宮頸癌組織長(zhǎng)鏈非編碼RNA XIST、小分子RNA miR-101-3p表達(dá)變化及其意義

劉麗丹，黃浩梁

(武漢市第一醫(yī)院，武漢 430022)

宮頸癌組織長(zhǎng)鏈非編碼RNA XIST、小分子RNA miR-101-3p表達(dá)變化及其意義

劉麗丹，黃浩梁

(武漢市第一醫(yī)院，武漢430022)

目的觀察宮頸癌組織長(zhǎng)鏈非編碼RNA(LncRNA)X染色體失活特異轉(zhuǎn)錄子(XIST)、小分子RNA miR-101-3p表達(dá)變化，并探討其臨床意義。方法選取91例宮頸癌患者的宮頸癌組織標(biāo)本為觀察組，癌旁正常組織(距離宮頸癌組織>5cm且經(jīng)病例檢查證實(shí)為正常組織)標(biāo)本為對(duì)照組。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)兩組標(biāo)本中的XIST、miR-101-3p表達(dá)，并分析其與宮頸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果觀察組、對(duì)照組XIST表達(dá)量分別為8.97±3.56、7.01±3.82，miR-101-3p表達(dá)量分別為8.24±4.22、10.15±3.97。觀察組XIST表達(dá)量高于對(duì)照組(P<0.05)，miR-101-3p表達(dá)量低于對(duì)照組(P<0.05)。Pearson積矩相關(guān)分析結(jié)果顯示宮頸癌組織miR-101-3p、XIST表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)性(r=-0.716，P<0.05)。腫瘤最大徑≥4 cm、FIGO分期Ⅲ+Ⅳ期、低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌組織中miR-101-3p表達(dá)量分別低于于腫瘤最大徑<4 cm、FIGO分期Ⅰ+Ⅱ期、中高分化、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌組織(P均<0.05)，XIST表達(dá)量分別高于于腫瘤最大徑<4 cm、FIGO 分期Ⅰ+Ⅱ期、中高分化、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸癌組織(P均<0.05)。結(jié)論宮頸癌組織XIST表達(dá)升高、miR-101-3p表達(dá)降低。檢測(cè)宮頸組織XIST、miR-101-3p有助于宮頸癌的病情判斷。

宮頸癌；長(zhǎng)鏈非編碼RNA；X染色體失活特異轉(zhuǎn)錄子；小分子RNA；miR-101-3p

目前對(duì)腫瘤發(fā)生原因的研究已經(jīng)涉及小分子RNA(miRNA)和長(zhǎng)鏈非編碼RNA(LncRNA)[1,2]。

小分子RNA101(miR-101)廣泛存在于真核生物細(xì)胞，可作為抑癌因子在乳腺癌[3]、胃癌[4]等惡性腫瘤中異常表達(dá)，miR-101-3p是miR-101的一種活性形式[5]。目前尚不清楚宮頸癌組織中miR-101表達(dá)變化情況。X染色體失活特異轉(zhuǎn)錄因子(XIST)表達(dá)異常與肺癌和胰腺癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)[6，7]。目前宮頸癌組織中XIST表達(dá)變化也不清楚。本課題組前期研究用ELM數(shù)據(jù)庫(kù)分析發(fā)現(xiàn)，miR-101和XIST存在4個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，筆者推測(cè)二者可能存在相互作用。本研究觀察了宮頸癌組織中miR-1-1-3p、XIST的表達(dá)變化，并分析了宮頸癌組織中miR-101、XIST表達(dá)與宮頸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系，旨在明確miR-1-1-3p、XIST在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的作用及檢測(cè)宮頸癌組織miR-1-1-3p、XIST表達(dá)的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2016年1月～2017年1月收治的91例宮頸癌患者的手術(shù)切除宮頸癌組織標(biāo)本為觀察組，癌旁正常組織標(biāo)本(距離宮頸癌組織>5 cm且經(jīng)病例檢查證實(shí)為正常組織)為對(duì)照組?；颊呒{入標(biāo)準(zhǔn)：①宮頸癌組織病理檢查確定為宮頸癌；②術(shù)前未行任何放、化療治療；③術(shù)前未接受其它可能影響本研究結(jié)果的抗腫瘤藥物治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①妊娠期以及哺乳期的婦女；②心臟功能不全者；③肝、腎功能障礙者；④臨床病歷資料記錄不完整者；⑤合并有其它惡性腫瘤的患者。入組患者年齡39～76(63.24±11.87)歲；腫瘤類型為鱗癌55例，腺癌35例；病灶最大徑<4 cm者49例，≥4 cm者 42例；國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)分期[8]Ⅰ+Ⅱ期38例，Ⅲ+Ⅳ期53例；分級(jí)程度低分化31例，中、高分化60例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移33例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移58例。本研究已獲我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)?；颊呋蚱浼覍僖押炇鹬橥鈺?shū)。

1.2 miR-101、XIST檢測(cè)方法 參照RNA提取試劑盒(諾維贊生物公司)說(shuō)明書(shū)操作提取總RNA。按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(諾維贊生物公司)說(shuō)明書(shū)操作進(jìn)行RNA的反轉(zhuǎn)錄。反應(yīng)體系包括總RNA 1 μg、2×RT mix 10 μL、mix 2 μL、oligo dNTPs 1 μL、引物 1 μL共計(jì)20 μL。反應(yīng)條件25 ℃ 5 min，50 ℃ 15 min，85 ℃ 5 min。按照熒光定量PCR試劑盒(諾維贊生物公司)說(shuō)明書(shū)操作進(jìn)行熒光定量PCR，反應(yīng)體系包括反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物2 μL、正向引物2 μL、反向引物2 μL、2×mix 10 μL、純水4 μL，設(shè)定38個(gè)循環(huán)，循環(huán)的程序?yàn)?5 ℃ 30 s、95 ℃ 5 s、60 ℃ 30 s。以GAPDH為內(nèi)參照。檢測(cè)XIST所需引物采用Primer Premier 5.0軟件設(shè)計(jì)，并由上海生工生物工程公司合成。XIST上游引物序列5′-AATGGAACGGGCTGAGTTTTAG-3′，下游引物序列5′-TCATCCGCTTGCGTTCATAG-3′；內(nèi)參GAPDH上游引物序列5′-GGAAGGACTCATGACCACAGTCC-3′，下游引物序列5′-TCGCTGTGAAGTCAGAGGAGACC-3′。檢測(cè)miR-101-3p所需引物采用TaqMan公司生產(chǎn)的miR-101-3p檢測(cè)探針。以2-ΔΔCt表示miR-101、XIST表達(dá)量。

2 結(jié)果

2.1 兩組miR-101-3p、XIST表達(dá)比較 觀察組、對(duì)照組XIST表達(dá)量分別為(8.97±3.56)、(7.01±3.82)，miR-101-3p表達(dá)量分別為(8.24±4.22)、(10.15±3.97)。觀察組XIST表達(dá)量高于對(duì)照組(P<0.05)，miR-101-3p表達(dá)量低于對(duì)照組(P<0.05)。

2.2 觀察組miR-101-3p、XIST表達(dá)量的相關(guān)性 Pearson積矩相關(guān)分析結(jié)果顯示宮頸癌組織miR-101-3p、XIST表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)性(r=-0.716，P<0.05)。

2.3 宮頸癌組織miR-101-3p、XIST表達(dá)與宮頸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 見(jiàn)表1。腫瘤最大徑≥4 cm、FIGO分期Ⅲ+Ⅳ期、低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌組織中miR-101-3p表達(dá)量分別低于于腫瘤最大徑<4 cm、FIGO分期Ⅰ+Ⅱ期、中高分化、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌組織(P均<0.05)，XIST表達(dá)量分別高于于腫瘤最大徑<4 cm、FIGO分期Ⅰ+Ⅱ期、中高分化、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸癌組織(P均<0.05)；不同年齡、病理類型宮頸癌組織中miR-101-3p、XIST表達(dá)量相比P均>0.05。

表1 宮頸癌組織XIST、miR-101-3p表達(dá)與宮頸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

3 討論

miRNA是內(nèi)源性的非編碼小RNA，廣泛存在于真核生物中，它與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，腫瘤細(xì)胞中的miRNA異常改變可以介導(dǎo)某些基因的表達(dá)，進(jìn)而調(diào)控惡性腫瘤細(xì)胞的功能[12]。miR-101作為抑癌因子在乳腺癌[13]、肝癌[14]等惡性腫瘤細(xì)胞呈低表達(dá)，并調(diào)控其增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等。MiR-101包括miR-101-3P和miR-101-5p兩種成熟的形式，有研究發(fā)現(xiàn)miR-101-3p的下調(diào)可以促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖、遷移，并抑制細(xì)胞的凋亡[15]。在正常雌性哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，XIST是維持兩條X染色體中一條沉默的關(guān)鍵因素，其表達(dá)異常會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄過(guò)程異常而向惡性轉(zhuǎn)變。文獻(xiàn)報(bào)道，XIST表達(dá)異常與肺癌、乳腺癌等密切相關(guān)[17]。本研究首先觀察了宮頸癌組織miR-101-3p、XIST表達(dá)變化，結(jié)果顯示，與癌旁組織比較，宮頸癌組織中miR-101-3p表達(dá)下調(diào)，XIST表達(dá)上調(diào)，提示miR-101-3p、XIST參與了宮頸癌的發(fā)病過(guò)程。Sheng等[4]的研究結(jié)果顯示，miR-101-3p表達(dá)下調(diào)參與了肝癌的增殖、遷移。魏偉等[6]的研究發(fā)現(xiàn)，XIST在胰腺癌組織中呈高表達(dá)，可能參與了胰腺癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程。亦與本研究結(jié)果相呼應(yīng)。Pearson積矩相關(guān)分析結(jié)果顯示宮頸癌組織中miR-101-3p與XIST的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。筆者在前期研究中利用ELM數(shù)據(jù)庫(kù)分析發(fā)現(xiàn)，miR-101和XIST存在4個(gè)結(jié)合位點(diǎn)。結(jié)合本研究結(jié)果，筆者認(rèn)為XIST、miR-101-3p共同參與了宮頸癌發(fā)生過(guò)程，但是其中究竟是XIST調(diào)控miR-101-3p還是miR-101-3p調(diào)控XIST目前尚不清楚。

本研究結(jié)果顯示，相對(duì)于腫瘤最大徑<4 cm、FIGO分期Ⅰ+Ⅱ期、中高分化、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌組織腫瘤最大徑≥4 cm、FIGO分期Ⅲ+Ⅳ期、低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌組織中miR-101-3p低表達(dá)、XIST高表達(dá)更為顯著，說(shuō)明miR-101-3p、 XIST與宮頸癌患者臨床病理參數(shù)密切相關(guān)，腫瘤越大、臨床分期越晚、腫瘤分化程度越差以及有區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移時(shí)，兩種蛋白的表達(dá)異常更為明顯，提示臨床檢測(cè)宮頸組織miR-101-3p、XIST有助于宮頸癌的病情判斷。

綜上所述，宮頸癌組織miR-101-3p表達(dá)下降、 XIST表達(dá)升高。檢測(cè)宮頸癌組織miR-101-3p、 XIST表達(dá)有助于判斷患者病情。

[1] Huang L, Huang Z, Fan Y, et al. FOXC1 promotes proliferation and epithelial-mesenchymal transition in cervical carcinoma through the PI3K-AKT signal pathway[J].Am J Transl Res, 2017,9(3):1297-1306.

[2] 劉瀟陽(yáng),張?jiān)?中國(guó)人群宮頸癌p63蛋白表達(dá)的Meta分析[J].診斷病理學(xué)雜志,2014,32(5):267-269.

[3] Liu P, Ye F, Xie X, et al. mir-101-3p is a key regulator of tumor metabolism in triple negative breast cancer targeting AMPK[J].Oncotarget, 2016,7(23):35188-35198.

[4] Sheng Y, Li J, Zou C, et al. Downregulation of miR-101-3p by hepatitis B virus promotes proliferation and migration of hepatocellular carcinoma cells by targeting Rab5a[J]. Arch Virol, 2014,159(9):2397-2410.

[5] Cui Y, Zhang F, Zhu C, et al. Upregulated lncRNA SNHG1 contributes to progression of non-small cell lung cancer through inhibition of miR-101-3p and activation of Wnt/β-catenin signaling pathway[J]. Oncotarget, 2017,8(11):17785-17794.

[6] 魏偉,楊波,唐翎.長(zhǎng)鏈非編碼RNA XIST在胰腺癌中的表達(dá)及意義[J].中國(guó)普通外科雜志,2017,26(3):304-310.

[7] Wang H, Shen Q, Zhang X, et al. The long non-coding RNA XIST controls non-small cell lung cancer proliferation and invasion by modulating miR-186-5p[J]. Cell Physiol Biochem, 2017,41(6):2221-2229.

[8] Reisenauer C, Wallwiener D, Brucker SY, et al. Pelvic organ prolapse stage Ⅳ and cervical cancer FIGO Ⅱa[J]. Arch Gynecol Obstet, 2017,295(6):1303-1304.

[9] 趙珊,姚德生,陳軍瑩,等.血清miR-203與宮頸癌臨床病理特征的關(guān)系[J].重慶醫(yī)學(xué),2014,43(8):972-975.

[10] 韓金利,楊冉,崔志英.宮頸癌患者血清CRP水平與臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系[J].中國(guó)婦幼保健,2015,30(17):2728-2730.

[11] Kurita T, Matsuura Y, Koi C, et al. The relationship between positive peritoneal cytology and the prognosis of patients with uterine cervical cancer[J].Acta Cytol, 2015,59(2):201-206.

[12] Loosen SH, Schueller F, Trautwein C, et al. Role of circulating microRNAs in liver diseases[J]. World J Hepatol, 2017,9(12):586-594.

[13] Wang L, Li L, Guo R, et al. miR-101 promotes breast cancer cell apoptosis by targeting Janus kinase 2[J]. Cell Physiol Biochem, 2014,34(2):413-422.

[14] Xu F, Liao JZ, Xiang GY, et al. MiR-101 and doxorubicin codelivered by liposomes suppressing malignant properties of hepatocellular carcinoma[J].Cancer Med, 2017,6(3):651-661.

[15] Sheng Y, Ding S, Chen K, et al. Functional analysis of miR-101-3p and Rap1b involved in hepatitis B virus-related hepatocellular carcinoma pathogenesis[J]. Biochem Cell Biol, 2014,92(2):152-162.

[16] Hu CE, Du PZ, Zhang HD, et al. Long noncoding RNA CRNDE promotes proliferation of gastric cancer cells by targeting miR-145[J]. Cell Physiol Biochem,2017,42(1):13-21.

[17] Schouten PC, Vollebergh MA, Opdam M, et al. High XIST and low 53BP1 expression predict poor outcome after high-dose alkylating chemotherapy in patients with a BRCA1-like breast cancer[J]. Mol Cancer Ther, 2016,15(1):190-198.

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.35.014

R737.3

B

1002-266X(2017)35-0044-03

2017-06-02)

湖北省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2015CFB306)。