桑皮中1—脫氧野尻霉素的提取技術研究

唐滿生+吳新+周錦云

【摘 要】1-脫氧野尻霉素（1-DNJ）是桑皮提取物中的一種功能性成分。1-脫氧野尻霉素（1-DNJ）是一種哌啶生物堿，其化學名稱是3，4，5-三羥基- 2-羥甲基四氫吡啶，分子式為C6H13NO4，分子量為163。DNJ作為α-葡萄糖苷酶的抑制劑，具有降血糖、抗病毒、抗腫瘤轉移等作用。目前工業(yè)化生產大多采用沸水提取的方法，此法雖然簡單易操作，但提取物中1-脫氧野尻霉素（1-DNJ）的含量都在1.5%以下。本文分別采用不同濃度乙醇、提取溫度和提取時間進行三水平三因素正交試驗，經過脫溶脫水和干燥粉碎后，氣相色譜法檢測各正交試驗粉未1-脫氧野尻霉素（1-DNJ）的含量分別為2.53%、2.85%、2.75%、2.68%、3.28%、2.86%、2.77%、2.84%、2.71%。得到的最優(yōu)工藝提取條件為：濃度乙醇60%，提取溫度60℃，提取時間2小時。

【關鍵詞】桑皮提取物；1-脫氧野尻霉素（1-DNJ）；提取技術

【Key words】Mulberry extract； 1-DNJ； Gas chromatography

桑皮提取物中1-脫氧野尻霉素（1-DNJ）是提取物中的一種功能性成分，具有降血糖、抗病毒、抗腫瘤轉移等作用，另外還是α-葡萄糖淀粉酶的有效抑止劑。目前工業(yè)化生產大多采用沸水提取的方法，本文就桑皮1-脫氧野尻霉素（1-DNJ）的提取和含量檢測進行研究，為工業(yè)化生產提供依據。

1 測定方法

1.1 氣相色譜法

1.1.1 儀器和試劑

GC-14C氣相色譜儀（FID檢測器）（日本島津制作所）；氫氣發(fā)生器（北京中興匯利科技發(fā)展有限公司 GH-300）；低噪音空氣泵（北京中興匯利科技發(fā)展有限公司 GA5000A）；高純氮氣（99.99%）；電子分析天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司 EA-200）；高速離心機（長沙凱達科學儀器公司TG16G）。

1-脫氧野尻霉素（1-DNJ）標準儲備液：稱取1-脫氧野尻霉素（1-DNJ）（安譜 99.39% 約10mg），用2mL吡啶30min溶解后，加入10 mg氫氧化鈉混勻，即得5.0mg/mL的1-脫氧野尻霉素（1-DNJ）標準儲備液。

吡啶（AR），氫氧化鈉（AR）。

N，0-雙（三甲基硅烷基）乙酰胺（BSA）

離心管（5mL、2mL）。

1-脫氧野尻霉素（1-DNJ）標準樣系列：取1-脫氧野尻霉素（1-DNJ）標準儲備液用吡啶稀釋成0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL標準樣系列各0.2 mL于2mL離心管。

1.1.2 試樣制備

稱取桑皮提取物樣品約0.5g（精確至少數(shù)點后四位）于5mL離心管中，加入10 mg氫氧化鈉，加吡啶定容，混勻，放置離心機（8000r/min）中離心6 min，取上清液0.2 mL于2mL離心管，與以上標準系列液分別加入0.2 mL BSA，在60℃條件下水浴5 min發(fā)生衍生反應，放入4℃冰箱保存待測。

1.1.3 氣相色譜分析條件

色譜柱：OV-275（廣州菲羅門），30m×0.25mm×0.25μm；汽化室（INJ）溫度：200℃，檢測器（DET）溫度：210℃，程序升溫條件：初始柱（COL）溫：120℃，保持3 min，每分鐘20℃升溫到180℃，保持4 min；氮氣流量：30mL/min，氫氣流量：50 mL/min，空氣流量：400 mL/min；進樣量：1μL。

1.1.4 實驗方法

取配制好的標準樣和樣品，按1.1.3的分析條件，進行測試。

2 結果與分析

2.1 單因素試驗

2.1.1 不同溫度對提取粉未1-DNJ含量的影響

稱取桑皮粉未3份，每份50g，提取液濃度60%，提取時間1.5小時，在1（55℃）、2（60℃）、3（65℃）溫度下，按料液比1：10進行提取，提取2次，合并提取液，回收乙醇、脫水和干燥粉碎后得到棕黃色粉未。按1.1.3的分析條件，進行測試，含量分別為2.85%、3.23%、3.02%，結果見圖1。

2.1.2 不同乙醇濃度對提取粉未1-DNJ含量的影響

稱取桑皮粉未3份，每份50g，提取溫度60℃，提取時間1.5小時，在1（55%）、2（60%）、3（65%）濃度下，按料液比1：10進行提取，提取2次，合并提取液，回收乙醇、脫水和干燥粉碎后得到棕黃色粉未。按1.1.3的分析條件，進行測試，含量分別為2.68%、3.23%、3.06%，結果見圖2。

2.1.3 不同提取時間對提取粉未1-DNJ含量的影響

稱取桑皮粉未3份，每份50g，提取溫度60℃，提取濃度60%，在1（1.0小時）、2（1.5小時）、3（2.0小時）時間下，按料液比1：10進行提取，提取2次，合并提取液，回收乙醇、脫水和干燥粉碎后得到棕黃色粉未。按1.1.3的分析條件，進行測試，含量分別為2.96%、3.23%、3.28%，結果見圖3。

2.2 正交試驗

為篩選最優(yōu)工藝，結合以上單因素試驗，以桑皮提取粉未1-DNJ含量為考察指標，通過氣相色譜法測定來考察不同濃度乙醇、提取溫度和提取時間對桑皮提取粉未1-DNJ含量的影響，設2次重復，采用L9（33）三因素三水平，正交試驗見表1和表2。

3 結論與工業(yè)化生產

通過表1表2可知，最優(yōu)的工藝條件為試驗5，即濃度乙醇60%，提取溫度60℃，提取時間2小時。按最優(yōu)的工藝條件進行工業(yè)化生產，每批次投料量為1噸，前10批棕黃色粉未中1-DNJ含量為3.08%、3.03%、2.99%、3.16%、3.08%、3.12%、3.07%、3.03%、3.13%、3.15%，平均值為3.08%，所得產品提取物中1-DNJ含量顯著增加。

【參考文獻】

[1]作者：楊文宇，等.《桑樹總生物堿分析方法與提取方法的探討》.時珍國醫(yī)國藥2008年第9卷第5期.

[2]作者：王鵬，等.《桑樹DNJ提取、純化和檢測的研究進展》.實驗室研究與探索 2011年12月第30卷第12期.

[3]作者：蔣小飛，等.《桑葉中生物堿脫氧野尻霉素（DNJ）的最佳提取工藝探討》 .西昌學院學報2010年12月第24卷第4期.

[責任編輯：張濤]endprint