葉蟬球孢白僵菌Bb305與8種化學農藥的相容性研究

王定鋒，陳焰冠，李慧玲，吳光遠*

葉蟬球孢白僵菌Bb305與8種化學農藥的相容性研究

王定鋒1，陳焰冠2，李慧玲1，吳光遠1*

（1.福建省農業(yè)科學院茶葉研究所，福建 福安 355015；2.長江大學，湖北 荊州 434025）

為明確葉蟬白僵菌Bb305與常用化學農藥的相容性，本研究測定了8種化學農藥對白僵菌Bb305孢子萌發(fā)、菌絲生長和產孢量的影響。試驗結果表明，總體而言，殺蟲劑和殺螨劑與白僵菌Bb305的相容性要好于除草劑。其中，乙基多殺菌素與白僵菌Bb305具有最好的相容性。在常用濃度、亞致死濃度和次亞致死濃度下，乙基多殺菌素對白僵菌Bb305孢子萌發(fā)抑制作用最輕，抑制率為1.30%～2.73%；對白僵菌Bb305菌絲生長的抑制作用也較輕，抑制率為2.86%～4.29%；相比其他化學農藥，乙基多殺菌素對白僵菌Bb305產孢抑制作用也較弱，抑制率為27.20%～43.20%。而在3種試驗濃度下除草劑草銨膦和百草枯對白僵菌Bb305孢子萌發(fā)、菌絲生長和產孢量都具有很強的抑制作用，相容性極差。

球孢白僵菌；化學殺蟲劑；除草劑；相容性

球孢白僵菌Beauveriabassiana可寄生15個目149個科的700多種昆蟲及蜱螨類，是當前研究和應用的最多的一種蟲生真菌，在多種農林害蟲的生物防治中得到廣泛的應用［1］。據Faria統(tǒng)計，全世界（除中國外）已經生產出171個真菌殺蟲劑產品，而33.9%的真菌殺蟲劑是以球孢白僵菌為有效成分［2］。目前我國已經登記的11種真菌殺蟲劑，其中6種是球孢白僵菌產品［3］。但球孢白僵菌作為活體細胞，存在殺蟲速度慢和受環(huán)境影響較大等弊端［4］，嚴重影響其在生產實踐中的應用效果。為解決這一難題，眾多學者開展了其他化學殺蟲劑與蟲生真菌相容性試驗［5－9］，結果表明低劑量的化學殺蟲劑與蟲生真菌混用，能夠起到增效作用［7，10］。為明確葉蟬白僵菌Bb305和化學農藥的相容性，我們開展了葉蟬白僵菌Bb305與8種化學農藥的相容性研究，為今后利用白僵菌和化學農藥混配進行田間防治提供技術參考。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

供試菌株：球孢白僵菌Bb305菌株，分離自茶小綠葉蟬，對葉蟬具有較好的殺蟲活性。

1.2 培養(yǎng)基和萌發(fā)液

薩氏培養(yǎng)基（Sabouraud dextrose agar plus 1%yeast extract，SDAY）：葡萄糖40 g、酵母10 g、蛋白胨10 g、瓊脂20 g，補充蒸餾水至1000 m L，p H 7.0。在121℃下高壓滅菌鍋滅菌15 min。

萌發(fā)液：蔗糖2%、蛋白胨0.5%、補充蒸餾水至1000 m L。高壓滅菌條件同SDAY。

1.3 供試農藥及配制

參照宋漳［13］的方法將化學農藥按照常規(guī)濃度、亞致死濃度（常規(guī)使用濃度稀釋5倍）、次亞致死濃度（常規(guī)使用濃度稀釋10倍）進行配制。整個操作在超凈工作臺中進行。供試的8種化學農藥及其稀釋倍數見表1。

表1 8種化學農藥及稀釋倍數Table 1 Eight farm chemicals and dilutions applied for treatments

1.4 不同農藥處理對白僵菌Bb305孢子萌發(fā)的影響

利用孢子萌發(fā)法。從SDAY平板上刮取培養(yǎng)14 d的白僵菌的新鮮孢子，接入SDY培養(yǎng)液（含0.05%吐溫-80）中，充分振蕩混勻，孢懸液濃度調到1.0×106孢子·m L－1，各培養(yǎng)液中加入不同濃度的供試化學農藥（表1）。將各不同濃度化學農藥處理的孢懸液在25℃，130 r·min－1振蕩培養(yǎng)14 h，用移液器取樣，在顯微鏡下通過血球計數板檢查孢子萌發(fā)情況［14］，每個處理4次重復，以不加化學農藥的孢懸液為對照。按以下公式計算孢子萌發(fā)抑制率：孢子萌發(fā)抑制率（%）＝（1－處理萌發(fā)率／對照萌發(fā)率）×100%。

1.5 不同農藥處理對白僵菌Bb305菌絲生長的影響

每個SDAY培養(yǎng)皿內加入配制好的藥液0.2 m L（表1），在無菌操作下將藥液均勻涂于培養(yǎng)基表面。用0.01%Tween-80將新鮮的白僵菌孢子粉配制成1×106孢子·m L－1的孢懸液，把直徑6 mm的濾紙圓片浸沒于孢子懸液中［15］，再取出濾紙圓片接種于藥劑處理的SDAY平板（直徑9 cm）中央，每個處理4個重復，以加入0.2 m L無菌水的SDAY培養(yǎng)基作為對照。25℃光照培養(yǎng)箱內培養(yǎng)，處理10 d分別測定各SDAY培養(yǎng)基菌落直徑。根據公式求得抑制率：抑制率（%）＝（1－處理菌落直徑／對照菌落直徑）×100%。

1.6 不同農藥處理對白僵菌Bb305產孢的影響

取各平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)15 d的菌落，于菌落中心至邊緣1／2處用6 mm打孔器隨機打取3個菌塊，放入75 m L 0.05%吐溫-80溶液中，用磁力攪拌器攪拌均勻后，顯微鏡下用血球計數板檢查孢子濃度。根據公式求得產孢抑制率：產孢抑制率（%）＝（1－處理產孢量／對照產孢量）×100%。

1.7 統(tǒng)計分析

利用軟件SPSS17.0對數據進行統(tǒng)計分析；利用鄧肯氏新復極差法檢驗差異顯著性。

2 結果與分析

2.1 8種化學農藥對白僵菌Bb305孢子萌發(fā)的影響

從表2可以看出，不同濃度的8種化學農藥對白僵菌Bb305孢子萌發(fā)都存在不同程度的抑制作用；不同種類的農藥對孢子抑制作用存在較大差異；同種農藥對孢子萌發(fā)的抑制率隨濃度的降低而降低。3種試驗濃度下，草銨膦、百草枯、高效氯氰菊酯、螺螨酯、溴氰菊酯對球孢白僵菌的毒害作用較強；在常規(guī)濃度下對白僵菌Bb305孢子萌發(fā)抑制率為83.32%～100.00%，在亞致死濃度下抑制率為41.07%～90.90%，在次亞致死濃度下對白僵菌Bb305孢子萌發(fā)抑制率為10.63%～ 71.81%。高效氯氟氰菊酯、乙基多殺菌素和氯蟲苯甲酰胺在3種試驗濃度下對白僵菌Bb305孢子萌發(fā)的抑制作用均相對較弱，在常規(guī)濃度下對白僵菌Bb305孢子萌發(fā)抑制率為1.72%～24.60%；在亞致死濃度下對白僵菌Bb305孢子萌發(fā)抑制率為0.77%～6.35%；在次亞致死濃度下對白僵菌Bb305孢子萌發(fā)抑制率為0.88%～5.87%。

表2 8種化學農藥及不同濃度處理對白僵菌Bb305孢子萌發(fā)的影響Table 2 Effect of 8 farm chemicals in varied concentrations on spore germination of Bb305 under treatments

2.2 8種化學農藥對白僵菌Bb305菌絲生長的影響

從表3可以看出，8種化學農藥因種類和處理濃度的不同對白僵菌Bb305菌絲生長的影響呈現差異。在3種試驗濃度下，草銨膦、百草枯（除次亞致死濃度）和高效氯氰菊酯對白僵菌Bb305菌絲生長抑制作用最強，抑制率為20.95%～70.95%；而螺螨酯、乙基多殺菌素和氯蟲苯甲酰胺對白僵菌Bb305菌絲生長的抑制作用較輕，具有較好的相容性。

表3 8種化學農藥及不同處理濃度對白僵菌Bb305菌絲生長的影響Table 3 Effect of 8 farm chemicals in varied concentrations on mycelial growth of Bb305 under treatments

2.3 8種化學農藥對白僵菌Bb305產孢量的影響

從表4可知，因農藥的種類和濃度的不同，對球孢白僵菌Bb305產孢量的影響呈現差異。在常規(guī)濃度和亞致死濃度下，除乙基多殺菌素，其余7種化學農藥對白僵菌Bb305產孢抑制率均超過50%；其中草銨膦對白僵菌Bb305產孢抑制作用最為明顯，抑制率達99.04%。在次亞致死濃度下，草銨膦、高效氯氰菊酯、氯蟲苯甲酰胺、高效氯氟氰菊酯和螺螨酯對白僵菌Bb305產孢抑制率也都超過50%。總體而言，草銨膦對白僵菌Bb305產孢抑制作用最為明顯，抑制率為98.72%～99.28%；而乙基多殺菌素對白僵菌Bb305產孢抑制作用最弱，抑制率為27.20%～43.20%。

表4 8種化學農藥及不同處理濃度對白僵菌Bb305產孢量的影響Table 4 Effect of 8 farm chemicals in varied concentrations on sporulation of Bb305 under treatments

3 討論

球孢白僵菌是一種最常見的蟲生真菌之一，具有環(huán)境相容性好、寄主范圍廣、殺蟲活性強并可持續(xù)控制害蟲，以及便于人工培養(yǎng)等優(yōu)點，使其在農林害蟲的生物防治中起到重要作用［1，15］。但作為活體生物農藥，白僵菌也存在殺蟲速度較慢和容易受環(huán)境影響的缺點，使其田間的使用效果受到較大的限制。探索能與蟲生真菌相容性好的農藥進行混合使用，不僅可以提高田間防治效果，而且可以減少田間農藥的使用量［7，10，16－18］。但混用的前提是蟲生真菌要與農藥有較好的相容性。研究表明蟲生真菌與農藥的相容性沒有簡單的規(guī)律可循［7，20］，因此生產上蟲生真菌與農藥混合使用，首先需要明確蟲生真菌與混用的農藥是否具有相容性，才能更好的發(fā)揮兩者的效果，達到提高防效的目的。

眾多學者開展了蟲生真菌與化學農藥的混用試驗，并篩選出一批與蟲生真菌相容性良好的化學農藥［5－9］。盡管如此，隨著農藥更新換代，不斷有新的化學農藥品種和劑型問世，而對于新的化學農藥與蟲生真菌的相容性的研究也有必要不斷的開展，才能了解到新的農藥與與蟲生真菌的相容性。我們研究發(fā)現，殺蟲劑和殺螨劑與白僵菌Bb305的相容性要好于除草劑。該研究結果與蔡悅等研究發(fā)現球孢白僵菌與除草劑的相容性要好于殺蟲劑不一致［6］，造成該結果的原因可能是蔡悅等的供試化學農藥與本研究所用的農藥不一樣。念曉歌［9］報道綠僵菌與高效氯氟氰菊酯和溴氰菊酯的相容性較好，而本研究發(fā)現白僵菌與高效氯氟氰菊酯和溴氰菊酯相容性較差，其原因可能是球孢白僵菌與綠僵菌和農藥的相容性并不完全一致，也可能是不同廠家出產的同類化學農藥助劑成分可能存在差異。熊琦等［20］報道高氯類農藥與白僵菌的相容性較好，可能是本研究所用白僵菌菌株不同所致，亦或是所用的化學農藥的廠家不一樣的原因。

在蟲生真菌與農藥相容性評價指標上，部分研究者主要側重化學農藥對蟲生真菌菌絲生長和孢子萌發(fā)的影響［21－23］，而未考慮其對蟲生真菌產孢量的影響。孢子萌發(fā)、菌絲生長和產孢是蟲生真菌生活史中三個主要階段，只部分考慮其中某個生活史階段，會使得評估的結果具有片面性。綜合考評農藥對蟲生真菌生活史中三個主要階段的影響已經受到越來越多的研究者的重視［6，8－9，24－25］。本研究表明化學農藥對球孢白僵菌孢子萌發(fā)、菌絲生長和產孢量有一定的抑制作用，但并無明顯的規(guī)律。而張英財等［8］對18種化學農藥與綠僵菌的相容性研究和念曉歌等［9］13種常用農藥和玫煙色棒束孢SCAUIFCF01的相容性研究也發(fā)現類似的現象。因此，本文綜合測試了8種化學農藥對球孢白僵菌Bb305生活史中孢子萌發(fā)、菌絲生長和產孢量三個主要階段的影響，明確了球孢白僵菌Bb305與8種化學農藥的相容性，可為今后田間的應用提供依據。

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Tolerances of Beauveria bassiana on Eight Farm Chemicals

WANG Ding-feng1，CHEN Yan-guan2，LI Hui-ling，WU Guang-yuan1*
（1.Tea Research Institute，Fujian Academy of Agricultural Sciences，Fu’an，Fujian 355015，China；2.Yangtze University，Jingzhou，Hubei 434025，China）

To ensure the safety of Beauveria bassiana as a bio-control agent against pest insects，tolerances of the fungus on 8 commonly used farm chemicals were examined.The spore germination，mycelia growth and sporulation of the strain，Bb305，isolated from Empoasca vitis were monitored under treatments with the pesticides，acaricides or herbicides in varied concentrations.B.bassiana was found to be more tolerant to the insecticides or acaricides than the herbicides.Among the chemicals，spinetoram appeared to exert the least harm on Bb305.That is，under the commonly applied concentration for field spray and at or below the sub-lethal concentration of spinetoram，the inhibition rate on the conidial germination of the fungi ranged lowly from 1.30%to 2.73%；that on mycelial growth，2.86%to 4.29%；and，that on sporulation，27.20%to 43.20%.For the herbicides（i.e.，glufosinateammonium and paraquat），on the other hand，the inhibitory effects were significantly greater than either the insecticides or the acaricides under 3 levels of concentrations.

Beauveria bassiana；chemical insecticide；herbicide；compatibility

S476.12

A

2096－0220（2017）02－0046－05

2017－03－01初稿；2017－05－05修改稿

福建省屬公益類科研院所基本科研專項（2014R1012－5）；國家茶葉產業(yè)技術體系建設專項（CARS－23）；福建省農業(yè)科學院茶葉研究所重點項目（2014－cys－02）；國家重點研發(fā)計劃項目（2016YFD0200900）。

王定鋒（1981－），男，助理研究員。主要從事害蟲生物防治研究。E－mail：109259162＠qq.com

*通訊作者：吳光遠（1962－），男，研究員。主要從事茶樹植保與害蟲生物防治。E－mail：gywupt＠163.com