中華蟾蜍仿生態(tài)養(yǎng)殖技術(shù)△

楊艷，趙群，高波，康彥，李燈林，李軍德

(1.道地藥材國家重點實驗室培育基地，中國中醫(yī)科學(xué)院 中藥資源中心，北京，100700；2.安徽華潤金蟾藥業(yè)股份有限公司，安徽 淮北 235000；3.皖西學(xué)院，安徽 六安 237012)

·中藥農(nóng)業(yè)·

中華蟾蜍仿生態(tài)養(yǎng)殖技術(shù)△

楊艷1,2，趙群1,3，高波2，康彥2，李燈林2，李軍德1*

(1.道地藥材國家重點實驗室培育基地，中國中醫(yī)科學(xué)院 中藥資源中心，北京，100700；2.安徽華潤金蟾藥業(yè)股份有限公司，安徽 淮北 235000；3.皖西學(xué)院，安徽 六安 237012)

本文主要介紹中華蟾蜍BufogargarizansCantor在安徽淮北地區(qū)的人工養(yǎng)殖技術(shù)，通過在實驗室玻璃飼養(yǎng)缸中的養(yǎng)殖實驗，確定對養(yǎng)殖條件的控制和人工管理技術(shù)。實驗主要通過人工干預(yù)管理，模擬蟾蜍野外水陸環(huán)境，監(jiān)控水質(zhì)、溫度、濕度等，引入增氧系統(tǒng)的設(shè)計和天敵防護(hù)措施；在食性馴化方面，保證食物的多樣化，設(shè)計并優(yōu)化飼喂條件，確定合理配方，為下一步野外人工放養(yǎng)奠定了一定基礎(chǔ)。

中華蟾蜍；仿生態(tài)；養(yǎng)殖技術(shù)

中華蟾蜍BufogargarizansCantor隸屬于兩棲綱、無尾目、蟾蜍科、蟾蜍屬，俗稱“癩蛤蟆”[1-2]。中華蟾蜍的藥用價值很高[3-4]，常以蟾酥、蟾衣、干蟾、蟾皮作為藥用。蟾酥是蟾蜍耳后的大毒腺和背部疙瘩所分泌的有毒物質(zhì)，具有解毒、消腫、強(qiáng)心止痛等功效。蟾衣是蟾蜍每隔一段時間所蛻下的角質(zhì)膜，具有清熱、解毒、消腫止痛、抗病毒的功效，并對肝腹水、癌癥等有明顯的效果。干蟾是把蟾蜍整體進(jìn)行干燥后所得來的，蟾蜍的腺體含有華蟾素。蟾皮是蟾蜍的一層表皮，主要用來開發(fā)藥品，

蟾皮的需求量比較大，其抗腫瘤有效成分蟾蜍噻嚀的含量也較高[5-8]。中華蟾蜍是目前國內(nèi)蟾皮藥材和華蟾素制劑的主要來源，目前的需求也比較大。

近年來由于環(huán)境的嚴(yán)重污染，導(dǎo)致中華蟾蜍的生態(tài)環(huán)境遭到了破壞，使野生蟾蜍棲息地大大受到限制，資源不斷的減少[1]。為了保護(hù)野生資源和滿足臨床及生產(chǎn)需要，大力開展規(guī)?；?、規(guī)范化的人工養(yǎng)殖是保證中華蟾蜍來源的重要途徑。

中華蟾蜍為水陸兩棲性，喜靜怕驚擾，由于自身體溫調(diào)節(jié)能力弱，故為冷血變溫動物。合適的飼養(yǎng)密度與食物的營養(yǎng)組成對蝌蚪期的成活率和質(zhì)量影響很大[9]，蝌蚪期和變態(tài)期的水中含氧量對蝌蚪的生存至關(guān)重要。

本文主要介紹中華蟾蜍B.gargarizans在安徽淮北地區(qū)的人工養(yǎng)殖技術(shù)，通過在實驗室玻璃飼養(yǎng)缸中的養(yǎng)殖實驗，尋求合理的飼養(yǎng)密度與理想的食物營養(yǎng)組成，以及養(yǎng)殖過程中環(huán)境條件的控制和嚴(yán)格的人工管理，以提高幼蟾成活率，為建立規(guī)范化的中華蟾蜍人工養(yǎng)殖技術(shù)體系及其應(yīng)用推廣打下一定的基礎(chǔ)。

1 安徽淮北地區(qū)環(huán)境氣侯

1.1氣候情況

淮北地區(qū)位于安徽省北部，東經(jīng)116.80，北緯33.95，地處我國南北氣候過渡帶，屬溫帶季風(fēng)氣候區(qū)，海拔14～46m，是華北大平原的一部分。該地區(qū)氣候溫和，年平均氣溫14～15℃，年平均無霜期203d。雨量適中，年平均降雨量830mm左右，年平均空氣相對濕度71%，日照充足，四季分明。由于氣候的過渡性，也常常出現(xiàn)各種氣象災(zāi)害，夏秋旱澇幾率大，氣候不是很穩(wěn)定。

通過在淮北地區(qū)中華蟾蜍養(yǎng)殖基地中安裝的八要素(氣溫、相對濕度、地溫、地濕、光照強(qiáng)度、雨量、氣壓、風(fēng)向、風(fēng)速等)自動氣象站，對當(dāng)?shù)丨h(huán)境進(jìn)行監(jiān)控，并對數(shù)據(jù)進(jìn)行記錄。其溫度和濕度隨時間的變化如圖1和圖2所示。

圖1 溫度因素隨日期的變化曲線(引種至越冬階段)

圖2 濕度因素隨時間變化曲線(引種至越冬階段)

1.2水質(zhì)條件

中華蟾蜍養(yǎng)殖水質(zhì)依據(jù)《漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)(GB11607-1989)》的規(guī)定，對水中氨氮，溶氧量，硫化氫等指標(biāo)進(jìn)行監(jiān)測。

2 種蟾引種

2.1引種

在安徽省淮北地區(qū)實驗基地進(jìn)行養(yǎng)殖實驗，11月份底到12月份初分別從江蘇、河南、河北和山東四個地方進(jìn)行種蟾的引種。

本實驗基地的蟾蜍養(yǎng)殖池根據(jù)用途分為種蟾池、孵化池、蝌蚪池和幼蟾池，并在池中進(jìn)行仿生態(tài)養(yǎng)殖。從以上四個產(chǎn)地引種過來的種蟾放入種蟾池種等待來年的產(chǎn)卵孵化。

2.2種蟾標(biāo)準(zhǔn)

2.2.1種性特征 種用蟾蜍的特征要明顯。雄性有明顯的婚墊，雌性腹部膨大、柔軟，卵巢輪廓可見而富有彈性。

2.2.2個體特征 個體大、體質(zhì)健壯、皮膚光澤、無病無傷。

2.2.3親緣關(guān)系 選擇親緣關(guān)系較遠(yuǎn)的雌雄蟾蜍作種用。血緣關(guān)系太近(同胞、親子)的雌雄種蟾配對，受精率、孵化率均較低，且孵出蝌蚪成活率也低，生長發(fā)育也不好。

2.2.4成熟度 應(yīng)選用2～5齡青壯年蟾蜍。不宜選用5齡以上和2齡以下蟾蜍作為種用。成熟度要盡量一致，便于產(chǎn)卵時間集中。

2.2.5雌雄比例 雌：雄比例為1～2∶1。

2.3雌雄鑒別

2.3.1繁殖季節(jié) (1)鳴叫 雄蟾會鳴叫。在雄蟾咽喉腹面或下頜腹面有1～2個內(nèi)聲囊，為皮膚所掩蓋，是由肌肉皺褶向外突出所形成的雙壁結(jié)構(gòu)，能發(fā)生共鳴作用而擴(kuò)大喉部發(fā)出聲音。

(2)婚墊 雄蟾有婚墊。春末夏初，雄蟾前肢內(nèi)側(cè)第一、二指基部局部隆起形成黑色婚墊，也有在第三指上出現(xiàn)婚墊的。

(3)顏色 雄蟾背部顏色比雌性要深呈黑綠色。

2.3.2非繁殖季節(jié)

(1)大小 雄蟾個體較雌蟾小。

(2)前臂 兩前臂粗壯而有力。在爬行時，前肢肘關(guān)節(jié)向外側(cè)擴(kuò)展而前肢直立起來。

3 飼養(yǎng)期

3.1抱對

蟾蜍大多在春季進(jìn)行交配產(chǎn)卵，選擇體格健壯，體表無病無損傷和腹部膨大卵巢發(fā)育明顯的蟾蜍。將選擇好的種蟾放入種蟾池內(nèi)，當(dāng)環(huán)境氣溫在14℃左右時，雄蟾蜍會用前肢緊緊抱住雌性蟾蜍以促使其性腺發(fā)育成熟并產(chǎn)卵(圖3)。

圖3 抱對、產(chǎn)卵

3.2產(chǎn)卵及孵化

種蟾在淮北地區(qū)第二年的2月16號前后開始產(chǎn)卵，產(chǎn)卵時環(huán)境氣溫在10℃左右。卵的受精在水中完成，受精卵外面有一層卵膠膜包裹。此時，在種蟾池中放入捆狀的金銀花干枝(一捆4kg左右)，種蟾產(chǎn)出的卵帶附著在上面，避免粘結(jié)成團(tuán)在一起，影響蝌蚪的孵化。

受精卵孵化時的環(huán)境氣溫在10～15℃左右，從卵帶開始斷裂到蝌蚪完全分離大概所需的時間為一周左右(圖4)。

圖4 卵粒分離

剛從卵膜中孵化出來的蝌蚪不需要進(jìn)行喂食，依靠吸收剩余卵黃來維持生活。當(dāng)蝌蚪成形后的2～3d可以用蛋黃喂食，其方法是將煮熟的蛋黃捏碎用水?dāng)嚢韬笕鋈胨泄蝌饺∈?圖5)。

圖5 蝌蚪孵化

3.3蝌蚪期飼養(yǎng)管理

孵化出的蝌蚪在孵化池喂養(yǎng)15d左右后，部分蝌蚪被轉(zhuǎn)移到室內(nèi)實驗室中進(jìn)行飼養(yǎng)，在飼養(yǎng)過程對水質(zhì)進(jìn)行控制。余下的蝌蚪被轉(zhuǎn)移到室外蝌蚪池進(jìn)行養(yǎng)殖。

實驗室中的蝌蚪在飼養(yǎng)過程中，進(jìn)行食性實驗和密度實驗以確定蝌蚪的最適宜的飼料和最適人工飼養(yǎng)密度。蝌蚪被飼養(yǎng)在若干玻璃飼養(yǎng)缸中，每個玻璃飼養(yǎng)缸的長×寬×高為150cm×100cm×60cm，缸內(nèi)水深為玻璃缸的三分之一高度。

玻璃飼養(yǎng)缸放在通風(fēng)和光照條件良好的室內(nèi)環(huán)境中。實驗室中的頂棚可自動開啟和關(guān)閉，并安裝了加氧系統(tǒng)，每個玻璃缸內(nèi)都放置一個加氧孔，根據(jù)需要隨時給玻璃缸內(nèi)的水中加氧。蝌蚪來自于同一天受精的卵團(tuán)，并在分組前隨機(jī)混合。根據(jù)食性實驗和密度實驗的要求進(jìn)行實驗分組。定期進(jìn)行檢測主要水質(zhì)指標(biāo)，保證其符合《漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)(GB11607-1989)》的規(guī)定。

每天定時定量喂食。每天喂食2次，分別為上午8∶30和下午2∶30各1次；每次投食量為飼養(yǎng)缸中蝌蚪總重量的10%左右，每隔7天根據(jù)蝌蚪的實際重量調(diào)整投食量。每隔7d測量和記錄5個樣本，主要測量其體重、頭體長、尾長和死亡個數(shù)，直到蝌蚪全部變態(tài)完畢。正常的情況下每缸每天換水一次。

如果水中硫化氫及氨氮含量較高，會導(dǎo)致水環(huán)境惡化，使蝌蚪大量死亡。因此，在飼養(yǎng)管理中，勤換水和持續(xù)增氧非常重要。

3.4變態(tài)期飼養(yǎng)管理

用沙子和磚塊瓦片在缸內(nèi)鋪建三分之一面積的陸地，陸地和水接觸的一面邊緣要有一定的緩坡，便于蝌蚪在變態(tài)期間幼體隨時登陸和下水，能夠順利完成水陸兩棲的過渡階段。

剛處于變態(tài)時的蝌蚪不吃不動，能量消耗大，若幼蟾體質(zhì)不健壯，死亡率增大，故前期飼養(yǎng)很重要。

蝌蚪變態(tài)期間，身體結(jié)構(gòu)發(fā)生很大轉(zhuǎn)變，由腮呼吸變成肺呼吸，口開始裂開張大，體內(nèi)各系統(tǒng)不斷變化，蝌蚪仍然都處于水中的生活環(huán)境，若增氧機(jī)不能每24小時持續(xù)增氧，間斷供氧的話，會造成蝌蚪大量死亡，后期會作相關(guān)規(guī)范，增氧機(jī)每天24小時持續(xù)增氧，水也要常換。

在淮北地區(qū)的蝌蚪從孵化到完全變態(tài)完成整個歷程為當(dāng)年的2月16日到5月20日經(jīng)歷了3個多月的時間。期間蝌蚪在生長到30d左右出現(xiàn)了后肢芽，60d左右開始有退尾。但由于蝌蚪的變態(tài)是不同步的，即使是同一日齡的蝌蚪，早變態(tài)的已長出四肢，而遲變態(tài)的仍是長尾一條(圖6、圖7)，因此，就整體而言，應(yīng)繼續(xù)投喂，只是投喂量要逐漸減少，直至全部變態(tài)成幼蟾。

圖6 變態(tài)期

圖7 退尾

中華蟾蜍B.gargarizans在蝌蚪飼養(yǎng)密度和飼料營養(yǎng)組成研究實驗中表明：(1)飼養(yǎng)密度實驗和飼料種類實驗中，中華蟾蜍蝌蚪臨近變態(tài)時(變態(tài)前)和變態(tài)后的成活率分別為68.7%～96.3%和5.7%～36.0%；(2)中華蟾蜍蝌蚪的最適養(yǎng)殖密度為1000只/m2，II(28%玉米粉、19%豆餅粉、16%肉骨粉、17%魚粉、10%酵母、3%多維和6%新鮮蔬菜)，IV(43%玉米粉、13%豆餅粉、0%肉骨粉、6%魚粉、10%酵母、4%多維和24%新鮮蔬菜)和V(牛蛙飼料)等3種飼料均為中華蟾蜍蝌蚪較為適宜的飼料[10]。

4 實驗室幼蟾飼養(yǎng)

4.1飼養(yǎng)環(huán)境

用沙子和磚塊瓦片在缸內(nèi)鋪建2/3面積的陸地，陸地和水接觸的一面邊緣要有一定的緩坡，便于幼蟾隨時登陸和下水。

4.2水質(zhì)監(jiān)測

保證實驗室內(nèi)環(huán)境內(nèi)有良好的光照與通風(fēng)。檢測主要水質(zhì)指標(biāo)，保證其符合《漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)(GB11607-1989)》的規(guī)定。

幼蟾期大部分的棲息地都在陸地，相對于水質(zhì)的要求要比蝌蚪期低，所以在水質(zhì)監(jiān)測上可以一周一次，根據(jù)檢測結(jié)果來確定是否需要換水。

4.3投食

定時定量喂食。每天喂食2次，分別為上午8∶30和下午6∶30各1次；每次投食量為飼養(yǎng)缸中幼蟾總重量的10%左右，每隔7d根幼蟾的實際重量調(diào)整投食量。

圖8 幼蟾攝食蠅蛆

圖9 幼蟾攝食黃粉蟲

投入的餌料以蠅蛆和黃粉蟲為主(圖8、圖9)，剛變態(tài)的幼蟾比較弱小，蠅蛆的體質(zhì)比黃粉蟲更小、更軟，且活動能力較強(qiáng)，可作為幼蟾的開口餌料，并拌入適量的鈣粉和多維素保證幼蟾時期的營養(yǎng)和促進(jìn)腸道的蠕動。在后期成蟾過程中，逐漸摻入黃粉蟲混合飼喂，使餌料多樣化達(dá)到營養(yǎng)均衡的目的(圖10)。

圖10 蠅蛆、黃粉蟲混合飼喂

4.4觀測記錄

每隔7d測量和記錄1次數(shù)據(jù)，每個重復(fù)組至少測量10個樣本，主要測量幼蟾的體重、頭體長、頭長、四肢長和死亡個數(shù)。

細(xì)心觀察幼蟾的攝食情況，以確定每次的投食量。如投入餌料后，幼蟾集中在餌料上取食，且完全吃完，表明投食量不足；如在投食后當(dāng)天餌料有剩余，表明投食量充足，應(yīng)適當(dāng)減少投食量。投入的餌料以不?；蛏偈橐?。

4.5注意事項

由于幼蟾數(shù)量多，如果只在一點投食，則可能導(dǎo)致很多幼蟾不能及時找到食物。因此，在飼養(yǎng)幼蟾時采用多點投食，即在飼養(yǎng)缸的四周分多點投放餌料。每天剩余的餌料要及時取出，避免剩余的餌料對水質(zhì)造成污染。

在幼蟾期間根據(jù)需要每天要對玻璃缸的陸地進(jìn)行人工噴水，讓陸地部分保持著濕潤狀態(tài)，根據(jù)環(huán)境溫度來適當(dāng)?shù)膶斉镞M(jìn)行開啟或關(guān)閉，防止溫度在過高的情況下對幼蟾造成一定傷害。在室內(nèi)溫度過高的情況下也可采取人工地面灑水來進(jìn)行室內(nèi)降溫。

中華蟾蜍B.gargarizans在幼蟾飼養(yǎng)研究實驗中表明：(1)中華蟾蜍在第一次冬眠前的成活率為7.9%～30.0%；(2)中華蟾蜍幼蟾的最適養(yǎng)殖密度為80只/m2。

4.6天敵防護(hù)

在幼蟾實驗期間實驗室內(nèi)有遭到天敵侵害的現(xiàn)象(黃鼠狼、鳥類、鼠類、蛇類等)，網(wǎng)格有破損，死亡的幼蟾大部分都有破肚的現(xiàn)象(圖11)。

圖11 中華蟾蜍遭遇天敵后所受傷害

發(fā)現(xiàn)有天敵侵害后，隨即對實驗室的玻璃缸進(jìn)行了安全防護(hù)，由于天敵的問題比較嚴(yán)重，就防護(hù)問題不斷改進(jìn)，期間用了繩網(wǎng)，塑料網(wǎng)，直到用鋼網(wǎng)才使得天敵侵害的問題得以解決。

5 冬眠期飼養(yǎng)管理

中華蟾蜍為變溫動物，當(dāng)環(huán)境溫度低于10℃時，就要進(jìn)入冬眠狀態(tài)。本次淮北地區(qū)仿生態(tài)養(yǎng)殖的幼蟾在當(dāng)年的10月29號左右進(jìn)入第一次冬眠。整個冬眠期持續(xù)到來年的2月份。

冬眠的場所一般在水底或陸地的泥土中，因此在冬眠前要保證池中水量和把蟾蜍在陸地上活動區(qū)域的土翻松，或在陸地的部分覆蓋稻草可以對冬眠的蟾蜍起到保溫的效果。

冬眠期間，蟾蜍不吃不動，而冬眠期要持續(xù)很長一段時間，所以在蟾蜍冬眠前必須加強(qiáng)喂食、增加營養(yǎng)，使其冬前健壯，以便順利度過冬眠期。

在越冬期間，每天要定時巡視養(yǎng)殖池，觀察冬眠蟾蜍有無異常情況，如發(fā)現(xiàn)有死亡個體或即將死亡個體，應(yīng)及時從養(yǎng)殖池中清除，以免污染水質(zhì)或?qū)】档捏蛤茉斐晌：Α?/p>

定期檢測水質(zhì)，水溶解氧低于8mg·L-1升或水變差時，應(yīng)及時換水，必要時開增氧機(jī)增氧。

當(dāng)翌年環(huán)境溫度升到10℃以上時，冬眠結(jié)束，蟾蜍開始醒眠，隨后便開始抱對、產(chǎn)卵。

6 討論

6.1環(huán)境因素

在實驗室養(yǎng)殖的過程中，在室內(nèi)增加了加氧系統(tǒng)，在蟾蜍的蝌蚪期與蝌蚪變態(tài)期必須要24h供氧，特別是蝌蚪處于變態(tài)期的時候，若氧氣不足會導(dǎo)致蝌蚪的大量死亡。

在高溫季節(jié)，實驗室內(nèi)溫度過高，進(jìn)行人工地面灑水降溫，保證室內(nèi)空氣流通，在蝌蚪變態(tài)期及幼蟾期，由于已經(jīng)變態(tài)的幼蟾主要活動于陸地，除了陸地部分要做好遮陰措施以外，每天還要進(jìn)行人工噴灑水使陸地部分保持濕潤。

實驗室中的頂棚自動化設(shè)計可以很好的避雨水，預(yù)防大氣中的一些有害物質(zhì)進(jìn)入玻璃飼養(yǎng)缸污染水質(zhì)，導(dǎo)致玻璃飼養(yǎng)缸內(nèi)的水中氨氮、硫化氫等檢測指標(biāo)超標(biāo)影響水質(zhì)，給蟾蜍帶來危害。實驗室中玻璃飼養(yǎng)缸內(nèi)的水源都是地下水，不建議使用河流引水，因周邊有農(nóng)作物種植，水中不排除有農(nóng)藥的殘留，以免對蟾蜍造成大量的死亡。

6.2關(guān)鍵技術(shù)

提高蝌蚪和幼蟾的成活率與質(zhì)量是中華蟾蜍規(guī)范化養(yǎng)殖的關(guān)鍵。通過在淮北地區(qū)的仿生態(tài)養(yǎng)殖實驗，蟾蜍的人工養(yǎng)殖技術(shù)有了一定的突破。根據(jù)蟾蜍的生活習(xí)性，通過實驗?zāi)M蟾蜍野外生存環(huán)境，設(shè)計并優(yōu)化飼養(yǎng)條件，在食性實驗與密度實驗中都得到了一定的數(shù)據(jù)支持，為后期的規(guī)模化養(yǎng)殖提供了經(jīng)驗和支持。

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The Bionic Breeding Technology ofBufogargarizans

YANG Yan1,2，ZHAO Qun1,3，GAO Bo2，KANG Yan2，LI Denglin2，LI JunDe1*

(1.State Key Laboratory Breeding Base of Dao-di Herbs，National Resource Center for Chinese Materia Medica，China Academy of Chinese Medicinal Sciences，Beijing 100700，China；2.Anhui China Resources Jinchan Pharmaceutical Co.，Ltd.，Huaibei 235000，China；3.West Anhui University，Liu’an 237012，China)

This paper mainly introduces the artificial breeding technology of toad(BufogargarizansCantor)in Huaibei region of Anhui province.Through the cultivation experiment in the glass cylinder of laboratory，the control of the farming conditions and artificial management technology were established.The experiment simulated the imitations of the toads' natural habitat by manual intervention，including the control of water quality，temperature，humidity，adding oxygen and the protection measures from predators.To ensure the food diversity，we designed experiments to find the best feeding condition and reasonable formula.The study laid a foundation for the next step in the field of artificial stocking.

Bufogargarizans；bionic；breeding technology；

中央本級重大增減支項目(2060302)；蟾蜍規(guī)范化養(yǎng)殖技術(shù)研究(3-YFB2014005)

] 李軍德，研究員，研究方向：藥用動物資源與動物藥材鑒定研究；E-mail：jundeli99@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.1.016

2016-09-02)

*[