茶葉中農(nóng)藥殘留分析技術(shù)研究進展

劉騰飛， 楊代鳳， 張 麗， 董明輝，*

(1.江蘇太湖地區(qū)農(nóng)業(yè)科學研究所， 江蘇 蘇州 215155； 2.蘇州市職業(yè)大學， 江蘇 蘇州 215104)

茶葉中農(nóng)藥殘留分析技術(shù)研究進展

劉騰飛1， 楊代鳳1， 張 麗2， 董明輝1，*

(1.江蘇太湖地區(qū)農(nóng)業(yè)科學研究所， 江蘇 蘇州 215155； 2.蘇州市職業(yè)大學， 江蘇 蘇州 215104)

查閱近些年國內(nèi)外公開發(fā)表的文獻，簡述了我國茶葉生產(chǎn)上常用農(nóng)藥情況，比較了國內(nèi)外茶葉農(nóng)藥殘留最大限量標準，綜述了茶葉中農(nóng)藥殘留的主要檢測技術(shù)，重點對固相微萃取法、液相微萃取法、分散固相萃取法等樣品前處理技術(shù)，以及氣相色譜法、液相色譜法、質(zhì)譜法、免疫分析法等檢測技術(shù)在茶葉農(nóng)藥殘留分析中的應(yīng)用及特點進行了總結(jié)，并對其發(fā)展方向進行了展望，以期為今后開展茶葉中農(nóng)藥殘留的分析研究提供參考。

茶葉； 農(nóng)藥殘留； 分析技術(shù)

茶葉(CamelliasinensisL.)是一種天然保健飲料作物，具有獨特的香氣、口感以及抗癌、延緩衰老等藥用和保健功效[1-2]，深受世界各國人民的喜愛。我國是茶葉生產(chǎn)的起源國和大國，有著悠久的種茶和飲茶歷史，茶園面積、茶葉產(chǎn)量和出口量均居世界前列。據(jù)統(tǒng)計，2015年我國茶園總面積近288萬hm2，茶葉總產(chǎn)量224萬t，占世界產(chǎn)茶總產(chǎn)量的25%，出口量32.5萬t，居世界前列[3-4]。飲茶有利于健康，然而茶葉的質(zhì)量安全，特別是茶葉中農(nóng)藥污染的問題，不僅影響茶葉的健康消費，也影響我國茶葉在國際市場上的銷售，尤其是歐盟、日本等茶葉進口國家出臺嚴苛的農(nóng)藥殘留限量標準之后，我國出口茶葉因農(nóng)藥殘留超標多次受到通報，從2012—2014年，每年受到歐盟國家通報30余次[5]，嚴重妨礙了我國茶葉的貿(mào)易發(fā)展。雖然我國現(xiàn)行茶葉檢測方法標準能夠應(yīng)對茶葉中大多數(shù)農(nóng)藥殘留的檢測，如GB/T 23204—2008[6]和GB/T 23205—2008[7]分別能夠檢測茶葉中519種、448種農(nóng)藥及相關(guān)化學品殘留量，且方法簡單快速準確，對環(huán)境的污染也少，但由于茶葉進口國家和地區(qū)農(nóng)藥殘留限量標準的不斷更新，仍有不少農(nóng)藥(如草銨膦、氯噻啉)缺乏檢測標準，無標準可依。因此加強茶葉中農(nóng)藥殘留檢測方法的研究，對保障我國茶葉安全和茶產(chǎn)業(yè)的持續(xù)健康發(fā)展具有重要意義。

茶葉樣品基質(zhì)復雜，含有大量的茶多酚類、色素類等干擾物質(zhì)，且要檢測的殘留農(nóng)藥種類多、性質(zhì)差異大、濃度水平低，直接通過儀器時不能達到精確檢測，需要經(jīng)過精細的樣品前處理過程進行分離富集。因此，準確測定茶葉中的農(nóng)藥殘留，不僅需要高靈敏的痕量檢測技術(shù)，還需要高效快速的樣品前處理技術(shù)。本文查閱近年來國內(nèi)外公開發(fā)表的文獻，簡述了我國茶葉生產(chǎn)上常用農(nóng)藥情況，比較了國內(nèi)外茶葉農(nóng)藥殘留最大限量標準，總結(jié)了茶葉中農(nóng)藥殘留的主要檢測技術(shù)，包括固相微萃取、液相微萃取、分散固相萃取等樣品前處理技術(shù)，以及氣相色譜法、液相色譜法、質(zhì)譜法、免疫分析法等分析技術(shù)，并對其未來的發(fā)展趨勢進行了展望，以期為今后開展茶葉中農(nóng)藥殘留的分析研究提供參考。

1 我國茶園農(nóng)藥使用情況

茶樹是一種耐陰性較強的多年生植物，主要生長在溫暖濕潤的氣候環(huán)境下，易于滋生病蟲害。迄今為止，我國已記載的茶樹蟲害超過了800種，茶樹病害超過了130種[8]，給茶葉種植帶來了嚴重的威脅。農(nóng)藥是茶葉生產(chǎn)的必要保障[9]，根據(jù)中國農(nóng)藥信息網(wǎng)統(tǒng)計，目前我國登記在茶樹和茶

葉上使用的主要農(nóng)藥有80余種，見表1，按其成分及來源，主要為化學類農(nóng)藥，生物類及其他類農(nóng)藥較少；按防治對象，以殺蟲劑居多，主要為有機磷類、擬除蟲菊酯類殺蟲劑，殺菌劑、除草劑及生長調(diào)節(jié)劑較少[10]。近年來，隨著害蟲抗藥性不斷增強，復配農(nóng)藥品種越來越多地被應(yīng)用于茶園害蟲防治上。不過，農(nóng)藥殘毒危害大，在茶葉生產(chǎn)中應(yīng)盡量減少各類農(nóng)藥、特別是水溶性農(nóng)藥的使用量，茶葉生產(chǎn)者同時應(yīng)樹立科學的因需施藥觀念，盡量零用藥，做到從源頭上減少和控制茶葉中的農(nóng)藥殘留水平。

表1 我國登記在茶樹和茶葉上使用的農(nóng)藥品種

2 茶葉農(nóng)藥殘留最大限量標準

施用農(nóng)藥為茶葉產(chǎn)量提供了保證，并不可避免地對茶園環(huán)境和茶葉產(chǎn)品產(chǎn)生污染，殘留問題備受關(guān)注，許多國家和國際組織對茶葉中農(nóng)藥殘留的限量都作了嚴格的規(guī)定，以確保消費者的飲茶健康。例如，歐盟規(guī)定了茶葉中515種農(nóng)藥的限量，且超過90%的農(nóng)藥采用方法的檢出限作為標準[11]。日本規(guī)定了茶葉中264種農(nóng)藥的限量，對未規(guī)定的農(nóng)藥，則全部按0.01 mg/kg的“一律標準”執(zhí)行[12]。國際食品法典委員會(Codex Alimentarius Commission，CAC)[13]、美國[14]分別規(guī)定了茶葉中15種、19種農(nóng)藥的限量，雖然規(guī)定限量的農(nóng)藥數(shù)量不多，但嚴格程度卻很高，尤其是美國標準，對未涉及的農(nóng)藥，全部采用方法的檢出限為限量。我國強制性食品安全國家標準[15]規(guī)定了不同食品中387 種農(nóng)藥的限量，涉及茶葉的僅有28種，限量值在0.1～20 mg/kg之間。從設(shè)定限量的農(nóng)藥數(shù)量來看，我國標準規(guī)定的茶葉農(nóng)藥數(shù)量少于歐盟和日本，多于CAC和美國的規(guī)定，在國際上處于中等水平，但在限量水平上距離歐盟等發(fā)達國家標準仍存在一定差距。

表2為我國目前茶葉上有限量值的28種農(nóng)藥與主要發(fā)達國家或地區(qū)的數(shù)據(jù)。

通過比較可以看出，我國國家標準對茶葉中農(nóng)藥的最大殘留限量(maximum residue limits, MRLs)要求與歐盟的要求差異較大，但部分農(nóng)藥的限量較日本、美國、CAC標準要嚴格。

3 茶葉農(nóng)藥殘留檢測技術(shù)

3.1 樣品前處理技術(shù)

茶葉中農(nóng)藥殘留的痕量檢測分析，樣品的前處理是其關(guān)鍵和難點，直接影響檢測的各項指標、成本和效率。茶葉因加工工藝不同，可以制成綠茶、紅茶、白茶、黃茶等不同茶類產(chǎn)品，各類茶產(chǎn)品內(nèi)含成分有很大差異，在農(nóng)藥殘留測定時，不同成分的干擾作用也會有所不同，其中以茶多酚類和色素類成分對殘留檢測的干擾最大[16]。現(xiàn)行的用于茶葉中農(nóng)藥殘留分析的樣品前處理多采用傳統(tǒng)的提取凈化方法，如液液萃取法、振蕩提取法、索氏提取法等，這些方法易于推廣、應(yīng)用普遍，但是操作繁瑣、溶劑消耗大、選擇性不夠好、不能自動控制、消耗時間長，難以達到滿意的效果。隨著前處理技術(shù)水平的不斷提升，一些樣品前處理新技術(shù)和新方法的出現(xiàn)，如固相萃取(solid phase extraction，SPE)、固相微萃取(solid phase microextraction, SPME)、液相微萃取( liquid phase microextraction, LPME)、分散固相萃取(dispersive solid-phase extraction, DSPE; 又稱QuEChERS)、基質(zhì)固相分散萃取(matrix solid-phase dispersion, MSPD)、攪拌棒吸附萃取(stir bar sorptive extraction, SBSE)、納米材料富集等[17]，有效地克服了傳統(tǒng)前處理方法的缺陷，因操作簡單、萃取效率高、易于自動化、省時省力、較少使用或不用溶劑、對環(huán)境污染小正逐漸得到廣泛應(yīng)用。

表2 我國及主要發(fā)達國家或地區(qū)茶葉農(nóng)藥最大殘留限量值

在上述眾多方法中，基于吸附原理的固相前處理技術(shù)如SPE, SPME, MSPD, SBSE及QuEChERS等，能夠很好地減少茶葉基質(zhì)干擾，大大提高樣品的處理量，在茶葉農(nóng)藥殘留分析樣品前處理中的應(yīng)用最為廣泛。吸附材料是決定這些技術(shù)選擇性和靈敏度的關(guān)鍵因素，然而常見的商品化吸附材料如乙二胺-N-丙基硅烷(primary secondary amine，PSA)、十八烷基硅烷鍵合硅膠、石墨化炭黑(graphitized carbon blacks，GCB)、弗羅里硅土(Florisil)、氧化鋁(Al2O3)及氨基填料等重復使用率低、選擇性差、價格較貴，已滿足不了現(xiàn)代茶葉農(nóng)藥殘留樣品分析的實際需求，因此發(fā)展選擇性高、吸附速度快、富集能力強的吸附材料，尤其是納米材料的開發(fā)與應(yīng)用成為前處理領(lǐng)域的研究熱點和發(fā)展趨勢。目前已應(yīng)用于茶葉中農(nóng)藥殘留前處理的納米材料主要有碳納米管(CNTs)、Fe3O4納米粒子、石墨烯及其功能化材料等。李媛等[18]比較了Fe3O4納米粒子、PSA分別與GCB混合裝填固相萃取柱對不同茶葉(針形苦丁茶、梅山云茶、祁紅茶、烏龍茶、黑茶、綠茶)樣品基質(zhì)中16種農(nóng)藥殘留的凈化效果。結(jié)果表明，兩種混合固相萃取柱對16種農(nóng)藥的萃取回收率相當，但Fe3O4納米粒子混合型固相萃取柱對茶葉提取液的凈化效果明顯優(yōu)于商品化PSA混合基質(zhì)分散萃取法，可以得到無色透明溶液，而且價格便宜，操作簡單快速。Liu等[19]將石墨烯、PSA和GCB用于QuEChERS前處理方法，結(jié)合液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測手段，對不同發(fā)酵程度茶葉(綠茶、紅茶、白茶)樣品中的25種農(nóng)藥殘留進行分析。結(jié)果表明，石墨烯與PSA和GCB混合使用可顯著提高茶葉提取液的凈化效果，且與文獻相比，大大減少了PSA和GCB的用量，25種農(nóng)藥的回收率滿足測定要求。Deng等[20]制備了基于多壁碳納米管的磁性碳納米材料，利用QuEChERS技術(shù)和氣相色譜- 質(zhì)譜儀檢測，建立了茶葉中8種農(nóng)藥殘留的分析方法。結(jié)果顯示，該前處理方法對茶葉基質(zhì)的凈化效果優(yōu)異，且在30 s內(nèi)即能實現(xiàn)對目標農(nóng)藥的萃取?；诩{米材料在吸附容量、吸附速度、吸附選擇性和使用成本等方面的優(yōu)勢，目前其在茶葉農(nóng)藥殘留分析中的應(yīng)用已引起越來越多的關(guān)注和重視。

表3總結(jié)了部分樣品前處理新技術(shù)在茶葉農(nóng)藥殘留檢測中的應(yīng)用及其主要特點。

表3 幾種新技術(shù)在茶葉農(nóng)藥殘留檢測樣品前處理中的應(yīng)用及其主要特點

由表3可知，不同樣品前處理技術(shù)具有不同的優(yōu)缺點，在實際工作中，需綜合考慮茶葉樣品的類型、待測農(nóng)藥的種類、性質(zhì)以及檢測結(jié)果的要求，選擇適宜的前處理技術(shù)，保證檢測結(jié)果的精準性。

3.2 殘留檢測技術(shù)

3.2.1氣相色譜法

氣相色譜(gas chromatography, GC)利用被分析物質(zhì)的沸點、極性和吸附性質(zhì)的差異來實現(xiàn)混合物的分離，主要用于易氣化、熱穩(wěn)定性好的農(nóng)藥的測定，具有操作簡單、分析速度快、分離效能高、選擇性好、樣品用量少等特點[25,27]。隨著GC進樣系統(tǒng)的不斷完善，高效毛細管柱的使用，以及高靈敏度和高選擇性檢測器的出現(xiàn)，相當部分的農(nóng)藥可以使用GC配備合適的檢測器進行測定，如有機磷類、有機氯類、擬除蟲菊酯類農(nóng)藥。文獻報道測定茶葉中農(nóng)藥殘留常用的檢測器有電子捕獲檢測器(electron capture detector, ECD)、火焰光度檢測器(flame photometric detector, FPD)和氮磷檢測器(nitrogen phosphorus detector, NPD)。ECD對含強電負性元素(或基團)的農(nóng)藥靈敏度較高，多用于分離和測定茶葉中有機氯類、擬除蟲菊酯類農(nóng)藥，主要缺點是線性范圍較窄，對溫度和流速的變化比較敏感。FPD對含磷農(nóng)藥具有很好的選擇性和靈敏度，使用成本低，但穩(wěn)定性較差，對載氣的要求高。而NPD靈敏度高，選擇性強，是測定茶葉中有機磷類、氨基甲酸酯類農(nóng)藥的有效檢測器，但重現(xiàn)性差，使用壽命短，需定期更換銣珠，使用成本較高。

GC作為茶葉中農(nóng)藥殘留測定最普遍、最常用的方法之一，具有較強的分離能力，結(jié)合傳統(tǒng)檢測器的檢測，依靠與標準物質(zhì)保留時間對照定性，受茶葉基質(zhì)、試劑或儀器背景干擾大，容易造成假陽性誤判。采用雙柱色譜分析技術(shù)，可以一定程度的增加定性的可靠性。盧劍等[30]采用氣相色譜雙柱法對茶葉中多種有機氯和擬除蟲菊酯農(nóng)藥殘留進行測定。茶葉樣品經(jīng)乙腈提取、弗羅里硅土SPE凈化后，采用 DB-1701 和 DB-35MS 毛細管氣相色譜柱、ECD分離和測定，目標農(nóng)藥在DB-1701柱上的平均回收率為81.76%～118.16%，相對標準偏差(relative standard deviation, RSD)為1.42%～9.56%，檢出限(limit of detection, LOD)為0.000 6～0.50 mg/kg；在DB-35MS柱上的平均回收率為72.02%～119.23%，RSD為0.21%～5.77%，LOD為0.000 4～0.50 mg/kg。采用雙柱法測定提高了定性的準確度，縮短了陽性樣品的驗證時間，在只配備GC儀器的實驗室，可以一定程度地提高茶葉農(nóng)藥殘留檢測的可靠性。表4列舉了應(yīng)用GC進行茶葉農(nóng)藥殘留檢測的部分實例。

3.2.2液相色譜法

液相色譜(high performance liquid chromatography，HPLC)主要適用于高沸點、熱穩(wěn)定差、不易氣化或受熱易分解的農(nóng)藥殘留的定量測定，包括氨基甲酸酯類、磺酰脲類、苯氧羧酸類等農(nóng)藥。在茶葉樣品的分離分析中，HPLC的流動相一般采用甲醇- 水、乙腈- 水兩大體系。乙腈洗脫能力強，黏度比甲醇低，系統(tǒng)壓力較低，但價格較高，毒性較強。甲醇的優(yōu)勢體現(xiàn)在經(jīng)濟、低毒等環(huán)保優(yōu)勢上，但系統(tǒng)壓力高，洗脫能力較差[40]。檢測器主要使用紫外檢測器(ultraviolet absorption detector，UV)、二極管陣列檢測器(photo-diode array，PDA)和熒光檢測器(fluorescence detector，F(xiàn)L)。UV主要用于不同茶葉樣品中有紫外吸收能力的農(nóng)藥殘留的測定，其靈敏度高，精密度及線性范圍好，對環(huán)境溫度、流動相組成變化和流速波動不太敏感，可同時用于等度洗脫和梯度洗脫。PDA同樣適用于有紫外吸收的農(nóng)藥殘留的檢測，它能夠一次進樣分析同時獲得樣品組分的色譜和光譜信息，利用組分的色譜保留時間、色譜峰純度、光譜吸收曲線形狀和最大吸收波長等信息，一定程度上增加測定結(jié)果的可靠性，但靈敏度較UV低；FL在幾種常用檢測器中的靈敏度最高，最小檢測量可達1×10-13g，主要用來測定茶葉樣品中能夠產(chǎn)生熒光或者衍生化處理后可以產(chǎn)生熒光的農(nóng)藥，如氨基甲酸酯類農(nóng)藥。

與GC法相比，HPLC不需要考慮樣品的揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性，但是溶劑消耗大，檢出限高，檢測器種類少，缺乏像GC中ECD等高靈敏度的檢測器，而且對樣品的凈化程度要求很高，但由于儀器價格便宜，普通檢測實驗室易于配備和使用，且操作維護簡單，在茶葉農(nóng)藥殘留的檢測中應(yīng)用很普遍。表5列舉了應(yīng)用HPLC進行茶葉中農(nóng)藥殘留檢測的部分實例。

3.2.3質(zhì)譜法

質(zhì)譜法(mass spectrometry, MS)是當前茶葉農(nóng)藥殘留分析的主流技術(shù)，其基本原理是采用多種離子化技術(shù)將待測農(nóng)藥離子化，再經(jīng)過質(zhì)量分析器和檢測器將這些離子按質(zhì)荷比大小分離并排列成譜，然后通過標準品對照和質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫檢索，并結(jié)合特征離子的豐度值實現(xiàn)各農(nóng)藥殘留組分的定性、定量分析[51]。質(zhì)量分析器作為質(zhì)譜儀工作的核心組件，其性能直接影響質(zhì)譜儀的分辨率、靈敏度和檢測范圍，常用的質(zhì)量分析器主要有四級桿質(zhì)譜(quadrupole-mass spectrometer, Q-MS)、離子阱質(zhì)譜(ion trap-mass spectrometer, IT-MS)、飛行時間質(zhì)譜(time of flight-mass spectrometer, TOF-MS)、傅立葉變換離子回旋共振質(zhì)譜(Fourier transform ion cyclotron resonance-mass spectrometer, FT-ICR-MS)、四極桿- 靜電場軌道阱質(zhì)譜(quadrupole/electrostatic field orbit trap mass spectrometry, QE-MS)等。不同的質(zhì)量分析器在靈敏度、分辨率和精確度方面存在差異[52-57]：

表4 茶葉中農(nóng)藥殘留的GC檢測實例

表5 茶葉中農(nóng)藥殘留的HPLC檢測實例

四級桿結(jié)構(gòu)簡單、定量能力強，但價格高、分辨率低，桿體易被高濃度樣品污染，維護難度大，不適合分析具有較高質(zhì)量的離子；IT體積小巧，價格低廉，使用維護簡單，具備多級串聯(lián)質(zhì)譜功能，適于結(jié)構(gòu)方面的定性研究，但線性范圍較窄，定量能力較弱；TOF掃描速度很快，質(zhì)量范圍寬，分辨率和質(zhì)量精度高，可以把質(zhì)量數(shù)非常接近的物質(zhì)分開，但在飛行過程中離子丟失較多，靈敏度較低，且儀器對電場的穩(wěn)定性要求極高，質(zhì)量準確度受溫度等環(huán)境條件影響較大；FT-ICR具有超高的分辨率和高質(zhì)量精度，質(zhì)荷比可以精確到千分之一道爾頓，但離子回旋共振需在較高磁場下進行，對真空度要求嚴格，且儀器體積大，操作復雜，維護費用昂貴；QE-MS體積小巧，操作簡單，在靜電場下工作，無需超低溫環(huán)境，且質(zhì)量穩(wěn)定性好，分辨率高，利用自動觸發(fā)全掃描二級質(zhì)譜功能進行定性確證，在多殘留目標物篩查時，可顯著消除樣品基質(zhì)干擾，簡化方法開發(fā)過程，但分析速度較慢，需要強大的軟件工具和豐富的物質(zhì)質(zhì)譜圖數(shù)據(jù)庫做支持。MS定性能力強，但分離能力有限，一般與分離能力強的色譜技術(shù)連接使用，其中氣相色譜- 質(zhì)譜(GC-MS)是目前最成熟的一種聯(lián)用技術(shù)，主要用于茶葉中熱穩(wěn)定性好、沸點低的農(nóng)藥殘留的檢測。以70eV的電子轟擊電離源和四級桿質(zhì)量分析器進行檢測獲得的質(zhì)譜圖，可借助標準譜庫檢索，得到目標農(nóng)藥的特征離子及相對豐度，實現(xiàn)定性、定量分析[58]。液相色譜- 質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LC-MS)主要用來分析茶葉中難揮發(fā)、熱不穩(wěn)定、極性較大的農(nóng)藥殘留，不同的農(nóng)藥需要選取不同的檢測模式，對于中性及堿性農(nóng)藥，如三嗪類、有機磷類、季銨鹽類、氨基甲酸酯類農(nóng)藥一般使用正離子檢測，而酸性農(nóng)藥，如苯氧羧酸類、磺酰脲類農(nóng)藥則使用負離子檢測。有時兩種模式同時使用。該技術(shù)一般沒有商品化的標準譜庫檢，只能自己建庫或解析譜圖，主要應(yīng)用于有標準物質(zhì)參照情況下的定性和定量分析[59]。盡管GC-MS、LC-MS等單級質(zhì)譜定性能力相對較強和準確，但難以完全獲得農(nóng)藥的結(jié)構(gòu)信息，在茶葉等復雜樣品中存在嚴重基質(zhì)干擾物及共流出物時，容易產(chǎn)生假陽性結(jié)果。相比于單級質(zhì)譜，MS/MS或MSn等多級質(zhì)譜串聯(lián)利用獲得的離子豐富的結(jié)構(gòu)信息，對農(nóng)藥化合物的結(jié)構(gòu)加以確證，通過選擇離子模式，可以使茶葉樣品背景和噪音大大降低，在茶葉痕量農(nóng)藥殘留的鑒定和定量分析中更具有優(yōu)勢。

質(zhì)譜法對茶葉樣品的前處理要求不高，且分析速度快，靈敏度高，依據(jù)獲得的特征母離子及子離子信息，可獲得準確的定性和定量結(jié)果。但是，質(zhì)譜儀價格昂貴，運行成本高，需要嚴格的操作技能，限制了它的應(yīng)用和普及。表6列舉了應(yīng)用MS進行茶葉中農(nóng)藥殘留檢測的部分實例。

表6 茶葉中農(nóng)藥殘留的MS檢測實例

3.2.4免疫分析法

免疫分析法(immunoassay, IA)利用抗原、抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)對殘留物進行檢測分析，其不需要昂貴復雜的儀器，樣品前處理過程簡單，對操作技術(shù)要求不高，已成功應(yīng)用于茶葉農(nóng)藥殘留的快速檢測領(lǐng)域，為保障茶葉產(chǎn)品的食用安全發(fā)揮了重要作用。高質(zhì)量的抗體是IA的關(guān)鍵，其直接影響分析的特異性、靈敏性和準確性，常用的抗體類型有多克隆抗體、單克隆抗體和基因工程抗體(如核酸適體、納米抗體)等。IA種類很多，對于茶葉中小分子農(nóng)藥的殘留檢測，主要應(yīng)用非均相的、競爭型酶聯(lián)免疫吸附分析法(enzyme-link immunosorbent assay, ELISA)。該方法將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合，是敏感性很高的一種免疫測定方法，根據(jù)檢測策略的不同可分為間接競爭ELISA法、包被抗原或抗體的直接競爭ELISA 法。直接競爭ELISA 法只有一步免疫反應(yīng)，省去了與二抗反應(yīng)的步驟，檢測時間短，但抗原抗體用量多、檢測靈敏度低；間接競爭ELSA 法需要與二抗反應(yīng)，檢測時間長，但檢測靈敏度高，且抗原抗體用量少，分析成本低[69]。

到目前為止，運用免疫化學技術(shù)，研究人員已經(jīng)開發(fā)了用于茶葉中甲霜靈、啶蟲脒、吡蟲啉、克百威等農(nóng)藥的免疫檢測試劑盒和試紙條[70-74]，建立了茶葉中有機氯、氨基甲酸酯、擬除蟲菊酯等多類農(nóng)藥的ELISA檢測技術(shù)[75-77]。例如，Song等[78]將氰戊菊酸(FA)與氨基己酸(AME)經(jīng)一系列反應(yīng)合成氰戊菊酯半抗原(FAAE)，利用活性酯法與載體蛋白(KLH)偶聯(lián)合成突出氰戊菊酯分子結(jié)構(gòu)特征的人工抗原，免疫新西蘭大白兔制備抗血清，采用Protein A-Sepharose 4B柱親和層析法從抗血清中分離純化對氰戊菊酯具特異性親和力的多克隆抗體，采用活性酯法以辣根過氧化物酶標記氰戊菊酯抗原，建立了快速檢測茶葉中氰戊菊酯的直接競爭ELISA 法。通過方陣滴定法篩選包被抗體和酶標抗原的最適工作濃度，并考察了反應(yīng)體系的有機溶劑、離子強度和pH值3種影響因素。最終確立了氰戊菊酯直接競爭ELISA法中包被抗體的量為1 μg/孔，酶標抗原稀釋倍數(shù)為2×104倍，反應(yīng)體系中φ(甲醇)不高于5%，pH為7.5，鹽濃度為0.01 mol/L。在此最佳檢測條件下，方法的靈敏度(IC50)為9.0 μg/L，檢出限(IC15)為0.5 μg/L，除氯氰菊酯與甲氰菊酯外，與結(jié)構(gòu)相似農(nóng)藥的交叉反應(yīng)率均小于6%。茶樣提取后，經(jīng)弗羅里硅土SPE凈化用于ELISA測定，平均回收率為76.67%～91.43%，變異系數(shù)為3.75%～26%。相同前處理條件下，采用ELISA法和GC-ECD法檢測茶葉中氰戊菊酯的回歸方程為y=0.929 3x+1.891 1，相關(guān)系數(shù)r為0.998 4，表明兩種方法的檢測結(jié)果具有很好的一致性，ELISA法適用于茶葉樣品的快速檢測。呂瀟等[79]建立了用于測定綠茶和紅茶中硫丹(α-硫丹、β-硫丹、硫丹硫酸酯)的直接競爭ELISA法，硫丹標樣檢測的線性范圍為1～10 μg/L，IC50為 2.0 μg/L，IC15為0.4 μg/L。茶樣提取后，不凈化，提取液用磷酸鹽緩沖液稀釋500倍后用于ELISA測定，平均回收率為 86.6%～91.1%，RSD為2.5%～20.9%，最低檢測限為2.0 mg/kg；經(jīng)SPE凈化后，用于ELISA測定，平均回收率為68.7%～123%，RSD為13.2%～16.8%，最低檢測限為0.06 mg/kg。相同前處理條件下，采用GC-MS對硫丹的最低檢測限為0.05 mg/kg，平均回收率為70.1%～95.5%，RSD為4.1%～11.9%。采用ELISA法和GC-MS法檢測結(jié)果的回歸方程為y=1.053 2x-0.011 79，相關(guān)系數(shù)r為0.959 9，兩種方法的檢測結(jié)果具有較好的一致性。與GC-MS相比，ELISA不僅減少了繁瑣的前處理過程，而且靈敏度相當，更易操作。

ELISA法除具有特異靈敏、簡便快捷、選擇性好、分析通量大等特點外，還具有檢測成本低、適于現(xiàn)場操作的突出優(yōu)勢，但在茶葉農(nóng)藥殘留檢測的應(yīng)用過程中仍然存在著一些問題[80]，例如，對與待測農(nóng)藥結(jié)構(gòu)類似的化合物存在一定程度的交叉反應(yīng)，容易出現(xiàn)假陽性；只能用于定性和半定量檢測，可靠性需要采用精準的色譜方法進行驗證；對于成分復雜的茶葉樣品，基質(zhì)效應(yīng)可能抑制免疫結(jié)合反應(yīng)。

4 結(jié) 論

農(nóng)藥殘留作為影響茶葉質(zhì)量安全的主要因素之一，已成為我國茶葉產(chǎn)業(yè)持續(xù)健康發(fā)展的重要阻礙。茶葉中農(nóng)藥殘留的分析技術(shù)作為檢驗和評價茶葉質(zhì)量安全的重要手段之一，越來越受到人們的關(guān)注。許多國家和地區(qū)對茶葉中農(nóng)藥殘留的檢測分析開展了研究。由于茶葉樣品本身的復雜性，以及殘留農(nóng)藥種類和數(shù)量日益增加、化學組成日趨復雜，給茶葉中農(nóng)藥殘留的分析檢測帶來了巨大挑戰(zhàn)，發(fā)展茶葉中農(nóng)藥殘留分析的快速、準確、高效、高選擇性和自動化的樣品前處理技術(shù)，以及多類多殘留檢測技術(shù)和高通量快速篩查技術(shù)成為發(fā)展趨勢。但是，茶葉的質(zhì)量安全是“產(chǎn)”出來的，而不是“檢”出來的。因而，減少和控制茶葉中農(nóng)藥殘留的根本途徑，保障茶葉的質(zhì)量安全，首先是要加強茶葉種植環(huán)節(jié)中農(nóng)藥使用的源頭管理，樹立科學的因需施藥觀念，推廣使用高效低毒低殘留的環(huán)境友好農(nóng)藥，提倡少用、不用和安全用藥，大力推行農(nóng)業(yè)防治、理化誘控、生物防治、生態(tài)控制等病蟲害“綠色防控”技術(shù)。同時，制定既符合我國茶葉生產(chǎn)水平又能與國際接軌的茶葉農(nóng)藥殘留限量標準，打破國際貿(mào)易中的技術(shù)性“綠色壁壘”。并積極發(fā)展有機茶種植，開發(fā)生產(chǎn)綠色安全的有機茶，從源頭上消除茶葉中的農(nóng)藥殘留，提高茶葉產(chǎn)品的安全水平，促進我國茶產(chǎn)業(yè)的持續(xù)健康發(fā)展。

[1] NAGHMA K, HASAN M. Tea and health: studies in humans[J]. Current Pharmaceutical Design, 2013, 19(34):6141-6147.

[2] LEE L K, FOO K Y. Recent advances on the beneficial use and health implications of Pu-Erh tea[J]. Food Research International, 2013, 53(2):619-628.

[3] 封槐松. 2015年全國茶葉生產(chǎn)穩(wěn)定發(fā)展 結(jié)構(gòu)優(yōu)化產(chǎn)值增加[J].茶世界, 2016(1):31-32. FENG H S. Chinese tea production stable development, structural optimization and output value increasing in 2015 [J]. Tea world, 2016 (1): 31-32.

[4] 中國食品土畜進出口商會茶葉分會秘書處. 2015年我國茶葉出口金額創(chuàng)歷史新高[J].中國茶葉,2016(2):24-26. China Chamber of Commerce of Foodstuffs and Native Product Tea Branch Secretariat. The export value of Chinese tea reached an all-time high in 2015[J]. China Tea, 2016(2):24-26.

[5] 焦知岳, 趙凌云. 歐盟茶葉農(nóng)藥殘留限量措施對中國茶葉出口的影響及對策[J].世界農(nóng)業(yè),2015,434(6):132-136. JIAO Z Y, ZHAO L Y. Analysis of the effect of pesticide residue limit measures in European Union and countermeasures for China’s tea export[J]. World Agriculture, 2015,434(6):132-136.

[6] 中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局, 中國國家標準化管理委員會. 茶葉中 519 種農(nóng)藥及相關(guān)化學品殘留量的測定- 氣相色譜- 質(zhì)譜法：GB/T 23204—2008 [S]. 北京: 中國標準出版社, 2008. General Administration of Quality Supervision, Inspection and Quarantine of the People’s Republic of China, Standardization administration of the People’s Republic of China. Determination of 519 kinds of pesticides and related chemicals residues in teas GC-MS method：GB/T 23204—2008 [S]. Beijing: Standards Press of China, 2008.

[7] 中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局, 中國國家標準化管理委員會. 茶葉中 448 種農(nóng)藥及相關(guān)化學品殘留量的測定- 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法: GB/T 23205—2008 [S]. 北京: 中國標準出版社, 2008. General Administration of Quality Supervision, Inspection and Quarantine of the People’s Republic of China, Standardization administration of the People’s Republic of China. Determination of 448 kinds of pesticides and related chemicals residues in teas-LC-MS-MS method: GB/T 23205—2008 [S]. Beijing: Standards Press of China, 2008.

[8] 肖強.茶樹病蟲害的類群[J].中國茶葉, 2014(3):16-17. XIAO Q. The group of pests and diseases in tea plants[J]. China Tea, 2014(3):16-17.

[9] 郭徐魁,洪燕沛,陳其忠,等.不同茶葉農(nóng)藥的作用及其結(jié)構(gòu)分類[J].農(nóng)產(chǎn)品加工,2015(6):54-57. GUO X K, HONG Y P, CHEN Q Z, et al. Function and structure classification of different pesticides in tea[J]. Farm Products Processing, 2015(6):54-57.

[10] 中國農(nóng)藥信息網(wǎng). 農(nóng)藥登記數(shù)據(jù)[DB/OL]. [2016-07-10]. http:∥www.chinapesticide.gov.cn/hysj/index.jhtml.

[11] European Union. Pesticide residues and maximum residue levels[DB/OL]. [2016-05-05]. http:∥ec.europa.eu/sanco_pesticides/public/index.cfm.

[12] The Japan Food Chemical Research Foundation. Maximum residue limits (MRLs) of agricultural chemicals in foods[DB/OL]. [2016-05-05]. http:∥ www.ffcr.or.jp/zaidan/FFCRHOME.nsf/pages/MRLs-p.

[13] Codex Alimentarius Commission. Codex pesticides residues in food online database[DB/OL]. [2016-05-05]. http:∥www. codexal imentarius.org/ standards/en/.

[14] Global MRL Database. Pesticides[DB/OL]. [2016-05-05]. https:∥www.globalmrl.com/db#query.

[15] 衛(wèi)生和計劃生育委員會,農(nóng)業(yè)部.食品安全國家標準 食品中農(nóng)藥最大殘留限量: GB 2763—2014[S]. 北京:中國標準出版社, 2014. National Health and Family Planning Commission of PRC, The Ministry of Agriculture of the People’s Republic of China. National food safety standard-maximum residue limits for pesticides in food: GB 2763—2014[S]. Beijing: Standards Press of China, 2014.

[16] 錢傳范.農(nóng)藥殘留分析原理與方法[M].北京 : 化學工業(yè)出版社,2011:382. QIAN C F. Principle and method of pesticide residue analysis[M]. Beijing: Chemical Industry Press, 2011:382.

[17] ZHANG L J, LIU S W, CUI X Y, et al. A review of sample preparation methods for the pesticide residue analysis in foods[J]. Central European Journal of Chemistry, 2012,10(3):900-925.

[18] 李媛,肖樂輝,周乃元,等.在茶葉農(nóng)藥殘留測定中用四氧化三鐵納米粒子去除樣品中的色素[J].分析化學,2013,41(1):63-68. LI Y, XIAO L H, ZHOU N Y, et al. Purification of pigments by iron oxide nanoparticles for analysis of pesticide residues in tea[J].Chinese Journal of Analytical Chemistry,2013,41(1):63-68.

[19] LIU X, GUAN W, HAO X, et al. Pesticide multi-residue analysis in tea using d-SPE sample cleanup with grapheme mixed with primary secondary amine and graphitized carbon black prior to LC-MS/MS[J].Chromatographia,2013,77(1/2):1-7.

[20] DENG X J, GUO Q J, CHEN X P, et al. Rapid and effective sample clean-up based on magnetic multiwalled carbon nanotubes for the determination of pesticide residues in tea by gas chromatography-mass spectrometry[J]. Food Chemistry, 2014, 145(7):853-858.

[21] WEN X, CHAO H, YAN Q, et al. Determination of neonicotinoid pesticides residues in agricultural samples by solid-phase extraction combined with liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. Journal of Chromatography A,2011,1218(28):4426-4433.

[22] SCHUREK J, PORTOLES T, HAJSLOVA J, et al. Application of head-space solid-phase microextraction coupled to comprehensive two-dimensional gas chromatography-time-of-flight mass spectrometry for the determination of multiple pesticide residues in tea samples[J]. Analytica Chimica Acta, 2008, 611(2):163-172.

[23] KANRAR B, MANDAL S, BHATTACHARYYA A. Validation and uncertainty analysis of a multiresidue method for 42 pesticides in made tea, tea infusion and spent leaves using ethyl acetate extraction and liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. Journal of Chromatography A, 2010, 1217 (12): 1926-1933.

[24] KADIR H A, ABAS F, ZAKARIA O, et al. Analysis of pesticide residues in tea using accelerated solvent extraction with in-cell cleanup and gas chromatography tandem mass spectrometry[J]. Analytical Methods, 2015, 7(7):3141-3147.

[25] LIU D, MIN S G. Rapid analysis of organochlorine and pyrethroid pesticides in tea samples by directly suspended droplet microextraction using a gas chromatography-electron capture detector[J]. Journal of Chromatography A, 2012, 1235(8):166-173.

[26] HU Y Y, ZHENG P, HE Y Z, et al. Response surface optimization for determination of pesticide multiresidues by matrix solid-phase dispersion and gas chromatography[J]. Journal of Chromatography A, 2006, 1098(1/2):188-193.

[27] LI B, ZENG F, DONG Q, et al. Rapid determination method for 12 pyrethroid pesticide residues in tea by stir bar sorptive extraction-thermal desorption-gas chromatography[J]. Physics Procedia, 2012, 25(22):1776-1780.

[28] 李軍明,鐘讀波,王亞琴,等.在線凝膠滲透色譜- 氣相色譜/質(zhì)譜法檢測茶葉中的153種農(nóng)藥殘留[J].色譜, 2010, 28(9):840-848. LI J M, ZHONG D B, WANG Y Q, et al. Determination of 153 pesticide residues in tea using on-line gel permeation chromatography-gas chromatography/mass spectrometry[J].Chinese Journal of Chromatography,2010, 28(9):840-848.

[29] JI J, DENG C H, ZHANG H Q, et al. Microwave-assisted steam distillation for the determination of organochlorine pesticides and pyrethroids in Chinese teas[J]. Talanta, 2007, 71(3):1068-1074.

[30] 盧劍,武中平,高巍,等.氣相色譜雙柱法測定茶葉中多種有機氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留量[J].食品科學, 2009, 30(24):401-404. LU J, WU Z P, GAO W, et al. Use of dual-column gas chromatography for the determination of organochlorine and pyrethroid pesticides residues in tea[J]. Food Science,2009,30(24):401-404.

[31] 劉騰飛,楊代鳳,董明輝,等.分散固相萃取- 氣相色譜法測定茶鮮葉中7種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留[J].農(nóng)藥學學報, 2015, 17(5):571-578. LIU T F, YANG D F, DONG M H, et al. Determination of pyrethroid residues in fresh tea leaves by dispersive solid phase extraction and gas chromatography[J].Chinese Journal of Pesticide Science,2015, 17(5):571-578.

[32] CHO S K, EL-ATY A M A, RAHMAN M M, et al. Simultaneous multi-determination and transfer of eight pesticide residues from green tea leaves to infusion using gas chromatography[J]. Food Chemistry, 2014, 165(3):532-539.

[33] HOU X H, ZHENG X, ZHANG C L, et al. Ultrasound-assisted dispersive liquid-liquid microextraction based on the solidification of a floating organic droplet followed by gas chromatography for the determination of eight pyrethroid pesticides in tea samples[J]. Journal of Chromatography B, 2014, 969:123-127.

[34] MOINFAR S, HOSSEINI M R M. Development of dispersive liquid-liquid microextraction method for the analysis of organophosphorus pesticides in tea[J]. Journal of Hazardous Materials, 2009, 169(1/3):907-911.

[35] KOTTIAPPAN M, DHANAKODI K, ANNAMALAI S. Monitoring of pesticide residues in South Indian tea[J]. Environmental Monitoring and Assessment, 2013, 185(8):6413-6417.

[36] OZBEY A, UYGUN U. Behaviour of some organophosphorus pesticide residues in peppermint tea during the infusion process[J]. Food Chemistry, 2007, 104(1):237-241.

[37] NATALIA C, ROSA P, MANUEL H C. Pesticide analysis in herbal infusions by solid-phase microextraction and gas chromatography with atomic emission detection[J]. Talanta, 2007, 71(3):1417-1423.

[38] 游飛明,吳芳,陸萬平,等.固相萃取- 氣相色譜法測定茶葉中多種有機磷農(nóng)藥[J].分析測試技術(shù)與儀器, 2011, 17(1):6-10. YOU F M, WU F, LU W P, et al. Determination of organophosphorus pesticide residues in tea by solid-phase extraction gas chromatography [J].Analysis and Testing Technology and Instruments,2011, 17(1):6-10.

[39] 張水壩,易軍,葉江雷,等.氣相色譜法測定茶葉中的噻嗪酮、甲胺磷、乙酰甲胺磷及三唑磷殘留[J].色譜, 2004, 22(2):154-157. ZHANG S B, YI J, YE J L, et al. Determination of buprofezin, methamidophos, acephate, and triazophos residues in chinese tea samples by gas chromatography[J].Chinese Journal of Chromatography,2004,22(2):154-157.

[40] 葛曉鳴,湛嘉,楊亮,等.動物源性食品中小分子有機污染物的多類別多殘留分析技術(shù)的研究進展[J].理化檢驗:化學分冊,2015,51(3): 409-415. GE X M, ZHAN J, YANG L, et al. Research progress on multi-class, multi-residue analytical method for screening of low-weight organic contaminants in food of animal origin[J].Physical Testing and Chemical Analysis: Chemical Analysis, 2015, 51(3):409-415.

[41] KIM S W, EI-ATY A M A, LEE Y J, et al. A simple HPLC-UVD method for detection of etofenprox in green tea using sample hydration[J]. Food Science and Biotechnology, 2014, 23(6):2097-2101.

[42] KOTTIAPPAN M, ANANDHAN S, CHANDRAN S. Estimation of abamectin residues present in tea: high-performance liquid chromatography technique[J]. Isrn Chromatography, 2013 (5):1958-1969.

[43] KOTTIAPPAN M, ANANDH S V. Determination and residues level of emamectin benzoate in tea using HPLC with fluorescence detection[J]. Food and Public Health, 2012, 2(2):12-15.

[44] LIANG P, WANG J J, LIU G J, et al. Determination of four sulfonylurea herbicides in tea by matrix solid-phase dispersion cleanup followed by dispersive liquid-liquid microextraction[J]. Journal of Separation Science, 2014, 37(17):2380-2387.

[45] WU F, CHEN J H, LU W P, et al. Solid-phase microextraction using poly (1-hexadecene-co-trimethylolpropane trimethacrylate) coating for analysis of pesticides in tea samples by high-performance liquid chromatography[J]. Current Analytical Chemistry, 2011,7(4):341-348.

[46] HOU R Y, JIAO W T, QIAN X S, et al. Effective extraction method for determination of neonicotinoid residues in tea[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2013, 61(51):12565-12571.

[47] SHARMA A, GUPTA M, SHANKER A. Fenvalerate residue level and dissipation in tea and in its infusion[J]. Food Additives and Contaminants, 2008, 25(1):97-104.

[48] WU C C, CHU C, WANG Y S, et al. Dissipation of carbofuran and carbaryl on Oolong tea during tea bushes, manufacturing and roasting processes[J]. Journal of Environmental Science and Health Part B, 2007, 42(42):669-675.

[49] WU C C, CHU C, WANG Y S, et al. Multiresidue method for high-performance liquid chromatography determination of carbamate pesticides residues in tea samples[J]. Journal of Environmental Science and Health, 2009, 44(1):58-68.

[50] WANG X H, CHENG J, ZHOU H B, et al. Development of a simple combining apparatus to perform a magnetic stirring-assisted dispersive liquid-liquid microextraction and its application for the analysis of carbamate and organophosphorus pesticides in tea drinks[J]. Analytica Chimica Acta, 2013, 787(13):71-77.

[51] STEINIGER D, LU G P, BUTLER J, et al. Determination of multiresidue pesticides in green tea by using a modified QuEChERS extraction and ion-trap gas chromatography/mass spectrometry[J]. Journal of Aoac International, 2010, 93(4):1169-1179.

[52] 李燕,梁漢東,韋妙,等.離子阱質(zhì)譜計的研究現(xiàn)狀及其進展[J].質(zhì)譜學報, 2006, 27(4):249-256. LI Y, LIANG H D, WEI M, et al. Introduction to ion trap mass spectrometer[J]. Journal of Chinese Mass Spectrometry Society,2006,27(4): 249-256.

[53] 陳曉水,侯宏衛(wèi),邊照陽,等.氣相色譜- 串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)的應(yīng)用研究進展[J]. 質(zhì)譜學報, 2013, 34(5):308-320. CHEN X S, HOU H W, BIAN Z Y, et al. Research progress on application of GC-MS/MS[J].Journal of Chinese Mass Spectrometry Society, 2013,34(5):308-320.

[54] 王姍姍,蔣可志,伍川.氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在有機硅化合物分析中的應(yīng)用[J].杭州師范大學學報(自然科學版), 2014,13(6):579-585. WANG S S, JIANG K Z, WU C. The application of GC-MS in the analysis of organosilicon compounds[J].Journal of Hangzhou Normal University (Natural Sciences Edition), 2014,13(6):579-585.

[55] 韓璐,陸金梅,陳達煒,等.高分辨質(zhì)譜在食品農(nóng)藥殘留分析領(lǐng)域的應(yīng)用進展[J].中國食品衛(wèi)生雜志, 2015, 27(5):594-598. HAN L, LU J M, CHEN D W, et al. Progress of the application of high-resolution mass spectrometry techniques in the field of pesticide residue analysis in food-based matrices[J].Chinese Journal of Food Hygiene, 2015, 27(5):594-598.

[56] 李明,馬家辰,李紅梅,等.靜電場軌道阱質(zhì)譜的進展[J].質(zhì)譜學報,2013,34(3):185-192. LI M, MA J C, LI H M, et al. Progress on electrostatic orbitrap mass spectrometer[J].Journal of Chinese Mass Spectrometry Society, 2013,34(3):185-192.

[57] 劉蕓,丁濤,廖雪晴,等.高效液相色譜- 四極桿/靜電場軌道阱高分辨率質(zhì)譜法快速篩查中成藥和保健食品中非法添加的42種化學藥物[J].分析化學,2016,44(3):423-429. LIU Y, DING T, LIAO X Q, et al. Direct determination of 42 chemical drugs illegally added in herbal medicines and dietary supplement by high performance liquid chromatography-quadrurpole/electrostatic field orbitrap high resolution mass spectrometry[J]. Chinese Journal of Analytical Chemistry,2016,44(3):423-429.

[58] HUANG Z Q, LI Y J, CHEN B, et al. Simultaneous determination of 102 pesticide residues in Chinese teas by gas chromatography-mass spectrometry[J]. Journal of Chromatography B, 2007, 853(1/2):154-162.

[60] YANG X, XU D C, QIU J W, et al. Simultaneous determination of 118 pesticide residues in Chinese teas by gas chromatography-mass spectrometry[J]. Chemical Papers, 2008, 63(1):39-46.

[61] WU L J, HU M Z, LI Z C, ET AL. Dynamic microwave-assisted extraction online coupled with single drop microextraction of organophosphorus pesticides in tea samples[J]. Journal of Chromatography A, 2015, 1407:42-51.

[62] HOU X, LEI S R, QIU S T, et al. A multi-residue method for the determination of pesticides in tea using multi-walled carbon nanotubes as a dispersive solid phase extraction absorbent[J]. Food Chemistry, 2014, 153(24):121-129.

[63] CHEN H P, YIN P, WANG Q H, et al. A modified QuEChERS sample preparation method for the analysis of 70 pesticide residues in tea using gas chromatography-tandem mass spectrometry[J]. Food Analytical Methods, 2014, 7(8):1577-1587.

[64] ZHAO P, WANG L, JIANG Y, et al. Dispersive cleanup of acetonitrile extracts of tea samples by mixed multiwalled carbon nanotubes, primary secondary amine, and graphitized carbon black sorbents[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2012,60(16):4026-4033.

[65] ZHANG Y, XU H. Determination of triazoles in tea samples using dispersive solid phase extraction combined with dispersive liquid-liquid microextraction followed by liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. Food Analytical Methods, 2014, 7(1):189-196.

[66] CAO Y L, TANG H, CHEN D Z, et al. A novel method based on MSPD for simultaneous determination of 16 pesticide residues in tea by LC-MS/MS[J]. Journal of Chromatography B, 2015, 998:72-79.

[67] CHEN G Q, CAO P Y, LIU R J. A multi-residue method for fast determination of pesticides in tea by ultra performance liquid chromatography-electrospray tandem mass spectrometry combined with modified QuEChERS sample preparation procedure[J]. Food Chemistry, 2011, 125(4):1406-1411.

[68] ZHAO H X, ZHAO S C, DENG L G, et al. Rapid determination of organonitrogen, organophosphorus and carbamate pesticides in tea by ultrahigh-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS)[J]. Food Analytical Methods, 2013, 6(2): 497- 505.

[69] 楊代鳳,劉騰飛,鄧金花,等.標記免疫分析在農(nóng)獸藥殘留檢測中的應(yīng)用研究進展[J].中國農(nóng)學通報, 2012, 28(30):218-225. YANG D F, LIU T F, DENG J H, et al. Development and application of labeled immunoassay in pesticide and veterinary drug residues analysis[J]. Chinese Agricultural Science Bulletin, 2012, 28(30):218-225.

[70] 何方洋,馮才偉,汪善良,等.檢測甲霜靈殘留的酶聯(lián)免疫試劑盒及使用方法:201510529378.5 [P]. 2015-12-16. HE F Y, FENG C W, WANG S L, et al. A ELISA kit for detecting metalaxyl and its use method: 201510529378.5 [P]. 2015-12-16.

[71] 趙穎,楊斌,郭逸蓉,等.適用于茶葉中啶蟲脒殘留的速測方法及相應(yīng)的試紙條: 201510608015.0 [P]. 2015-12-16. ZHAO Y, YANG B, GUO Y R, et al. A rapid method and its test strip for determination of acetamiprid residue in tea: 201510608015.0 [P]. 2015-12-16.

[72] 朱國念,趙穎,柳穎,等.適用茶葉中吡蟲啉等3種農(nóng)藥多殘留速測法及所用試紙條: 201510609069.9 [P]. 2015-12-23. ZHU G N, ZHAO Y, LIU Y, et al. A rapid method and its test strip for determination of 3 kinds of pesticide residues (imidacloprid, clothianidin, imidaclothiz) in tea: 201510609069.9[P]. 2015-12-23.

[73] 馮才偉,崔海峰,何方洋,等.檢測茶葉中吡蟲啉殘留的酶聯(lián)免疫試劑盒及使用方法: 201510517049.9 [P]. 2016-02-03. FENG C W, CUI H F, HE F Y, et al. A ELISA kit for detecting imidacloprid and its use method: 201510517049.9[P]. 2016-02-03.

[74] 馮才偉,崔海峰,萬宇平,等.檢測克百威的酶聯(lián)免疫試劑盒及其應(yīng)用: 201510598718.X [P].2015-12-09. FENG C W, CUI H F, WAN Y P, et al. ELISA kit for detecting cabofuran and its application: 201510598718.X [P]. 2015-12-09.

[75] 莊惠生,楊麗波,陳寒玉.測定茶葉中二氯聯(lián)苯的酶聯(lián)免疫吸附分析新方法[J].分析試驗室, 2010, 29(5):33-35. ZHUANG H S, YANG L B, CHEN H Y, et al. Research on a new ELISA method for detection of PCB12 in the tea[J]. Chinese Journal of Analysis Laboratory, 2010, 29(5):33-35.

[76] HATAKEYAMA E, KAJITA H, SUGAWARA T, et al. Determination of chlorothalonil residues in raw tea and green tea leaves by an enzyme-linked immunosorbent assay[J]. Journal of Pesticide Science, 2008, 33(4):387-392.

[77] LU Y, XU N, ZHANG Y, et al. Development of gene-ral immunoassays for pyrethroids: a new approach for hapten synthesis using pyrethroid metabolite analogue and application to food samples[J]. Food and Agricultural Immunology, 2010(21):27-45.

[78] SONG Y, LU Y, LIU B, et al. A sensitivity-improved enzyme-linked immunosorbent assay for fenvalerate: a new approach for hapten synthesis and application to tea samples[J]. Journal of the Science of Food and Agriculture, 2011, 91(12):2210-2216.

[79] 呂瀟,任鳳山,王文博,等.茶葉中硫丹及硫丹硫酸酯的ELISA快速測定[J].茶葉科學, 2006, 26(2):141-146. LU X, REN F S, WANG W B, et al. Determination of endosulfan and endosulfan sulfate in tea by ELISA[J]. Journal of Tea Science, 2006, 26 (2):141-146.

[80] 張強. ELISA技術(shù)在食品安全檢測中的應(yīng)用研究進展[J].長江大學學報(自然科學版), 2015,12(33):45-49. ZHANG Q. Research advance of ELISA and its application in food safety[J]. Journal of Yangtze University (Natural Science Edition),2015, 12(33):45-49.

(責任編輯：李 寧)

ReviewonAnalyticalMethodsofPesticideResiduesinTea

LIU Tengfei1, YANG Daifeng1, ZHANG Li2, DONG Minghui1，*

(1.JiangsuTaihuAreaInstituteofAgriculturalSciences,Suzhou215155,China; 2.SuzhouVocationalUniversity,Suzhou215104,China)

Based on the recent published literatures, this paper briefly states the commonly used pesticides in China’s tea production, compares their domestic and international maximum residue limits, summarizes the relevant main detection techniques, concludes the application and characteristics of sample pretreatment technologies ,such as solid phase microextraction, liquid phase microextraction, dispersive solid phase extraction, and analytical methods in the analysis of pesticide residues in tea samples, including gas chromatography, liquid chromatography, mass spectrometry, immunoassay. The future development trend about the analysis of pesticides in tea is also prospected. This review provides a reference for the further study on analytical methods of pesticides in tea.

tea; pesticide residue; analytical methods

10.3969/j.issn.2095-6002.2017.04.011

2095-6002(2017)04-0080-15

劉騰飛，楊代鳳，張麗，等. 茶葉中農(nóng)藥殘留分析技術(shù)研究進展[J]. 食品科學技術(shù)學報，2017,35(4):80-94. LIU Tengfei, YANG Daifeng, ZHANG Li, et al. Review on analytical methods of pesticide residues in tea[J]. Journal of Food Science and Technology, 2017,35(4):80-94.

2016-07-20

江蘇省農(nóng)業(yè)科技自主創(chuàng)新基金項目(CX(14)2102)；蘇州市科技支撐項目(SNG201442)；蘇州市應(yīng)用基礎(chǔ)研究項目(SNY201518)。

劉騰飛，男，助理研究員，碩士，主要從事農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全分析研究；

TS272.7

： A

*董明輝，男，研究員，博士，主要從事茶樹營養(yǎng)生理與標準化生產(chǎn)、農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量與控制技術(shù)研究，通信作者。