卵巢癌組織己糖激酶2、6磷酸果糖激酶1、丙酮酸激酶表達變化及其意義

崔英,魏順英

(青海紅十字醫(yī)院，西寧810000)

卵巢癌組織己糖激酶2、6磷酸果糖激酶1、丙酮酸激酶表達變化及其意義

崔英,魏順英

(青海紅十字醫(yī)院，西寧810000)

目的觀察卵巢癌組織中己糖激酶2(HK-2)、6磷酸果糖激酶1(PFK1)、丙酮酸激酶(PK)表達變化，并探討其意義。方法采用免疫組化法檢測100例卵巢癌患者腫瘤組織(觀察組)及癌旁組織(對照組)中的HK-2、PFK1、PK。分析卵巢癌組織中HK-2、PFK1、PK表達與卵巢癌臨床病病理參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果觀察組HK-2表達陽性56例(56%)、PFK1表達陽性62例(62%)、PK表達陽性53例(53%)，對照組分別為8例(8%)、11例(11%)、10例(10%)。觀察組HK-2、PFK1、PK陽性表達率高于對照組，P均<0.05。HK-2、PFK1、PK陽性表達率高于對照組，P<0.05。卵巢癌組織中HK-2、PFK1、PK陽性表達與卵巢癌臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠處轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均<0.05)，與患者年齡、組織學(xué)類型、分化程度無關(guān)(P均>0.05)。HK-2、PFK1、PK表達陽性和HK-2、PFK1、PK表達陰性的卵巢癌患者2年累積復(fù)發(fā)率相比P均>0.05。結(jié)論卵巢癌組織HK-2、PFK1、PK表達上調(diào)。檢測卵巢癌組織HK-2、PFK1、PK有助于判斷卵巢癌患者病情。

卵巢癌；糖酵解；己糖激酶2；6磷酸果糖激酶1；丙酮酸激酶

腫瘤細(xì)胞的代謝與正常細(xì)胞不同，即使在有足夠氧氣的情況下依然保持著高度的糖酵解，即Warburg效應(yīng)[1～4]，Warburg效應(yīng)是惡性腫瘤細(xì)胞的特征性表現(xiàn)之一。糖酵解過程中有己糖激酶2(HK-2)、6磷酸果糖激酶1(PFK1)、丙酮酸激酶(PK)三個限速酶。文獻報道，HK-2、PFK1、PK在多形性膠質(zhì)細(xì)胞瘤中呈高表達，且與腫瘤的發(fā)生發(fā)展和預(yù)后密切相關(guān)[5，6]。但是尚未見有關(guān)卵巢癌組織中HK-2、PFK1、PK表達變化及其臨床意義的相關(guān)研究。本研究觀察了卵巢癌組織中HK-2、PFK1、PK表達變化，并分析卵巢癌組織HK-2、PFK1、PK表達與患者年齡、臨床分期、組織學(xué)類型、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)等的關(guān)系?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇我院2011年9月～2014年9月收治的病理資料及隨訪資料完整的100例卵巢癌患者?；颊吣挲g24～73(50.6±5.3)歲。手術(shù)切除的卵巢癌組織標(biāo)本病理檢查均證實為單一的卵巢癌。組織學(xué)類型為漿液性51例、黏液性49例。FIGO臨床分期Ⅰ期18例、Ⅱ期27例、Ⅲ期38例、Ⅳ期17例。分化程度低分化22例、中分化35例、高分化43例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移58例、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移42例。有遠處轉(zhuǎn)移55例、無遠處轉(zhuǎn)移45例。隨訪2年，復(fù)發(fā)54例。取其手術(shù)切除卵巢癌組織標(biāo)本為觀察組，癌旁正常卵巢組織(病理檢查證實為正常卵巢組織)標(biāo)本為對照組。

1.2 兩組HK-2、PFK1、PK檢測方法 采用免疫組化染色法。根據(jù)試劑盒說明書操作。兩組標(biāo)本切片經(jīng)二甲苯脫蠟，在100%、95%、85%乙醇浸泡水化，在98℃的枸櫞酸鈉溶液(0.01 mol/L，pH值6.0)中浸泡15 min進行抗原修復(fù)，山羊血清封閉，一抗(1∶200)4 ℃孵育過夜，二抗(1∶500)室溫孵育1 h，加入鏈霉親和素-過氧化物酶，DAB顯色。讀片時隨機選取10個視野(奧林巴斯顯微鏡CX31)。由同一醫(yī)師進行觀察。細(xì)胞膜和(或)細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性染色。陽性細(xì)胞百分率>75%為3分，25%～75%為2分，<25%為1分；染色強度淺棕黃色為1分，棕黃色為2分，深棕黃色為3分。兩項得分乘積≥4為陽性表達，小于4分為陰性表達。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件。計量資料組間比較用χ2檢驗和Fisher確切概率法。P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組HK-2、PFK1、PK表達比較 觀察組HK-2表達陽性56例(56%)、PFK1表達陽性62例(62%)、PK表達陽性53例(53%)，對照組分別為8例(8%)、11例(11%)、10例(10%)。觀察組HK-2、PFK1、PK陽性表達率高于對照組，P均<0.05。

2.2 卵巢癌組織HK-2、PFK1、PK表達與卵巢癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 卵巢癌組織中HK-2、PFK1、PK陽性表達與卵巢癌FIGO臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠處轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均<0.05)，與患者年齡、組織學(xué)類型、分化程度無關(guān)(P>0.05)。詳見表1。

表1 卵巢癌組織HK-2、PFK1、PK表達與卵巢癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3 卵巢癌組織HK-2、PFK1、PK表達與患者復(fù)發(fā)的關(guān)系 本組100例患者隨訪2年，復(fù)發(fā)54例，其中HK-2陽性表達的56例患者中復(fù)發(fā)29例(51.78%)，HK-2陰性表達的44例患者中復(fù)發(fā)25例(56.82%)，HK-2陽性、陰性表達患者2年累積復(fù)發(fā)率相比，P>0.05；PFK1陽性表達的62例患者中復(fù)發(fā)33例(53.22%)，PFK1陰性表達的38例患者中復(fù)發(fā)21例(55.26%)，PFK1陽性、陰性表達患者2年累積復(fù)發(fā)率相比，P>0.05；PK陽性表達的53例患者中復(fù)發(fā)28例(52.83%)，PK陰性表達的47例患者中復(fù)發(fā)21例(55.32%)，PK陽性、陰性表達患者2年累積復(fù)發(fā)率相比，P>0.05。

3 討論

腫瘤細(xì)胞的代謝與正常細(xì)胞不同，主要依靠糖酵解獲得能量。HK-2、PFK1、PK作為糖酵解過程中的關(guān)鍵酶，與惡性腫瘤關(guān)系最密切，在多種惡性腫瘤組織中呈高表達，并與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。HK-2、PFK1、PK可以通過調(diào)控腫瘤細(xì)胞的糖酵解、改變腫瘤細(xì)胞能量代謝水平，進而在腫瘤細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移和凋亡過程中也發(fā)揮著重要作用。如HK-2、PK在膽管癌中高表達，抑制HK-2、PK可抑制膽管癌細(xì)胞的生長和侵襲遷移能力[7]。PFK1在肝癌細(xì)胞的糖代謝和細(xì)胞凋亡中發(fā)揮重要作用，抑制PFK1可引起肝癌細(xì)胞凋亡[8]。此外，在結(jié)直腸癌、口腔癌、前列腺癌等的研究中，也有類似發(fā)現(xiàn)[9～12]。這提示我們HK-2、PFK1、PK有可能也是卵巢癌的治療靶點。

本研究結(jié)果顯示，卵巢癌組織中HK-2、PFK1、PK高表達，而在癌旁組織中幾乎不表達，提示HK-2、PFK1、PK參與了卵巢癌的發(fā)病過程。本研究中我們還分析了HK-2、PFK1、PK陽性表達與卵巢癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)HK-2、PFK1、PK陽性表達與患者的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠處轉(zhuǎn)移有關(guān)，而與年齡、組織學(xué)類型、分化程度無關(guān)，說明HK-2、PFK1、PK在卵巢癌進展和轉(zhuǎn)移中也發(fā)揮一定作用，提示我們檢測卵巢癌組織HK-2、PFK1、PK表達有助于判斷卵巢癌患者病情。本研究未發(fā)現(xiàn)卵巢癌組織HK-2、PFK1、PK表達與患者復(fù)發(fā)有相關(guān)性，這與Suh等[13]的報道不一致。Suh等[13]研究發(fā)現(xiàn)，HK-2、PFK1、PK高表達與卵巢癌化療耐藥、復(fù)發(fā)密切相關(guān)。造成這種差異的原因有多種可能，筆者認(rèn)為研究對象不同可能是造成結(jié)果差異的重要原因。本研究的對象是中國人群，Suh等[13]的研究對象是韓國人群。HK-2、PFK1、PK表達與卵巢癌患者的化療敏感性及復(fù)發(fā)的關(guān)系尚需后續(xù)更深入的研究。

能量代謝是腫瘤治療的重要靶點，抑制能量代謝過程中的關(guān)鍵酶可明顯抑制腫瘤的生長、侵襲和轉(zhuǎn)移，在腫瘤治療中發(fā)揮一定作用[14～16]。HK-2、PFK1、PK是糖酵解過程中最關(guān)鍵的三個限速酶。本研究結(jié)果為今后的研究指明了方向。除了HK-2、、PFK1、PK，己糖激酶1(HK-1)、己糖激酶3(HK-3)等也是重要的能量代謝酶[17,18]。本研究為其他能量代謝酶在腫瘤中的作用的研究提供了很好的研究思路。

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2017-05-22)

魏順英(E-mail:weishunyingvip@163.com)