卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫患者外周血Th17、Treg比例變化及意義

吳德慧

(青海紅十字醫(yī)院，西寧810000)

卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫患者外周血Th17、Treg比例變化及意義

吳德慧

(青海紅十字醫(yī)院，西寧810000)

目的探討輔助性T細胞17(Th17)、調(diào)節(jié)性T細胞(Treg)比例及其調(diào)控基因在卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫發(fā)生、發(fā)展中的作用。方法選擇卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫患者90例作為觀察組，因單純輸卵管原因?qū)е碌牟辉邪Y患者90例作為對照組。采用流式細胞術檢測兩組外周血Th17、Treg占CD4+T細胞比例，計算Th17/Treg。采用qRT-PCR法檢測觀察組異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜及對照組在位內(nèi)膜組織孤獨核受體γ(ROR-γ) mRNA、叉頭狀轉(zhuǎn)錄因子3(FoxP3)mRNA。采用ELISA法檢測兩組血清白細胞介素17(IL-17)、IL-22、IL-10、轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)。結(jié)果觀察組外周血Th17占CD4+T細胞比例、Th17/Treg均高于對照組，Treg占CD4+T細胞比例低于對照組(P均<0.05)。觀察組異位內(nèi)膜ROR-γ mRNA相對表達量低于觀察組在位內(nèi)膜和對照組在位內(nèi)膜(P均<0.05)，觀察組在位內(nèi)膜ROR-γ mRNA相對表達量低于對照組在位內(nèi)膜(P<0.05)；觀察組異位內(nèi)膜FoxP3 mRNA相對表達量高于觀察組在位內(nèi)膜和對照組在位內(nèi)膜(P均<0.05)，觀察組在位內(nèi)膜FoxP3 mRNA相對表達量高于對照組在位內(nèi)膜(P<0.05)。觀察組血清IL-17、IL-22水平均高于對照組，IL-10、TGF-β水平均低于對照組(P均<0.05)。結(jié)論卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫患者外周血Th17/Treg比例失衡；Th17/Treg比例失衡可能通過調(diào)節(jié)其下游轉(zhuǎn)錄因子及細胞因子表達而促進卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫的發(fā)生、發(fā)展。

子宮內(nèi)膜異位癥；卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫；輔助性T細胞17；調(diào)節(jié)性T細胞

卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫是子宮內(nèi)膜異位癥的常見類型，育齡婦女高發(fā)，發(fā)病率為7%～12%[1]。目前，關于卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫的發(fā)病機制仍未明確，一般認為是子宮內(nèi)膜細胞通過輸卵管進入盆腔后定植于卵巢而引起的，其中免疫應答機制在這一過程中發(fā)揮了重要作用[2,3]。輔助性T細胞17(Th17)和調(diào)節(jié)性T細胞(Treg)是兩種重要的CD4+T淋巴細胞。近年來研究發(fā)現(xiàn)，Th17、 Treg可能參與卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫的發(fā)生與發(fā)展[4]，但具體的免疫調(diào)節(jié)機制仍不清楚。孤獨核受體γ(ROR-γ)、叉頭狀轉(zhuǎn)錄因子3(FoxP3)是Th17、Treg調(diào)控的下游轉(zhuǎn)錄因子。IL-17、IL-22、IL-10、轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)是Th17、Treg分泌的細胞因子。本研究探討血清Th17、Treg比例及其調(diào)控基因在卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2013年11月～2016年11月青海紅十字醫(yī)院收治的卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫患者90例作為觀察組，年齡21～40(31.24±3.52)歲。選擇同期因單純輸卵管原因?qū)е碌牟辉邪Y患者90例為對照組，年齡22～41(32.13±3.62)歲。均為中國漢族育齡女性，平素月經(jīng)規(guī)律，月經(jīng)周期27～35 d。排除心肝腎等臟器功能不全、糖尿病、慢性高血壓疾病、自身免疫性疾病、感染以及近期用藥史者，以及子宮肌瘤、腺肌病者。術前3個月沒有接受促性腺激素釋放激素激動劑或雌孕激素治療。觀察組經(jīng)病理檢查證實為卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫，取其異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜組織；對照組經(jīng)病理檢查排除子宮內(nèi)膜異位癥，取其在位內(nèi)膜組織；均液氮保存。本研究通過我院醫(yī)學倫理委員會批準，患者及其家屬均知情同意。

1.2 外周血Th17、Treg細胞比例檢測 采用流式細胞術。兩組于月經(jīng)干凈后3～7 d采集空腹外周靜脈血5 mL，取肝素抗凝全血100 μL，即刻進行流式細胞學檢查。首先向抗凝管中加入FITC 標記的CD3抗體、APC-CY7標記的CD8抗體、PE-CY7標記的CD25抗體、PEMAB標記的CD127抗體各10 μL，恒溫孵育20 min；固定后破膜，應用PBS緩沖液洗滌細胞，置于流式細胞儀中檢測外周血Th17、Treg占CD4+T細胞比例(分別記為Th17%、Treg%)，并計算Th17/Treg。

1.3 子宮內(nèi)膜組織ROR-γ、FoxP3 mRNA表達檢測 采用qRT-PCR法。取觀察組異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜及對照組在位內(nèi)膜組織，采用qRT-PCR法檢測ROR-γ、FoxP3 mRNA表達。引物序列參考文獻[5]。先用TRIzol法提取組織中總RNA，按照試劑盒操作說明進行逆轉(zhuǎn)錄，然后進行qRT-PCR反應。反應條件：95 ℃預變性30 s，95 ℃變性5 s，60 ℃退火34 s，進行40個循環(huán)。以GAPDH作為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt法計算ROR-γ、FoxP3 mRNA相對表達量。

1.4 血清IL-17、IL-22、IL-10、TGF-β檢測 采用ELISA法。取兩組1.2檢測后的剩余外周血，經(jīng)3 500 r/min離心10 min，取上清液。采用ELISA法檢測血清IL-17、IL-22、IL-10、TGF-β水平，試劑盒購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司，嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

2 結(jié)果

2.1 兩組外周血Th17%、Treg%及Th17/Treg比較 見表1。

表1 兩組外周血Th17%、Treg%及Th17/Treg比較

注：與對照組比較，*P<0.05。

2.2 兩組子宮內(nèi)膜組織ROR-γ、FoxP3 mRNA表達比較 見表2。

表2 觀察組異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜及對照組在位內(nèi)膜ROR-γ、FoxP3 mRNA相對表達量比較

注：與對照組在位內(nèi)膜比較，*P<0.05，與觀察組在位內(nèi)膜比較，#P<0.05。

2.3 兩組血清IL-17、IL-22、IL-10、TGF-β水平比較 見表3。

表3 兩組血清IL-17、IL-22、IL-10、TGF-β水平比較

注：與對照組比較，*P<0.05。

3 討論

在正常女性體內(nèi)，子宮內(nèi)膜細胞隨逆流的經(jīng)血經(jīng)輸卵管進入盆腔可被機體免疫細胞識別并清除[5]；而在卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫患者體內(nèi)，進入盆腔的子宮內(nèi)膜細胞未被免疫細胞清除，而植入卵巢形成囊腫。Myung等[6]將卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫的發(fā)病分為6個階段：①子宮內(nèi)膜細胞脫落;②脫落子宮內(nèi)膜細胞移位至盆腔內(nèi)；③內(nèi)膜細胞逃避免疫監(jiān)視；④內(nèi)膜細胞黏附;⑤血管生成定植細胞存活；⑥周期性出血，其中免疫因素與卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫發(fā)生有密切關系。

Th17和Treg是兩種重要的CD4+T淋巴細胞，正常情況下機體Th17和Treg存在平衡，當Th17和Treg出現(xiàn)失衡時，可引起一系列免疫反應，引發(fā)相應疾病[7]。目前已有研究證實腫瘤、自身免疫疾病、炎癥、感染等均與Th17/Treg失衡有關[8～10]。本研究觀察組Th17%、Th17/Treg高于對照組，Treg%低于對照組，證實卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫患者體內(nèi)存在Th17降低和Treg升高。Th17是由Th0細胞分化而成的輔助性T細胞，正常情況下Th17可以分泌IL-17、IL-22等細胞因子，從而發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能[11]。而Treg則是一種控制體內(nèi)自身免疫反應性的T細胞亞群，可分泌IL-10、TGF-β，發(fā)揮調(diào)節(jié)免疫反應的功能[12]。本研究觀察組Th17升高，Treg降低，提示卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫患者存在Th17功能亢進。進一步分析發(fā)現(xiàn)，觀察組血清IL-17、IL-22水平顯著高于對照組，IL-10、TGF-β水平顯著低于對照組；其中IL-17、IL-22是Th17的主要效應分子，IL-17可促進T淋巴細胞進一步刺激上皮細胞、成纖維細胞、內(nèi)皮細胞增殖，刺激巨噬細胞和黏附分子生成[13]。IL-22亦是一種重要的致炎因子，在類風濕關節(jié)炎、銀屑病、克羅恩病、強制性脊柱炎中存在IL-22異常升高[14～16]。IL-10、TGF-β是Treg的主要效應分子，可發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)和免疫抑制功能。本研究觀察組血清IL-17、IL-22水平升高，IL-10、TGF-β水平降低，是Th17與Treg比例失衡的必然結(jié)果。

ROR-γ是Th17調(diào)控的重要轉(zhuǎn)錄因子，可以進一步誘導IL-17分泌并發(fā)揮免疫功能[17]。同時研究發(fā)現(xiàn)，ROR-γ可以啟動多個信號通路，促進Th17分化，進一步引發(fā)炎癥反應[18]。FoxP3是Treg的特異性核轉(zhuǎn)錄因子，發(fā)揮免疫抑制功能[19]。本研究觀察組異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜ROR-γ mRNA相對表達量均顯著低于對照組，F(xiàn)oxP3 mRNA相對表達量顯著高于對照組，觀察組異位內(nèi)膜ROR-γ mRNA相對表達量顯著低于在位內(nèi)膜，F(xiàn)oxP3 mRNA相對表達量顯著高于在位內(nèi)膜。提示ROR-γ表達異常升高與FoxP3表達異常降低在卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用。

綜上所述，卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫患者外周血Th17/Treg比例免疫調(diào)節(jié)失衡；Th17/Treg比例失衡可能通過調(diào)節(jié)其下游轉(zhuǎn)錄因子及細胞因子表達而促進卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫的發(fā)生、發(fā)展。

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