藏藥十味乳香膠囊質量標準研究

招嘉文，祝清燦，魏俊校，黃炳森，劉凱，陳泳惠，杜藹媚

[1.國藥集團德眾(佛山)藥業(yè)有限公司，廣東 佛山 528000；2.國藥集團同濟堂(貴州)制藥有限公司，貴州 貴陽 550200]

·中藥工業(yè)·

藏藥十味乳香膠囊質量標準研究

招嘉文1，祝清燦2*，魏俊校1，黃炳森1，劉凱2，陳泳惠1，杜藹媚1

[1.國藥集團德眾(佛山)藥業(yè)有限公司，廣東 佛山 528000；2.國藥集團同濟堂(貴州)制藥有限公司，貴州 貴陽 550200]

目的：提高十味乳香膠囊質量標準。方法：采用薄層色譜法對處方中訶子和毛訶子進行定性鑒別；采用高效液相色譜法測定大黃酚的含量，使用FNG Redclassical C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；以甲醇-0.1%磷酸溶液(80∶20)為流動相；流速為1.0 mL·min-1；檢測波長為254 nm。結果：薄層色譜斑點清晰，陰性無干擾。大黃酚在0.100 8～1.008 μg有良好的線性關系(r=0.999 7)，平均加樣回收率為99.02%(n=6)，RSD為1.91%。結論：建立的方法準確、可靠、重復性好，可用于該制劑的質量控制。

十味乳香膠囊；薄層色譜法；高效液相色譜法；訶子；毛訶子；大黃酚

十味乳香膠囊為藏藥制劑，由寬筋藤、訶子、毛訶子、決明子、黃葵子、乳香等組成。質量標準收載于《國家中成藥標準匯編》腦系經絡肢體分冊。具有祛風燥濕的功能。用于濕疹、類風濕性關節(jié)炎、痛風等風濕痹癥、黃水病、皮膚病。該制劑現(xiàn)行質量標準對寬筋藤、木香進行薄層色譜法鑒別，采用薄層掃描法進行決明子中大黃酚的含量測定。為了控制產品質量，確保臨床療效，本實驗采用薄層色譜法對訶子[1-6]、毛訶子進行定性鑒別[1，5-6]，改用高效液相色譜法對大黃酚進行含量測定[1，8]，為提高其質量標準提供參考。

1 儀器與試藥

1.1儀器

Waters2695高效液相色譜儀(在線脫氣機、四元泵、2998PDA二極管陣列檢測器、Empower2化學工作站)；BS224S電子分析天平(德國賽多利斯公司)；YOKO-ZS薄層色譜成像儀(武漢藥科新技術開發(fā)有限公司)；ZF-2C型暗箱式自動紫外分析儀(上海安亭電子儀器廠)；必能信超聲波清洗儀[型號Branson5510，必能信超聲(上海)有限公司]；功率250W，頻率40kHz)。

1.2試藥

HPLC用甲醇為色譜純(賽默飛世爾科技有限公司，批號：144639)；水為超純水；其余試劑為分析純(天津市富宇精細化工有限公司)。

訶子對照藥材(121015-201004)、毛訶子對照藥材(121206-0101)、大黃酚對照品(110796-201118)均購于中國食品藥品檢定研究院。硅膠G預制薄層板(德國默克公司，批號：HX377558)；硅膠G預制薄層板(青島海洋化工廠分廠，批號：20120622)；硅膠G預制薄層板(浙江臺州市路橋四甲生化塑料廠)；硅膠G(200目，青島海洋化工有限公司分，批號：0130616)。C18固相萃取小柱(WatersSep-PakVac500mg/3cc，沃特世公司，批號：036032328A；VarianBondElute-C18500mg/3mL，瓦里安公司，批號：0703510；WelchC18E500mg/6mL，月旭科技公司，批號：00501)。

十味乳香膠囊樣品(青海普蘭特藥業(yè)有限公司，批號分別為140201，140504，140613，140701，140711，140811，140907，141003，141116，150130)。

2 方法與結果

2.1訶子薄層色譜鑒別

2.1.1供試品溶液的制備 取十味乳香膠囊內容物1g，加無水乙醇30mL，加熱回流30min，濾過，濾液蒸干，殘渣用甲醇5mL使溶解，通過中性氧化鋁柱(100～200目，5g，內徑為2cm)，用稀乙醇50mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加水5mL使溶解，濾過，濾液通過已處理好的C18固相萃取小柱(規(guī)格500mg，3mL，先用甲醇10mL沖洗，再用水10mL沖洗)，用30%甲醇10mL洗脫，棄去30%甲醇洗脫液，再用甲醇10mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇0.5mL使溶解，作為供試品溶液[1]。

2.1.2對照藥材溶液的制備 取訶子對照藥材0.5g，加無水乙醇30mL，按2.1.1方法制備，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為對照藥材溶液。

2.1.3陰性對照溶液的制備 按照處方配比，取除訶子外的其他藥味，按十味乳香膠囊工藝制成樣品，按2.1.1的方法制成缺訶子陰性對照溶液。

2.1.4薄層鑒別方法及結果 吸取供試品溶液與缺訶子陰性對照溶液各10μL、訶子對照藥材溶液5μL，分別點于硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(15∶5∶2)10℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，日光下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性對照溶液在相應的位置上無斑點。見圖1。

注：1～3.供試品(批號：140504，140613，140701)；4.訶子對照藥材；5.缺訶子陰性。圖1 十味乳香膠囊訶子薄層色譜圖

2.2毛訶子薄層色譜鑒別

2.2.1供試品溶液的制備 取十味乳香膠囊內容物1g，加無水乙醇30mL，加熱回流30min，濾過，濾液蒸干，殘渣用甲醇5mL使溶解，通過中性氧化鋁柱(100～200目，5g，內徑為2cm)，用稀乙醇50mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加水6mL使溶解，濾過，濾液通過已處理好的C18固相萃取小柱(規(guī)格500mg，3mL，先用甲醇10mL沖洗，再用10mL水沖洗)，用30%甲醇10mL洗脫，棄去30%甲醇洗脫液，再用10mL甲醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加0.5mL甲醇使溶解，作為供試品溶液[1]。

2.2.2對照藥材溶液的制備 取毛訶子對照藥材0.5g，加無水乙醇30mL，按2.1.1方法制備，殘渣加1mL甲醇使溶解，作為對照藥材溶液。

2.2.3陰性對照溶液的制備 按照處方配比，取除毛訶子外的其他藥味，按十味乳香膠囊工藝制成樣品，按2.2.1方法制成缺毛訶子陰性對照溶液。

2.2.4薄層鑒別方法及結果 吸取供試品溶液與缺毛訶子陰性對照溶液各10μL、毛訶子對照藥材溶液5μL，分別點于硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(8∶2∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，置于紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照在相應的位置上無斑點。見圖2。

注：1～3.供試品(批號：140504，140613，140701)；4.毛訶子對照藥材；5 缺毛訶子陰性。圖2 十味乳香膠囊毛訶子薄層色譜圖

2.3大黃酚的含量測定

2.3.1供試品溶液的制備 取十味乳香膠囊內容物，研細，取約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加甲醇50mL，80℃水浴回流30min，濾過，濾渣用10mL甲醇洗滌，合并濾液，蒸干，殘渣加水10mL使溶解，再加鹽酸1mL，置水浴中加熱30min，立即冷卻，用乙醚振搖提取4次，每次20mL，合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇使溶解，并轉移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3.2對照品溶液的制備 精密稱取大黃酚對照品適量，加甲醇制成質量濃度為50μg·mL-1的溶液，作為對照品溶液。

2.3.3陰性對照溶液的制備 按照處方配比，取除決明子外的其他藥味，按十味乳香膠囊工藝制成樣品，按2.3.1方法制成缺決明子陰性對照溶液。2.3.4色譜條件 采用FNGRedclassicalC18(250mm×4.6mm，5μm)色譜柱、Kromasil5-100C18(250mm×4.6mm，5μm)色譜柱和WelchUltimateXDB-C18(250mm×4.6mm，5μm)色譜柱，以甲醇-0.1%磷酸溶液(80∶20)為流動相，流速1.0mL·min-1，檢測波長為254nm；理論板數按大黃酚峰計不低于3000，分離度大于1.5，符合規(guī)定。

2.3.5專屬性試驗 吸取大黃酚對照品溶液、十味乳香膠囊供試品溶液、缺決明子陰性對照溶液各5μL，按2.3.4色譜條件進樣測定。結果表明，大黃酚能與其他成分的色譜峰分離，缺決明子陰性對照無干擾，結果見圖3。

注：A.大黃酚對照品；B.十味乳香膠囊樣品；C.缺決明子陰性對照樣品。圖3 大黃酚檢測HPLC圖

采用二極管陣列檢測器對十味乳香膠囊供試品溶液中的大黃酚色譜峰進行峰光譜掃描和純度檢測，結果峰純度角度<峰純度閾值，供試品中大黃酚光譜圖與譜庫中大黃酚標準光譜圖匹配理想，說明大黃酚色譜峰為純峰，純度符合要求。見圖4～5。

圖4 供試品溶液大黃酚純度檢測圖

圖5 供試品溶液大黃酚光譜庫匹配圖

2.3.6線性關系的考察 取大黃酚對照品適量，精密稱定，置50mL容量瓶中，加甲醇使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，制成每1mL中含大黃酚201.6μg的對照品溶液。精密吸取該對照品溶液5mL(n=4)，分別置于10、20、25、50mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制成系列濃度對照品溶液Ⅰ～Ⅳ(質量濃度分別為100.8、50.40、40.32、20.16μg·mL-1)。分別精密吸取對照品溶液、系列濃度對照品溶液Ⅰ～Ⅳ各5μL，注入液相色譜儀，按2.3.4色譜條件測定各自峰面積。以進樣量(μg)為橫坐標(X)，峰面積為縱坐標(Y)，求得大黃酚的線性回歸方程：Y=4554912X+16672，r=0.9997。結果表明，大黃酚在0.1008～1.008μg線性關系良好。

2.3.7精密度試驗 精密吸取大黃酚對照品溶液(50.40μg·mL-1)5μL，重復進樣5次，按2.3.4色譜條件測定，平均峰面積為1183254，RSD為1.0%，符合測定要求。

2.3.8穩(wěn)定性考察 取十味乳香膠囊(批號140201)按照2.3.1方法制備供試品溶液，分別于0、2、4、8、11、24h進樣5μL，按2.3.4色譜條件測定，大黃酚峰面積的RSD為0.5%，結果表明，供試品溶液在24h內穩(wěn)定。

2.3.9重復性試驗 取十味乳香膠囊(批號140201)，研細，混勻，取6份，每份約2g，精密稱定，按2.3.1方法制備供試品溶液。按2.3.4色譜條件測定每一份的含量，結果樣品中大黃酚平均含量為0.298mg·g-1，RSD為1.4%，表明本方法重復性良好。

2.3.10加樣回收試驗 取十味乳香膠囊(批號：140201，含大黃酚0.298mg·g-1)，研細，混勻，取6份，每份約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入對照品溶液(每1mL中含大黃酚62.09μg)5mL，按2.3.1方法制備供試品溶液，按2.3.4色譜條件測定，計算大黃酚的回收率。結果平均回收率為99.02%，RSD為1.91%，表明方法的準確性較好。見表1。

表1 大黃酚加樣回收測定結果(n=6)

2.3.11 耐用性考察 取十味乳香膠囊(批號140504)，采用不同品牌的色譜柱A：Kromasil 5-100 C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)、B：Welch Ultimate XDB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)、C：FNG Redclassical C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，按2.3.4 色譜條件測定，分離度分別為1.5、1.5、1.8，理論板數分別為19 127、13 960、15 288，RSD為1.4%，結果表明，本實驗色譜條件耐用性良好。見圖6。

注：A：Kromasil 5-100 C18；B：Welch Ultimate XDB-C18；C：FNG Redclassical C18。圖6 不同色譜柱的比較

2.3.12 樣品的測定 取十味乳香膠囊10個批號，按2.3.1制備供試品溶液，按2.3.4色譜條件測定，用外標法計算大黃酚的含量，結果見表2。

表2 十批成品中大黃酚含量測定結果

3 討論

中訶子、毛訶子為處方主要組成藥味，與功能主治有密切關系，因此增加訶子、毛訶子的鑒別有利于提高產品質量控制。參照《中華人民共和國藥典》2015年版一部訶子、毛訶子的薄層色譜鑒別方法，采用相同的供試品溶液提取方法分別進行訶子和毛訶子的鑒別，參照中華人民共和國藥典的薄層色譜條件，發(fā)現(xiàn)訶子和毛訶子陰性有干擾，展開效果不理想。故對薄層色譜條件進行篩選優(yōu)化，最終采用本文的薄層色譜條件。結果表明，薄層色譜斑點清晰，方法專屬性好，陰性無干擾。

在訶子和毛訶子的鑒別研究中，曾采用不同品牌的薄層板和SPE固相萃取小柱進行比較，并分別考察了高溫、高濕、低溫、低濕等環(huán)境對薄層展開效果的影響，結果均能得到清晰的薄層色譜斑點，陰性無干擾，說明方法的耐用性較好。

取大黃酚對照品溶液，經紫外-可見分光光度計在210～400 nm進行掃描，大黃酚在225.4、257.3、288.1 nm處有吸收峰，大黃酚在257.3 nm波長處有最大吸收，參考《中華人民共和國藥典》2015年版一部大黃藥材項下規(guī)定[1]，確定254 nm為本實驗的測定波長。

原標準采用薄層掃描法測定決明子中大黃酚的含量，受上樣技術、薄層板質量、展開條件、溫濕度等因素影響較大，平行實驗的精密度較差，方法準確性不夠理想。故采用HPLC法測定大黃酚的含量，提高含量測定的重現(xiàn)性和自動化程度。經兩種方法測得的數據比較，無顯著差異。

處方決明子中大黃酚的含量測定參考相關文獻，對色譜條件進行優(yōu)化，比較了乙腈-0.1%磷酸梯度洗脫、不同比例的甲醇-0.1%磷酸等度洗脫、不同比例的乙腈-甲醇-0.1%磷酸洗脫系統(tǒng)，最后采用甲醇-0.1%磷酸(80∶20)洗脫系統(tǒng)，具有專屬性高、重現(xiàn)性好，分離能力強、靈敏度高，與中華人民共和國藥典系統(tǒng)相比有操作簡便等優(yōu)點。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015.

[2] 楊俊榮，孫芳云.訶子化學成分研究[J].天然產物研究與開發(fā)，2008，20(3)：450-451.

[3] 劉玉梅，宋寶安，楊松，等.訶子化學成分與生物活性的研究進展[J].貴州大學學報(自然科學版)，2007,2(24):208.

[4] 張海龍，裴月湖，華會明，等.訶子化學成分及藥理活性的研究進展[J].沈陽藥科大學學報，2001，18(6)：452.

[5] 楊永康，格桑索朗，吳家坤，等.訶子，毛訶子和余甘子的植物分類研究和藥學特性綜述[J].中國醫(yī)學生物技術應用雜志，2004(1):14.

[6] 國家藥品標準：青鵬軟膏.藥典委網站公示稿.

[7] 楊希，聶晶，譚靜玲，等.一清系列制劑中大黃素和大黃酚的含量比較[J].中國藥師，2014,17(8)：1340-1352.

[8] 母小東，蘇晶，汪楊麗.HPLC測定八正片中大黃素及大黃酚含量[J].食品與藥品，2014,16(3):203.

Studies on Quality Standard of SHIWEIRUXIANG Capsule

ZHAO Jiawen1,ZHU Qingcan2,WEI Junxiao1,HUANG Bingsen1,LIU Kai2,CHEN Yonghui1,DU Aimei1

[1.Sinopharm Group Dezhong(Foshan) Pharmaceutical Co.,Ltd.,Foshan Guangdong 528000，China；2.Sinopharm Group Tongjitang(Guizhou) Pharmaceutical Co.,Ltd.,Guiyang Guizhou 550200，China]

Objective：To improve the quality standard of SHIWEIRUXIANG Capsule.Methods：The TLC method was used to qualitatively identify Fructus ofTerminaliachebulaandT.billericae.HPLC was used to determine chrysophanol.Results： Thin layer chromatograms were clear with good specificity，and no interfere was observed in negative TLC chromatogram.The calibration curve of chrysophanol was linear in the range of 0.100 8-1.008 μg (r=0.999 7).The average recovery was 99.02%，RSD was 1.91%.Conclusion: The established methods were accurate，reliable，reproducible and can be used for the quality control of SHIWEIRUXIANG Capsule.

SHIWEIRUXIANG Capsule;TLC;HPLC;Terminaliachebula;TerminaliabillericaeFructus;chrysophanol.

] 祝清燦，高級工程師，研究方向：中藥成藥質量標準；E-mail：657662046@qq.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.1.023

2016-02-25)

*[