中等強度鹽脅迫下噻吩磺隆對土壤微生物及土壤酶活性的影響

doi：10.15889/j.issn.1002-1302.2017.13.024[HT9.]

摘要：主要研究在中等強度鹽脅迫下噻吩磺隆對土壤微生物數(shù)量及土壤酶活性的影響，以期掌握其中的響應(yīng)規(guī)律，為在鹽堿地合理應(yīng)用噻吩磺隆等除草劑提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。結(jié)果表明：中等強度鹽脅迫可導(dǎo)致放線菌和真菌的數(shù)量顯著減少，但對細菌的影響不顯著；在非鹽脅迫環(huán)境下，噻吩磺隆對細菌和放線菌均有激活作用，而對真菌有抑制作用。另外，鹽脅迫能導(dǎo)致土壤蔗糖酶、脲酶、磷酸酶的活性顯著降低，但過氧化氫酶活性顯著提高。經(jīng)相關(guān)性分析表明，放線菌和真菌的數(shù)量與土壤蔗糖酶、脲酶、磷酸酶的活性呈正相關(guān)；在非鹽脅迫下，細菌數(shù)量的增加與過氧化氫酶活性的提高呈正相關(guān)，但在鹽脅迫下無明顯規(guī)律。

關(guān)鍵詞：鹽脅迫；噻吩磺隆；土壤微生物；土壤酶活性

中圖分類號： S182；TQ450.2+6文獻標志碼： A[HK]

文章編號：1002-1302（2017）13-0086-04[HS）][HT9.SS]

收稿日期：2016-12-21

基金項目：四川省教育廳重點項目（編號：13ZA0036）。

作者簡介：李曉樓（1974—），男，四川遂寧人，碩士，副教授，主要從事環(huán)境微生物相關(guān)領(lǐng)域的研究。E-mail：3141024328@qq.com。

[ZK）]

噻吩磺隆（thifensulfuron-methyl）屬于磺酰脲類除草劑，化學名為3-（4-甲氧基-6-甲基-1，3，5-三嗪-2-基）-1-（2-甲氧基甲?；绶?3-基）-磺酰脲。它是一種內(nèi)吸傳導(dǎo)型選擇性除草劑，能用于防除大多數(shù)闊葉雜草，對禾本科雜草也有一定的抑制效果。噻吩磺隆已經(jīng)在農(nóng)林業(yè)及相關(guān)領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用，切實地提高了生產(chǎn)效率，但也給生態(tài)環(huán)境帶來一些潛在問題，例如常會傷及一些非目標植物，并影響土壤微生物結(jié)構(gòu)、土壤酶活性及土壤肥力等，有時甚至會影響下茬作物正常生長[1-3]。

土壤微生物與土壤酶都是土壤的重要組成部分，它們對土壤的物質(zhì)循環(huán)、能量流動和肥力演變等均有重大影響，也是土壤生態(tài)系統(tǒng)評價的重要指標[4]。除草劑等農(nóng)用化學品的使用通常會對土壤微生物及土壤酶產(chǎn)生一系列影響，甚至干擾土壤的正常功能。據(jù)報道，氯磺隆和砜嘧磺隆會抑制土壤固氮螺菌和假單胞菌的生長[5]；甲磺隆、氯磺隆和噻吩磺隆可抑制土壤中的熒光假單胞菌[6]；四唑嘧磺隆可改變土壤細菌的群落結(jié)構(gòu)[7]；酰胺類除草劑對過氧化氫酶、脫氫酶等多種土壤酶均有不同程度的抑制作用[8]。因此，充分掌握噻吩磺隆可能導(dǎo)致的一系列生態(tài)效應(yīng)，對于合理使用噻吩磺隆等農(nóng)藥具有十分重要的意義。

近年來，關(guān)于噻吩磺隆對生態(tài)環(huán)境影響的研究主要集中在噻吩磺隆對非靶標植物和土壤微生物的影響以及在環(huán)境中的降解速度、降解機制等，但還沒有系統(tǒng)地研究噻吩磺隆對不同類型微生物及主要土壤酶的影響，特別是在鹽脅迫的特定環(huán)境條件下的影響機制。本研究采用傳統(tǒng)的微生物培養(yǎng)技術(shù)及酶活性測定方法，研究了鹽脅迫條件下噻吩磺隆對土壤微生物數(shù)量和土壤酶活性的影響，為噻吩磺隆的合理應(yīng)用提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1試劑與供試土壤

噻吩磺隆（≥98.5%）購自上海市農(nóng)藥研究所；本研究中所用其他化學試劑均為分析純或以上級別。土樣采自四川省遂寧市麥田，取土深度0～20 cm，室內(nèi)陰干，去除樹枝等雜物后備用。土壤的理化性質(zhì)：pH值為7.5，含水量4.9%，總氮0.79 g/kg，有機質(zhì)36.9 g/kg，總含鹽量0.22%，陽離子交換量10.95 cmol/kg。試驗時間：2015年9月至2016年6月；土樣采集時間為2015年8月；試驗地點：（四川省遂寧市）四川職業(yè)技術(shù)學院建筑與環(huán)境工程系實驗室。

1.2試驗設(shè)計

將上述土壤置于正方形塑料盆（40 cm×40 cm）中，每個盆中的土壤質(zhì)量保持一致，其內(nèi)均勻種植小麥，待小麥高度長至10～15 cm時，將其中一組的土壤鹽含量調(diào)節(jié)到1.0%，通過添加含NaCl的水逐步調(diào)節(jié)至1.0%，鹽含量均以NaCl計，本組標記為S1，并設(shè)置S0組（不添加NaCl），共2個大組；每組中再施入噻吩磺隆，其濃度設(shè)置3個級別，分別為0、0.1、1.0 mg/kg，分別標記為T0、T1、T2，共計6個試驗組（S0T0、S0T1、S0T2、S1T0、S1T1、S1T2）。處理完畢后將各試驗組全部置于人工氣候箱中孵育，土壤含水量控制在18%～20%。孵育后每隔5 d定時取樣1次，測定土壤中各類微生物數(shù)量及土壤酶活性[9-10]。

1.3測定方法

1.3.1微生物計數(shù)

取10 g土壤樣品，采用稀釋平板計數(shù)法進行微生物計數(shù)。總細菌數(shù)量用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，真菌用查彼克氏培養(yǎng)基，放線菌用改良高氏1號培養(yǎng)基。

1.3.2土壤酶活性測定

重點監(jiān)測在中等強度鹽脅迫下噻吩磺隆對土壤中脲酶、蔗糖酶、磷酸酶和過氧化氫酶活性的影響。土壤脲酶采用靛酚藍比色法測定，蔗糖酶采用磷鉬酸比色法測定，測定過氧化氫酶采用高錳酸鉀滴定法，磷酸酶的測定應(yīng)用磷酸苯二鈉比色法。

2結(jié)果與分析

2.1鹽脅迫下噻吩磺隆對土壤中細菌、真菌和放線菌的影響

從圖1所示數(shù)據(jù)可以看出，在非鹽脅迫的條件下（S0T0、S0T1、S0T2），土壤中噻吩磺隆的濃度升高時，土壤中細菌總數(shù)有明顯的增加，這可能是由于噻吩磺隆對某些種類的細菌的生長繁殖有激活作用；另外，也能看出其細菌總數(shù)隨時間推移有增加的趨勢，但在后期又逐漸減少，約30 d以后恢復(fù)到初始狀態(tài)。在中等強度的鹽脅迫條件下（S1T0、S1T1、S1T2），隨著噻吩磺隆的濃度逐步升高，土壤中細菌總數(shù)未發(fā)生明顯變化，未觀察到在非鹽脅迫條件下所見到的噻吩磺隆對細菌的激活作用，這可能是鹽脅迫對細菌的抑制作用所致。endprint

[FK（W11][TPLXL1.tif][FK）]

在不含噻吩磺隆條件下（比較S0T0與S1T0），中等強度的鹽脅迫（1.0% NaCl）對細菌總數(shù)無顯著影響（P>0.05），但這并不意味著細菌的主要類群及其不同種類細菌之間的數(shù)量關(guān)系沒有發(fā)生大的變化；鹽脅迫通常對細菌有抑制作用，會導(dǎo)致土壤中細菌總數(shù)下降，但是也易于讓耐鹽細菌獲得生長優(yōu)勢；通常土壤細菌約占土壤微生物總量的70%～80%，其數(shù)量的穩(wěn)定性與土壤的結(jié)構(gòu)及功能密切相關(guān)。本研究中未觀察到鹽脅迫下細菌數(shù)量下降的現(xiàn)象，可能與所取土樣的理化性質(zhì)有關(guān)，通常來說，孔隙度高、緩沖能力強的土壤中細菌數(shù)量的穩(wěn)定性更高；另外，某些耐鹽細菌獲得生長優(yōu)勢可能抵消了另一些類型細菌的減少[11-12]。

從圖2可以看出，在非鹽脅迫的條件下（S0組），添加噻吩磺隆將導(dǎo)致土壤中放線菌數(shù)量有較大幅度的增長，這可能是由于噻吩磺隆對某些種類的放線菌的生長繁殖有激活作用，但是更高濃度的噻吩磺隆并不會進一步提高土壤中放線菌的數(shù)量，這與文獻報道的甲磺隆及氯嘧磺隆等磺酰脲類除草劑對土壤放線菌的影響結(jié)果（主要是抑制效應(yīng)）并不一致[13-14]；這主要是由于噻吩磺隆在土壤中較其他磺酰脲類除草劑更易于降解，降解過程中的中間產(chǎn)物及衍生物對放線菌的生長有激活作用[15-16]。

[FK（W11][TPLXL2.tif][FK）]

在鹽脅迫的條件下（S1組），放線菌的數(shù)量較非鹽脅迫條件下有大幅下降，在試驗初期尤為顯著；另外，改變土壤中噻吩磺隆的濃度，并未導(dǎo)致放線菌數(shù)量顯著變化，這可能是由于中等程度的鹽脅迫對防線菌的抑制作用顯著大于其他因素對放線菌所致的激活作用，導(dǎo)致其中的激活作用被掩蓋。

從圖3可以看出，在非鹽脅迫的條件下（S0組），添加噻吩磺隆會導(dǎo)致土壤中真菌數(shù)量有較大幅度的降低，并且隨著噻吩磺隆濃度的增加，其真菌數(shù)量降低的幅度會擴大，表明噻吩磺隆對真菌的生長繁殖有較強的抑制作用，這可能由于噻吩磺隆是支鏈氨基酸合成抑制劑，也能干擾某些真菌中支鏈氨基酸的合成，進而影響真菌正常的生長繁殖；另外，噻吩磺隆降解中間物可能也會影響到真菌的生長。通過比較曲線S0T0與S1T0，表明中等程度的鹽脅迫會導(dǎo)致土壤中真菌的數(shù)量大幅減少，這與文獻報道的情況一致[17-18]；比較鹽脅迫下不同濃度噻吩磺隆對真菌的影響，測試結(jié)果表明，在此條件下不同濃度噻吩磺隆對真菌總數(shù)的影響不顯著（P>0.05），但并不能排除有些類型的真菌可能受到抑制，而另有一些甚至受到激活。由于不同種類的真菌對除草劑的敏感性不一樣，在真菌總數(shù)保持穩(wěn)定時，除草劑的應(yīng)用仍然可能會導(dǎo)致土壤中原有的微生物群落系統(tǒng)被打破，進而影響到相關(guān)的土壤功能。一般來說，各類微生物的數(shù)量在施用不同種類的除草劑后其變化規(guī)律并不確定，通常受到土壤性質(zhì)、除草劑類型與施用濃度以及氣候條件等諸多方面的影響[19-20]。

2.2鹽脅迫下噻吩磺隆對土壤酶活性的影響

土壤蔗糖酶活性通常用于表征土壤生物學活性強度， 能反映土壤有機碳轉(zhuǎn)化水平，也是評價土壤熟化程度和肥力水平的重要指標[21]。圖4所示的測試結(jié)果表明，在非鹽脅迫環(huán)境下，不同濃度噻吩磺隆對土壤蔗糖酶活性的影響并不顯著（P>0.05，S0T0、S0T1與S0T2三者之間差異不顯著）。在中等程度的鹽脅迫下，土壤蔗糖酶活性會顯著降低，這一方面是由于高鹽分或高滲透壓環(huán)境會直接導(dǎo)致蔗糖酶活性的下降，另一方面則是由于鹽脅迫下產(chǎn)蔗糖酶的微生物數(shù)量或產(chǎn)蔗糖酶的能力下降所致。另外，在中等程度的鹽脅迫下隨著噻吩磺隆濃度的提高，蔗糖酶的活性也會隨之進一步下降，可推測噻吩磺隆與鹽脅迫發(fā)生協(xié)同作用影響到蔗糖酶活性或產(chǎn)酶微生物活性。

[FK（W11][TPLXL4.tif][FK）]

圖5結(jié)果表明，在非鹽脅迫環(huán)境下，噻吩磺隆的存在會導(dǎo)致土壤脲酶活性下降，但S0T1與S0T2之間無顯著差異（P>0.05）。在中等程度的鹽脅迫下，土壤脲酶活性會顯著降低，但在此條件下噻吩磺隆濃度未對脲酶活性產(chǎn)生顯著影響（S1T0、S1T1和S1T2三者之間差異不顯著）。這些數(shù)據(jù)表明噻吩磺隆與鹽脅迫都會降低土壤脲酶活性，但中等強度鹽脅迫的影響作用更大，比較S0T0與S1T0發(fā)現(xiàn)其在鹽脅迫下脲酶活性最大約下降40%。脲酶與土壤中的氮素循環(huán)密切相關(guān)，它可將尿素水解為氨，是植物重要的氮素營養(yǎng)來源，如果土壤中脲酶活性降低，將會影響土壤中尿素的利用率，若活性過高，會造成植物氨中毒，對土壤肥力和植物生長也不利，因此，了解農(nóng)藥化肥等農(nóng)用化學品對土壤脲酶活性的影響對于農(nóng)林業(yè)生產(chǎn)及土壤維護具有重要意義[22-23]。

土壤中過氧化氫酶可以清除生物代謝過程中所產(chǎn)生的過氧化氫，從而解除土壤中過氧化氫積累對生物體的毒害作用。通常土壤過氧化氫酶活性與土壤有機質(zhì)含量及微生物數(shù)量密切相關(guān)，與土壤肥力也呈正相關(guān)。從圖6的數(shù)據(jù)可以看出，在非[CM（25]鹽脅迫的條件下，噻吩磺隆對土壤過氧化氫酶有較強的激[CM）]

[FK（W11][TPLXL5.tif][FK）]

活作用，這可能是它激活了土壤微生物產(chǎn)過氧化氫酶的活性；但S0T1與S0T2之間無顯著差異。比較S0T0曲線與S1T0曲線可知，鹽脅迫也對過氧化氫酶活性有激活作用，這主要是由于鹽脅迫會影響許多微生物的代謝方式，可能會誘導(dǎo)過氧化氫酶及其他酶類的產(chǎn)生，但是鹽脅迫本身通常會降低過氧化氫酶活性[24]。另外，在鹽脅迫下，噻吩磺隆未表現(xiàn)出對過氧化氫酶的激活作用，S1T0、S1T1與S1T2之間的差異均不顯著，這表明中等程度的鹽脅迫能抑制噻吩磺隆對土壤過氧化氫酶的激活作用。

[FK（W11][TPLXL6.tif][FK）]

土壤磷酸酶活性高低直接影響著土壤中有機磷的分解轉(zhuǎn)化及其生物有效性，可直接反映出土壤磷的基本狀況。磷酸酶在土壤磷循環(huán)中起重要的作用，它可以將土壤中復(fù)雜的有機磷水解成可被生物直接利用的無機磷，從而緩解土壤磷的限制[25-26]。[JP2]從圖7可知，在未受到鹽脅迫的條件下，噻吩磺隆的存在可激活土壤磷酸酶的活性，但這一激活作用主要表現(xiàn)在應(yīng)用的早期，應(yīng)用15 d后的激活作用并不顯著；S0T1與S0T2之間的差異也不顯著，表明更高濃度的噻吩磺隆也不能提高這一激活效應(yīng)。在中等程度鹽脅迫下，土壤磷酸酶的活性將大幅度下降，這是由于土壤中較高的鹽分會直接導(dǎo)致磷酸酶活性的降低[27-28]；S1T0、S1T1和S1T2三者之間的差異不顯著，噻吩磺隆在此條件下未表現(xiàn)出明顯的激活或者抑制效應(yīng)。[JP]endprint

3討論與小結(jié)

土壤微生物是土壤的重要組成部分，它們對土壤的形成發(fā)育、物質(zhì)循環(huán)和肥力演變等均有重大影響。土壤酶來源于土壤微生物、土壤動物、植物根系等，其中微生物是它最主要來源，它在土壤生態(tài)系統(tǒng)的物質(zhì)循環(huán)和能量流動方面扮演重要角色， 土壤酶活性也能用于分析外源物質(zhì)對土壤健康的影響[29]。本研究對各項指標的測試分析表明，中等程度的鹽脅

[FK（W11][TPLXL7.tif][FK）]

[JP2]迫可導(dǎo)致放線菌和真菌數(shù)量顯著減少，但對細菌的影響不顯著；在非鹽脅迫環(huán)境下，噻吩磺隆對細菌和放線菌均有激活作用，而對真菌則表現(xiàn)出抑制作用。鹽脅迫及噻吩磺隆對土壤酶的影響更具多樣性，具體情況是：鹽脅迫能導(dǎo)致土壤蔗糖酶、脲酶、磷酸酶的活性顯著降低，但過氧化氫酶活性顯著提高；在非鹽脅迫條件下，噻吩磺隆對過氧化氫酶和磷酸酶有一定程度的激活作用，對脲酶活性則表現(xiàn)抑制效應(yīng)，對蔗糖酶無顯著影響。經(jīng)相關(guān)性分析表明，放線菌和真菌的數(shù)量與土壤蔗糖酶、脲酶、磷酸酶的活性呈正相關(guān)；在非鹽脅迫下，細菌數(shù)量的增加與過氧化氫酶活性的提高呈正相關(guān)，但在鹽脅迫下無明顯規(guī)律可循；一系列的數(shù)據(jù)分析也表明鹽脅迫與噻吩磺隆聯(lián)合存在于土壤中會產(chǎn)生區(qū)別于單一因素的生態(tài)效應(yīng)響應(yīng)。[JP]

通常，鹽脅迫以及除草劑的應(yīng)用也會對植物的生長構(gòu)成一定影響，進而影響到植物根際相關(guān)酶的分泌，植物根際產(chǎn)生的酶類通常也是土壤酶的重要組成部分，但在本研究的相關(guān)分析中僅考慮了土壤酶與土壤微生物之間的相關(guān)性，暫未涉及到土壤酶與植物之間的關(guān)系，這需要在后續(xù)研究中進一步加以完善，以便更準確地揭示其中的規(guī)律，為合理利用除草劑等農(nóng)用投入品提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和理論指導(dǎo)。

[HS2]參考文獻：

[1][ZK（#]李新安，趙華，李廣領(lǐng)，等. 噻吩磺隆在不同類型土壤中的降解行為[J]. 農(nóng)藥，2012，51（1）：55-57.

[2]Jean P，Cambon J B. Mechanism of thifensulfuron-methyl transformation in soil[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry，1998，46（3）：1210-1216.

[3]熊興明，黎理，劉春來，等. 噻吩磺隆在小麥和土壤中的殘留降解動態(tài)研究[J]. 湖南農(nóng)業(yè)大學學報（自然科學版），2009，35（1）：104-106，110.

[4]García-Ruiz R，Ochoa V，Hinojosa M B，et al. Suitability of enzyme activities for the monitoring of soil quality improvement in organic agricultural systems[J]. Soil Biology & Biochemistry，2008，40（9）：2137-2145.

[5]Forlani G，Mantelli M，Branzoni M，et al. Differential sensitivity of plant-associated bacteria to sulfonylurea and imidazolinone herbicides[J]. Plant and Soil，1995，176（2）：243-253.

[6]Boldt T S，Jacobsen C S. Different toxic effects of the sulfonylurea herbicides metsulfuron-methyl，chlorsulfuron and thifensulfuron-methyl on fluorescent pseudomonads[J]. FEMS Microbiology Letters，2006，161（1）：29-35.

[7]Valle A，Boschin G，Negri M，et al. The microbial degradation of azimsulfuron and its effect on the soil bacterial community[J]. Journal of Applied Microbiology，2006，101（2）：443-452.

[8]劉惠君，詹秀明，劉維屏. 四種酰胺類除草劑對土壤酶活性的影響[J]. 中國環(huán)境科學，2005，25（5）：611-614.

[9]關(guān)松蔭. 土壤酶及其研究方法[M]. 北京：農(nóng)業(yè)出版社，1986.[ZK）]

[10][ZK（#]周禮愷. 土壤酶學[M]. 北京：科學出版社，1987.

[11]周玲玲，孟亞利，王友華，等. 鹽脅迫對棉田土壤微生物數(shù)量與酶活性的影響[J]. 水土保持學報，2010，24（2）：241-246.

[12]Guo Z Y，Tang M Z，Yuan M. Effects of iodosulfuron-methyl sodium on several biological indicators in soil[J]. Chinese Journal of Pesticide Science，2005，7（1）：88-91.

[13]方程冉，沈東升，賀永華. 有機毒物甲磺隆脅迫下根際微生物種群生態(tài)的動態(tài)變化研究[J]. 土壤通報，2003，34（4）：340-342.

[14]馬吉平，陳慶隆，陳柳萌，等. 不同濃度氯嘧磺隆對土壤微生物群落和土壤呼吸強度的影響[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學，2014，42（9）：2593-2596.

[15]Hugh M，Brown M. Degradation of thifensulfuron-methyl in soil：role of microbial carboxyesterase activity[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry，1997，45（5）：961-995.endprint

[16]趙衛(wèi)松. 煙嘧磺隆和噻吩磺隆微生物降解研究[D]. 北京：中國農(nóng)業(yè)大學，2015.

[17]周玲玲，孟亞利，王友華，等. 鹽脅迫對棉田土壤微生物數(shù)量與酶活性的影響[J]. 水土保持學報，2010，24（2）：241-246.

[18]周德平，吳淑杭，褚長彬，等. 鹽脅迫對蔬菜地土壤微生物及土壤酶活的毒害效應(yīng)[J]. 農(nóng)業(yè)環(huán)境科學學報，2011，30（8）：1602-1607.

[19]Cai Z Q，Li S S，Zhang W J，et al. Effects of the novel pyrimidynyloxybenzoic herbicide ZJ0273 on enzyme activities，microorganisms and its degradation in Chinese soils[J]. Environmental Science and Pollution Research，2015，22（6）：4425-4433.

[20]Pampulha M E，Oliveira A. Impact of an herbicide combination of bromoxynil and prosulfuron on soil microorganisms[J]. Current Microbiology，2006，53（3）：238-243.

[21]王建武，馮遠嬌，駱世明. Bt玉米秸稈分解對土壤酶活性和土壤肥力的影響[J]. 應(yīng)用生態(tài)學報，2005，16（3）：524-528.

[22]謝勇波，周清明，龔道新. 不同化學農(nóng)藥對土壤脲酶活性的影響[J]. 湖南農(nóng)業(yè)科學，2010（3）：63-65，68.

[23]Li Y H，Gao Y B. Effects of monosulfuron on growth of millet and soil microbial function[J]. Journal of Agro-Environmental Science，2004，23（4）：633-637.

[24][JP2]莫俊杰，彭詩春，葉昌輝，等. 鹽脅迫下甘蔗根際土壤微生物量及其酶活性的效應(yīng)分析[J]. 廣東農(nóng)業(yè)科學，2016，43（6）：103-108.[JP]

[25]Nannipieri P，Giagnoni L，Landi L，et al. Role of phosphatase enzymes in soil[M]. Phosphorus in Action，Soil Biology，2011：215-243.

[26]Krmer S，Green D M. Acid and alkaline phosphatase dynamics and their relationship to soil microclimate in a semiarid woodlan[J]. Soil Biology & Biochemistry，2000，32（2）：179-188.

[27]劉雅淑，孟春鳳，劉延鵬，等. 森林土壤磷酸酶活性變化特征及其影響因素[J]. 湖北農(nóng)業(yè)科學，2016，55（4）：850-854.

[28]曲博. 濕地土壤磷酸酶活性對土壤有機磷形態(tài)轉(zhuǎn)化的影響研究[D]. 北京：北京林業(yè)大學，2015.

[29]孟立君，吳鳳芝. 土壤酶研究進展[J]. 東北農(nóng)業(yè)大學學報，2004，35（5）：622-626.endprint