金銀花注射液抗菌藥理作用研究

張燕

江蘇省中醫(yī)院 江蘇南京 210029

金銀花注射液抗菌藥理作用研究

張燕

江蘇省中醫(yī)院 江蘇南京 210029

目的：考察金銀花注射液的體內抗菌藥理作用。方法：通過給金黃色葡萄球菌感染小鼠、肺炎雙球菌感染小鼠靜脈注射、灌胃不同濃度金銀花注射液，考察其體內抑菌作用。結果：金銀花注射液能降低金黃色葡萄球菌感染小鼠、肺炎雙球菌感染小鼠的死亡率，延長存活天數，同劑量組靜脈注射作用強于灌胃給藥。結論：金銀花注射液具有體內抗菌作用。

金銀花注射液；金黃色葡萄球菌；肺炎雙球菌；小鼠；藥理作用

金銀花為忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾或帶初開的花；具有清熱解毒，疏散風熱的作用。用于癰腫疔瘡，喉痹，丹毒，熱毒血痢，風熱感冒，溫病發(fā)熱[1]；含揮發(fā)油類、黃酮類、有機酸類和三萜皂苷類物質，其抗茵有效成分為綠原酸類化合物。[2]金銀花注射液為金銀花經提取純化而成，綠原酸含量高，本文通過體內抗菌試驗，考察其抗菌作用。

1.材料與方法

1.1 材料

金銀花注射液，10ml/瓶，相當于生藥材10g，自制；雙黃連注射液，河南淅川制藥集團有限公司；鹽酸林可霉素，南京第三制藥廠。

營養(yǎng)肉湯，上海中科昆蟲生物技術開發(fā)有限公司；營養(yǎng)瓊脂，江蘇省病癥控制中心微生物試劑廠；胃膜素，由江蘇省中醫(yī)院藥理室提供。

臨床分離金黃色葡萄球菌、肺炎雙球菌，由江蘇省人民醫(yī)院微生物室鑒定提供。

清潔級ICR小鼠，由南京醫(yī)科大學提供。

孵箱，上海分析儀器廠；DKB-8A型電熱恒溫水槽，上海精宏實驗設備有限公司。

1.2 方法[3-5]

1.2.1 對金黃色葡萄球菌感染小鼠的保護作用

1.2.1.1 菌液制備

取臨床分離金黃色葡萄球菌接種于營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，置37 ℃孵箱培養(yǎng)18h。取出，劃線于血平板上（10%羊紅細胞營養(yǎng)瓊脂平板），37℃孵箱培養(yǎng)20h。取出，用6ml 5%的胃膜素（PH 7.2）洗脫菌落，并用4ml生理鹽水溶液將血平板沖洗干凈，合并后吹打，使菌落分散并分別用生理鹽水配成 0.33ml/ml、0.20ml/ml、0.11ml/ml、0.06ml/ml濃度菌液備用。

1.2.1.2 選擇合適的菌液濃度

取清潔級ICR小鼠40只，雌雄各半，體重18～22g。隨機為4組，每組1個濃度，腹腔注射金黃色葡萄球菌菌液，每鼠0.5ml，觀察 24、48、72h感染小鼠死亡數。結果 4組感染小鼠死亡率分別為100%、90%、80%、30%。故實驗選用0.11ml/ml濃度菌液。

1.2.1.3 對金黃色葡萄球菌感染小鼠的保護作用試驗

取18～22g 清潔級ICR小鼠190只，隨機分組，每組19只，雌雄兼用。（1）正常對照組：等量生理鹽水（NS）10ml/kg；（2）模型組：等量 NS 10ml/kg；（3）雙黃連注射液組：10ml/kg；（4）鹽酸林可霉素組：0.3g/kg；（5）金銀花注射液Ⅰ組：6.6 g/kg（生藥量）；（6）金銀花注射液Ⅱ組：13.2 g/kg（生藥量）；（7）金銀花注射液Ⅲ組：26.4 g/kg（生藥量）；（8）金銀花注射液Ⅳ組：6.6g/kg（生藥量）；（9）金銀花注射液Ⅴ組：13.2g/kg（生藥量）；（10）金銀花注射液Ⅵ組：26.4g/kg（生藥量）。以上（1）～（7）組小鼠均靜脈注射給藥，（8）～（10）組小鼠均灌胃給藥，給藥容量10ml/kg。各組每日給藥1次，連續(xù)給藥5日。第3日給藥后1h，除空白對照組以外，其余各組均腹腔注射金黃色葡萄球菌培養(yǎng)液0.5ml/鼠（菌液濃度0.11ml/ml）。然后繼續(xù)給藥2日。觀察各組動物7日內死亡情況。

1.2.2 對肺炎雙球菌感染小鼠的保護作用

1.2.2.1 菌液制備

取臨床分離肺炎雙球菌接種入營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，置37 ℃孵箱培養(yǎng)18h。取出，劃線于血平板上（1%羊紅細胞營養(yǎng)瓊脂平板），37℃孵箱培養(yǎng)24h，取出。用6ml 5%的胃膜素（PH 7.2）洗脫菌落，并用4ml生理鹽水溶液將血平板沖洗干凈，合并后吹打，使菌落分散。用生理鹽水配成 1ml/ml、0.5ml/ml、0.33ml/ml、0.25ml/ml濃度菌液備用。

1.2.2.2 選擇合適的菌液濃度

取清潔級ICR小鼠40只，雌雄各半，體重18～22g隨機分組，每組1個濃度，腹腔注射肺炎雙球菌菌液0.5ml/鼠，觀察感染小鼠死亡數。結果感染小鼠死亡率分別為100.0%，100.0%，60.0%，30.0%。故實驗選用0.45ml/ml濃度菌液（小鼠死亡率估計80～90%之間）。

1.2.2.3 對肺炎雙球菌感染小鼠死亡的保護作用試驗

取18～22g 清潔級ICR小鼠190只隨機分組，每組19只，雌雄兼用。（1）正常對照組：等量 NS 10ml/kg；（2）模型組：等量 NS 10ml/kg；（3）雙黃連注射液組：10ml/kg；（4）林可霉素組：0.3g/kg；（5）金銀花注射液Ⅰ組：6.6g/kg（生藥量）；（6）金銀花注射液Ⅱ組：13.2g/kg（生藥量）；（7）金銀花注射液Ⅲ組：26.4g/kg（生藥量）；（8）金銀花注射液Ⅳ組：6.6g/kg（生藥量）；（9）金銀花注射液Ⅴ組：13.2g/kg（生藥量）；（10）金銀花注射液Ⅵ組：26.4g/kg（生藥量）。以上（1）～（7）組小鼠均靜脈注射給藥，（8）～（10）組小鼠均灌胃給藥，給藥容量10ml/kg。各組每日給藥1次，連續(xù)給藥5日。第3日給藥1小時后，除正常對照組外，其余各組均腹腔注射肺炎雙球菌培養(yǎng)液0.5ml/鼠（菌液濃度0.45ml/ml）。然后繼續(xù)給藥2日。觀察各組動物7日內死亡情況。

2.結果

2.1 對金黃色葡萄球菌感染小鼠的保護作用

實驗結果顯示：金銀花注射液三個劑量組靜脈注射給藥對金黃色葡萄球菌感染小鼠可降低其死亡率，13.2g/kg和26.4g/kg組可延長感染小鼠的存活天數，與模型組比較具有顯著性差異（P＜0.05，0.01），效果優(yōu)于同劑量灌胃給藥P＜0.05）。表明金銀花注射液對金黃色葡萄球菌感染小鼠具有明顯的保護作用。見表1。

表1 金銀花注射液對金黃色葡萄球菌感染小數死亡的保護作用（按生藥量計算）

2.2 對肺炎雙球菌感染小鼠的保護作用

實驗結果顯示：金銀花注射液三個劑量組靜脈注射給藥對肺炎雙球菌感染小鼠均可降低其死亡率，延長存活天數，與模型組比較有顯著差異（P＜0.05，0.01）。作用優(yōu)于同劑量灌胃給藥組（P＜0.05）。表明金銀花注射液對肺炎雙球菌感染小鼠具有一定的保護作用。見表2。

表2 金銀花注射液對肺炎雙球菌感染小鼠死亡的保護作用（按生藥量計算）

**P＜0.01 與模型組比較；△P＜0.05，金銀花注射液靜脈注射給藥與灌胃給藥同劑量組比較

3.討論

體內抗菌試驗結果顯示：金銀花注射液 6.6、13.2、26.4 g/kg（生藥量）三個劑量組靜脈注射及灌胃給藥，以靜脈注射效果較好，可降低金黃色葡萄球菌、肺炎雙球菌感染小鼠的死亡率，延長感染小鼠的存活天數。表明金銀花注射液體內給藥具有較好的抗金黃色葡萄球菌和肺炎雙球菌的作用。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2015年版（一部）[s].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：221.

[2]趙琰玲，尹蓮.金銀花化學成分與有效成分提取研究進展[J].醫(yī)藥導報，2007：26（5）：521-523.

[3]陳奇主編.中藥藥理研究方法學[M].人民衛(wèi)生出版社，2000：239，278，251，298，300，302，305，378.

[4]徐叔云，卞如濂，陳修主編.藥理實驗方法學[M].人民衛(wèi)生出版社，2002：1649，1690，1739，1723；1991：719，1233，1226，1230.

[5]中華人民共和國衛(wèi)生部藥政局.新藥（西藥）臨床前研究指導原則匯編[M].1993：51.

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