冠心康對(duì)ApoE-/-動(dòng)脈粥樣硬化小鼠血清血脂及炎性微環(huán)境的影響*

徐華英 王建茹 王 鳳 杜文婷 章怡祎 劉 萍

（上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院，上海 200032）

冠心康對(duì)ApoE-/-動(dòng)脈粥樣硬化小鼠血清血脂及炎性微環(huán)境的影響*

徐華英 王建茹 王 鳳 杜文婷 章怡祎 劉 萍△

（上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院，上海 200032）

目的 觀察冠心康對(duì)ApoE-/-動(dòng)脈粥樣硬化小鼠的血清白細(xì)胞介素-6（IL-6）、白細(xì)胞介素-8（IL-8）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）表達(dá)的影響，探討冠心康抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用機(jī)制與炎性因子之間的關(guān)系。方法以ApoE-/-小鼠給予高脂飼料建立動(dòng)脈粥樣硬化模型。30只ApoE-/-小鼠隨機(jī)分為模型組、冠心康組、辛伐他汀組；10只同遺傳背景的C57BL/6J小鼠作為正常組。冠心康組以冠心康煎劑灌胃，辛伐他汀組以辛伐他汀水溶液進(jìn)行灌胃。各組干預(yù)12周時(shí)取材。每周檢測(cè)小鼠體質(zhì)量；生化儀檢測(cè)血清血脂；酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)（ELISA）檢測(cè)血清IL-6、IL-8、TNF-α蛋白的表達(dá)情況。免疫組化法檢測(cè)小鼠主動(dòng)脈CD68蛋白的檢測(cè)。結(jié)果干預(yù)12周后，用藥組的小鼠體質(zhì)量均低于模型組（P<0.05）。與模型組比較，冠心康組與辛伐他汀組的血清TC、TG、LDL-C 下降（P<0.05），HDL-C 升高（P<0.05）。 用藥組的血清 IL-8、TNF-α 表達(dá)比模型組均下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；IL-6表達(dá)則升高（P<0.05）。與模型組比較，用藥組的CD68蛋白表達(dá)下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 冠心康可能通過(guò)調(diào)節(jié)血清血脂及炎性因子的表達(dá)，降低血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，從而發(fā)揮抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用。

動(dòng)脈粥樣硬化 冠心康 炎性因子 腫瘤壞死因子-α（TNF-α）

動(dòng)脈粥樣硬化是心血管疾病的病理學(xué)標(biāo)志，又是疾病的前期基礎(chǔ)。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)于動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和進(jìn)展中，炎癥標(biāo)志物常伴隨脂質(zhì)的代謝紊亂而出現(xiàn)。在動(dòng)脈粥樣硬化的不同階段，血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等產(chǎn)生白細(xì)胞介素（Interleukin），白介素作為多種細(xì)胞所產(chǎn)生的細(xì)胞因子，廣泛作用于細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)、增殖分化以及組織炎癥反應(yīng)中。其中，白介素-8（IL-8）和白介素-6（IL-6）參與炎癥期細(xì)胞因子的表達(dá)，而IL-6同時(shí)又能夠激活巨噬細(xì)胞分化［1］。 腫瘤壞死因子-α（TNF-α）是主要由 T 細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的促炎因子，在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展中起重要作用，TNF-α的過(guò)表達(dá)與中風(fēng)、動(dòng)脈粥樣硬化等病理狀況密切相關(guān)［2］。本研究以ApoE-/-小鼠建立動(dòng)脈粥樣硬化模型，通過(guò)冠心康的給藥干預(yù)，觀察動(dòng)脈粥樣硬化小鼠的體質(zhì)量及血脂變化，小鼠血清IL-6、IL-8、TNF-α蛋白變化及小鼠主動(dòng)脈CD68蛋白表達(dá)，探討冠心康抗動(dòng)脈粥樣硬化的可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 雄性APoE-/-小鼠30只，SPF級(jí)，6～8周齡，體質(zhì)量（18±2）g，由上海南方模式有限公司提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（滬）2014-0002。相同遺傳背景的雄性C57BL/6J小鼠10只，6～8周齡，體質(zhì)量18～20 g，作為正常組，購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，動(dòng)物許可證號(hào)：SYXK（滬）2014-0002。

1.2 藥物與試劑 冠心康水煎液由上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院中藥房提供，生黃芪30 g，全瓜蔞15 g，薤白12 g，制半夏12 g，益母草 30 g，丹參12 g，水煎 2次，紗布過(guò)濾，混合加熱后濃度按43.2 g/kg進(jìn)行濃縮，4℃保存?zhèn)溆?。辛伐他汀片（舒降之）由杭州默沙東有限公司提供。規(guī)格20 mg。批號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字J20130068。伊紅蘇木精試劑盒，碧云天生物技術(shù)研究所；IL-6、IL-8、TNF-α試劑盒，江蘇凱基生物技術(shù)股份有限公司；CD68抗體（批號(hào)ab125212），英國(guó)Abcam公司；免疫組化試劑盒，武漢博士德生物工程有限公司；DAB顯色劑，北京中杉金橋有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 SL202N電子天平，上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司；全自動(dòng)生化檢測(cè)儀，日本東芝公司；組織包埋機(jī)，德國(guó)Leica公司；TP1020全自動(dòng)組織脫水機(jī)，德國(guó)Leica公司；RM2335手動(dòng)石蠟切片機(jī)，德國(guó)Leica公司；Synergy H1 MF型酶標(biāo)分析儀，美國(guó)Bio Tek公司；超純水儀，美國(guó)MilliPore公司；倒置熒光顯微鏡，日本Nikon公司。

1.4 分組與造模 30只雄性ApoE-/-小鼠按完全隨機(jī)設(shè)計(jì)的方法分為冠心康組、辛伐他汀組和模型組，每組10只。另取10只相同遺傳背景的C57BL/6J小鼠作為正常組。30只ApoE-/-小鼠高脂飲食（高脂飼料配方：脂肪21%，膽固醇0.15%，基礎(chǔ)飼料為78.85%）8周，建立動(dòng)脈粥樣硬化模型。正常組喂以普通飼料，不進(jìn)行造模。1.5 給藥方法 模型建立以后，冠心康組給予冠心康水煎劑灌胃（43.2 g/kg灌胃）；辛伐他汀組給予辛伐他汀水溶液灌胃（1.5 μg/g灌胃）；模型組給予與用藥組相同劑量的生理鹽水灌胃。每日1次，共灌胃給藥12周，取材前1 d晚上禁食不禁水。

1.6 標(biāo)本采集與檢測(cè)

1.6.1 小鼠的一般狀態(tài)及體質(zhì)量變化 觀察小鼠的一般狀態(tài)。每周測(cè)量1次小鼠的體質(zhì)量。監(jiān)測(cè)從造模1周至造模后及用藥干預(yù)12周的小鼠體質(zhì)量變化。

1.6.2 小鼠血清血脂檢測(cè) 小鼠摘眼球取血，血液室溫靜置后，3500 r/min離心15 min，將分離后的上清液進(jìn)行分裝，全自動(dòng)生化儀檢測(cè)各組小鼠的血脂水平。膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）采用 GPO-PAP 酶法，高密度脂蛋白膽固醇 （HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）采用直接法檢測(cè)。

1.6.3 小鼠主動(dòng)脈病理的檢測(cè) 小鼠主動(dòng)脈進(jìn)行剝離后置于4%多聚甲醛，置于4℃冰箱固定12～24 h，常規(guī)梯度脫水后進(jìn)行石蠟包埋，將血管組織橫斷面切片，切片厚度為4～6 μm，將展片、撈片后的組織附于載玻片于37℃恒溫箱過(guò)夜固定后行HE染色。在顯微鏡下觀察組織形態(tài)學(xué)變化并進(jìn)行拍照。

1.6.4 小鼠血清IL-6、IL-8、TNF-α 蛋白的檢測(cè) 小鼠摘眼球取血，血液室溫靜置后，3500 r/min離心15 min，將分離后的上清液進(jìn)行分裝，參照ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行IL-6、IL-8、TNF-α蛋白的檢測(cè)。

1.6.5 小鼠主動(dòng)脈CD68蛋白的檢測(cè) 免疫組化法檢測(cè)小鼠主動(dòng)脈CD68蛋白的檢測(cè)。按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行免疫組化染色，并進(jìn)行封片。每張切片在400倍的光鏡下隨機(jī)挑選5個(gè)視野，進(jìn)行拍照后采用Image-Pro Plus6.0軟件進(jìn)行半定量分析蛋白表達(dá)的平均光密度，區(qū)域面積。平均積分光密度除以陽(yáng)性著色面積，乘以100為陽(yáng)性表達(dá)率。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件。計(jì)量資料描述服從正態(tài)分布或近似正態(tài)分布以（±s）表示，多組數(shù)據(jù)比較（各組間），符合正態(tài)分布的采用單因素方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組小鼠一般情況及體質(zhì)量比較 見(jiàn)表1。各組小鼠均精神充沛，靈活好動(dòng)，飲食、二便正常，毛發(fā)整潔光滑，各藥物組小鼠與模型組、正常組無(wú)明顯差異。于高脂喂養(yǎng)8周時(shí)隨機(jī)處死2只ApoE-/-小鼠，進(jìn)行主動(dòng)脈HE染色，已確定造模成功。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中正常組和模型組小鼠自然死亡各1只。正常組小鼠體質(zhì)量與其他組別小鼠比較明顯偏低（P<0.05）。經(jīng)藥物干預(yù)后，與模型組比較，冠心康組和辛伐他汀組小鼠的體質(zhì)量呈逐漸下降趨勢(shì)（P<0.05）；模型組小鼠體質(zhì)量呈逐漸上升趨勢(shì)（P<0.05）。

表1 各組小鼠藥物干預(yù)前后體質(zhì)量水平比較（g）

表1 各組小鼠藥物干預(yù)前后體質(zhì)量水平比較（g）

與正常組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與辛伐他汀組比較，△P＜0.05。 下同。

組 別 n 1周 7周 14周 21周正常組 8模型組 8冠心康組 8 18.32±0.46 20.84±1.24 25.08±1.17 27.50±1.14 21.61±0.98*33.64±1.12*38.68±2.24*39.10±2.11*22.25±0.83*34.58±1.09*34.45±1.63*#33.35±1.19*#辛伐他汀組 821.74±0.76*34.38±1.04*34.21±1.34*#34.94±0.93*#

2.2 各小鼠血脂水平比較 見(jiàn)表2。藥物干預(yù)12周后，與正常組比較，模型組小鼠血清TC、TG、LDL-C顯著升高，HDL-C顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與模型組比較，辛伐他汀組小鼠血清TC、TG、LDL-C顯著降低，HDL-C顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。冠心康組小鼠血清較模型組TC、LDLC顯著降低，HDL-C顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），模型組與冠心康組組間TG比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與辛伐他汀組比較，冠心康組小鼠血清 TG、LDL-C 更高（P<0.05），兩組間 TC、HDL-C比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

表2 各組小鼠血脂水平比較（mmol/L）

表2 各組小鼠血脂水平比較（mmol/L）

與正常組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與辛伐他汀組比較，△P＜0.05。 下同。

組 別 n TC TG HDL-C LDL-C正常組 8模型組 8冠心康組 8 3.63±0.87 0.68±0.15 2.23±0.53 2.00±0.61 20.28±2.47*3.21±1.04* 1.21±0.22* 8.08±0.87*14.04±2.11*#2.86±0.81*△ 2.01±0.55# 4.76±0.84*#△辛伐他汀組 815.19±2.31*#1.59±0.57*#2.18±0.68# 3.85±0.79*#

2.3 各組小鼠主動(dòng)脈病理的影響 見(jiàn)圖1。正常組小鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮相對(duì)光滑、無(wú)斑塊形成，平滑肌細(xì)胞排列整齊。模型組小鼠主動(dòng)脈壁存在不同程度的內(nèi)膜增厚，并有纖維帽的形成，主動(dòng)脈管壁厚度不均一，動(dòng)脈粥樣硬化病灶較為明顯，斑塊內(nèi)部結(jié)構(gòu)粗糙，平滑肌細(xì)胞萎縮明顯。其中模型組可見(jiàn)膽固醇結(jié)晶的形成。冠心康組及辛伐他汀組小鼠內(nèi)膜增厚及脂質(zhì)沉積程度減輕，平滑肌細(xì)胞萎縮不明顯，斑塊內(nèi)部結(jié)構(gòu)相對(duì)不粗糙，病變程度較模型組減輕。

2.4 各組小鼠血清IL-6、IL-8、TNF-α比較 見(jiàn)表3。藥物干預(yù)12周后，與正常組比較，模型組小鼠血清IL-6、IL-8、TNF-α顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與模型組比較，冠心康組、辛伐他汀組IL-8、TNF-α顯著降低，IL-6顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 冠心康組小鼠血清 IL-6、IL-8、TNF-α與辛伐他汀組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

圖1 各組小鼠主動(dòng)脈形態(tài)學(xué)（HE染色，100倍）

表 3 各組小鼠血清 IL-6、IL-8、TNF-α 比較（pg/mL

表 3 各組小鼠血清 IL-6、IL-8、TNF-α 比較（pg/mL

組 別 n IL-6 IL-8 TNF-α組 8模型組 8冠心康組 8 51.84±27.35 78.78±33.42 53.98±18.26 81.29±21.85*183.65±42.84*120.66±35.57*122.81±44.78*#133.47±41.46*#68.79±23.85#辛伐他汀組 8109.63±29.36*#112.30±35.67# 75.69±38.78#

2.5 各組小鼠主動(dòng)脈CD68蛋白表達(dá)的比較 見(jiàn)圖2，表4。CD68蛋白為細(xì)胞膜/胞漿染色，陽(yáng)性染色呈深棕色，顏色越深，陽(yáng)性表達(dá)率越明顯。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，模型組小鼠血管中CD68陽(yáng)性表達(dá)率為（32.44±3.89）%，與正常組的陽(yáng)性表達(dá)率（13.37±1.90）%相比升高，巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)明顯，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。冠心康組、辛伐他汀組小鼠中動(dòng)脈的CD68陽(yáng)性表達(dá)率為（19.40±2.05）%，（17.53±1.53）%。 與模型組比較，陽(yáng)性表達(dá)率降低（P<0.05）。用藥組小鼠血管組織中的巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)減輕。

圖2 用藥干預(yù)12周后各組小鼠主動(dòng)脈CD68蛋白的表達(dá)（IHC 染色，400倍）

表4 各組小鼠主動(dòng)脈CD68蛋白的表達(dá)（%s）

表4 各組小鼠主動(dòng)脈CD68蛋白的表達(dá)（%s）

組 別 n IL-6正常組 8模型組 8冠心康組 8 13.37±1.90 32.44±3.89*19.40±2.05*#辛伐他汀組 817.53±1.53*#

3 討 論

心血管疾病，包括缺血性卒中和心臟病發(fā)作，是全球死亡和發(fā)病的主要原因。研究顯示，其基礎(chǔ)病理學(xué)動(dòng)脈粥樣硬化被定義為動(dòng)脈壁的慢性炎性疾?。?］。本病的發(fā)生與脂質(zhì)代謝紊亂、血管內(nèi)皮細(xì)胞的炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。炎癥貫穿動(dòng)脈粥樣硬化的各個(gè)階段。同時(shí)，以脂代謝紊亂、血清高LDL水平等危險(xiǎn)因素的相互作用亦可以擴(kuò)大炎癥的進(jìn)程。研究表明，IL-8是由單核/巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等多種細(xì)胞分泌，屬于CXC亞科的一種促炎趨化因子，與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病等密切相關(guān)［4］。有研究發(fā)現(xiàn)，其水平的升高，可以增加臨床冠心病患者中的心血管事件［5］。本實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，ApoE-/-動(dòng)脈粥樣硬化小鼠的血清IL-8水平升高，經(jīng)藥物干預(yù)后與模型組相比，用藥組的小鼠血清中IL-8水平均下降，表明冠心康組及辛伐他汀組都可以降低ApoE-/-小鼠血清IL-8的表達(dá)，具有抗炎作用。

TNF-α是主要由巨噬細(xì)胞和T細(xì)胞產(chǎn)生的促炎細(xì)胞因子，其在許多生理學(xué)免疫過(guò)程中起關(guān)鍵作用，但是當(dāng)產(chǎn)生過(guò)量時(shí)，其可能對(duì)宿主造成嚴(yán)重?fù)p害。TNF-α的過(guò)度表達(dá)與許多病理狀況有相關(guān)，比如潰瘍性結(jié)腸炎，糖尿病、多發(fā)性硬化，中風(fēng)，動(dòng)脈粥樣硬化等［6］。多實(shí)驗(yàn)研究也表明，阻滯TNF-α信號(hào)傳導(dǎo)與動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展減少有相關(guān)性，可以減少動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展趨勢(shì)［7-8］。在胰島素抵抗的患者中，抗TNF-α治療具有增加胰島素敏感性，具有調(diào)節(jié)肥胖等代謝疾病的效力［9-10］。筆者的實(shí)驗(yàn)表明，用藥干預(yù)后小鼠的TNF-α水平明顯降低，冠心康組與辛伐他汀組都能夠降低血清TNF-α的表達(dá)水平，進(jìn)一步表明其抗炎效應(yīng)。

IL-6屬于細(xì)胞因子，認(rèn)為是一種參與炎癥期細(xì)胞因子表達(dá)而引起局部炎癥，同時(shí)激活巨噬細(xì)胞的分化和浸潤(rùn)而加快動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生有關(guān)［11］。但近年研究表明，IL-6又被證明可以增加全身葡萄糖耐量和胰島素的敏感性，降低體質(zhì)量、逆轉(zhuǎn)脂肪肝等，從而發(fā)揮肥胖中的預(yù)后價(jià)值［12-15］。同時(shí)，IL-6又能促進(jìn)M2型巨噬細(xì)胞的極化［1］。 而 M2 型巨噬細(xì)胞則發(fā)揮抗炎效應(yīng)［16］。在筆者的研究中，中藥復(fù)方冠心康和辛伐他汀組干預(yù)后小鼠IL-6都有所升高，這與用藥干預(yù)組的小鼠在體質(zhì)量、脂代謝等水平上的改善結(jié)果相一致。

動(dòng)脈粥樣硬化屬于中醫(yī)學(xué)“胸痹”“心痛”等范疇。結(jié)合臨床特征，現(xiàn)代醫(yī)家認(rèn)為其主要病機(jī)是本虛和痰濁、氣滯、血瘀等標(biāo)實(shí)為主的相互共同作用的結(jié)果，本項(xiàng)目組結(jié)合中醫(yī)基礎(chǔ)理論及前期的臨床研究，認(rèn)為氣虛痰瘀證候是冠心病、動(dòng)脈粥樣硬化的主要證型，提出益氣活血、祛痰降濁的治療方法，由此構(gòu)成基本方藥冠心康。本方由生黃芪、丹參、制半夏、全瓜蔞、薤白、益母草組成，方中黃芪、丹參、益母草益氣活血，制半夏、薤白、全瓜蔞祛痰降濁，有補(bǔ)有通，標(biāo)本兼治。前期研究表明，中藥復(fù)方冠心康具有調(diào)節(jié)血脂、調(diào)節(jié)肝臟膽固醇穩(wěn)態(tài)、抑制 MCP-1、NF-κΒ 表達(dá)等作用［17-19］。 本研究中，筆者選擇他汀類藥物作為陽(yáng)性對(duì)照藥，他汀具有阻斷膽固醇合成和調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)的能力，選用ApoE-/-小鼠作為動(dòng)脈粥樣硬化模型可以較好反映動(dòng)脈粥樣硬化的形成過(guò)程。本實(shí)驗(yàn)研究顯示，用藥干預(yù)后小鼠動(dòng)脈粥樣硬化組織的巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)減少，冠心康可以控制小鼠體質(zhì)量的過(guò)度增長(zhǎng)，并可以改善ApoE-/-小鼠脂代謝紊亂，調(diào)節(jié)血清 IL-6、IL-8、TNF-α 的表達(dá)，具有調(diào)脂及控制體質(zhì)量、改善炎性環(huán)境，從而發(fā)揮抗動(dòng)脈粥樣硬化。動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病因素多樣，病情發(fā)展和轉(zhuǎn)變的原因復(fù)雜，對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化過(guò)程中炎性因子與其他信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子間的關(guān)系如何，中藥復(fù)方對(duì)炎性因子的具體作用靶點(diǎn)，以及中藥復(fù)方的多靶點(diǎn)、多調(diào)控問(wèn)題，以后仍需進(jìn)一步深入研究。

［1］Braune J，Weyer U，Hobusch C，et al.IL-6 regulates M2 polarization and local proliferation of adipose tissue macrophages in obesity［J］.Journal of immunology，2017，198（7）：2927.

［2］Hashizume M，Mihara M.Atherogenic effects of TNF-α and IL-6 via uP-regulation of scavenger receptors［J］.Cytokine，2012，58（3）：424-430.

［3］Taleb S.Inflammation in atherosclerosis［J］.Archives of cardiovascular diseases，2016，109（12）：708-715.

［4］Boekholdt SM，Peters RJ，Hack CE，et al.IL-8 plasma concentrations and the risk of future coronary artery disease in apparently healthy men and women：the EPIC-Norfolk prospective population study［J］.Arteriosclerosis， thrombosis， and vascular biology，2004，187（2）：1503-1508.

［5］Inoue T，Komoda H，Nonaka M，et al.Interleukin-8 as an indePendent predictor of long-term clinical outcome in patients with coronary artery disease［J］.International journal of cardiology，2008，124（3）：319.

［6］Guirado A，LoPez Sanchez JI，Ruiz-Alcaraz AJ，et al.Cheminform abstract：synthesis and biological evalu ation of 4-Alkoxy-6，9-dichloro［1，2，4］triazolo［4，3-a］quinoxalines as inhibitors of TNF-α and IL-6 ［J］.Euro Pean Journal of Medicinal Chemistry，2012，54（50）：87-94.

［7］Elhage R，Maret A，Pieraggi MT，et al.Differential effects of interleukin-1 receptor antagonist and tumor necrosis factor binding protein on fatty-streak formation in apolipoprotein E-deficient mice［J］.Circulation，1998，97（3）：242-244.

［8］Kleemann R，Zadelaar S，Kooistra T.Cytokines and atherosclerosis： a comprehensive review of studies in mice［J］.Cardiovascular research，2008，79（3）：360-376.

［9］Yazdani-Biuki B，Stelzl H，Brezinschek HP，et al.Improvement of insulin sensitivity in insulin resistant subjects during prolonged treatment with the anti-TNF-α antibody infliximab［J］.EuroPean journal of clinical investigation，2004，34（9）：641-642.

［10］Araújo EP，De Souza CT，Ueno M，et al.Infliximab restores glucose homeostasis in an animal model of diet-induced obesity and diabetes［J］.Endocrinology，2007，148（12）：5991-5997.

［11］Ridker PM，Rifai N，StamPfer MJ，et al.Plasma concentration of interleukin-6 and the risk of future myocardial infarction among apparently healthy men［J］.Circulation，2000，101（15）：1767-1772.

［12］Sadagurski M，Norquay L，F(xiàn)arhang J，et al.Human IL6 enhances lePtin action in mice［J］.Diabetologia，2010，53（3）：525.

［13］Wunderlich FT，Strhle P，Knner AC，et al.Interleukin-6 signaling in liver-parenchymal cells suppresses hepatic inflammation and improves systemic insulin action［J］.Cell metabolism，2010，12（3）：237.

［14］Mauer J，Chaurasia B，Goldau J，et al.Signaling by IL-6 promotes alternative activation of macrophages to limit endotoxemia and obesity-associated resistance to insulin ［J］.Nature immunology，2014，15（5）：423-430.

［15］Ma Y，Gao M，Sun H，et al.Interleukin-6 gene transfer reverses body weight gain and fatty liver in obese mice ［J］.Biochimica et bioPhysica acta，2015，1852（5）：1001.

［16］Fujisaka S，Usui I，Kanatani Y，et al.Telmisartan improves insulin resistance and modulates adiPose tissue macrophage polarization in high-fat-fed mice［J］.Endocrinology，2011，152（5）：1789-1799.

［17］章怡祎，劉萍，勵(lì)冬斐，等.冠心康對(duì)APoE基因敲除小鼠動(dòng)脈粥樣硬化的影響［J］.上海中醫(yī)藥雜志，2012，58（11）：80-83.

［18］胡俊萍，毛美嬌，陳富榮，等.冠心康對(duì)載脂蛋白E基因敲除動(dòng)脈粥樣硬化小鼠主動(dòng)脈粥樣斑塊及MCP-1、NF-B表達(dá)的影響［J］.中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2012，19（5）：41-44.

［19］章怡祎，劉萍，張娜，等.冠心康對(duì)高脂血癥大鼠肝臟膽固醇穩(wěn)態(tài)分子表達(dá)的動(dòng)態(tài)影響［J］.上海中醫(yī)藥雜志，2016，62（11）：69-73.

Effect of Guanxinkang Decoction on Serum Lipids and Inflammatory Microenvironment in APoE-/-Atherosclerotic Mice

XU Huaying ，WANG Jianru，WANG Feng，et al.Longhua Hospital of Shanghai Univer-sity of Traditional Chinese Medicine，Shanghai 200032，China.

Objective： To observe the effect of Guanxinkang Decoction on the serum lipids and the expression of IL-6，IL-8 and tumor necrosis factor-α （TNF-α） in APoE-/-atherosclerotic mice，and to investigate the relationship between anti-atherosclerosis mechanism and inflammatory factors of Guanxinkang Decoction.Methods：APoE-/-mice were given high fat diet to establish atherosclerosis model.Thirty APoE-/-mice were randomly divided into the model group，traditional Chinese medicine group and western medicine group.Ten C57BL/6J mice with same genetic background were used as the normal group.TCM group was treated with Guanxinkang Decoction，and the western medicine group was fed with simvastatin aqueous solution.Each group was drawn at 12 weeks of intervention.Mouse weight was measured weekly.Detection of serum lipids by biochemical analyzer.The expression of IL-6，IL-8 and TNF-α in serum was detected by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）.CD68 protein in mouse aorta was detected by immunohistochemistry.Results： After 12 weeks of intervention，the body weight of the mice in the treated groups was lower than that in the model group （P<0.05）.Compared with the model group，the serum levels of TC，TG and LDL-C in the traditional Chinese medicine group and the western medicine group decreased（P<0.05） and HDL-C increased（P<0.05）.The difference was statistically significant（P<0.05）.The expression of IL-6 was increased（P<0.05），and the expression of IL-8 and TNF-α in the treated groups decreased（P<0.05）.Compared with the model group，the expression of CD68 protein in the treated groups decreased，and the difference was statistically significant （P<0.05）.Conclusion： Guanxinkang Decoction may regulate the expression of serum lipids and inflammatory factors，reduce the damage of vascular endothelial cells，and thus play the role of anti-atherosclerosis.

Atherosclerosis；Guanxinkang Decoction；Inflammatory factors；Tumor necrosis factor-α（TNF-α）

R285.5

A

1004-745X（2017）09-1509-05

10.3969/j.issn.1004-745X.2017.09.002

2017-06-24）

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（81573739）；上海市中醫(yī)藥三年行動(dòng)計(jì)劃項(xiàng)目（ZY3-CCCX-3-3039）

△通信作者（電子郵箱：liuPing23@sina.com）