當(dāng)歸赤小豆湯對(duì)烏拉坦誘導(dǎo)小鼠肺癌的預(yù)防作用

杜振華,姚靜靜，李自波，杜鋼軍

河南大學(xué)藥學(xué)院 藥物研究所，河南 開封 475004

當(dāng)歸赤小豆湯對(duì)烏拉坦誘導(dǎo)小鼠肺癌的預(yù)防作用

杜振華,姚靜靜，李自波，杜鋼軍

河南大學(xué)藥學(xué)院 藥物研究所，河南 開封 475004

〔目的〕 觀察當(dāng)歸赤小豆湯對(duì)烏拉坦誘導(dǎo)的小鼠肺癌是否有預(yù)防作用?！卜椒ā?采用烏拉坦腹腔注射建立小鼠肺癌模型，造模后隨機(jī)分組。次日以當(dāng)歸赤小豆湯灌胃給藥，觀察其對(duì)肺癌小鼠體質(zhì)量、自主活動(dòng)及肺組織形態(tài)學(xué)的影響，并進(jìn)行肺組織病理HE染色及血清CEA含量檢測?！步Y(jié)果〕 烏拉坦建立的小鼠肺癌模型組致瘤率為100%。當(dāng)歸赤小豆湯組致瘤率為78%。與模型組相比，當(dāng)歸赤小豆湯組小鼠肺荷瘤數(shù)較少且瘤體積較小。HE染色顯示：模型組小鼠肺組織出現(xiàn)核畸變，炎癥浸潤明顯；當(dāng)歸赤小豆湯組小鼠肺組織有明顯的腺圈，腺圈內(nèi)部有少量炎癥浸潤現(xiàn)象。血清肺癌標(biāo)志物檢測CEA表明，當(dāng)歸赤小豆湯組含量低于模型組(P<0.05)。〔結(jié)論〕當(dāng)歸赤小豆湯對(duì)烏拉坦誘導(dǎo)的小鼠肺癌模型具有預(yù)防作用。

當(dāng)歸赤小豆；肺癌；預(yù)防作用

Abstract: 〔Objective〕To observe the prevention effect of Dangguichixiaodou decoction on lung cancer in mice.〔Methods〕The mouse model of lung cancer was established by injecting urethane into abdomen,they were divided into different groups randomly.The mice were received the Dangguichixiaodou decoction via intragastric administration next day following urethane injection.The body weight, autonomic activity and lung histomorphology were observed in mice. The lung pathological were observed by HE staining and the CEA content in the serum was detected.〔Results〕The tumorigenicity rate in the model group was 100%，whereas the tumorigenicity rate in the Dangguichixiaodou decoction group was 78%.Compared with the model group,the number of lung tumors was fewer, and the tumor volume was smaller . HE staining showed that the lung tissue in the model group appeared nuclear distortion and infiltration of inflammation. In the Dangguichixiaodou decoction group, the lung tissue had obvious gland ring, and there was a small amount of inflammatory infiltration in the gland. The CEA concentration in the Dangguichixiaodou decoction group was obviously lower than it in the model group (P<0.05). 〔Conclusion〕The Dangguichixiaodou decoction have prevention effect on lung cancer in mice.

Keywords: dangguichixiaodou decoction; lung cancer; prevention effect

肺癌是在癌癥患者中發(fā)病率和死亡率最高的一種疾病[1]。 肺癌的治療原則為多學(xué)科綜合治療和個(gè)體化治療，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)常用治療手段包括手術(shù)、放療、化療、免疫、分子靶向治療等，但總體來說肺癌的預(yù)后取決于能否早期發(fā)現(xiàn)和及時(shí)治療，故挖掘更有效的治療方法屬當(dāng)務(wù)之急[2]。近年來，中醫(yī)藥治療肺癌的研究方向主要體現(xiàn)在循證醫(yī)學(xué)在中醫(yī)藥研究中的應(yīng)用[3]。樸炳奎等[4]將肺癌辨證分為肺氣不足、陰虛內(nèi)熱、氣陰兩虛、氣滯血瘀和痰濕瘀阻證。 百病皆生于氣，氣血郁滯,從而導(dǎo)致血痊氣血疲滯，為腫瘤的發(fā)生發(fā)展創(chuàng)造了條件，瘀滯貫穿于腫瘤的全病程是腫瘤的最主要病理變化[5]。所以，尋找一種能夠化瘀的藥物是治療肺癌的關(guān)鍵。在《金匱要略》中赤小豆當(dāng)歸湯的功能主要是排膿血、除濕熱?，F(xiàn)代研究當(dāng)歸赤小豆用來治療尿路感染、前列腺肥大、泡性結(jié)膜炎、白塞病綜合征等[6]?；谝陨嫌^點(diǎn)，本實(shí)驗(yàn)開展了當(dāng)歸赤小豆對(duì)烏拉坦誘導(dǎo)的肺癌模型預(yù)防作用的研究。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥品

1.1.1 當(dāng)歸赤小豆湯的制備 當(dāng)歸、赤小豆(購于開封市天濟(jì)堂大藥房)取當(dāng)歸20 g,赤小豆提取物80 g,加水熬煮3次，每次30 min，然后濃縮至200 mL,濃度為10 g/kg。

1.1.2 烏拉坦溶液 取烏拉坦6 g溶于100 mL體積分?jǐn)?shù)為0.9%的生理鹽水制成濃度為0.06 g/mL的溶液。

1.2 動(dòng)物

昆明種小鼠：健康雌鼠，體質(zhì)量(22±5) g，由河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器

JY10001電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；YLS-1A多功能小鼠自主活動(dòng)儀(安徽淮北正華生物儀器有限公司)；FA224型電子天平(杭州匯爾儀器設(shè)備有限公司)；LGR16-W型高速冷凍離心機(jī)(北京京立離心機(jī)有限公司)；顯微圖像分析儀(奧林巴斯中國有限公司)；LEICA RM2235輪轉(zhuǎn)切片機(jī)(徠卡顯微系統(tǒng)上海貿(mào)易有限公司)。

2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

2.1 實(shí)驗(yàn)方法

2.1.1 建立小鼠肺癌模型 腹腔注射烏拉坦(600 mg/kg)建造肺癌模型，每周1次，連續(xù)注射10周。

2.1.2 分組與給藥 將90只小鼠隨機(jī)分成正常組、模型組、當(dāng)歸赤小豆湯組(以下稱給藥組)。給藥組：當(dāng)歸赤小豆水煎液，從小鼠開始造模后次日按10 g/kg給藥，2次/d，連續(xù)21周;模型組:小鼠造模后以0.2 mL/10 g蒸餾水灌胃2次/d,連續(xù)21周；正常組：正常的飼養(yǎng)。

2.2 指標(biāo)檢測

在小鼠養(yǎng)至第22周時(shí)，稱量小鼠的體質(zhì)量，測量自主活動(dòng)。解剖取出肺部組織觀察其肺部形態(tài)學(xué)變化。

2.3 病理檢測

處死小鼠，取出肺組織稱量計(jì)算臟器指數(shù)，然后放入體積分?jǐn)?shù)為4%的多聚甲醛中48 h，常規(guī)梯度酒精脫水，二甲苯通透，石蠟包埋，切5 μm厚的片，HE染色，顯微鏡下觀察并拍照。

2.4 生化指標(biāo)檢測

按照ELISA試劑盒說明書要求檢測血清中CEA的濃度。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)均以平均值±方差來表示，用SPSS 17.0處理，兩組間差異性比較采用t檢驗(yàn)。P<0.05表示有顯著性差異；P<0.01表示有非常顯著性差異。

3 結(jié)果

3.1 對(duì)小鼠形態(tài)學(xué)的影響

解剖小鼠，取出肺組織肉眼觀察如下：正常組小鼠肺組織表面光滑，呈粉色，無充血、水腫的現(xiàn)象。模型組小鼠肺組織明顯增大，呈現(xiàn)暗紅色，部分組織略呈現(xiàn)淡黃色，并有明顯的結(jié)節(jié)點(diǎn)。當(dāng)歸赤小豆組小鼠肺組織較正常組大小無明顯變化，表面略見結(jié)節(jié)點(diǎn)，與模型組相比明顯減少。見圖1。

圖1 小鼠肺組織形態(tài)比較

3.2 對(duì)小鼠肺組織病理影響

組織經(jīng)過包埋切片HE染色結(jié)果如下圖：正常組小鼠肺組織未見病理損傷；模型組小鼠肺組織出現(xiàn)核畸變，炎癥浸潤明顯；當(dāng)歸赤小豆組小鼠肺組織有明顯的腺圈，腺圈內(nèi)部有少量炎癥浸潤現(xiàn)象。見圖2。

3.3 生化指標(biāo)檢測

與正常小鼠比較，模型組血清CEA含量明顯增高；當(dāng)歸赤小豆湯組與模型組比較，血清CEA顯著降低。見圖3。

圖2 HE染色

圖3 血清中CEA含量

3.4 對(duì)小鼠體質(zhì)量、自主活動(dòng)的影響

小鼠體質(zhì)量模型組低于給藥組及正常組；小鼠的自主活動(dòng)模型組低于給藥組及正常組。見圖4、圖5。

圖4 小鼠的體質(zhì)量比較

圖5 小鼠的自主活動(dòng)比較

4 討論

當(dāng)歸，來源于傘形科多年生草本植物當(dāng)歸的干燥根。味甘、辛，性溫。歸肝、心、脾經(jīng)。有補(bǔ)血、活血、調(diào)經(jīng)、散寒、止痛之功效。赤小豆，來源于豆科植物赤小豆或赤豆的種子。味甘酸、性平。歸心經(jīng)、小腸經(jīng)。在《金匱要略》中講赤小豆?jié)B濕清熱、解毒排膿；當(dāng)歸活血、去瘀生血，漿水清涼解毒。二者共奏清熱利濕，活血解毒之功。

烏拉坦誘導(dǎo)的小鼠肺癌模型與臨床人體肺癌發(fā)病過程十分相似，是目前常用的研究肺癌發(fā)病機(jī)制及肺癌預(yù)防的常用模型，一般采用給動(dòng)物一次性腹腔注射烏拉坦制造模型[7]?？墒剐∈蠓伟┌l(fā)生率達(dá)到100%。在本實(shí)驗(yàn)中模型組小鼠出現(xiàn)畏寒、活動(dòng)量少、體質(zhì)量減輕的現(xiàn)象。第22周模型組解剖時(shí)發(fā)現(xiàn)小鼠肺部組織上均有黃白色結(jié)節(jié)，給藥組解剖時(shí)發(fā)現(xiàn)小鼠肺部出現(xiàn)淡黃色結(jié)節(jié)。眼球取血時(shí)，模型組的血流量比給藥組的少，血液黏度增高，生化指標(biāo)檢測CEA模型組明顯高于正常組。HE染色發(fā)現(xiàn)，正常組小鼠肺組織未見病理損傷，模型組小鼠肺組織出現(xiàn)核畸變，炎癥浸潤明顯，當(dāng)歸赤小豆組小鼠肺組織有明顯的腺圈，腺圈內(nèi)部有少量炎癥浸潤現(xiàn)象。

綜上所述，病理檢測結(jié)果及生化指標(biāo)檢測都表明，當(dāng)歸赤小豆湯對(duì)烏拉坦誘導(dǎo)的小鼠肺癌模型具有預(yù)防作用，可能與調(diào)節(jié)癌狀態(tài)有關(guān)系。

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[2] 容志航.北京市名老中醫(yī)治療肺癌的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)與臨床研究[D].北京：北京中醫(yī)藥大學(xué),2013.

[3] 關(guān)念波,劉浩,林洪生.肺癌中醫(yī)藥治療的研究進(jìn)展及展望[J].臨床腫瘤學(xué)雜志,2013,18(3):264-267.

[4] 鄭洪剛.樸炳奎辨治肺癌學(xué)術(shù)思想與經(jīng)驗(yàn)探析[J].中醫(yī)雜志，2010，51(4):304-306.

[5] 吳琪.中醫(yī)藥抗癌止痛新論[M].沈陽：遼寧科技出版社1996：21，65.

[6] 李華英,段穎,劉士霞.赤小豆當(dāng)歸散加減治療白塞病綜合征的臨床療效觀察[J].臨床合理用藥雜志,2016,9(4):58-59.

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[責(zé)任編輯時(shí)紅]

ThepreventiveeffectofDangguichixiaodouDecoctiononurethane-inducedlungcancerinmice

DU Zhenhua，YAO Jingjing, LI Zibo, DU Gangjun

Intitute of Pharmacy, Pharmaceutical College of Henan University, Henan Kaifeng 475004, China

R734.2

A

1672-7606(2017)03-0153-03

2016-11-17

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81173094)

杜振華(1988-)，女，河南太康人，在讀研究生，研究方向：中藥藥理學(xué)與腫瘤藥理學(xué)。