子宮內(nèi)膜癌組織中miRNA-302c的表達(dá)變化及其意義

杜寧寧，譚文舉，李洪言，付娟娟

(1安徽省亳州市人民醫(yī)院，安徽亳州 236800；2安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院；3安徽醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院)

子宮內(nèi)膜癌組織中miRNA-302c的表達(dá)變化及其意義

杜寧寧1，譚文舉1，李洪言2，付娟娟3

(1安徽省亳州市人民醫(yī)院，安徽亳州236800；2安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院；3安徽醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院)

目的觀察子宮內(nèi)膜癌組織中miRNA-302c的表達(dá)變化，并探討其臨床意義。方法選擇2012年1月～2013年12月收治的51例子宮內(nèi)膜癌患者的手術(shù)切除腫瘤組織標(biāo)本為觀察組，同期因子宮肌瘤行全子宮切除術(shù)的40例患者的正常子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本為對(duì)照組。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)兩組標(biāo)本中的miRNA-302c。分析51例子宮內(nèi)膜癌患者腫瘤組織標(biāo)本miRNA-302c相對(duì)表達(dá)量與臨床病理參數(shù)的關(guān)系。采用受試者工作曲線和最大約登指數(shù)法確定用子宮內(nèi)膜癌組織標(biāo)本miRNA-302c表達(dá)量預(yù)測(cè)患者死亡和復(fù)發(fā)的截?cái)嘀?，將其用截?cái)嘀捣譃楦適iRNA-302c表達(dá)組和低miRNA-302c表達(dá)組，采用Kaplan-Meier法計(jì)算并比較高、低miRNA-302c表達(dá)組的3年累計(jì)生存率和復(fù)發(fā)率。結(jié)果觀察組、對(duì)照組miRNA-302c表達(dá)量分別為1.721±2.804、4.024±6.518，兩組相比P<0.05。51例子宮內(nèi)膜癌患者子宮內(nèi)膜癌組織標(biāo)本miRNA-302c表達(dá)量與臨床分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均<0.05)。用腫瘤組織標(biāo)本miRNA-302c表達(dá)量預(yù)測(cè)患者死亡的截?cái)嘀禐?.568，用其將51例子宮內(nèi)膜癌患者分為高miRNA-302c表達(dá)組(miRNA-302c表達(dá)量<1.568)30例和低miRNA-302c表達(dá)組(miRNA-302c表達(dá)量≥1.568)21例，其3年累計(jì)生存率分別為96.67%(29/30)、90.47%(19/21)，P<0.05。用腫瘤組織標(biāo)本miRNA-302c表達(dá)量預(yù)測(cè)患者復(fù)發(fā)的截?cái)嘀禐?.803，用其將51例子宮內(nèi)膜癌患者分為高miRNA-302c表達(dá)組(miRNA-302c表達(dá)量<1.803)24例和低miRNA-302c表達(dá)組(miRNA-302c表達(dá)量≥1.803)27例，其復(fù)發(fā)率分別為16.67%(4/24)、29.63%(8/27)，P<0.05。結(jié)論子宮內(nèi)膜癌組織miRNA-302c表達(dá)降低。檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌組織miRNA-302c表達(dá)有助于判斷子宮內(nèi)膜癌的臨床分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)測(cè)預(yù)后、復(fù)發(fā)。

子宮內(nèi)膜癌；微小RNA；微小RNA-302c

子宮內(nèi)膜癌是臨床上較為常見(jiàn)的女性生殖道腫瘤之一，主要是指原發(fā)于子宮內(nèi)膜的一組上皮性惡性腫瘤[1]。有研究報(bào)道顯示，子宮內(nèi)膜癌為女性生殖道的三大惡性腫瘤之一，其發(fā)病率在所有女性腫瘤中位居第四，僅低于大腸癌、肺癌以及乳腺癌[2]。因此，對(duì)患者進(jìn)行早期有效的診斷及治療顯得尤為重要。而明確其具體的發(fā)病機(jī)制是臨床有效治療的必經(jīng)途徑[3]。近年來(lái)研究報(bào)道，在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中，微小RNA(miRNA)表達(dá)譜具有顯著的異常[4]。miRNA-302c參與了卵巢癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程[5]。但是目前子宮內(nèi)膜癌組織中miRNA-302c表達(dá)的變化及其臨床意義尚未見(jiàn)研究報(bào)道。我們對(duì)此進(jìn)行了研究。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2012年1月～2013年12月收治的51例子宮內(nèi)膜癌患者的手術(shù)切除腫瘤組織標(biāo)本為觀察組?；颊吣挲g51～74(61.2±4.2)歲。均根據(jù)2009年國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟所制定的子宮內(nèi)膜癌診斷及分期標(biāo)準(zhǔn)確診，臨床分期Ⅰ期37例，Ⅱ期4例，Ⅲ期5例，Ⅳ期5例；分化程度低分化5例，中分化18例，高分化28例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移6例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移45例；有肌層浸潤(rùn)4例，無(wú)肌層浸潤(rùn)47例?；颊呤中g(shù)前均未行激素治療及放化療。隨訪3年，臨床及隨訪資料齊全。另取同期因子宮肌瘤行全子宮切除術(shù)的40例患者的正常子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本為對(duì)照組，患者年齡53～73(61.3±4.3)歲。兩組患者年齡相比P>0.05。本研究已經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，入組者均已簽署知情同意書(shū)。

1.2 miRNA-302c檢測(cè)方法 采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法。先參照RNAiso Plus試劑盒說(shuō)明書(shū)操作提取總RNA，然后采用Takara公司生產(chǎn)的miRNA專用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒行逆轉(zhuǎn)錄，反應(yīng)體系(10 μL)為mRQ Buffer(2×)5 μL，RNA Sample 3.75 μL，mRQ Enzyme 1.25 μL。反應(yīng)條件為37 ℃ 1 h，85 ℃ 5 min。然后行實(shí)時(shí)熒光定量PCR。反應(yīng)體系(20 μL)為SUBR Premix Ex Taq Ⅱ(2×)10 μL，PCR For-ward Primer(10 μmol/L)0.8 μL，PCR Reverse Primer(10 μmol/L)0.8 μL，R0X Reference Dye Ⅱ(50×)0.4 μL，DNA2.0 μL，ddH2O 6.0 μL。反應(yīng)條件:95 ℃ 30 s，95 ℃ 3 s，61 ℃ 30 s，重復(fù)40個(gè)循環(huán)。以U6為內(nèi)參照，采用2-△△Ct表示miRNA-302c表達(dá)量。

1.3 子宮內(nèi)膜癌組織miRNA-302c表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌預(yù)后和復(fù)發(fā)的關(guān)系分析方法 繪制用子宮內(nèi)膜癌組織標(biāo)本miRNA-302c表達(dá)量預(yù)測(cè)患者死亡和復(fù)發(fā)的受試者工作曲線，用最大約登指數(shù)法確定截?cái)嘀担瑩?jù)此將子宮內(nèi)膜癌患者分為高、低miRNA-302c表達(dá)組，比較3年累計(jì)生存率和復(fù)發(fā)率。

2 結(jié)果

2.1 兩組miRNA-302c表達(dá)量比較 觀察組、對(duì)照組miRNA-302c相對(duì)表達(dá)量分別為1.721±2.804、4.024±6.518，兩組相比P<0.05。

2.2 子宮內(nèi)膜癌組織miRNA-302c表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 見(jiàn)表1。子宮內(nèi)膜癌患者子宮內(nèi)膜癌組織標(biāo)本miRNA-302c表達(dá)量與臨床分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均<0.05)，與肌層浸潤(rùn)無(wú)關(guān)(P>0.05)。

表1 子宮內(nèi)膜癌組織miRNA-302c表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3 子宮內(nèi)膜癌組織miRNA-302c表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌預(yù)后和復(fù)發(fā)的關(guān)系 用子宮內(nèi)膜癌組織標(biāo)本miRNA-302c表達(dá)量預(yù)測(cè)患者死亡的截?cái)嘀禐?.568，用其將51例子宮內(nèi)膜癌患者分為高miRNA-302c表達(dá)組(miRNA-302c表達(dá)量<1.568)30例和低miRNA-302c表達(dá)組(miRNA-302c表達(dá)量≥1.568)21例，其3年累計(jì)生存率分別為96.67%(29/30)、90.47%(19/21)，P<0.05。用子宮內(nèi)膜癌組織標(biāo)本miRNA-302c表達(dá)量預(yù)測(cè)患者復(fù)發(fā)的截?cái)嘀禐?.803，用其將51例子宮內(nèi)膜癌患者分為高miRNA-302c表達(dá)組(miRNA-302c表達(dá)量≥1.803)24例和低miRNA-302c表達(dá)組(miRNA-302c表達(dá)量<1.803)27例，其復(fù)發(fā)率分別為16.67%(4/24)、29.63%(8/27)，P<0.05。

3 討論

子宮內(nèi)膜癌占所有女性生殖道惡性腫瘤的20%～30%，且隨著我國(guó)人們生活水平的不斷改變以及生活習(xí)慣的逐漸變化，該病發(fā)病率正呈逐年上升趨勢(shì)，甚至開(kāi)始趨于年輕化，嚴(yán)重影響了我國(guó)婦女的身心健康[6，7]。雖然大部分子宮內(nèi)膜患者均存在顯著的臨床癥狀，可得到早期有效的診斷以及治療，但仍有部分患者在就診時(shí)便已是晚期。由此，子宮內(nèi)膜癌的早期發(fā)現(xiàn)以及治療對(duì)改善疾病預(yù)后以及延長(zhǎng)患者生存時(shí)間具有極其重要的意義[8]。近年來(lái)隨著人們對(duì)miRNA分子的作用以及機(jī)制了解的逐漸深入，其已成為臨床研究腫瘤發(fā)生、發(fā)展的熱點(diǎn)[9，10]。miRNA是由22～25個(gè)核苷酸組成的一種非編碼單鏈小RNA，其主要作用是通過(guò)和靶基因mRNA產(chǎn)生作用，從而使得其在轉(zhuǎn)錄后的翻譯過(guò)程中受到抑制或被降解，進(jìn)一步降低了其蛋白表達(dá)水平，最終在多項(xiàng)生命過(guò)程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用[11，12]。有研究報(bào)道顯示，miRNA-302c會(huì)對(duì)細(xì)胞周期產(chǎn)生一定影響，同時(shí)在染色體結(jié)構(gòu)的形成以及p63基因的蛋白、mRNA表達(dá)方面均具有一定的作用[13，14]。國(guó)內(nèi)外已有研究報(bào)道顯示，miRNA-302c在多種惡性腫瘤中具有抑制腫瘤細(xì)胞增長(zhǎng)殖的作用。

本研究結(jié)果顯示子宮內(nèi)膜癌組織中miRNA-302c表達(dá)低于正常子宮內(nèi)膜組織。這提示miRNA-302c表達(dá)下調(diào)與子宮內(nèi)膜癌有關(guān)。安琪等[15，16]研究顯示，miRNA-302c在肝癌細(xì)胞中發(fā)揮的作用是通過(guò)抑制異黏蛋白的表達(dá)，從而對(duì)內(nèi)皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化產(chǎn)生一定的抑制作用，進(jìn)一步對(duì)肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)繁殖產(chǎn)生明顯的抑制作用。周胤健等[17，18]研究證實(shí)，乳腺癌細(xì)胞中miRNA-302c可有效抑制下游基因ERα表達(dá)。結(jié)合本研究結(jié)果，筆者認(rèn)為在子宮內(nèi)膜癌組織中，miRNA-302c也可能是通過(guò)與靶基因的結(jié)合，從而達(dá)到抑制腫瘤生長(zhǎng)繁殖的目的。

本研究結(jié)果顯示，臨床分期Ⅰ期者子宮內(nèi)膜癌組織miRNA-302c表達(dá)量高于Ⅱ～Ⅳ期者，低分化子宮內(nèi)膜癌組織miRNA-302c表達(dá)量低于中、高分化患者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的子宮內(nèi)膜癌組織miRNA-302c表達(dá)量低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者。表明miRNA-302c與子宮內(nèi)膜癌的臨床分期、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，且miRNA-302c可能發(fā)揮類似抑癌基因的作用。王穎等[19，20]認(rèn)為，腫瘤細(xì)胞中miRNA-302c可直接或間接發(fā)揮抑癌基因的作用，并以此對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖、分化以及凋亡進(jìn)行調(diào)節(jié)，參與了腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲以及轉(zhuǎn)移。本研究結(jié)果與其相似。這提示我們檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌組織miRNA-302c表達(dá)有助于判斷子宮內(nèi)膜癌的臨床分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。目前對(duì)于miRNA-302c如何調(diào)控細(xì)胞的增殖、分化以及凋亡仍不清楚，可以確定的是miRNA-302c可以通過(guò)與多種癌基因的3′非編碼區(qū)片段結(jié)合，從而阻斷基因的表達(dá)，但哪些基因是miRNA-302c的作用靶點(diǎn)仍不清楚，而研究其作用機(jī)制將是我們今后研究的重點(diǎn)，這有利于為子宮內(nèi)膜癌的早期診斷以及有效治療。

本研究結(jié)果顯示，子宮內(nèi)膜癌組織miRNA-302c表達(dá)與患者預(yù)后和復(fù)發(fā)有關(guān)，miRNA-302c表達(dá)相對(duì)較低者復(fù)發(fā)較多，預(yù)后不佳。這進(jìn)一步證明miRNA-302c在子宮內(nèi)膜癌組織中具有類似抑癌基因的功能。檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌組織miRNA-302c有助于判斷子宮內(nèi)膜癌組織的預(yù)后和復(fù)發(fā)情況，具有重要的臨床意義。

[1] 張鳳仙,張建,陳素蕓,等.18F-FDG PET/CT顯像SUVmax對(duì)子宮內(nèi)膜癌術(shù)前浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移的評(píng)估價(jià)值[J].中華核醫(yī)學(xué)與分子影像雜志,2017,37(2):75-80.

[2] 孔祥怡.微小RNA與子宮內(nèi)膜癌關(guān)系的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展,2013,22(10):843-845.

[3] Wilczynski M, Danielska J, Dzieniecka M, et al. Prognostic and clinical significance of miRNA-205 in endometrioid endometrial cancer[J]. PLoS One, 2016,11(10):164687-164688.

[4] Alowayed N, Salker MS, Zeng N, et al. LEFTY2 controls migration of human endometrial cancer cells via focal adhesion kinase activity (FAK) and miRNA-200a[J]. Cell Physiol Biochem, 2016,39(3):815-826.

[5] Dong P, Ihira K, Xiong Y, et al. Reactivation of epigenetically silenced miR-124 reverses the epithelial-to-mesenchymal transition and inhibits invasion in endometrial cancer cells via the direct repression of IQGAP1 expression[J]. Oncotarget, 2016,7(15):20260-20270.

[6] 饒?jiān)葡?子宮內(nèi)膜癌患者血清 HE4、CP2、HCgp-39含量與腫瘤惡性程度的關(guān)系探究[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2017,23(4):444-447.

[7] 葉文蔚,鄭飛云,程愛(ài)花,等.miR-205對(duì)Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生物學(xué)行為的調(diào)空作用研究[J].醫(yī)學(xué)研究雜志,2016,45(7):47-51.

[8] 張金霞,林明燕,林亞,等.miR-34c抑制人子宮內(nèi)膜癌的機(jī)制分析[J].中華全科醫(yī)學(xué),2016,14(8):1282-1285.

[9] 李飄飄,包珊.子宮內(nèi)膜癌中miRNA與自噬的研究進(jìn)展[J].海南醫(yī)學(xué),2014,25(21):3201-3203.

[10] 王淑芳,馮玉珍,霍新龍,等.MicroRNA在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展及臨床診治中的研究[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2013,10(6):30-32.

[11] 楊艷.食管癌相關(guān)微RNA研究進(jìn)展[J].腫瘤研究與臨床,2017,29(2):129-133.

[12] 孔祥怡,周懷君.miRNA-30c及其靶基因MTA-1在子宮內(nèi)膜癌裸鼠皮下移植瘤中的作用[J].東南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2016,35(3):364-370.

[13] 李華偉,張哲.miR-302a在胃癌中表達(dá)及其對(duì)胃癌細(xì)胞凋亡與細(xì)胞周期影響[J].臨床軍醫(yī)雜志,2017,45(1):42-45.

[14] Gui J, Yan F, Yu B, et al. MicroRNA miR-302?inhibits the tumorigenicity of endometrial cancer cells by suppression of Cyclin D1 and CDK1[J]. Cancer Lett, 2014,345(01):39-47.

[15] 安琪,馬曉欣.miRNA-302 c在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及其與臨床病理資料的關(guān)系[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2017,25(1):127-130.

[16] 李寶恒,宋巖峰.microRNA在婦科疾病中的作用[J].中華臨床醫(yī)師雜志(電子版),2016,10(6):844-848.

[17] 周胤健,杜英,梅麗娜,等.子宮內(nèi)膜癌microRNA表達(dá)譜的初步研究[J].中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志,2014,28(4):280-282.

[18] Zhou C, Gu HF, Rong T, et al. MicroRNA 302/367 cluster effectively facilitates direct reprogramming from human fibroblasts into functional neurons[J]. Stem Cells Dev, 2015,24(23):2746-2755.

[19] 王穎,阿迪拉·斯依提,張曉明,等.子宮內(nèi)膜癌微小RNA的表達(dá)特點(diǎn)及其臨床意義[J].中華病理學(xué)雜志,2014,43(2):88-94.

[20] 劉霞,夏偉,邵寧生,等.微小RNA-200b對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中TIMP2基因表達(dá)的影響[J].中華婦產(chǎn)科雜志,2013,48(11):867-869.

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.35.015

R737.35

B

1002-266X(2017)35-0047-03

2017-05-23)

安徽省科技廳科技攻關(guān)項(xiàng)目(1604a0802098) 。