精氨酸在體內(nèi)和體外試驗(yàn)中對(duì)鯉魚(yú)免疫力的影響

程鎮(zhèn)燕 曲 木 孫 穎 于 宏 孫金輝 喬秀亭*

(1.天津農(nóng)學(xué)院水產(chǎn)學(xué)院，天津市水產(chǎn)生態(tài)及養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津300384；2.天津現(xiàn)代晨輝科技集團(tuán)有限公司，天津市水族動(dòng)物功能性飼料企業(yè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津301800；3.天津海友佳音生物科技股份有限公司，天津300350)

精氨酸在體內(nèi)和體外試驗(yàn)中對(duì)鯉魚(yú)免疫力的影響

程鎮(zhèn)燕1曲 木2孫 穎1于 宏3孫金輝1喬秀亭1*

(1.天津農(nóng)學(xué)院水產(chǎn)學(xué)院，天津市水產(chǎn)生態(tài)及養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津300384；2.天津現(xiàn)代晨輝科技集團(tuán)有限公司，天津市水族動(dòng)物功能性飼料企業(yè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津301800；3.天津海友佳音生物科技股份有限公司，天津300350)

本試驗(yàn)采用體外和體內(nèi)2種方法來(lái)研究精氨酸(Arg)對(duì)鯉魚(yú)免疫力的影響。體外試驗(yàn)中，在培養(yǎng)基中分別添加0、0.5、1.0、1.5和2.0 mmol/L的Arg，將腎臟白細(xì)胞培養(yǎng)不同的時(shí)間段后測(cè)定增殖指數(shù)、呼吸爆發(fā)活力、吞噬活力和殺菌率。體內(nèi)試驗(yàn)中，將平均體重37 g的鯉魚(yú)隨機(jī)分為5組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10條，分別體內(nèi)注射0、25、50、100和200 mg/kg魚(yú)體重的Arg，商業(yè)飼料投喂2周，進(jìn)行腎臟白細(xì)胞增殖指數(shù)、呼吸爆發(fā)活力和吞噬活力的測(cè)定，以及血清和肝胰臟一氧化氮(NO)含量、一氧化氮合成酶(NOS)活性及血清白蛋白(ALB)含量的測(cè)定。體外試驗(yàn)結(jié)果表明：添加Arg能夠提高腎臟白細(xì)胞的增殖指數(shù)、呼吸爆發(fā)活力、吞噬活力和殺菌率。培養(yǎng)12和24 h后，1.0、1.5和2.0 mmol/L Arg組腎臟白細(xì)胞增殖指數(shù)顯著高于0 mmol/L Arg組(P<0.05)；培養(yǎng)6、12和24 h后，1.0 mmol/L Arg組腎臟白細(xì)胞呼吸爆發(fā)活力顯著高于0 mmol/L Arg組(P<0.05)；培養(yǎng)12和24 h后，1.0、1.5和2.0 mmol/L Arg組腎臟白細(xì)胞吞噬活力顯著高于0 mmol/L Arg組(P<0.05)；培養(yǎng)18 h后，1.0、1.5和2.0 mmol/L Arg組腎臟白細(xì)胞殺菌率顯著高于0 mmol/L Arg組(P<0.05)。體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果表明：50、100和200 mg/kg Arg組腎臟白細(xì)胞呼吸爆發(fā)活力、吞噬活力和增殖指數(shù)顯著高于0 mg/kg Arg組(P<0.05)；100和200 mg/kg Arg組血清ALB和NO含量顯著高于0 mg/kg Arg組(P<0.05)，50、100和200 mg/kg Arg組血清NOS活性顯著高于0 mg/kg Arg組(P<0.05)；50、100和200 mg/kg Arg組肝胰臟NO含量顯著高于0 mg/kg Arg組(P<0.05)，25和50 mg/kg Arg組肝胰臟NOS活性顯著高于0 mg/kg Arg組(P<0.05)。由此可見(jiàn)，Arg提高了鯉魚(yú)腎臟白細(xì)胞的免疫力，體外試驗(yàn)表明Arg的適宜濃度為1.0 mmol/L。正常攝食情況下，Arg在鯉魚(yú)體內(nèi)注射適宜濃度為50～100 mg/kg。

精氨酸；鯉魚(yú)；免疫力；細(xì)胞培養(yǎng)

蛋白質(zhì)是生命的物質(zhì)基礎(chǔ)，機(jī)體中的每一個(gè)細(xì)胞和所有重要組成部分都有蛋白質(zhì)參與。蛋白質(zhì)攝入量不足會(huì)影響抗體的形成；蛋白質(zhì)的缺乏也會(huì)導(dǎo)致維生素或微量元素的缺乏，從而降低機(jī)體的營(yíng)養(yǎng)水平和免疫能力，影響?zhàn)B殖動(dòng)物的健康。補(bǔ)充適量的相應(yīng)氨基酸，可以起到增強(qiáng)蛋白質(zhì)的合成和提高免疫力的作用。其中有一類(lèi)氨基酸叫做功能性氨基酸，它是指除了合成蛋白質(zhì)外還具有其他特殊功能的氨基酸，不僅對(duì)動(dòng)物的正常生長(zhǎng)和維持是必需的，而且對(duì)很多生物活性物質(zhì)的合成也是必需的[1]。精氨酸(Arg)是功能性氨基酸的一種。目前Arg在哺乳動(dòng)物方面報(bào)道頗多[2-5]，研究表明，Arg參與體內(nèi)蛋白質(zhì)的沉積，通過(guò)多種酶參與機(jī)體代謝，并通過(guò)其代謝產(chǎn)物一氧化氮(NO)和多胺等在動(dòng)物體內(nèi)發(fā)揮多重營(yíng)養(yǎng)生理效應(yīng)[4]；此外，作為一種重要的生物活性物質(zhì)，多胺能參與蛋白質(zhì)合成、細(xì)胞增殖分化，還能調(diào)節(jié)基因的表達(dá)[5-6]。

鯉魚(yú)俗稱(chēng)鯉拐子，原產(chǎn)亞洲，是溫帶性淡水魚(yú)，雜食性。鯉魚(yú)生長(zhǎng)很快，肉質(zhì)鮮美，是我國(guó)養(yǎng)殖魚(yú)的主要品種之一。Arg作為一種功能性氨基酸在水產(chǎn)動(dòng)物上的研究目前還不深入[11]，本試驗(yàn)以鯉魚(yú)為研究對(duì)象，通過(guò)在體外培養(yǎng)基中添加Arg的方法，篩選敏感的免疫指標(biāo)，確定Arg適宜添加濃度，再通過(guò)體內(nèi)注射Arg來(lái)進(jìn)一步驗(yàn)證其對(duì)鯉魚(yú)生理生化指標(biāo)及免疫力的影響，以期為綠色環(huán)保健康的水產(chǎn)養(yǎng)殖提供參考。

1 材料與方法

1.1試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)魚(yú)來(lái)自天津市換新水產(chǎn)良種場(chǎng)同一批繁殖的鯉魚(yú)魚(yú)種，魚(yú)體消毒后放入水箱中暫養(yǎng)1周。Arg購(gòu)自臺(tái)灣MDbio公司，純度為99.4%。

體外試驗(yàn)：取體格健壯、大小相似(平均體重34 g)的試驗(yàn)魚(yú)27尾，麻醉后，靜脈取血，然后解剖獲得頭腎和中腎，放在0.85%生理鹽水中，洗去附著的血細(xì)胞。向RPMI-1640培養(yǎng)基中分別加入0、0.5、1.0、1.5和2.0 mmol/L的Arg，制成5種不同濃度梯度的培養(yǎng)基，用于白細(xì)胞的培養(yǎng)，用2個(gè)獨(dú)立的復(fù)合樣品(每個(gè)樣本3個(gè)重復(fù))進(jìn)行免疫學(xué)指標(biāo)的測(cè)定。

體內(nèi)試驗(yàn)：將150尾重量和大小相近的鯉魚(yú)，隨機(jī)分為5組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10尾，以重復(fù)為單位放養(yǎng)于水箱(110 L)中，投喂商業(yè)飼料，每天2次。1周后，用Arg藥劑配制不同濃度的Arg溶液，5組試驗(yàn)魚(yú)Arg注射量分別為0、25、50、100和200 mg/kg魚(yú)體重，腹腔注射，注射劑量為0.5 mL，注射完后繼續(xù)每天投喂商業(yè)飼料，投喂2周后解剖采樣。

1.2樣品制備與測(cè)定

體外試驗(yàn)：按照程鎮(zhèn)燕等[12]方法進(jìn)行白細(xì)胞的分離和原代培養(yǎng)，調(diào)整細(xì)胞懸浮液密度至每毫升2×107個(gè)細(xì)胞，要求用0.1%臺(tái)盼藍(lán)染色測(cè)定活力均大于95%。將腎臟白細(xì)胞培養(yǎng)12和48 h后測(cè)定增殖指數(shù)，培養(yǎng)2、6、12、24 h后測(cè)定呼吸爆發(fā)活力，培養(yǎng)12 h后測(cè)定吞噬活力，培養(yǎng)18 h后測(cè)定殺菌率。具體測(cè)定方法參考程鎮(zhèn)燕等[12]的方法。

體內(nèi)試驗(yàn)：用經(jīng)過(guò)7%肝素鈉溶液潤(rùn)濕的注射器從尾部靜脈抽血，將每條魚(yú)的血液?jiǎn)为?dú)放1個(gè)離心管里，血液樣本以4 000 r/min離心10 min，收集血清，血清保存在-80 ℃冰箱中待測(cè)。之后解剖魚(yú)體，取肝胰臟，放入勻漿器中進(jìn)行研磨，用0.85%生理鹽水進(jìn)行稀釋?zhuān)? 500 r/min離心10 min，取上清液進(jìn)行白蛋白(ALB)、NO含量及一氧化氮合酶(NOS)活性的測(cè)定(具體測(cè)定方法參照南京建成生物工程研究所試劑盒說(shuō)明書(shū))。取頭腎、中腎放于生理鹽水中清洗表面血污，然后放在培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)，按照Buentello等[8]的方法進(jìn)行增殖指數(shù)、呼吸爆發(fā)活力和吞噬活力的測(cè)定。

1.3數(shù)據(jù)處理

所得數(shù)據(jù)用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件做單因素方差分析(one-way ANOVA)，若差異達(dá)到顯著水平(P<0.05)，則采用Duncan氏法進(jìn)行組間多重比較。

2 結(jié) 果

2.1培養(yǎng)基中添加Arg對(duì)鯉魚(yú)腎臟白細(xì)胞增殖指數(shù)的影響

如圖1所示，培養(yǎng)基中添加Arg后，鯉魚(yú)腎臟白細(xì)胞的增殖指數(shù)明顯升高。培養(yǎng)12 h后，1.0、1.5和2.0 mmol/L Arg組腎臟白細(xì)胞的增殖指數(shù)顯著高于0和0.5 mmol/L Arg組(P<0.05)，0和0.5 mmol/L Arg組之間無(wú)顯著差異(P>0.05)，1.0、1.5和2.0 mmol/L Arg組之間無(wú)顯著差異(P>0.05)。培養(yǎng)48 h后，隨著培養(yǎng)基中Arg濃度的增加，腎臟白細(xì)胞的增殖指數(shù)逐漸提高，2.0 mmol/L Arg組腎臟白細(xì)胞的增殖指數(shù)最高，顯著高于0、0.5、1.0 mmol/L Arg組(P<0.05)，但與1.5 mmol/L Arg組差異不顯著(P>0.05)。除添加1.0 mmol/L Arg組培養(yǎng)48 h后的腎臟白細(xì)胞的增殖指數(shù)較培養(yǎng)12 h有所降低外，其他均有所增高。

數(shù)據(jù)柱標(biāo)相同小寫(xiě)字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)。下圖同。

Value columns with the same small letter mean no significant difference (P>0.05), while with different small letters mean significant difference (P<0.05). The same as below.

圖1培養(yǎng)基中添加Arg對(duì)鯉魚(yú)腎臟白細(xì)胞增殖指數(shù)的影響

Fig.1 Effects of culture media supplemented with Arg on proliferation index of leukocytes in carp kidney

2.2培養(yǎng)基中添加Arg對(duì)鯉魚(yú)腎臟白細(xì)胞呼吸爆發(fā)活力的影響

如圖2所示，培養(yǎng)基中添加Arg后，鯉魚(yú)腎臟白細(xì)胞的呼吸爆發(fā)活力明顯升高。培養(yǎng)2 h后，0.5、1.0、1.5、2.0 mmol/L Arg組腎臟白細(xì)胞呼吸的爆發(fā)活力較0 mmol/L Arg組均有所增加，但是各組之間差異不顯著(P>0.05)。培養(yǎng)6、12、24 h后，1.0、1.5、2.0 mmol/L Arg組之間腎臟白細(xì)胞的呼吸爆發(fā)活力差異不顯著(P>0.05)，但是較0和0.5 mmol/L Arg組卻有明顯提高，其中1.0 mmol/L Arg組顯著高于0 mmol/L Arg組(P<0.05)；隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，各組腎臟白細(xì)胞的呼吸爆發(fā)活力均呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，且最高值發(fā)生在培養(yǎng)12 h后的1 mmol/L Arg組中。

圖2 培養(yǎng)基中添加Arg對(duì)鯉魚(yú)腎臟白細(xì)胞呼吸爆發(fā)活力的影響

2.3培養(yǎng)基中添加Arg對(duì)鯉魚(yú)腎臟白細(xì)胞吞噬活力的影響

如圖3所示，培養(yǎng)基中添加Arg后，鯉魚(yú)腎臟白細(xì)胞的吞噬活力均有所提高。培養(yǎng)12 h后，各組腎臟白細(xì)胞的吞噬活力隨著培養(yǎng)基中Arg濃度的增加呈上升趨勢(shì)，2.0 mmol/L Arg組腎臟白細(xì)胞的吞噬活力最高，顯著高于0和0.5 mmol/L Arg組(P<0.05)，與1.0、1.5 mmol/L Arg組差異不顯著(P>0.05)。培養(yǎng)24 h后，各組腎臟白細(xì)胞的吞噬活力也是隨著培養(yǎng)基中Arg濃度的增加呈上升的趨勢(shì)，1.5、2.0 mmol/L Arg組腎臟白細(xì)胞的吞噬活力顯著高于其他各組(P<0.05)。

2.4培養(yǎng)基中添加Arg對(duì)鯉魚(yú)腎臟白細(xì)胞殺菌率的影響

如圖4所示，培養(yǎng)基中添加Arg培養(yǎng)18 h后，鯉魚(yú)腎臟白細(xì)胞的殺菌率(遲鈍愛(ài)德華氏菌)均有明顯提升。1.0、1.5和2.0 mmol/L Arg組之間腎臟白細(xì)胞的殺菌率沒(méi)有顯著差異(P>0.05)，但是1.0、1.5 mmol/L Arg組腎臟白細(xì)胞的殺菌率顯著高于0和0.5 mmol/L Arg組(P<0.05)，其中在1 mmol/L Arg組腎臟白細(xì)胞的殺菌率達(dá)到頂峰。

2.5注射Arg對(duì)鯉魚(yú)腎臟白細(xì)胞呼吸爆發(fā)活力、吞噬活力和增殖指數(shù)的影響

如表1所示，鯉魚(yú)注射Arg后，腎臟白細(xì)胞呼吸爆發(fā)活力、吞噬活力和增殖指數(shù)均有所提高。隨著Arg注射濃度的增加，腎臟白細(xì)胞呼吸爆發(fā)活力呈現(xiàn)先上升后趨于穩(wěn)定的趨勢(shì)，100和200 mg/kg Arg組達(dá)到最高值，顯著高于0和25 mg/kg Arg組(P<0.05)，與50 mg/kg Arg組差異不顯著(P>0.05)。隨著Arg注射濃度的增加，腎臟白細(xì)胞吞噬活力呈逐漸提高的趨勢(shì)(P<0.05)，200 mg/kg組達(dá)到最高值，與100 mg/kg Arg組差異不顯著(P>0.05)，但顯著高于其他各組(P<0.05)。腎臟白細(xì)胞增殖指數(shù)的變化趨勢(shì)與吞噬活力變化趨勢(shì)一致，除25 mg/kg Arg組與0 mg/kg Arg組差異不顯著(P>0.05)外，其余各組均顯著高于0 mg/kg Arg組(P<0.05)，200 mg/kg組達(dá)到最高值。

圖3 培養(yǎng)基中添加Arg對(duì)鯉魚(yú)腎臟

圖4 培養(yǎng)基中添加Arg對(duì)鯉魚(yú)腎臟白細(xì)胞殺菌率的影響

2.6注射Arg對(duì)鯉魚(yú)肝胰臟、血清中ALB、NO含量及NOS活性的影響

如表2所示，鯉魚(yú)注射Arg后，血清ALB、NO含量及血清和肝胰臟NOS活性有不同程度提高。隨著Arg注射濃度的增加，血清ALB的含量呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，100 mg/kg Arg組血清ALB含量最高，顯著高于0、25、50 mg/kg Arg組(P<0.05)，但0、25、50 mg/kg Arg組之間差異不顯著(P>0.05)。

50 mg/kg Arg組肝胰臟中NO的含量最高，顯著高于其他各組(P<0.05)；100、200 mg/kg Arg組之間差異不顯著(P>0.05)，但顯著高于0和25 mg/kg Arg組(P<0.05)。血清NO的含量則隨著Arg注射濃度的增加呈上升趨勢(shì)，200 mg/kg Arg組血清NO含量最高，顯著高于0、25和50 mg/kg Arg組(P<0.05)，與100 mg/kg Arg組差異不顯著(P>0.05)。

血清和肝胰臟中NOS活性隨著Arg注射濃度的增加而呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)。25 mg/kg Arg組肝胰臟中NOS活性最高，顯著高于0和200 mg/kg Arg組(P<0.05)，之后隨著Arg注射濃度的增加呈下降趨勢(shì)。50 mg/kg Arg組血清NOS活性最高，顯著高于其他各組(P<0.05)，之后隨著Arg注射濃度的提高呈下降趨勢(shì)。

3 討 論

3.1Arg對(duì)鯉魚(yú)腎臟白細(xì)胞增殖能力的影響

3.2Arg對(duì)鯉魚(yú)腎臟白細(xì)胞呼吸爆發(fā)活力的影響

表1 注射Arg對(duì)鯉魚(yú)腎臟白細(xì)胞呼吸爆發(fā)活力、吞噬活力和增殖指數(shù)的影響

同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)，相同或無(wú)字母表示差異不顯著(P>0.05)。下表同。

In the same column, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

表2 注射Arg對(duì)鯉魚(yú)肝胰臟、血清中白蛋白、一氧化氮含量及一氧化氮合酶活性的影響

3.3Arg對(duì)鯉魚(yú)腎臟白細(xì)胞吞噬能力和殺菌能力的影響

3.4注射Arg對(duì)鯉魚(yú)血清和肝胰臟中ALB、NO含量及NOS活性的影響

本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，注射一定濃度的Arg可以有效提高鯉魚(yú)血清ALB的含量，而Arg又是生物體內(nèi)NO合成的前體物質(zhì)，隨著Arg濃度的增加，鯉魚(yú)血清和肝胰臟中NO含量提高，血清中NO含量在Arg注射濃度為200 mg/kg時(shí)達(dá)到最高值。在異育銀鯽上的研究結(jié)果表明，飼料中添加Arg后，異育銀鯽血清中的NO含量呈劑量依賴(lài)性增加[21]。NOS是NO合成的關(guān)鍵酶，其活性反映組織產(chǎn)生NO的能力。研究表明，飼料中添加Arg可以提高建鯉頭腎誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(iNOS)[18]及軍曹魚(yú)血清NOS活性[22]；此外，異育銀鯽肝臟總NOS活性隨飼料中Arg水平的增加而增強(qiáng)[21]。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，體內(nèi)注射Arg后提高了血清和肝胰臟中NOS的活性，相應(yīng)的，NOS活性的增強(qiáng)也促進(jìn)了血清和肝胰臟中NO的產(chǎn)生。由此可以說(shuō)明，Arg能提高鯉魚(yú)NOS活性，促進(jìn)NO生成。經(jīng)相關(guān)研究表明，Arg-NO途徑被認(rèn)為是殺死細(xì)胞內(nèi)微生物的有效機(jī)制，同時(shí)也是巨噬細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞毒性的主要機(jī)制[4]。產(chǎn)生的NO可以起到殺死動(dòng)物體內(nèi)的寄生蟲(chóng)、細(xì)菌、病毒，抑制癌癥細(xì)胞的增殖，提高免疫力和抗病能力的作用[23-24]。所以，添加一定濃度的Arg有利于促進(jìn)鯉魚(yú)肝胰臟和血清中的細(xì)胞產(chǎn)生NO，從而提高鯉魚(yú)的免疫力和抗病能力。

4 結(jié) 論

Arg提高了鯉魚(yú)腎臟白細(xì)胞的免疫力，體外試驗(yàn)表明Arg的適宜濃度為1.0 mmol/L。正常攝食情況下，Arg在鯉魚(yú)體內(nèi)注射適宜濃度為50～100 mg/kg。

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*Corresponding author, professor, E-mail: qxt65@sohu.com

(責(zé)任編輯 武海龍)

Effects of Arginine on Immunity of Carp (Cyprinus carpio) in Vivo and in Vitro Experiment

CHENG Zhenyan1QU Mu2SUN Ying1YU Hong3SUN Jinhui1QIAO Xiuting1*

(1. Tianjin Key Lab of Aqua-Ecology and Aquaculture, College of Fisheries, Tianjin Agricultural University, Tianjin 300384, China; 2. Tianjin Enterprise Key Lab of the Functional Feed of Aquatic Animals, Tianjin Chenhui Modern Technology Group Co., Ltd., Tianjin 301800, China; 3. Tianjin Ocean Pal Carol Biotech Co., Ltd., Tianjin 300350, China)

Aninvivoand ainvitroexperiment were conducted to evaluate the effects of arginine on immunity of carp. In theinvitroexperiment, arginine with the concentrations of 0, 0.5, 1.0, 1.5 and 2.0 mmol/L were added in the culture medium, after different incubation time of kidney leukocytes, the proliferation index, respiratory burst activity, phagocytosis activity and bactericidal rate were assayed respectively. In theinvivoexperiment, the carp of average body weight 37 g were divided into 5 groups, and each group had three replicates, each replicate had 10 fish. Arginine at 0, 25, 50, 100, 200 mg/kg were injected into fish cavity, and then fed them with commercial diets for 2 weeks. Then, the proliferation index, respiratory burst activity and phagocytic activity of kidney leukocytes were determined. At the same time, the nitric oxide (NO) content and nitric oxide synthase (NOS) activity in serum and hepatopancreas, and serum albumin (ALB) content were determined. Theinvitroexperiment results showed that added arginine could increase the proliferation index, respiratory burst activity, phagocytosis activity and bactericidal rate of kidney leukocytes. After 12 and 24 h incubation, the proliferation index of kidney leukocytes in 1.0, 1.5 and 2.0 mmol/L arginine groups was significantly higher than that in 0 mmol/L arginine group (P<0.05); after 6, 12 and 24 h incubation, the respiratory burst activity of kidney leukocytes in 1.0 mmol/L arginine group was significantly higher than that in 0 mmol/L arginine group (P<0.05); after 12 and 24 h incubation, the phagocytosis activity of kidney leukocytes in 1.0, 1.5 and 2.0 mmol/L arginine groups was significantly higher than that in 0 mmol/L arginine group (P<0.05); after 18 h incubation, the bactericidal rate of kidney leukocytes in 1.0, 1.5 and 2.0 mmol/L arginine groups was significantly higher than that in 0 mmol/L arginine group (P<0.05). Theinvivoexperiment results showed that the proliferation index, respiratory burst activity and phagocytosis activity of kidney leukocytes in 50, 100 and 200 mg/kg arginine groups was significantly higher than that in 0 mg/kg arginine group (P<0.05); the serum ALB and NO contents in 100 and 200 mg/kg arginine groups were significantly higher than those in 0 mg/kg arginine group (P<0.05); the serum NOS activity in 50, 100 and 200 mg/kg arginine groups was significantly higher than that in 0 mg/kg arginine group (P<0.05); the hepatopancreas NO content in 50, 100 and 200 mg/kg arginine groups was significantly higher than that in 0 mg/kg arginine group (P<0.05); the hepatopancreas NOS activity in 25 and 50 mg/kg arginine groups was significantly higher than that in 0 mg/kg arginine group (P<0.05). Generally, the arginine can enhance on the immunity of leukocytes in carp, and the optimum arginine concentration is 1.0 mmol/Linvitroexperiment. In normal feeding condition, the optimum arginine injection concentration for carp is 50 to 100 mg/kginvivo.[ChineseJournalofAnimalNutrition,2017,29(9)：3293-3300]

arginine; carp; immunity; cell incubation

10.3969/j.issn.1006-267x.2017.09.033

2017-03-02

國(guó)家自然科學(xué)基金(31402313)；天津市應(yīng)用基礎(chǔ)與前沿技術(shù)研究計(jì)劃(14JCQNJC15100)

程鎮(zhèn)燕(1981—)，女，山東泰安人，副教授，博士，研究方向?yàn)轸~(yú)類(lèi)營(yíng)養(yǎng)生理與免疫。E-mail: chengzhenyan2005@126.com

*通信作者：?jiǎn)绦阃?，教授，碩士生導(dǎo)師，E-mail： qxt65@sohu.com

S963.73+1

：A

：1006-267X(2017)09-3293-08