熱休克蛋白90、Bcl—2在卵巢上皮癌中的表達(dá)及意義

張春梅++袁貞明++田秀成++鄭紅艷++張紅麗

摘要：目的 探討熱休克蛋白90（Heat shock protein90，HSP90）、Bcl-2（B-cell lymphoma-2）在卵巢上皮癌組織中的表達(dá)及臨床意義。方法 采用SP免疫組織化學(xué)法檢測(cè)47例卵巢上皮癌組織中HSP90、Bcl-2的表達(dá)情況，以25例交界性卵巢上皮性腫瘤組織和13例良性卵巢上皮性腫瘤組織作對(duì)照，對(duì)結(jié)果進(jìn)行綜合分析。結(jié)果 在卵巢上皮癌組織中HSP90、Bcl-2的陽(yáng)性表達(dá)比良性和交界性卵巢上皮性腫瘤組織中的表達(dá)顯著增高；在卵巢上皮癌組織中HSP90、Bcl-2的陽(yáng)性表達(dá)隨卵巢上皮癌的FIGO臨床分期升高，組織分化降低陽(yáng)性表達(dá)增強(qiáng)，并與有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)；提示二者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)卵巢上皮癌的發(fā)生、發(fā)展、評(píng)估預(yù)后及降低腫瘤耐藥的發(fā)生有重要意義，有助于對(duì)患者治療和預(yù)后的監(jiān)測(cè)。結(jié)論 聯(lián)合檢測(cè)卵巢上皮癌中HSP90、Bcl-2的表達(dá)可以成為卵巢上皮癌的早期診斷，監(jiān)測(cè)腫瘤耐藥，指導(dǎo)免疫治療和靶向治療及判斷預(yù)后可靠的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)之一。

關(guān)鍵詞：卵巢上皮癌；熱休克蛋白 90；Bcl-2；免疫組織化學(xué)

中圖分類(lèi)號(hào)：R737.31 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1006-1959（2017）19-0045-03

Expression and Significance of Heat Shock Protein 90 and Bcl-2 in Epithelial Ovarian Cancer

ZHANG Chun-mei1，YUAN Zhen-ming1，TIAN Xiu-cheng2，ZHENG Hong-yan1，ZHANG Hong-li1

（1.Department of Obstetrics and Gynecology，Maternal and Child Health Hospital of Shouguang City，

Shouguang 262700，Shandong， China；

2.Center for Disease Control and Prevention，Shouguang 262700，Shandong，China）

Abstract：Objective To investigate the heat shock protein 90（Heat shock，Protein90，HSP90），Bcl-2（B-cell lymphoma-2）expression in epithelial ovarian carcinoma and its clinical significance.Methods The expressions of HSP90 and Bcl-2 in 47 cases of ovarian epithelial carcinoma were detected by SP immunohistochemical method.25 cases of borderline ovarian epithelial tumor and 13 cases of benign ovarian epithelial tumor were used as controls，the results were comprehensively analyzed.Results The positive expression of HSP90 and Bcl-2 in ovarian epithelial carcinoma was significantly higher than that in benign and borderline ovarian epithelial tumor tissues.The positive expression of HSP90 and Bcl-2 in ovarian epithelial carcinoma was associated with the increase of FIGO of ovarian epithelial carcinoma and the decrease of histological differentiation，and it was closely related to lymph node metastasis.Suggesting that the combination of the two detection of ovarian epithelial cancer in the occurrence， development，assessment of prognosis and reduce the occurrence of tumor resistance is important to help patients with treatment and prognosis of the monitoring.Conclusion The combined detection of HSP90 and Bcl-2 expression in ovarian epithelial carcinoma can be one of the early laboratory indicators of early diagnosis of ovarian epithelial carcinoma，monitoring tumor resistance，guiding immunotherapy and targeted therapy and judging prognosis.

Key words：Ovarian epithelial carcinoma；Heat shock protein 90；Bcl-2；Immunohistochemistryendprint

卵巢癌是女性生殖道腫瘤中最常見(jiàn)的三大惡性腫瘤之一，其死亡率居三位之首。其中90%的卵巢癌是體腔上皮來(lái)源的惡性腫瘤，具有起病隱匿，易轉(zhuǎn)移，易復(fù)發(fā)等特點(diǎn)，70%的卵巢癌患者診斷時(shí)已是晚期。近年來(lái)卵巢上皮癌的發(fā)病率在世界范圍內(nèi)呈上升趨勢(shì)，隨著手術(shù)、放療、化療、生物及基因等綜合方法的應(yīng)用，5年生存率雖有較大提高，但晚期患者因存在耐藥或不耐受化療反應(yīng)等問(wèn)題療效甚微，5年生存率仍在30%左右[1]。因此早期判斷腫瘤組織的惡變傾向，惡性程度及轉(zhuǎn)移危險(xiǎn)性對(duì)指導(dǎo)臨床治療，改善預(yù)后和提高生存率具有重要作用。我院采用SP免疫組化法聯(lián)合檢測(cè)HSP90、Bcl-2在卵巢上皮癌組織中的表達(dá)情況，綜合分析，以期對(duì)卵巢上皮癌的早期監(jiān)測(cè)，指導(dǎo)免疫治療和靶向治療及評(píng)價(jià)預(yù)后有新的導(dǎo)向作用，為臨床提供新的可靠的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

1 材料與方法

1.1標(biāo)本來(lái)源

收集2010年3月～2014年12月我院婦產(chǎn)科收治，經(jīng)開(kāi)腹或腹腔鏡手術(shù)證實(shí)的卵巢腫瘤患者，其中卵巢上皮癌患者47例，平均年齡（51.84±10.68）歲；交界性卵巢上皮性腫瘤患者25例；良性卵巢上皮性腫瘤患者13例為研究對(duì)象。所有病例均經(jīng)病理確診。所采用的卵巢上皮癌組織術(shù)前均無(wú)放、化療史。

組織標(biāo)本：選用患者對(duì)應(yīng)的卵巢腫瘤組織，10%福爾馬林固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，制成4 μm切片備用。

1.2方法

免疫組化采用ElivisionTMplus二步法：石蠟切片脫蠟，水化后磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗，過(guò)氧化物阻斷劑封閉過(guò)氧化物酶活性，加一抗，室溫孵育，加二抗，滴加DAB顯色，蘇木精復(fù)染，常規(guī)脫水，透明封固。HSP90、Bcl-2、CD34均為鼠抗人單克隆抗體，購(gòu)于北京中山金橋生物技術(shù)有限公司。已知的卵巢上皮癌陽(yáng)性片作陽(yáng)性對(duì)照；以PBS代替一抗作陰性對(duì)照。

1.3結(jié)果判定

HSP90陽(yáng)性信號(hào)為胞漿呈棕黃色顆粒；Bcl-2陽(yáng)性信號(hào)為胞漿/胞膜呈棕黃色顆粒為準(zhǔn)。根據(jù)Beeasley免疫組化評(píng)分方法，按陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比并參考著色強(qiáng)度判斷分級(jí)：無(wú)明顯陽(yáng)性細(xì)胞為（-）；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<25%為（+）；25%-50%為（++），>50%為（+++）。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，兩組樣本均數(shù)比較采用非參數(shù)檢驗(yàn)（Mann-Whitney法），兩個(gè)樣本率的比較采用？字2檢驗(yàn)，兩指標(biāo)間相互關(guān)系采用Spearman相關(guān)分析，P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1在卵巢腫瘤組織中HSP90、CD34標(biāo)記的MVD、Bcl-2的表達(dá)情況

由表1可見(jiàn)，卵巢上皮癌組與交界性、良性卵巢上皮性腫瘤組相比HSP90、Bcl-2表達(dá)的陽(yáng)性率顯著升高（均P<0.05）；二者高表達(dá)呈正相關(guān)。良性與交界性卵巢上皮性腫瘤兩組間HSP90、Bcl-2表達(dá)的陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

2.2 HSP90、Bcl-2在卵巢上皮癌組織中的表達(dá)與各臨床病理參數(shù)的關(guān)系

由表2可知年齡>50歲與年齡≤50歲的患者相比， HSP90表達(dá)的陽(yáng)性率顯著增高（H=2.124，P=0.034），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05） 。HSP90、 Bcl-2在各組織類(lèi)型中無(wú)顯著差異（均 P>0.05）；在組織分化和FIGO臨床分期中 ，隨組織分化降低，臨床分期增高HSP90和 Bcl-2的表達(dá)逐漸增強(qiáng)（均P<0.05），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在有、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中，HSP90和 Bcl-2陽(yáng)性表達(dá)差異顯著（均P<0.05），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 討論

腫瘤的形成是由多種因素形成的，其中一個(gè)重要因素是由于腫瘤細(xì)胞的免疫原性低下，逃逸了機(jī)體的免疫監(jiān)視。腫瘤細(xì)胞不斷增殖，合成代謝增強(qiáng)，突變或異常蛋白質(zhì)的存在刺激了HSP70的合成，需要大量HSP70來(lái)調(diào)節(jié)和穩(wěn)定這一異常增殖過(guò)程，HSP90作為HSP70的輔分子伴侶依賴(lài)三磷酸腺苷（ATP）的作用參與多分子伴侶復(fù)合物的裝配，還參與腫瘤血管的生長(zhǎng)侵襲及轉(zhuǎn)移。在腫瘤組織中突變的不正常的蛋白可刺激HSP90的合成，HSP90可通過(guò)構(gòu)像的特異性與其他一些輔分子伴侶結(jié)合，形成各種不同的超級(jí)蛋白復(fù)合體，與HSP90的ATP酶循環(huán)相匹配，起調(diào)節(jié)作用。這些HSP90的受體蛋白包括跨膜酪氨酸激酶（原癌基因HER-2/neu蛋白，上皮生長(zhǎng)因子受體、胰島素樣生長(zhǎng)因子1受體）、蛋白激酶B（protein kinase B，Akt）促分裂原活化蛋白激酶（Raf-1）原癌基因蛋白P53等，與細(xì)胞周期調(diào)節(jié)、細(xì)胞轉(zhuǎn)化以及細(xì)胞存活和凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)到通路有關(guān)，對(duì)保持腫瘤癌變過(guò)程中的多條關(guān)鍵信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的穩(wěn)定性起著關(guān)鍵作用。HSP90可通過(guò)其受體蛋白多途徑多環(huán)節(jié)影響腫瘤的發(fā)生、發(fā)展進(jìn)程[2]。抑制HSP90的功能可導(dǎo)致其“客戶(hù)”蛋白的降解，下調(diào)多種下游蛋白來(lái)調(diào)節(jié)多種細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，從而達(dá)到對(duì)腫瘤的“多點(diǎn)攻擊”，達(dá)到抑制腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移，HSP90已成為腫瘤治療的新靶點(diǎn)[3]。

在本研究中HSP90 在良性和交界性卵巢上皮性腫瘤組織中有少量表達(dá)，在卵巢上皮癌組織中呈高表達(dá)。在卵巢上皮癌組織和交界性卵巢上皮性腫瘤組織中表達(dá)差異顯著，與HSP90在正常細(xì)胞中處于靜默態(tài)，在腫瘤細(xì)胞中處于活化態(tài)的特性相一致[3]，說(shuō)明HSP90具有促進(jìn)卵巢上皮性腫瘤發(fā)生惡變的功能。在臨床治療中通過(guò)檢測(cè)HSP90在卵巢上皮腫瘤組織中的表達(dá)活性，有效阻斷三磷酸腺苷（ATP）/二磷酸腺苷（ADP）結(jié)合位點(diǎn)，即格爾德霉素（GA）特異性結(jié)合的靶點(diǎn)，對(duì)抑制卵巢上皮性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展具有重要意義。在年齡方面HSP90的陽(yáng)性表達(dá)存在顯著差異，說(shuō)明年齡可導(dǎo)致HSP90與腫瘤細(xì)胞中的突變蛋白因子結(jié)合的程度增高，促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)，預(yù)示預(yù)后不良。HSP90可作為某些抗癌藥的分子伴侶促進(jìn)藥物進(jìn)入細(xì)胞，發(fā)揮選擇性抗癌活性，有效抑制了與其下游靶基因啟動(dòng)子的結(jié)合，與治療密切相關(guān)[2]。在組織分化、臨床分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面均存在顯著差異，說(shuō)明HSP90在卵巢上皮癌組織中的高表達(dá)與卵巢上皮癌的組織分化程度，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有不同程度的相關(guān)，可能參與了腫瘤的腫瘤組織內(nèi)的形成、腫瘤存活和侵襲轉(zhuǎn)移。腫瘤組織內(nèi)的HSP90通常和一些蛋白組成有活性的多伴侶復(fù)合物，三磷酸腺苷（ATP）的活性比正常組織內(nèi)HSP90高，使HSP90抑制劑具有一定的靶向性，可用于腫瘤及轉(zhuǎn)移灶的定位診斷，提高腫瘤細(xì)胞對(duì)其他化療藥物的敏感性[3]。endprint

卵巢上皮癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中存在著癌基因的激活、抑癌基因的失活、凋亡調(diào)控基因的失調(diào)等各種異常表達(dá)情況[6]。Bcl-2作為具有抑制凋亡作用的基因，可以定位于不同細(xì)胞的線(xiàn)粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及核膜上，組織線(xiàn)粒體細(xì)胞色素C的釋放，從而發(fā)揮抗凋亡作用[4]。其過(guò)度表達(dá)可抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)細(xì)胞生存，從而延長(zhǎng)細(xì)胞壽命，引起細(xì)胞異常積累，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。Bcl-2的過(guò)表達(dá)可使腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物不敏感，是一些腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生耐藥的機(jī)制之一，可誘導(dǎo)卵巢上皮性腫瘤有抗鉑類(lèi)作用[5]。

本研究中Bcl-2在良性、交界性卵場(chǎng)上皮性組織及卵巢上皮癌組織中的表達(dá)依次增強(qiáng)，說(shuō)明Bcl-2在卵巢上皮性腫瘤中的表達(dá)與腫瘤的惡性程度成相關(guān)。Bcl-2的過(guò)度表達(dá)會(huì)增加其他基因突變機(jī)會(huì)，并使突變基因聚集在細(xì)胞內(nèi)，從而發(fā)揮其抗凋亡活性，使正常細(xì)胞向腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)變，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的惡性增殖[6]。在細(xì)胞分化和臨床分期方面，隨著腫瘤細(xì)胞分化程度的增加Bcl-2基因的過(guò)度表達(dá)顯著增強(qiáng)，中晚期的卵巢上皮癌組織中Bcl-2基因的高表達(dá)率明顯高于早期。在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面差異顯著，說(shuō)明Bcl-2基因的高表達(dá)與預(yù)后密切相關(guān)。Bcl-2在腫瘤的形成及腫瘤耐藥的形成中起重要作用，細(xì)胞凋亡對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)起著負(fù)調(diào)控作用，是抗腫瘤的重要途徑[8-10]。Bcl-2過(guò)度表達(dá)時(shí)腫瘤細(xì)胞對(duì)化療劑不敏感，在一定濃度化療劑作用下，腫瘤細(xì)胞不死或凋亡明顯降低，可誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞對(duì)鉑類(lèi)產(chǎn)生耐藥，說(shuō)明Bcl-2高表達(dá)抑制細(xì)胞凋亡而產(chǎn)生腫瘤細(xì)胞耐藥[7]，從而導(dǎo)致化療效果降低或失敗，影響對(duì)患者的生存效價(jià)的評(píng)估。提示卵巢上皮癌組織中Bcl-2低表達(dá)可能提高癌組織對(duì)放化療等誘導(dǎo)凋亡治療的易感性，以Bcl-2基因?yàn)榘悬c(diǎn)，下調(diào)Bcl-2基因表達(dá)，可促進(jìn)細(xì)胞凋亡，逆轉(zhuǎn)耐藥。

通過(guò)對(duì)HSP90、Bcl-2進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)可以有效判斷卵巢上皮癌發(fā)生演變過(guò)程，評(píng)價(jià)預(yù)后，提高化療效果，有針對(duì)性地提供靶向治療和生物治療，降低腫瘤耐藥的發(fā)生率，提高患者的生存率，可以作為一個(gè)新的實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)指標(biāo)。

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編輯/成森endprint