瘤背石磺活性多肽制備工藝優(yōu)化及其抗氧化性探究

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(上海海洋大學(xué)省部共建水產(chǎn)種質(zhì)資源發(fā)掘與利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院,上海 201306)

瘤背石磺活性多肽制備工藝優(yōu)化及其抗氧化性探究

李柏航,沈和定*,朱敏,趙永蠶

(上海海洋大學(xué)省部共建水產(chǎn)種質(zhì)資源發(fā)掘與利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院,上海 201306)

以瘤背石磺為原料,采用響應(yīng)面法優(yōu)化瘤背石磺活性多肽的制備工藝,考察NaCl濃度、液固比、溫度和提取時(shí)間對(duì)羥基自由基清除率的影響。結(jié)果表明:最優(yōu)提取條件為NaCl濃度0.09%,液固比57 mL/g,提取時(shí)間2.5 h,在此條件下羥基自由基清除率最大,預(yù)測(cè)值為33.09%,實(shí)測(cè)值為33.34%,實(shí)測(cè)值與預(yù)測(cè)值相接近,且相對(duì)誤差只有0.76%,表明響應(yīng)面法得到的最佳提取條件合理可行。天然活性多肽體外抗氧化活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:其對(duì)羥基自由基、DPPH自由基、H2O2有較好清除能力,還具有一定還原能力以及亞鐵離子螯合能力。總體而言,瘤背石磺天然活性多肽表現(xiàn)出一定的體外抗氧化活性,具有良好的開(kāi)發(fā)前景。

瘤背石磺,響應(yīng)面法,活性多肽,抗氧化性

瘤背石磺(Onchidiumstruma),江浙滬一帶又叫涂龜、土鮑等,屬于軟體動(dòng)物門(Mollusca)、腹足綱(Gastropoda)、有肺類(Pulmonata)、縮眼目(Systellommatophora)、石磺超科(Onchidioidea)[1]。研究表明,瘤背石磺中含有20多種氨基酸和多種人體所需的微量元素,其營(yíng)養(yǎng)成分在一定程度上比牡蠣、縊蟶等海洋貝類豐富,具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值[2-3]。此外,石磺還具有很高的藥用價(jià)值,一些沿海地區(qū)民間流傳石磺有治哮喘、助消化、消除疲勞、明目等作用,是很好的中藥材[4]。

隨著人們對(duì)石磺認(rèn)識(shí)的逐漸加深,研究領(lǐng)域不斷拓展,學(xué)者們?cè)诜诸悓W(xué)、生態(tài)學(xué)、營(yíng)養(yǎng)學(xué)、繁殖生物學(xué)、酶學(xué)等方面對(duì)石磺的研究已經(jīng)做了大量工作[5-9]。而關(guān)于石磺活性肽的研究報(bào)道不多,1996年Fernández等[10]從石磺屬(Onchidiumsp.)中提取分離到了一種環(huán)縮酚酸肽Onchidin B;2011年Khodabandeh等[11]研究報(bào)道,從石磺的卵細(xì)胞中分離得到一種對(duì)乳腺癌細(xì)胞有一定的抑制作用的蛋白質(zhì)。

本實(shí)驗(yàn)以瘤背石磺為原料,羥自由基清除率為響應(yīng)值,采用響應(yīng)面法對(duì)瘤背石磺抗氧化肽制備工藝進(jìn)行優(yōu)化,考察NaCl濃度、液固比、溫度和提取時(shí)間對(duì)·OH清除率的影響,以期獲得最優(yōu)提取條件,制備出抗氧化肽類,并對(duì)其進(jìn)行體外抗氧化活性測(cè)定,包括羥自由基、DPPH自由基、H2O2的清除能力,亞鐵離子螯合能力以及還原能力,同時(shí)與肌肽的抗氧化能力進(jìn)行比較,為研究瘤背石磺活性物質(zhì)提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1材料與儀器

瘤背石磺 購(gòu)于上海崇明島堡鎮(zhèn),平均體重為(16.41±3.26) g,石磺干粉蛋白含量為(64.38±1.02)%。菲啰啉、肌肽 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;DPPH Sigma公司;其他試劑 均為分析純。

QSJ-D162電動(dòng)組織切碎機(jī) 廣東小熊電器有限公司;AL104電子分析天平 梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司;HWS-26雙列六孔恒溫水浴鍋 上海慧泰儀器制造有限公司;UB-7pH計(jì) 上海皖寧精密科學(xué)儀器有限公司;TDZ6B-WS低速臺(tái)式離心機(jī) 上海盧湘儀離心機(jī)儀器有限公司;LGJ-12真空冷凍干燥機(jī) 北京松源華興科技發(fā)展公司;UV-1800PC紫外可見(jiàn)分光光度計(jì) 上海菁華科技儀器有限公司。

1.2材料預(yù)處理

瘤背石磺→洗去泥土→解剖去除內(nèi)臟→剪成小碎塊→冷凍干燥→研磨成粉→干燥環(huán)境下儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

1.3多肽粗提液制備流程

稱取一定量瘤背石磺干粉→燒杯→加入配好的PBS緩沖液(pH=7.0)→低速磁力攪拌2 h→過(guò)濾提取液→低溫高速離心(4 ℃,8000 r/min)20 min→多肽粗提液。

1.4單因素實(shí)驗(yàn)

NaCl濃度對(duì)·OH清除率的影響:在液固比=60∶1 (mL/g),溫度=20 ℃,時(shí)間=2 h的條件下,調(diào)整NaCl濃度為0.05%、0.10%、0.15%、0.20%、0.25%,進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)。

液固比對(duì)·OH清除率的影響:在NaCl濃度為0.10%,溫度=20 ℃,時(shí)間=2 h的條件下,調(diào)整液固比為30∶1、60∶1、90∶1、120∶1和150∶1 (mL/g),進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)。

溫度對(duì)·OH清除率的影響:在NaCl濃度為0.10%,液固比=60∶1 (mL/g),時(shí)間=2 h的條件下,調(diào)整溫度為20、25、30、35和40 ℃,進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)。

提取時(shí)間對(duì)·OH清除率的影響:在NaCl濃度為0.10%,液固比=60∶1 (mL/g),溫度=20 ℃的條件下,調(diào)整時(shí)間為1、1.5、2、2.5和3 h,進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)。

1.5響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,對(duì)瘤背石磺天然活性多肽制備工藝進(jìn)行響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),選取3個(gè)因素:NaCl濃度、液固比、提取時(shí)間進(jìn)行Box-Beknhen實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),表1為實(shí)驗(yàn)因素和水平。

表1 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)水平編碼表Table 1 Factors and levels of response surface experiences

1.6多肽粗提液抗氧化活性測(cè)定

用優(yōu)化出的工藝條件制備瘤背石磺多肽粗提液,對(duì)得到的粗提液進(jìn)行冷凍干燥,將凍干樣品于-20 ℃密封保存。通過(guò)測(cè)定清除·OH 能力、清除DPPH·能力、清除H2O2能力、還原能力和亞鐵離子螯合能力來(lái)綜合反映瘤背石磺多肽粗提液中抗氧化肽的抗氧化性,并與肌肽的抗氧化性進(jìn)行比較研究,分析它們之間抗氧化活性的差異。

1.6.1 羥自由基清除活性測(cè)定 采用分光光度法[12]。在試管中分別加入0.5 mL樣品液,3.5 mL純水,0.5 mL 0.01 mol/L水楊酸-乙醇溶液,0.5 mL 0.01 mol/L FeSO4溶液,最后加5 mL 0.1 mol/L H2O2啟動(dòng)Fenton反應(yīng),振蕩混合后于37 ℃水浴保溫30 min,于510 nm處測(cè)定吸光度A1;用0.5 mL純水代替0.01 mol/L FeSO4溶液,于510 nm處測(cè)得吸光度A2;用0.5 mL純水代替樣品液,于510 nm處測(cè)得吸光度A3。

·OH清除率計(jì)算公式:清除率(%)=[1-(A1-A2)/A3]×100

1.6.2 DPPH自由基清除活性測(cè)定 參照劉成梅等[13]的方法,稍作改動(dòng)。在具塞試管中加入2 mL樣品液和2 mL 1×10-4mol/L DPPH溶液(95%乙醇配制),搖勻后在室溫下密閉避光30 min,于517 nm處測(cè)定吸光度A1;用2 mL 95%乙醇溶液代替2 mL 1×10-4mol/L DPPH溶液,測(cè)得吸光度A2;用2 mL純水代替2 mL樣品液,測(cè)得吸光度A0。

DPPH·清除率計(jì)算公式:清除率(%)=[1-(A1-A2)/A0]×100

1.6.3 H2O2清除活性測(cè)定 參照王運(yùn)改[14]的方法并稍加修改。樣品溶于3.4 mL磷酸緩沖液(pH=7.4)中,加入0.6 mL 4 mol/L的H2O2溶液,混勻后靜置10 min,于230 nm處測(cè)定吸光度A1;磷酸緩沖液中不加入樣品,測(cè)得吸光度A0。

H2O2清除率計(jì)算公式:清除率(%)=(A0-A1)/A0×100

1.6.4 還原能力測(cè)定 參照王艷梅等[15]的方法并稍加修改。在試管中加入2 mL樣品液,2.5 mL 0.2 mol/L pH6.6的磷酸鹽緩沖液和2.5 mL 1%鐵氰化鉀溶液,混勻后于50 ℃保溫20 min后加入2.5 mL 10%的三氟乙酸,混勻后3000 r/min離心10 min。取2.5 mL上清液,加2.5 mL純水和0.5 mL 0.1% FeCl3,于700 nm處測(cè)定吸光度。吸光度越大則說(shuō)明還原能力越強(qiáng)。

1.6.5 亞鐵離子螯合能力測(cè)定 參照王艷梅等[15]的方法。2 mL樣品液中加入2.8 mL純水,混合后再加入0.1 mL 2 mmol/L FeCl2和0.1 mL 5 mmol/L菲啰啉,靜置10 min,于562 nm處測(cè)定吸光度A1;用2 mL純水代替2 mL樣品液,測(cè)得吸光度A0。

亞鐵離子螯合能力計(jì)算公式:螯合能力(%)=(A0-A1)/A0×100

1.7數(shù)據(jù)分析

每個(gè)實(shí)驗(yàn)點(diǎn)做三組平行,結(jié)果取平均值。用SPSS分析軟件進(jìn)行單因素方差分析和顯著性檢驗(yàn),利用Design expert軟件進(jìn)行響應(yīng)面數(shù)據(jù)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1單因素結(jié)果分析

2.1.1 NaCl濃度對(duì)羥基自由基清除率的影響 由圖1可發(fā)現(xiàn),NaCl濃度對(duì)羥基自由基清除率的影響顯著(p<0.05)。羥基自由基清除率在NaCl濃度為0.05%～0.10%時(shí),呈增大的趨勢(shì),在NaCl濃度為0.10%～0.25%時(shí),呈減小的趨勢(shì)。分析認(rèn)為當(dāng)NaCl濃度為0.10%時(shí),緩沖液中的離子強(qiáng)度最適合瘤背石磺天然活性多肽的溶出。因此,本實(shí)驗(yàn)選取0.10%為最適NaCl濃度。

圖1 NaCl濃度對(duì)羥基自由基清除率的影響Fig.1 Influence of NaCl concentration on the clearance rate of hydroxyl radical注：標(biāo)注不同字母表示數(shù)據(jù)差異顯著(p<0.05)，圖2～圖4同。

圖2 液固比對(duì)羥基自由基清除率的影響Fig.2 Influence of liquid-solid rate on the clearance rate of hydroxyl radical

2.1.2 液固比對(duì)羥基自由基清除率的影響 如圖2所示,液固比對(duì)羥基自由基清除率的影響顯著(p<0.05)。羥基自由基清除率的變化隨著液固比的增大呈現(xiàn)先升后降的趨勢(shì)。由于液固比較低時(shí)分子的擴(kuò)散速度較慢,因此活性多肽溶出較少,隨著液固比的增加,分子擴(kuò)散速度加快,在60 mL/g時(shí),活性多肽基本溶出,羥基自由基清除率也達(dá)到最高值,而后隨著液固比繼續(xù)增加,活性多肽在緩沖液中的濃度逐漸降低,羥基自由基清除率也隨之降低。因此,本實(shí)驗(yàn)選取60 mL/g為最適液固比。

2.1.3 溫度對(duì)羥基自由基清除率的影響 由圖3可以發(fā)現(xiàn),溫度對(duì)羥基自由基清除率的影響不顯著(p>0.05)。在溫度變化的范圍內(nèi),羥基自由基清除率變化不明顯。因此,從簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)操作的角度出發(fā),選取20 ℃為最適提取溫度。

圖3 溫度對(duì)羥基自由基清除率的影響Fig.3 Influence of temperature on the clearance rate of hydroxyl radical

2.1.4 提取時(shí)間對(duì)羥基自由基清除率的影響 由圖4可以看出,提取時(shí)間對(duì)羥基自由基清除率的影響顯著(p<0.05)。隨著提取時(shí)間的增加,羥基自由基清除率呈增大的趨勢(shì)。其中,在1～1.5 h時(shí),羥基自由基清除率增速較大,1.5～3 h時(shí),羥基自由基清除率增速變緩。因此,從經(jīng)濟(jì)節(jié)能的角度出發(fā),選取2 h為最適提取時(shí)間。

圖4 提取時(shí)間對(duì)羥基自由基清除率的影響Fig.4 Influence of enzymolysis time on the clearance rate of hydroxyl radical

2.2響應(yīng)面結(jié)果分析

2.2.1 響應(yīng)面優(yōu)化因素確定 使用SPSS軟件對(duì)各個(gè)單因素進(jìn)行顯著性方差分析,選擇對(duì)羥基自由基清除率影響顯著的幾個(gè)因素進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)。通過(guò)分析可以得出NaCl濃度、液固比和提取時(shí)間對(duì)羥基自由基清除率影響顯著,選擇這三個(gè)因素進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn),其他因素取單因素實(shí)驗(yàn)中的最佳水平。

2.2.2 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)結(jié)果 表2為響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)方案及結(jié)果,使用Design Expert對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析,得到回歸方程為:羥基自由基清除率=33.08-0.26A-0.076B+0.037C-0.062AB+0.000AC+5.000E-003BC-0.93A2-0.30B2-0.040C2。

表2 實(shí)驗(yàn)方案與結(jié)果Table 2 Testing program and the results

2.2.3 方差分析 表3為回歸模型及各項(xiàng)方差分析結(jié)果。此模型顯著(p<0.0001),相關(guān)系數(shù)R2為0.9962,說(shuō)明此模型能解釋99.62%響應(yīng)值的變化,且失擬項(xiàng)p=0.5199>0.05,不顯著,實(shí)驗(yàn)誤差小。因此,可以用此模型對(duì)瘤背石磺活性多肽的制備工藝進(jìn)行分析和預(yù)測(cè)?？梢园l(fā)現(xiàn),一次項(xiàng)中A、B的回歸系數(shù)極顯著,說(shuō)明NaCl濃度和液固比對(duì)羥基自由基清除率有極顯著影響;交互項(xiàng)AC的偏回歸系數(shù)顯著,說(shuō)明NaCl濃度和液固比的交互項(xiàng)對(duì)羥基自由基清除率有顯著影響;2個(gè)二次項(xiàng)A2、B2的偏回歸系數(shù)達(dá)到極顯著水平,說(shuō)明NaCl濃度和液固比對(duì)羥基自由基清除率影響極大,且不是簡(jiǎn)單的一次線性關(guān)系。

表3 回歸方程方差分析表Table 3 Analysis results of regression and variance

注:“*”為顯著(p<0.05),“**”為極顯著(p<0.01)。

2.2.4 響應(yīng)面曲面分析 通過(guò)響應(yīng)曲面圖,可直觀地看出各個(gè)因素間的交互作用及其對(duì)羥基自由基清除率的影響。等高線的形狀越接近橢圓形,說(shuō)明因素間的交互作用越強(qiáng),說(shuō)明其交互效應(yīng)越顯著[16]。由于交互項(xiàng)里只有NaCl濃度和液固比的交互作用顯著,因此做出該交互項(xiàng)的響應(yīng)面圖和等高線圖(圖5)。由圖5的響應(yīng)曲面可以看出,羥基自由基清除率受到NaCl濃度和液固比的影響,只有取中間某個(gè)值時(shí),清除率才能達(dá)到最大值。另外可以看出,NaCl濃度和液固比的交互作用顯著,等高線的中心點(diǎn)即為兩者組合的最優(yōu)值。

圖5 NaCl濃度和液固比的交互作用對(duì)羥基自由基清除率影響的響應(yīng)曲面和等高線Fig.5 Response surface and contour plots for the influence of NaCl concentration and liquid-solid rate on the clearance rate of hydroxyl radical

2.2.5 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 對(duì)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ瓦M(jìn)行分析,得到制備瘤背石磺活性多肽的最優(yōu)工藝條件為:NaCl濃度0.09%,液固比56.71 mL/g,提取時(shí)間2.23 h,此條件下羥基自由基清除率最大,為33.11%。進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)時(shí),考慮到操作的可行性,將條件改為:NaCl濃度0.09%,液固比57 mL/g,提取時(shí)間2.5 h,實(shí)際測(cè)得羥基自由基清除率為33.41%、33.29%、33.21%、33.47%和33.32%,平均值為33.34%,與理論預(yù)測(cè)值33.11%相接近且相對(duì)誤差只有0.7%,說(shuō)明采用響應(yīng)面法優(yōu)化得到的工藝條件比較可靠,具有一定的參考價(jià)值。

2.3瘤背石磺活性多肽抗氧化作用

2.3.1 活性多肽對(duì)羥基自由基的清除活性 羥基自由基是體內(nèi)活性氧自由基中活性最強(qiáng)的,容易與諸如蛋白質(zhì),氨基酸等生物分子反應(yīng),因此清除羥基自由基是預(yù)防疾病的一種有效方法[17]。從圖6可以看出,在濃度低于2.0 mg/mL時(shí),瘤背石磺活性多肽對(duì)羥基自由基清除率略微高于肌肽,但當(dāng)濃度高于2.0 mg/mL后,肌肽對(duì)羥基自由基的清除率明顯高于瘤背石磺活性多肽,表明瘤背石磺天然活性多肽具有一定的羥基自由基清除能力。

圖6 活性多肽對(duì)羥基自由基的清除效果Fig.6 Hydroxyl radical clearance ability of bioactive peptides

2.3.2 活性多肽對(duì)DPPH自由基的清除活性 DPPH自由基溶于乙醇溶液時(shí)呈紫羅蘭色,并在517 nm處有最大吸光度。DPPH自由基的孤對(duì)電子與物質(zhì)結(jié)合,吸光度降低。吸光度越低說(shuō)明物質(zhì)清除DPPH自由基的能力越強(qiáng)[18]。從圖7可知,瘤背石磺活性多肽對(duì)DPPH自由基的清除作用明顯比肌肽要高很多。在濃度為3 mg/mL時(shí),瘤背石磺活性多肽對(duì)DPPH自由基的清除率就已經(jīng)是肌肽的2倍多,表明瘤背石磺活性多肽具有較強(qiáng)的DPPH自由基清除能力,是一種有效的DPPH清除劑。

圖7 活性多肽對(duì)DPPH自由基的清除效果Fig.7 DPPH radical clearance ability of bioactive peptides

2.3.3 活性多肽對(duì)H2O2的清除活性 由圖8可知,肌肽對(duì)H2O2有著很強(qiáng)的清除能力,在0.2 mg/mL的濃度時(shí)就已達(dá)到將近90%的清除率,高于瘤背石磺活性多肽。但隨著濃度增大,瘤背石磺活性多肽與肌肽的差距逐漸縮小。在濃度為0.8 mg/mL時(shí),能達(dá)到60%,表明其對(duì)H2O2有較強(qiáng)的清除能力。

圖8 活性多肽對(duì)H2O2的清除效果Fig.8 Hydrogen peroxide clearance ability of bioactive peptides

2.3.4 活性多肽的還原能力 還原能力與抗氧化能力呈正相關(guān),還原能力強(qiáng)的樣品能通過(guò)提供電子與自由基反應(yīng),使自由基形成較為穩(wěn)定的物質(zhì)來(lái)中斷自由基連鎖反應(yīng)[19]。吸光度越大,說(shuō)明還原能力越強(qiáng)。由圖9可以看出,肌肽的還原能力較低,相比之下,瘤背石磺活性多肽的還原能力明顯高于肌肽,表明瘤背石磺活性多肽具有較強(qiáng)的還原能力。

圖9 活性多肽的還原能力Fig.9 Reducing power of bioactive peptides

2.3.5 活性多肽的亞鐵離子螯合能力 亞鐵離子等金屬離子能催化脂質(zhì)的氧化,因此一種物質(zhì)如果具有金屬離子螯合能力,則能起到抗氧化作用。由圖10可以看出,濃度從1 mg/mL增大到2 mg/mL時(shí),肌肽的亞鐵離子螯合能力迅速增強(qiáng),而后趨于平穩(wěn)。瘤背石磺活性多肽的亞鐵離子螯合能力相比肌肽較弱,但在濃度為4 mg/mL時(shí)仍能達(dá)到50%左右,說(shuō)明其具有一定的亞鐵離子螯合能力。

圖10 活性多肽的亞鐵離子螯合能力Fig.10 Ferrous ion chelating capacity of bioactive peptides

3 結(jié)論

響應(yīng)面法對(duì)瘤背石磺活性多肽制備工藝的優(yōu)化結(jié)果為:NaCl濃度0.09%,液固比57 mL/g,提取時(shí)間2.5 h,在此條件下羥基自由基清除率平均值為33.34%,與預(yù)測(cè)值33.09%相接近且相對(duì)誤差只有0.76%,證明優(yōu)化結(jié)果合理可行。體外抗氧化實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,瘤背石磺活性多肽對(duì)羥基自由基、DPPH自由基、H2O2有較好清除能力,還具有一定還原能力以及亞鐵離子螯合能力?？傮w而言,瘤背石磺活性多肽表現(xiàn)出較好的體外抗氧化活性,具有良好的開(kāi)發(fā)前景。

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StudyonprocessoptimizationandantioxidantactivityofbioactivepeptidesfromOnchidiumstruma

LIBo-hang,SHENHe-ding*,ZHUMin,ZHAOYong-can

(Key Laboratory of Exploration and Utilization of Aquatic Genetic Resources, Minister of Education,Shanghai Ocean University,Shanghai 210306,China)

In this paper,the preparation process of oyster bioactive peptides was optimized by response surface method. The effect of NaCl concentration,liquid-solid ratio,temperature and extraction time on the scavenging rate of hydroxyl radicals was investigated. The result showed that optimum extraction conditions were:NaCl concentration 0.09%,liquid-solid rate 57 mL/g,time 2.5 h. Under this condition,the predictive value clearance rate of hydroxyl radical was 33.09% and the measured value was 33.34%,and the relative error was only 0.76%. It showed that the optimum extracting condition of response surface method was reasonable and feasible. The best result of bioactive peptides antioxidant activity indicated that it had a relatively good scavenging ability to hydroxyl radical,DPPH free radical and H2O2. Meanwhile,it also had reducing power and ferrous ion chelating capacity. On the whole,Onchidiumstrumabioactive peptides reflect a certain antioxidant activity and has a good prospect of development.

Onchidiumstruma;response surface methodology;bioactive peptides;antioxidant activity

2017-02-21

李柏航(1990-)，男，碩士研究生，研究方向：海洋生物資源研究與開(kāi)發(fā)，E-mail:li_bo_hang@sina.com。

*通訊作者:沈和定(1964-)，男，博士，教授，研究方向：貝類增養(yǎng)殖及海洋生物資源利用，E-mail:hdshen@shou.edu.cn。

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(41276157)；上海高校水產(chǎn)學(xué)一流學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目資助。

TS201.2

:B

:1002-0306(2017)15-0168-06

10.13386/j.issn1002-0306.2017.15.032