干式融漿機和水浴式融漿機溶解冷沉淀及溶解時間的長短對冷沉淀中凝血因子生物活性的影響

楊慶文+李廣瑩+丁文

[摘要]目的 探討使用干式和水浴式融漿機兩種方式融解冷沉淀以及融解時間長短對冷沉淀中凝血因子生物活性的影響，為達到更好的融漿效果提供依據(jù)。方法 選取2016年2月3～7日我院寶安中心血站提供的120袋冷沉淀（規(guī)格1.0 U/袋），采集時間相近，均不能超過5 d，將120袋冷沉淀隨機分為兩組，每組60袋，編為1組和2組。1組采用干式融漿機溶解，2組采用水浴式融漿機溶解，對120份置于不同融漿機37℃融解10、20、30 min的冷沉淀樣品，分別測定FⅧ、VWF抗原、PT、TT、APTT及Fib。結果 兩組的融漿效果及各個檢測指標比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。但隨著融漿時間的延長，會導致APTT延長，F(xiàn)Ⅷ、VWF抗原活性下降，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結論 融漿時間延長會導致凝血因子FⅧ、VWF抗原活性下降，APTT延長，為達到更好的臨床輸血療效，推薦融解冷沉淀的最佳時間為10 min。

[關鍵詞]不同融漿方式；冷沉淀凝；血因子；融漿時間

[中圖分類號] R457.1 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2017）08（c）-0118-03

[Abstract]Objective To investigate the use of dry and water-bath blood soluble machine for cryoprecipitation dissolution and the effect of length of dissolution time on the biological activity of coagulation factors in cryoprecipitate，in order to provide the basis for better results.Methods Altogether 120 bags of cryoprecipitate （Specification：1.0 U/Bag） with similar blood collection dates （less than 5 days） that were provided by our Central Blood Station of Baoan from February 3rd to February 7th in 2016 were selected and randomly divided into two groups （group 1 and group 2），with 60 bags in each group.group 1 adopted dry blood soluble machine for cryoprecipitation dissolution；while，group 2 adopted water-bath blood soluble machine for cryoprecipitation dissolution.FactorⅧ （FⅧ），von Willebrand factor antigen （vWF-Ag），prothrombin time （PT），thrombin time （TT），activated partial thromboplastin time （APTT） and plasma fibrinogen （Fib） of 120 cryoprecipitate samples that were placed in different blood soluble machines at 37℃ for 10，20 min and 30 min were determined.Results There was no statistically significant difference between group 1 and group 2 in the effects of blood plasma dissolution and all the indexes （P>0.05）；however，with the prolonging of dissolution time，prolonged APTT as well as decreased activity of FⅧ and VWF antigen were seen，with statistically significant difference （P<0.05）.Conclusion Prolonged blood plasma dissolution time will lead to decreased activity of FⅧ and VWF antigen as well as prolonged APTT，with statistically significant difference.To achieve better efficacy of clinical blood transfusion，the best time for cryoprecipitation dissolution is recommended to be 10 min.

[Key words]Different blood plasma dissolution methods；Cryoprecipitation；Coagulation factor，Dissolution time

冷沉淀是新鮮冰凍血漿在控制的溫度下（0～4℃）融化后收集的冷不溶成分，為白色沉淀物[1]，加熱至37℃時呈溶解狀態(tài)，1 U血漿分離出的冷沉淀雖然只有幾十毫升，但卻含有大量的（約100 U）FⅧ和纖維蛋白原，冷沉淀可用于預防和治療出血性疾病和凝血功能障礙性疾病，如兒童及輕型成人甲型血友病、彌散性血管內(nèi)凝血、嚴重創(chuàng)傷、燒傷、感染和肝功能衰竭等的疾病[2-3]。由于冷沉淀中的FⅧ極不穩(wěn)定，血管性假性血友病因子（von willebrand factor，VWF）的抗原穩(wěn)定性也較差，所以，研究在冷沉淀的制作、保存及融解過程中如何保護凝血因子及VWF活性顯得尤為重要，為保障臨床輸血療效提供重要的理論依據(jù)[4]，本次實驗選取我院中心血站提供的120袋冷沉淀，分別采用干式融漿機和水浴式融漿機對兩組冷沉淀進行融解，探討不同融漿方式對凝血因子活性的影響，同時比較在37℃融解過程中融漿時間的長短對凝血因子活性的影響，找到融漿的最佳方式及時間，從而更好地保護凝血因子的活性，減少凝血因子的損失，現(xiàn)將結果報道如下。endprint

1資料與方法

1.1一般資料

選取2016年2月3～7日我院寶安中心血站的冷沉淀120袋，規(guī)格為1 U/袋，冷沉淀的來源均為經(jīng)過體檢的健康人，無任何血液系統(tǒng)疾病。將其隨機分為兩組，每組60袋，分別編為1組和2組，1組采用干式融漿機進行融漿，2組采用水浴式融漿機。

1.2主要儀器和試劑

美國美德聲科學技術公司生產(chǎn)的Barkey博科微電腦干式血漿速溶機；PT、TT、APTT、FⅧ及Fib檢測系列試劑盒；武漢貝索醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn)的Baso全溫控監(jiān)測智能化血漿解凍儀；全自動血凝儀ACL TOP 700；AIR TE CH無菌操作臺；VWF抗原檢測采用ELISA法。

1.3標本留樣

分別在37℃溶解10、20、30 min時在超凈工作臺上使用無菌操作取出1、2組冷沉淀0.5 ml留樣待檢。

1.4操作方法

干式融漿法：將冷沉淀血袋放在2個融水膜袋之間，蓋好頂蓋，按“Start”鍵啟動設備，開始融漿；水浴式融漿：將冷沉淀置于解凍槽內(nèi)，蓋好頂蓋，按“Start”鍵啟動設備，開始融漿。

1.5檢測項目

檢測兩種融漿方式以及溶解10、20、30 min 3個時間段對所采集樣本的FⅧ、VWF抗原、PT、TT、APTT及Fib進行檢測。

1.6統(tǒng)計學方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料用均數(shù)±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

兩組各時間點PT、TT、APTT及FⅧ、VWF抗原、Fib等各項指標比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；與10 min時比較，1組20、30 min的PT、TT、APTT時間均延長，VWF抗原、FⅧ的含量下降，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。3個時間段兩組Fib含量未出現(xiàn)明顯變化。與10 min時比較，2組20、30 min的PT、TT、APTT時間均延長，VWF抗原、FⅧ的含量下降，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）（表1）。

3討論

本研究結果可見，采用干式及水浴式二種不同的融漿儀器溶解冷沉淀后，PT、APTT、TT、Fib、FⅧ及VWF抗原檢測值的差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），且融漿效果均已達標（冷沉淀溶解后外觀呈淡黃色澄清液體，無色澤異常，無纖維蛋白析出），因此日常工作中可采用干式或水浴式溶漿機進行冷沉淀的解凍。

干式和水浴式融漿機的大致原理如下：干式融漿機主要采用微電腦控制，數(shù)字顯示溫度、時間，血液置于恒溫水囊之間解凍，血漿不接觸到水；水浴式融漿機利用37℃恒溫水循環(huán)的擺動功能，能夠使融漿更加快速、充分，瞬間溫度差很小[5-6]。

解凍的溫度與時間可以影響冷沉淀的解凍質量[7]，本研究采用固定溶漿溫度37℃下，觀察冷沉淀中凝血因子活性在不同融漿時間段活性如何變化的平行實驗進行研究，結果提示，在37℃溫度條件下溶漿時間越長，融漿效果越好。但隨著融漿時間的延長，尤其達到30 min時，冷沉淀中的VWF抗原、FⅧ活性會大幅度降低，APTT時間明顯延長，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。

目前，隨著成分輸血在臨床上的大力推廣，靜脈輸注冷沉淀的應用范圍和用量呈逐年上升的趨勢[8-9]，主要體現(xiàn)在以下幾個方面：F缺乏患者；彌散性血管內(nèi)凝血的患者；FⅫ因子缺乏的患者；纖維蛋白原缺乏患者[10-11]。冷沉淀中大量纖維結合蛋白，能有效清除體內(nèi)非毒性物質，較好地解決細胞粘連、炎癥等病理現(xiàn)象，同時可促進創(chuàng)傷愈合，尤其對于大面積燒傷、創(chuàng)傷和嚴重感染的患者效果較為顯著[12]。同時，冷沉淀可用于治療FⅡ、FⅤ、FⅦ缺乏的患者，或者作為血漿容量擴張劑使用，還可以用做分離其他蛋白的原料[13-14]。為保證冷沉淀的輸注療效，冷沉淀從制備、保存、融漿到臨床輸注的各環(huán)節(jié)，都應進行嚴格質量控制，盡可能在保障融漿效果佳的情況下，縮短融漿時間，以減少不穩(wěn)定因子的失活，從而確保臨床用血安全有效。

綜上所述，本研究可以看出，從冷沉淀的制作、儲備、融解到臨床使用的整個過程，作為輸血科的工作者應牢固樹立保護凝血因子、減少流失的意識。同時筆者查閱相關文獻，得知在冷沉淀經(jīng)過低溫冰凍后，若再加溫融化，當融化時間太短時，會出現(xiàn)血漿纖維蛋白析出，不能用于臨床輸注的現(xiàn)象，也即溫度對冷沉淀中有效成分活性的影響是一種不可忽略的因素[15]。因此，本研究在冷沉淀的解凍過程中應注意在融漿時間和溫度之間找到一個平衡點，這樣既能保證凝血因子流失最小化，又可以減少纖維蛋白的析出。

[參考文獻]

[1]梁其隆，梁若鵠，陳龍菊，等.冷沉淀解凍后凝血因子變化的實驗研究[J].中國醫(yī)藥導報，2012，9（11）：28-30.

[2]鄒宗麗，甘芳香，車火嬌，等.冷沉淀在不同溫度不同時間放置對Ⅷ因子的影響[J].醫(yī)學檢驗，2012，19（36）：90-91.

[3]范紅玲.單采血小板聯(lián)合冷沉淀在大出血患者臨床治療中的應用[J].中國實用醫(yī)刊，2012，39（7）：105-106.

[4]陳善華，朱麗莉，呂紅艷，等.保證臨床用血的應對措施探析[J].中國輸血雜志，2011，24（8）：695-696.

[5]何子毅，田兆嵩.冷沉淀的臨床應用[J].中國輸血雜志，2008，21（12）：986.

[6]Neimark AI，Gatkin ML.Use of cryoprecipitate in combined therapy of acute purulent pyelonephritis[J].Urologiia，2005， 4：42-48.

[7]劉景漢，王德清.臨床輸血學[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2011：40.endprint

[8]蘇紅，譚愛玲，徐少英，等.冷沉淀制備的關鍵控制環(huán)節(jié)[J].中國醫(yī)學創(chuàng)新，2012，10（10）：144-145.

[9]萬鵬，童華生，張興欽，等.新型凝血和血小板功能分析儀在彌散性血管內(nèi)凝血早期診斷中的價值[J].中國急救醫(yī)學，2014，10（9）：789-793.

[10]胡豫.2012版彌散性血管內(nèi)凝血診斷與治療中國專家共識解讀[J].臨床血液學雜志，2013，2（11）：978-979.

[11]Ettinger A，Miklauz MM，Bihm DJ，et al.Preparation of cryoprecipitate from riboflavin and UV light-treated plasma[J].Transfus Apher Sci，2012，6（46）：153-158.

[12]Funk MB，Heiden M，Volkers P，et al.Evaluation of risk min-imisation measures for blood components-based on reporting rates of transfusion-transmitted reactions （1997-2013）[J].Transfus Med Hemother，2015，42（4）：240-246.

[13]陳志軍，吳稷，樊琴紅，等.冷沉淀制備技術在血液成分制備中的應用[J].中國中醫(yī)藥咨訊，2011，3（11）：69-70.

[14]Bui E，Inaba K，Ebadat A，et al.The impact of increased plasmaratios in massively transfused trauma patients：a prospective analysis[J].Eur J Trauma Emerg Surg，2016，42（4）：519-525.

[15]Shaz BH，Stowell SR，Hillyer CD.Transfusion-related acute lung injury：from bedside to bench and back[J].Blood，2011， 117（5）：1463-1471.

（收稿日期：2017-06-15 本文編輯：任 念）endprint