國(guó)內(nèi)食品中磺胺類藥物殘留檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展

□ 周 霞 陳萬(wàn)勤 傅紅雪 羅金文 浙江省食品藥品檢驗(yàn)研究院

國(guó)內(nèi)食品中磺胺類藥物殘留檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展

□ 周 霞 陳萬(wàn)勤 傅紅雪 羅金文 浙江省食品藥品檢驗(yàn)研究院

目前，磺胺類藥物的殘留問(wèn)題是國(guó)內(nèi)重要的食品安全問(wèn)題之一，檢測(cè)食品中的磺胺類藥殘留對(duì)人類的健康具有重要意義。檢測(cè)食品中痕量藥物的殘留關(guān)鍵是開(kāi)發(fā)有效的前處理方法和使用精密的分析儀器。隨著人們對(duì)食品樣品復(fù)雜體系的分離分析要求不斷提高，開(kāi)發(fā)能提高檢測(cè)效率、降低檢測(cè)的成本、準(zhǔn)確可靠、靈敏度高的磺胺類藥物殘留分析方法具有重要意義。本文論述了國(guó)內(nèi)磺胺類藥物殘留檢測(cè)的研究背景及現(xiàn)狀，綜述食品中磺胺類藥物殘留的前處理方法和檢測(cè)方法，以期為食品中磺胺類藥物的殘留檢測(cè)提供技術(shù)支持和文獻(xiàn)參考。

磺胺類藥物；食品安全；檢測(cè)技術(shù)

目前，食品安全成為了影響廣泛、深遠(yuǎn)的社會(huì)問(wèn)題，已經(jīng)引起了全社會(huì)普遍的關(guān)注，雖然食品安全監(jiān)管的力度一直在加大，但是食品安全事件仍然時(shí)有發(fā)生。食品安全不僅是保障人類健康、促進(jìn)我國(guó)食品行業(yè)可持續(xù)發(fā)展以及我國(guó)對(duì)外貿(mào)易[1]的發(fā)展需要，也是各行各業(yè)增收增產(chǎn)以及國(guó)家社會(huì)、經(jīng)濟(jì)、政治穩(wěn)定的重要因素之一，提升食品中磺胺類等藥物的殘留檢測(cè)能力，保障食品安全已刻不容緩。養(yǎng)殖戶在動(dòng)物疾病治療過(guò)程中，不按照規(guī)定范圍、劑量、配伍等使用獸藥，或者過(guò)多過(guò)濫使用獸藥，不僅不利于治療動(dòng)物的疾病，還導(dǎo)致了動(dòng)物對(duì)藥物產(chǎn)生了耐藥性；在飼料中添加獸藥，不嚴(yán)格執(zhí)行休藥期的相關(guān)規(guī)定，這些都是導(dǎo)致藥物殘留的原因。農(nóng)業(yè)部已經(jīng)發(fā)布了一系列關(guān)于獸藥使用的規(guī)定，但是仍有個(gè)別商家盲目追求利潤(rùn)，私自違規(guī)添加藥物，嚴(yán)重威脅了人們的身體健康。因此，加強(qiáng)對(duì)磺胺類等獸藥殘留的檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)快速、高效、靈敏的檢測(cè)方法，具有重大意義。

1 磺胺類藥物概述

磺胺類藥物（sulfanilamides，SAs），結(jié)構(gòu)上和對(duì)氨基苯甲酸（PABA）類似，可以與PABA競(jìng)爭(zhēng)，作用于細(xì)菌的二氫葉酸合成酶，阻止以PABA為原料合成所需的四氫葉酸，從而抑制了細(xì)菌蛋白質(zhì)合成，最終達(dá)到抗菌的效果。該類藥物具有抗菌譜廣[2]、抗菌效果明顯、性質(zhì)穩(wěn)定、價(jià)格便宜等優(yōu)點(diǎn)[3]，目前大量用于防治畜禽細(xì)菌性感染疾病。由于磺胺類藥物存在較為嚴(yán)重的副作用，能夠產(chǎn)生排尿和造血紊亂、導(dǎo)致過(guò)敏等，且在動(dòng)物體內(nèi)無(wú)法代謝完全，其殘留量通過(guò)食物鏈[4]進(jìn)入人體，對(duì)人體的健康構(gòu)成威脅[5-6]。動(dòng)物源性食品的安全問(wèn)題一直受到各方的重視，對(duì)食品中藥物殘留的檢測(cè)及監(jiān)控也越來(lái)越嚴(yán)格。中國(guó)對(duì)食品中藥物殘留最高限量作出了嚴(yán)格的規(guī)定，如動(dòng)物源性食品中磺胺類物質(zhì)最大殘留限量（MRL）為100 μg/kg。由于動(dòng)物源性食品基質(zhì)比較復(fù)雜，含有大量的脂肪、蛋白質(zhì)等生物基質(zhì)，需要比較合適的樣品前處理方法和分析檢測(cè)方法。目前，普遍的磺胺類藥物檢測(cè)技術(shù)主要通過(guò)線方式手工進(jìn)行樣品前處理，然后用液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行分析檢測(cè)。但這些方法都有一個(gè)共性問(wèn)題：技術(shù)人員工作量大、樣品檢測(cè)周期長(zhǎng)、手工預(yù)處理的雜質(zhì)干擾大、重現(xiàn)性難以保證，以及多種獸藥同時(shí)分析時(shí)很難滿足所有待測(cè)藥物均取得很好的定性定量效果，這些問(wèn)題是目前磺胺類等藥物殘留檢測(cè)中面臨的最大問(wèn)題。對(duì)于日益繁重的檢測(cè)任務(wù)來(lái)說(shuō)，開(kāi)發(fā)快速、準(zhǔn)確、高效的檢測(cè)技術(shù)勢(shì)在必行。本文論述了國(guó)內(nèi)最新的食品中磺胺類藥物的檢測(cè)方法，為食品中磺胺類藥物的殘留檢測(cè)提供參考。

2 我國(guó)食品中磺胺類藥物殘留的提取方式

常用于食品中藥物殘留提取凈化的方法有固相萃取法、液液分配法、分子印跡聚合物法、免疫親和柱層析法等[7]。因?yàn)楹哿课镔|(zhì)待測(cè)組分含量低和食品基質(zhì)的復(fù)雜性，使得前處理成為整個(gè)分析過(guò)程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一[8]。本文主要介紹以下幾種近年來(lái)比較新型的前處理提取方式。

王庚南[9]等利用離子液體單滴微萃取法對(duì)肉制品中的磺胺類藥物進(jìn)行提取，對(duì)實(shí)驗(yàn)中離子液體等參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，獲得了70.6%～95.1%的回收率。該方法只需數(shù)微升的提取溶劑，就可以實(shí)現(xiàn)提取、凈化和濃縮一步完成，同時(shí)還可以對(duì)待測(cè)物產(chǎn)生較高的富集倍數(shù)，獲得較好的靈敏度。

王露[10]等制備了高交聯(lián)聚苯乙烯-納米Fe3O4微球作為固相微萃取材料，對(duì)牛奶基質(zhì)進(jìn)行凈化，得到94%～105%的回收率。秦?zé)頪11]用磁性石墨烯固相萃取技術(shù)，以磁性石墨烯（G-Fe3O4）納米材料作為磁性固相萃取吸附劑。

王靜[12]等利用快速溶劑萃取儀對(duì)水產(chǎn)品中8種磺胺類藥物殘留進(jìn)行提取凈化，減少人工干擾，簡(jiǎn)化提取步驟，具有處理時(shí)間短、使用溶劑少、萃取效率高等優(yōu)點(diǎn)。

QuEChERS的意思是快速、簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)、高效、抗干擾、安全[14]。劉洪斌[13]等采用QuEChERS方法對(duì)雞蛋樣品進(jìn)行凈化，QuEChERS前處理的方法簡(jiǎn)單高效，檢測(cè)靈敏準(zhǔn)確，可以滿足大批量的雞蛋樣品磺胺類藥物殘留檢測(cè)的要求。郭海霞[15]等人利用QuEChERS液質(zhì)聯(lián)用法，同時(shí)檢測(cè)豬肉中的121種獸藥，該方法可對(duì)性質(zhì)差別大的多類別獸藥同時(shí)進(jìn)行分析，在保證檢測(cè)周期和節(jié)約成本方面顯示了突出的優(yōu)勢(shì)。

王萍[16]等利用超聲萃取技術(shù)以及SAX/PSA雙層柱與HLB固相萃取柱復(fù)合柱對(duì)魚(yú)肉中的磺胺類藥物進(jìn)行凈化和富集，回收率為80%～117%。

這些新型的提取方式均有靈敏度高、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，適用于食品中痕量藥物殘留的檢測(cè)，在今后的應(yīng)用中必定得到推廣。

3 我國(guó)食品中磺胺類藥物殘留的檢測(cè)技術(shù)

3.1 高效液相色譜法

高效液相色譜法是實(shí)驗(yàn)室較為普遍的檢測(cè)方法[17-21]，一般是采用紫外檢測(cè)器，文獻(xiàn)報(bào)道了蜂蜜、肉制品、牛奶等各類食品基質(zhì)中磺胺類藥物殘留的檢測(cè)。例如，馬麗娜[22]等使用了常規(guī)的高效液相色譜紫外檢測(cè)對(duì)雞蛋中的5種常用磺胺類藥物進(jìn)行檢測(cè)，為蛋制品的監(jiān)控提供依據(jù)。也有部分文獻(xiàn)[23-24]報(bào)道將磺胺類藥物與其他藥物一起檢測(cè)，如沙星類藥物、有機(jī)酸等，優(yōu)化色譜條件后能有較好的分離。目前，使用最多的是采用固相萃取柱凈化后進(jìn)行液相分析，如張?bào)闫G[25]用MCX柱凈化后對(duì)牛肉中磺胺類藥物進(jìn)行液相色譜的檢測(cè)。

除了紫外檢測(cè)器，許旭[26-27]等采用了熒光檢測(cè)器，使用在線柱后衍生的方法對(duì)磺胺類藥物進(jìn)行衍生，方法中結(jié)合了改良的QuEChERS方法，對(duì)不同的衍生劑進(jìn)行考察，建立了一種同時(shí)檢測(cè)牛肉、雞肉中16種磺胺類藥物的高靈敏度的快速檢測(cè)方法。許旭[28]采用同樣的方法建立豬肉中18種磺胺類藥物的殘留量，該方法前處理簡(jiǎn)便快速、有機(jī)溶劑用量少，準(zhǔn)確性和靈敏度高。

3.2 液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法

液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)與高效液相色譜法相比，具有更高的靈敏度和專屬性，文獻(xiàn)[29-37]諸多文獻(xiàn)表明了液質(zhì)聯(lián)用法逐漸成為了實(shí)驗(yàn)室常規(guī)的儀器分析方法，而且由于高的選擇性，與其他藥物如擴(kuò)諾酮、氯霉素、甾體激素類藥物、四環(huán)素等藥物同時(shí)檢測(cè)，節(jié)省時(shí)間成本、人力成本。李曉雯[38]還采用了液相色譜-四極桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜對(duì)磺胺類藥物進(jìn)行檢測(cè)。

劉洪斌[39]等采用了UPLC-MS/MS技術(shù)建立了雞蛋中16種磺胺類藥物殘留的檢測(cè)方法，該方法使用了磷酸鹽進(jìn)行提取、正己烷去脂，進(jìn)而用MCX柱凈化后，滿足磺胺類藥物殘留檢測(cè)的要求。李曉晶[40]等建立了使用超聲輔助分散液液微萃取技術(shù)對(duì)磺胺類藥物提取后進(jìn)行液質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)，獲得了更高的提取回收率。不同化合物結(jié)構(gòu)和不同的提取方式，最終產(chǎn)生了不同的提取回收率。

3.3 免疫分析法

曹喜春[41]等采用了膜免疫芯片檢測(cè)牛奶以及豬肝中磺胺類藥物殘留總量的方法，該方法是用PVDF膜作固相基質(zhì)，通過(guò)包被抗原濃度以及抗體工作濃度的優(yōu)化，建立了一種簡(jiǎn)便、直觀、快速、無(wú)需特殊檢測(cè)儀器的方法。與IC-ELISA和HPLC方法進(jìn)行比對(duì)，三者結(jié)果一致，表明該種新型技術(shù)的結(jié)果可靠。

何進(jìn)[42]等采用了化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法建立了一種成本低、檢測(cè)快、檢測(cè)批量大的一種適用于肉制品中磺胺類藥物殘留的檢測(cè)方法，與儀器法測(cè)定結(jié)果一致。

林品言[43]等使用酶聯(lián)免疫法對(duì)水產(chǎn)品中的磺胺類藥物進(jìn)行快速檢測(cè)，具有儀器簡(jiǎn)便、靈敏度高、檢測(cè)快、費(fèi)用低、選擇性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，多用于現(xiàn)場(chǎng)檢驗(yàn)。

免疫分析法綜合具有高度專一性、特異性，但是操作相對(duì)繁瑣，結(jié)果經(jīng)比較，文獻(xiàn)報(bào)道均可靠。

3.4 電化學(xué)方法

陳文博[5，44]等比較了修飾玻碳電極、自制鉑微電極和嵌入式粉末鉑微電極，較為全面詳細(xì)的比較優(yōu)化了各類條件，基于玻碳電極，利用藥物在一定的電位下可發(fā)生電聚合氧化反應(yīng)的原理，建立一種快速的電化學(xué)檢測(cè)方法。電化學(xué)分析法儀器設(shè)備較為簡(jiǎn)單，但是在選擇性方面可能低于其他檢測(cè)技術(shù)。

3.5 試劑盒

黨娟[45]等開(kāi)發(fā)了直接競(jìng)爭(zhēng)CLIA檢測(cè)試劑盒，與免疫法和液質(zhì)聯(lián)用發(fā)的檢測(cè)結(jié)果一致，該方法是一種穩(wěn)定、可靠、實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)的一種方法。

張勛[46]使用一種金納米棒快速測(cè)試紙進(jìn)行磺胺類藥物殘留的檢測(cè)，將膠體金標(biāo)記抗體復(fù)合物直接在微孔中凍干，使得檢測(cè)過(guò)程中待測(cè)樣與金標(biāo)抗體反應(yīng)充分，對(duì)傳統(tǒng)的膠體金免疫層析紙進(jìn)行改良優(yōu)化，提高了檢測(cè)的靈敏度。

試劑盒的使用具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、方便、快速等優(yōu)點(diǎn)。

3.6 毛細(xì)管電泳法

代婷婷[47]等利用磺胺類藥物在堿性介質(zhì)中抑制Ag配合物與魯米諾化學(xué)發(fā)光體系的發(fā)光強(qiáng)度，建立了毛細(xì)管電泳-化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)法，其重現(xiàn)性、穩(wěn)定性需要加強(qiáng)。

3.7 化學(xué)顯色法

周秀錦[48]等采用化學(xué)顯色快速檢測(cè)法對(duì)磺胺類藥物進(jìn)行檢測(cè)，使用試劑簡(jiǎn)單，成本低，對(duì)實(shí)驗(yàn)室條件要求也低，靈敏度最低可達(dá)50 μg/kg。

3.8 其他新技術(shù)

張[8]汪夏燕[49]等利用整體柱型管內(nèi)固相微萃取具有高萃取容量和低的傳質(zhì)阻力，實(shí)現(xiàn)了高通量樣品的萃取分析，成功建立了管內(nèi)固相微萃取-毛細(xì)管電泳-激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)聯(lián)用系統(tǒng)，具有綠色環(huán)保、操作簡(jiǎn)單、萃取效率高等優(yōu)點(diǎn)，在食品安全領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。

鐘文英[50]等利用了可視化蛋白芯片分析技術(shù)，采用間接競(jìng)爭(zhēng)法反應(yīng)原理，實(shí)現(xiàn)牛乳樣本中磺胺類藥物殘留的快速初篩，對(duì)于安全開(kāi)發(fā)能同時(shí)檢測(cè)藥物殘留的快速靈敏的方法具有實(shí)際意義。

4 結(jié)語(yǔ)

目前，對(duì)食品中的磺胺類藥物殘留的理化分析方法主要有高壓液相色譜法、高壓液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法、免疫分析法等。液相方法的專屬性較差，已經(jīng)不能滿足復(fù)雜基質(zhì)中痕量組分更加靈敏準(zhǔn)確地的檢測(cè)。液質(zhì)聯(lián)用法具有較高的專屬性和靈敏度，越來(lái)越多的實(shí)驗(yàn)室采用該方法進(jìn)行藥物的多殘留分析，但目前文獻(xiàn)的前處理過(guò)程較為復(fù)雜，分析周期較長(zhǎng)，有些化合物受到基質(zhì)干擾嚴(yán)重。此外，樣品的前處理方法的開(kāi)發(fā)也極其重要，前處理不僅是整個(gè)分析過(guò)程的限速步驟，同時(shí)處理的過(guò)程也直接影響分析結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性。隨著人們對(duì)食品樣品復(fù)雜體系的分離分析要求不斷提高，開(kāi)發(fā)能提高檢測(cè)效率、降低檢測(cè)成本，同時(shí)兼具準(zhǔn)確可靠、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)的磺胺類藥物殘留分析方法具有重要意義。

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浙江省科學(xué)技術(shù)廳重大科技專項(xiàng)重大農(nóng)業(yè)項(xiàng)目“肉雞全產(chǎn)業(yè)鏈質(zhì)量安全控制與溯源技術(shù)體系研究與應(yīng)用示范”（編號(hào)：2014C02001）；浙江省食品藥品監(jiān)督系統(tǒng)科技計(jì)劃項(xiàng)目“在線凈化液質(zhì)連用法在動(dòng)物源性食品中多獸殘檢測(cè)的應(yīng)用”（編號(hào)：SP201608）。

羅金文。