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    陜南豆薯淀粉漿液液化和糖化的工藝研究

    2017-09-28 21:34王穎何強(qiáng)陳文強(qiáng)衛(wèi)永華張東陳琰
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2017年13期
    關(guān)鍵詞:液化糖化漿液

    王穎 何強(qiáng) 陳文強(qiáng) 衛(wèi)永華 張東 陳琰

    摘要:以陜南豆薯淀粉漿液為試材,在單因素試驗的基礎(chǔ)上,采用L9(34)正交試驗優(yōu)化其液化和糖化工藝。結(jié)果表明,陜南豆薯淀粉漿液最佳的液化工藝為α-淀粉酶添加量75 U/g,液化pH值5.0,液化時間90 min,液化溫度 90 ℃;最佳的糖化工藝為糖化酶添加量200 U/g,糖化pH值4.5,糖化時間120 min,糖化溫度60 ℃。在此優(yōu)化條件下,糖化液的葡萄糖值(DE值)為16.23%。

    關(guān)鍵詞:豆薯;淀粉;漿液;液化;糖化

    中圖分類號: TS201.1文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A[HK]

    文章編號:1002-1302(2017)13-0165-04[HS)][HT9.SS]

    收稿日期:2016-09-26

    基金項目:陜西省“13115”科技創(chuàng)新工程計劃(編號:2008ZDGC-04)。

    作者簡介:王穎(1994—),女,陜西西安人,碩士研究生,主要從事微生物資源利用開發(fā)等研究。E-mail:306104241@qq.com。

    通信作者:陳文強(qiáng),教授,碩士生導(dǎo)師,主要從事微生物資源的保護(hù)與利用方面的研究。E-mail:wenqiangc@126.com。

    [ZK)]

    豆薯(Pachyrhizus erosus)是豆科(Leguminosae)豆薯屬(Pachyrhizus)中能形成紡錘形或扁球形塊根的一年生或多年生草質(zhì)藤本植物,喜炎熱而降雨較少的氣候,原產(chǎn)熱帶美洲,現(xiàn)分布于熱帶和亞熱帶地區(qū),我國長江以南地區(qū)普遍栽培,以貴州、四川、湖南、廣東、廣西、陜南和臺灣等地區(qū)生產(chǎn)較多[1]。豆薯含鈣、鐵、鋅、銅、磷等人體必需礦質(zhì)元素,且具有防癌、降血壓及降血脂等功效[2-4]。豆薯屬高產(chǎn)作物,作為一種重要的經(jīng)濟(jì)作物被農(nóng)民廣泛栽種。陜南每年9—11月盛產(chǎn)豆薯,當(dāng)?shù)厮追Q“地瓜”,食用部分為肥大的塊根。豆薯塊根不耐貯藏,易腐爛變質(zhì),每年豆薯成熟季節(jié),市場豆薯堆積,腐爛損失嚴(yán)重,農(nóng)民雖豐產(chǎn),經(jīng)濟(jì)卻不能增收?,F(xiàn)今利用豆薯加工的產(chǎn)品尚不多見,常見有涼薯酒[5]、豆薯汁果凍[6]、豆薯果脯[7]、豆薯片[8]、豆薯汁飲料[9-11]等。因此,對豆薯進(jìn)行精深加工具有十分重要的意義。

    豆薯富含淀粉,淀粉易被淀粉酶分解成小分子單糖和寡糖,非常適宜作為底物進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)品的生產(chǎn)。但在發(fā)酵過程中,微生物無法直接利用淀粉進(jìn)行發(fā)酵,需對豆薯原漿進(jìn)行液化和糖化處理,因此,本試驗以陜南鮮豆薯打漿所得豆薯漿液為原料,研究其液化和糖化的最佳工藝條件,旨在為陜南豆薯發(fā)酵制品的生產(chǎn)提供科學(xué)依據(jù)。

    1材料與方法

    1.1試驗材料

    豆薯購自陜西漢中豐輝農(nóng)貿(mào)市場,室溫下儲藏待用。

    試劑:葡萄糖、氫氧化鉀、乙酸鋅、氫氧化鈉、硫酸銅、亞鐵氰化鉀、無水亞硫酸鈉、酒石酸鉀鈉等均為分析純;次甲基藍(lán)(生物染色試劑,天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司);α-淀粉酶(生化試劑,≥3 700 U/g,北京奧博星生物科技有限責(zé)任公司);糖化酶(100 000 U/g,江蘇省無錫市雪梅酶制劑科技有限公司);試驗用水為純化水。

    儀器:電子恒溫水浴鍋(北京光明醫(yī)療儀器廠,DZKW-C);電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司,ALC-210);離心機(jī)(上海安寧科學(xué)儀器廠,GL-20B);折光儀(奧豪斯國際貿(mào)易(上海)有限公司,PR-101);電子萬用爐(天津市中環(huán)科技開發(fā)公司);酸式滴定管(北京玻璃集團(tuán)公司銷售分公司);隔水電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠,DHS-BS);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海申勝生物技術(shù)有限公司,R-205);精密pH計(上海雷諾儀器廠,pHS-3B)。

    1.2試驗方法

    1.2.1工藝流程

    [KG14]液化酶

    [KG15]↓

    豆薯預(yù)處理→豆薯渣→調(diào)漿→糊化→液化→糖化→滅菌→測定還原糖

    [KG5]↑[KG8]↑

    [KG7]確定料液比[KG5]糖化酶

    1.2.2測定方法

    1.2.2.1總糖的測定根據(jù)NY/T 2742—2015《水果及制品可溶性糖的測定3,5-二硝基水楊酸比色法》的相關(guān)方法測定。

    1.2.2.2還原糖的測定根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)GB/T 5009.7—2003《食品中還原糖的測定》的相關(guān)方法測定。

    1.2.2.3水分的測定根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)GB/T 23490—2009《食品水分活度的測定》的相關(guān)方法測定。

    1.2.2.4DE值的測定DE值是指糖化液中的還原糖含量(以葡萄糖計)占干物質(zhì)的百分率,又稱葡萄糖值。以DE值衡量淀粉水解程度,可以轉(zhuǎn)換為糖化液中淀粉已轉(zhuǎn)化的還原糖(以葡萄糖計)占淀粉含量的百分率。

    [JZ]DE值=[SX(]酶解液中還原糖-酶解前還原糖含量淀粉含量[SX)]×100%。

    1.2.3液化單因素試驗設(shè)計

    1.2.3.1α-淀粉酶添加量對液化的影響取豆薯原漿5份(約25 mL)于燒杯中,在pH值為6.0、溫度為90 ℃、時間為 90 min 的條件下,比較不同α-淀粉酶添加量(25、50、75、100、125 U/g)對液化效果的影響。恒溫過程中間隔一定時間對豆薯漿進(jìn)行攪拌(下同)。

    1.2.3.2pH值對液化的影響取豆薯原漿5份于燒杯中,在α-淀粉酶添加量為50 U/g、溫度為90 ℃、時間為90 min的條件下,比較不同pH值(5.0、5.5、6.0、6.5、7.0)對液化效果的影響。

    1.2.3.3溫度對液化的影響取5份豆薯原漿于燒杯中,在pH值為6.0、α-淀粉酶添加量為50 U/g、時間為90 min的條件下,比較不同溫度(80、85、90、95、100 ℃)對液化效果的影響。endprint

    1.2.3.4時間對液化的影響取5份豆薯原漿于燒杯中,在pH值為6.0、α-淀粉酶添加量為50 U/g、溫度為95 ℃的條件下,比較不同時間(70、80、90、110、120 min)對液化效果的影響。

    1.2.4液化正交試驗設(shè)計在液化單因素試驗的基礎(chǔ)上,選取α-淀粉酶添加量、溫度、pH值、時間這4個因素作為影響豆薯淀粉液化的工藝條件,設(shè)計4因素3水平的正交試驗,如表1所示。

    [FK(W6][HT6H][JZ][WTHZ]表1液化試驗L9(34)因素水平[WTBZ][HTSS][STBZ]

    [HJ*5][BG(!][BHDFG3,WK3,WK26W]水平[ZB(][BHDWG1*2,WK26W]因素

    [BHDWG1*2,WK7,WK5,WK8,WK6W][XXZSX*2-ZSX25*2]A:接種量(U/g)B:pH值C:糖化時間(min)D:溫度(℃)[ZB)W]

    [BHDG1*2,WK3,WK7,WK5,WK8,WK6W]1255.06090

    [BHDW]2506.09095

    [BH]3757.0120100[HT][HJ][BG)F][FK)]

    1.2.5糖化單因素試驗設(shè)計

    1.2.5.1糖化酶添加量對糖化的影響將液化后的豆薯漿在100 ℃下加熱15 min滅酶,冷卻至常溫(下同)。取5份液化液于燒杯中,在pH值為4.5、溫度為60 ℃、時間為90 min的條件下,比較不同糖化酶添加量(100、150、200、250、300 U/g)對糖化效果的影響。

    1.2.5.2pH值的對糖化的影響取5份液化液于燒杯中,在糖化酶添加量為200 U/g、溫度為55 ℃、時間為90 min的條件下,比較不同pH值(3.5、4.0、4.5、5.0、5.5)對糖化效果的影響。

    1.2.5.3溫度對糖化的影響取5份液化液于燒杯中,在糖化酶添加量為200 U/g、pH值為4.5、時間為90 min的條件下,比較不同溫度(50、55、60、65、70 ℃)對糖化效果的影響。

    1.2.5.4時間對糖化的影響取5份液化液于燒杯中,在糖化酶添加量為200 U/g、pH值為4.5、溫度為60 ℃的條件下,比較不同時間(30、60、90、120、150 min)對糖化效果的影響。

    1.2.6糖化正交試驗設(shè)計在糖化單因素試驗的基礎(chǔ)上,選取糖化酶添加量、溫度、pH值、時間這4個因素作為影響豆薯淀粉糖化的工藝條件,設(shè)計4因素3水平的正交試驗,如表2所示。

    2結(jié)果與分析

    2.1液化的單因素試驗

    2.1.1α-淀粉酶添加量對液化的影響在pH值為6.0、溫度為90 ℃、時間為90 min的條件下進(jìn)行α-淀粉酶添加量(25、50、75、100、125 U/g)梯度試驗,結(jié)果見圖1。

    由圖1可知,隨著α-淀粉酶添加量增加,DE值迅速升高;但當(dāng)加酶量大于50 U/g時,DE值基本趨于穩(wěn)定。這是由于加酶量小于50 U/g時,底物質(zhì)量濃度大于淀粉酶的質(zhì)量濃度,反應(yīng)速率受加酶量的影響較大,DE值隨著加酶量的增加而快速增大;加酶量大于50 U/g時,隨著酶質(zhì)量濃度逐漸升高,一部分酶分子沒有機(jī)會和底物接觸,致使水解液DE值基本不再變化。考慮到成本因素,因此,最佳的α-淀粉酶添加量為50 U/g。

    2.1.2pH值對液化的影響在α-淀粉酶添加量為 50 U/g、溫度為90 ℃、時間為90 min的條件下進(jìn)行液化pH值(5.0、5.5、6.0、6.5、7.0)梯度試驗,結(jié)果見圖2。

    [FK(W11][TPWY22.tif][FK)]

    由圖2可知,DE值隨著pH值的增大先升高后降低,pH值在6.0達(dá)到最高。因為酶的活性部分一般含重要的酸性或堿性基團(tuán),不同pH值環(huán)境下酶的活性部分處于不同的離解狀態(tài),從而影響酶分子的構(gòu)象以及酶與底物的結(jié)合力和催化能力[12-13]。因此,最佳的液化pH值為6.0。

    2.1.3溫度對液化的影響在α-淀粉酶添加量為50 U/g、pH值為6.0、時間為90 min的條件下進(jìn)行液化溫度(80、85、90、95、100 ℃)梯度試驗,結(jié)果見圖3。

    由圖3可知,DE值隨著溫度的升高先升高后降低,溫度為90 ℃時DE值最高,達(dá)到7.52%。液化溫度同時影響化學(xué)反應(yīng)速率和酶的活性,當(dāng)溫度小于90 ℃時,隨著溫度的升高,

    [FK(W11][TPWY33.tif][FK)]

    單位時間內(nèi)酶分子與底物間的有效碰撞次數(shù)增加,液化反應(yīng)速率加快;而當(dāng)溫度超過90 ℃時,隨著溫度的繼續(xù)升高,耐高溫α-淀粉酶變性失活,液化反應(yīng)速率迅速下降。同時作用溫度越高,還原糖與氨基酸越容易發(fā)生氨基糖反應(yīng),還原糖之間也會發(fā)生焦糖化反應(yīng),造成糖分的直接損失[14]。因此,最佳的液化溫度為90 ℃。

    2.1.4時間對液化的影響在α-淀粉酶添加量為50 U/g、pH值為6.0、溫度為95 ℃的條件下進(jìn)行液化時間(70、80、90、110、120 min)梯度試驗,結(jié)果見圖4。

    [FK(W11][TPWY44.tif][FK)]

    由圖4可知,隨著液化時間的增長,DE值增加,但逐漸趨于緩慢。原因是耐高溫α-淀粉酶是一種內(nèi)切酶,從分子內(nèi)部開始水解淀粉,且僅能水解α-1,4糖苷鍵,對α-1,6糖苷鍵不起作用,但可越過此鍵,繼續(xù)水解α-1,4糖苷鍵。由于淀粉中α-1,6糖苷鍵的存在,而影響了酶的水解速度,反應(yīng)開始時速度很快,而后逐漸變緩[15-16]。因此,最佳的液化時間為90 min。

    2.2液化正交試驗

    表3結(jié)果表明,各因子的最佳水平組合為A3B1C2D1。極差分析結(jié)果表明,各因子對液化影響順序分別為D>C>B>A。所以,最終確定陜南豆薯漿液液化的最佳工藝為加酶量75 U/g,pH值5.0,液化時間90 min,液化溫度90 ℃。endprint

    2.3糖化單因素試驗

    2.3.1糖化酶添加量對糖化的影響在pH值為4.5、溫度為60 ℃、時間為90 min的條件下進(jìn)行糖化酶添加量(100、150、200、250、300 U/g)梯度試驗,結(jié)果見圖5。

    由圖5可知,糖化酶的添加量在100~200 U/g時,DE值隨著酶添加量的增加而增加,當(dāng)超過200 U/g時,DE值趨于不變。因此,最佳的糖化酶添加量為200 U/g。

    2.3.2pH值對糖化的影響在糖化酶添加量為200 U/g、溫度為55 ℃、時間為90 min的條件下進(jìn)行糖化pH值(3.5、40、4.5、5.0、5.5)梯度試驗,結(jié)果見圖6。由圖6可知,隨著pH值的增大,DE值先升高后降低,pH值為4.5時DE值達(dá)到最大,隨后迅速下降。原因是糖化酶的最適作用pH值為4.0~4.5,pH值過大或過小都會導(dǎo)致酶蛋白變性,從而影響酶分子與底物分子的結(jié)合和催化,最終影響水解速率。因此,最佳的糖化pH值為4.5。

    2.3.3溫度對糖化的影響在糖化酶添加量為200 U/g、pH值為4.5、時間為90 min的條件下進(jìn)行糖化溫度(50、55、60、65、70 ℃)梯度試驗,結(jié)果見圖7。由圖7可知,DE值隨著溫度的升高而升高,當(dāng)溫度達(dá)到60 ℃時達(dá)到最高,隨后,其含量隨著溫度的上升而下降。這是由于糖化酶最適溫度不超過60 ℃[17],當(dāng)溫度高于60 ℃時,糖化酶失活,DE值降低。因此,最佳的糖化溫度為60 ℃。

    2.3.4時間對糖化的影響在糖化酶添加量為200 U/g、pH值為4.5、溫度為60 ℃的條件下進(jìn)行糖化時間(30、60、90、120、150 min)梯度試驗,結(jié)果見圖8。由圖8可知,隨著糖化時間的增加,DE值也增加,在 120 min 的時候達(dá)到最高。這是因為開始時,底物的濃度較高,反應(yīng)速度受時間的影響較大;隨著反應(yīng)的進(jìn)行底物濃度逐漸降低,反應(yīng)速率也隨之降低。因此,最佳的糖化時間為 120 min。[FL)]

    [FK(W11][TPWY66.tif][FK)]

    [FL(2K2]

    2.4糖化正交試驗

    表4結(jié)果表明,各因子的最佳水平組合為A1B2C1D2。極差分析結(jié)果表明,各因子對糖化影響順序分別為C>A>D>B。所以,最終確定陜南豆薯漿液糖化的最佳工藝為接種量為200 U/g,pH值為4.5,糖化時間為 120 min,糖化溫度為 60 ℃。

    3結(jié)論

    對陜南豆薯淀粉漿液的液化和糖化工藝進(jìn)行了研究,最佳的液化工藝為α-淀粉酶添加量75 U/g,pH值5.0,液化時間90 min,液化溫度90 ℃;最佳的糖化工藝為糖化酶添加量200 U/g,pH值4.5,糖化時間120 min,糖化溫度60 ℃。在此條件下,DE值為16.23%。

    近年來,對陜南豆薯淀粉漿液液化和糖化的工藝研究報道甚少,劉軻等通過豆薯糖化液制備技術(shù)研究發(fā)現(xiàn),其液化和糖化時間分別長達(dá)120、240 min,DE值為11.88%[18]。與此相比,陜南豆薯淀粉漿液的液化時間和糖化時間分別縮短30、120 min,且DE值高出4.35%,最終得到的DE值符合果酒[19]、果醋[20]釀造中酒精度和還原糖含量配比的要求。

    將豆薯淀粉水解成葡萄糖可供微生物發(fā)酵利用,轉(zhuǎn)化成具有較高營養(yǎng)價值的發(fā)酵制品,其應(yīng)用前景十分廣闊。豆薯發(fā)酵產(chǎn)品的開發(fā),有待進(jìn)一步研究。

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