有一定的地區(qū)性和季節(jié)性[4,6]。新疆昭蘇縣常年雨水較多，草原面積廣大，植被豐富，適合蜱類孳生，導致該地區(qū)馬泰勒蟲病流行頻繁。同時，由于基層對該病的防范不足，缺乏滅蜱意識和對該病的有效治療，造成當地馬產業(yè)經濟損失嚴重。因此，尋找出最佳的診斷和治療方法是綜合防控馬泰勒蟲病、降低病死率、保護馬產業(yè)健康發(fā)展的基礎。

目前，國內治療該病選擇的藥物主要是三氮脒(貝尼爾、血蟲凈)、鹽酸吖啶黃(黃色素、錐黃素)和咪唑苯脲等[7-10]，但對于治療藥物效果的評價卻報道較少。因此，筆者于2016年5月至2016年7月，在新疆馬泰勒蟲病的疫區(qū)昭蘇縣種馬場配種站蹲點調查與治療馬泰勒蟲病。根據流行病學調查、臨床癥狀和實驗室診斷結果，綜合確診馬泰勒蟲病，并通過2種治療處方對患馬牛進行臨床治療及效果觀察，有效地控制了病情并篩選出了最佳治療處方，現(xiàn)將試驗結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗用動物 2016年5月8日至2016年7月2日對昭蘇縣種馬場配種站520匹馬進行流行病學調查，采集其中128匹疑似馬的耳緣靜脈血及全血分別進行血涂片和PCR檢測。將經流行病學調查、PCR檢測陽性和具有明顯臨床癥狀特點的12匹1歲馬駒作為此次試驗對象。

1.1.2 主要設備和試劑 PCR儀，美國Bio-Rad公司產品；光學顯微鏡，Motic公司產品；樹脂型TM基因組DNA提取試劑盒，北京賽百盛基因技術有限公司產品。

1.2 方法

1.2.1 臨床癥狀診斷 觀察馬匹的精神狀態(tài)，飲食欲，結膜有無充血或黃染，排糞排尿情況，軀體是否出現(xiàn)水腫，并測定體溫。

1.2.2 實驗室診斷

1.2.2.1 血涂片檢查 耳緣靜脈無菌采血，滴至載玻片并涂制成血液涂片，待自然干燥后滴適量甲醇使其固定；待其完全晾干后按瑞氏-吉姆薩復合染液方法進行染色[11]；染色結束后用蒸餾水將血涂片沖洗干凈，自然晾干后滴石蠟油在油鏡下進行鏡檢。

1.2.2.2 PCR檢測 抗凝管無菌采集馬頸靜脈血液，通過全血基因組提取試劑盒提取DNA；引物參照羅金等[12]擴增18 S RNA基因的目的區(qū)段，上游引物：5′-TTTGGGCTGTTTACAGTTGC-3′；下游引物：5′-CTCAAAGTAAACGTCGAGTCATG-3′，由上海生工生物工程技術服務有限公司合成。采用25 μL反應體系以全血基因組DNA為模板，反應條件為：95℃ 5 min；94℃ 45 s，56℃ 30 s，72℃ 30 s,30個循環(huán)；72℃ 5 min。PCR產物用10 g/L瓊脂糖凝膠電泳觀察結果。

1.2.3 治療方案 綜合上述診斷方法對128匹疑似馬進行診斷，最終確定12匹感染馬泰勒蟲病。以這12匹患馬作為治療對象，采用2種治療方案，同時觀察此2種治療方案的治療效果。

1.2.3.1 治療處方 以三氮脒(貝尼爾、血蟲凈)、鹽酸吖啶黃(黃色素、錐黃素)分別作為第1治療組和第2治療組的主要治療藥物，其余藥物選用柴胡、維生素C、復合維生素B、右旋糖苷、阿托品、9 g/L鹽水、50 g/L葡萄糖和250 g/L碳酸氫鈉。

1.2.3.2 治療方法 將確診的12匹馬隨機分為2個組，選用三氮脒為主要治療藥物為第1治療組，鹽酸吖啶黃為主要治療藥物為第2治療組。按治愈療程分別對第1治療組和第2治療組進行為期5 d的臨床癥狀觀察、體溫測定、血涂片觀察及染蟲率統(tǒng)計，綜合分析以上試驗結果比較兩種藥物治療的效果。

2 結果

2.1 診斷結果

調查的128匹馬中，27匹馬血涂片在顯微鏡下觀察到圓形或圓點形的馬泰勒蟲，血涂片中馬泰勒蟲形態(tài)如圖1所示。49份馬血液DNA樣本經PCR擴增，得到預期條帶512 bp，與實際片段大小相符，部分樣品PCR檢測結果如圖2所示。馬泰勒蟲病不同病程及病程期的臨床癥狀分為最急性型、急性型和慢性型，最急性型表現(xiàn)出嚴重貧血、體溫上升至40℃～41℃，后肢拖地，腹式呼吸明顯。急性型根據病程期又可分為前期、中期和治療后，前期臨床癥狀不明顯，被毛粗亂，食欲減退；中期運動不穩(wěn)或后肢輕微拖地，稽留熱，體溫上升至39.1℃～41.0℃，下頜淋巴結腫大，結膜黃染；治療后體溫下降，運動狀態(tài)，精神狀態(tài)，食欲恢復正常，血液中PCR檢測不出蟲體。慢性型臨床癥狀不明顯，逐漸消瘦，貧血，耐過的病馬為帶蟲者。

綜合以上診斷結果，最后確定以12匹馬泰勒蟲陽性患馬作為藥物治療對象。

圖1 馬紅細胞內的馬泰勒蟲(10×100)

M.DNA標準 DL 2 000；1.陰性對照；2.陽性對照；3～5.馬泰勒蟲PCR陽性

M.DNA Marker DL 2 000；1.Negative control；2.Positive control;3-5.TheileriaequiPCR positive

圖2馬泰勒蟲PCR擴增結果

Fig.2 PCR amplification results ofTheileriaequi

2.2 治療結果

通過2組對比試驗，第1治療組治愈率為66.7%(4/6)，第2治療組治愈83.3%(5/6)，其具體治療效果及其相關數據詳見表1。通過比較第1治療組和第2治療組平均體溫變化及平均染蟲率變化可以看出，第2治療組平均染蟲率及體溫下降幅度較第1治療組均明顯，其具體治療效果及其相關數據見圖3和圖4。第1治療組1匹患馬因發(fā)病較急，于第2天死亡。第2治療組1匹患馬因感染鏈球菌引起腕關節(jié)膿腫而死亡。

3 討論

新疆昭蘇種馬場配種站草場位于高原腹地，海拔1 800 m～3 500 m，屬天山北麓西部高寒山區(qū)干旱半濕潤冷涼型氣候，植被豐富，為馬泰勒蟲病的傳播媒介-革蜱屬的硬蜱孳生提供了有利條件。當地馬匹飼養(yǎng)方式主要是草場散養(yǎng)，且每年有來自不同地方的馬匹到種馬場進行配種，綜合以上均導致了馬泰勒病在該地區(qū)的廣泛流行。近年來，新疆馬產業(yè)發(fā)展迅速，全區(qū)存欄量已達90萬匹，馬泰勒蟲病的流行逐年上升[13]，對馬產業(yè)造成巨大經濟損失。

表1 不同組治愈率

圖3 不同治療組治療后平均體溫變化表

圖4 不同治療組治療后平均紅細胞染蟲率變化

筆者在基層蹲點治療的過程中，發(fā)現(xiàn)當地基層獸醫(yī)對于馬泰勒蟲病的認識不足，診段設備缺乏、技術滯后，加之在其治療過程中藥物使用混亂、缺乏有效的治療方法等，使得該病的流行不能得到及時控制。據李文志[14]、魏錦龍等[15]曾在吉爾孟、莊浪縣地區(qū)對馬泰勒蟲病的診斷及治療進行了相關描述，在診斷中，選擇的診斷方法均為血液涂片鏡檢，該方法對有明顯臨床癥狀的的病馬進行檢測時效果較好，而當病馬處于隱形感染、發(fā)病初期時染蟲率較低，血涂片檢測效果較差，不能及時發(fā)現(xiàn)該病，對該病進行有效治療。故本試驗結合臨床癥狀、病原學檢查和PCR檢測3種方法進行疑似馬匹是否感染馬泰勒蟲病情況進行確診。同時選用三氮脒和鹽酸吖啶黃對確診病例進行了對比治療和治療效果觀察。第1治療組和第2治療組平均體溫分別從40.7℃、40.8℃下降到38.1℃、37.6℃，平均染蟲率分別從1.2%、0.90%都降到0。2組藥方對比治療試驗顯示，第1治療組治愈率為66.7%；第2治療組治愈率為83.3%；以上結果可以看出，平均染蟲率和體溫均有下降，但第2治療組平均染蟲率體溫和下降幅度較第1治療組較快，第2組治愈率高于第1組，說明鹽酸吖啶黃更加具有顯著的治療效果。

馬泰勒蟲病在血液內染蟲率低的情況下往往難以確診，故綜合診斷是關鍵。本次篩選的2組藥方是對治療馬泰勒蟲病效果明顯，且鹽酸吖啶黃具有更加顯著的治療效果，但三氮脒、鹽酸吖啶黃都有微量毒性，故給藥前，可按適當劑量給馬匹注射阿托品以減緩其毒性作用，給藥后，要對馬匹進行30 min觀察，看有無不良反應的發(fā)生；若持續(xù)較長時間給藥，可保肝適當補維生素D；對因治療的同時，也需注意對癥治療。

[1] Moretti A,Mangili V,Salvatori R,et al.Prevalence and diagnosis ofBabesiaandTheileriainfections in horses in Italy:a preliminary study[J].Vet J,2010,184:346-350.

[2] Micaela S， Francesca B，Simona N，et al.Seroprevalence and molecular analysis ofBabesiacaballiandTheileriaequi in horses from central Italy during a 10-year period[J].J Equi Vet Sci,2015,35(10):865-868.

[3] Salim B O M,Hassan S M,Bakheit M A,et al.Diagnosis ofBabesiacaballiandTheileriaequiinfections in horses in Sudan using ELISA and PCR[J].Parasitol Res,2008,103(5):1145-1150.

[4] 孔繁瑤.家畜寄生蟲學[M].2版.北京：中國農業(yè)大學出版社,2010:330-331.

[5] 瓦熱斯·吐爾松,李永暢,朱玉濤,等.新疆昌吉部分地區(qū)馬梨形蟲病檢測初報[J].中國動物傳染病學報,2016，23(1):75-79.

[6] 羅 金,劉光遠,田占成,等.馬泰勒蟲EMA1基因的克隆與生物學特性分析[J].中國獸醫(yī)科學,2012,42(4):352-356.

[7] 姜新基,六 十,布仁巴依爾,等.馬焦蟲病的臨床癥狀及防治措施[J].中國畜禽種業(yè),2014,21(10):82-83.

[8] 孫曉華.牛、馬巴貝斯蟲病的診斷與防治[J].養(yǎng)殖技術顧問,2014,42(2):176.

[9] 閆常平,薛克云,安海軍.馬巴貝斯蟲病的暴發(fā)與診治[J].中國獸醫(yī)雜志,2003,51(9):52-53.

[10] 馬 萍.馬類家畜巴貝斯蟲病的診治[J].甘肅畜牧獸醫(yī),2005(4):30-31.

[11] 王 蕾,劉亞萍,張大紅.三種血涂片染色方法在教學應用中的比較[J].實用醫(yī)技雜志,2015(9):984-985.

[12] 羅 金,劉光遠,謝俊仁,等. 馬泰勒蟲病PCR檢測方法的建立和應用[J]. 中國畜牧獸醫(yī),2012,41(2):28-31.

[13] 李 佳.馬泰勒蟲熒光定量PCR檢測方法的建立及伊犁馬泰勒蟲病的分子流行病學調查[D].新疆烏魯木齊：新疆農業(yè)大學,2014.

[14] 李文志.馬梨形蟲病的診斷與治療[J].青海畜牧獸醫(yī)雜志,1999,26(3):48.

[15] 魏錦龍,李昌銘.馬類巴貝斯蟲病的防治[J].中獸醫(yī)學雜志,2013,40(6):35.

Abstract:To observe and explore the effects of different detection methods and drugs on the clinical diagnosis and treatment in horses infected withTheileriaequi,to raise awareness of the clinical diagnosis and treatment and prevention level,one hundered and twenty-eight suspected horse blood samples collected from Zhaosu county stud farm randomly. 12 horses infected withTheileriaequiwere confirmed by clinical symptoms,etiology examination and PCR detection methods.The 12 positive horses were randomly divided into two groups named the prescription group 1 and the prescription group 2,within 5 days after treatment,respectively,for each group of horses,the clinical symptoms,temperature,blood smears and infestation rate of erythrocytes were recorded.Results showed that there are round or round point shapedTheileriaequiin erythrocytes. PCR detection obtained a 512 bp band which matched purpose fragment.Nitrogen amidine first treatment group cure rate was 66.7% (4/6),Hydrochloric acid(second group ) cure rate was 83.3% (5/6),the cure rate of the second treatment group is higher than that of the first treatment group.This study found that combination of clinical symptom observation,etiology examination and PCR detection method can accurately diagnoseTheileriaequiinfection,the prescription group 2 was better for the treatment ofTheileriaequiinfection in these two prescriptions.These clinical data can lay a foundation for prevention and control ofTheileriaequiinfection.

Keywords:Theileriaequi; diagnosis and treatment; efficiency observation

EfficiencyObservationofDiagnosisandTreatmentofTheileriaequiInfectioninZhaosuCountyofXinjiang

LIU Shi-fang,ALAX Abing2,SONG Rui-qi1,YANG Hong-xia2,Ba-yin-cha-han1

(1.CollegeofVeterinaryMedicine,XinjiangAgriculturalUniversity,Urumqi,Xinjiang,830052,China; 2.ZhaosuAnimalHusbandryStation,Zhaosu,Xinjiang,835604,China)

S852.723

B

1007-5038(2017)08-0122-04

2016-12-01

國家自然科學基金-新疆聯(lián)合基金重點項目(U1403283)

劉世芳(1990-)，男，云南曲靖人，碩士研究生，主要從事預防獸醫(yī)學研究。*