山東地區(qū)茄子感染番茄褪綠病毒的分子鑒定

劉永光 代惠潔 楊園園 陳 鵬 竺曉平 趙 靜*

（1濰坊科技學(xué)院，山東省高校設(shè)施園藝重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東壽光 262700；2山東農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院，山東省蔬菜病蟲生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東泰安 271018）

山東地區(qū)茄子感染番茄褪綠病毒的分子鑒定

劉永光1代惠潔1楊園園2陳 鵬2竺曉平2趙 靜1*

（1濰坊科技學(xué)院，山東省高校設(shè)施園藝重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東壽光 262700；2山東農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院，山東省蔬菜病蟲生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東泰安 271018）

為明確山東地區(qū)番茄褪綠病毒（Tomato chlorosis virus，ToCV）侵染茄子的情況，采用RT-PCR分子檢測鑒定疑似感染ToCV的茄子葉片樣品及發(fā)病茄子植株上的煙粉虱（Bemisia tabaci）體內(nèi)ToCV的帶毒情況。結(jié)果表明：10份茄子葉片樣品中有6份擴(kuò)增得到約463 bp的特異條帶，經(jīng)測序與GenBank中ToCV序列相似性達(dá)到99.0%以上，ToCV檢出率為60%；系統(tǒng)進(jìn)化分析顯示，山東壽光地區(qū)ToCV茄子分離物cp-1與北京番茄分離物BJ親緣關(guān)系最近。溫室內(nèi)發(fā)病茄子植株上的煙粉虱體內(nèi)攜帶ToCV，帶毒率為70%。

山東地區(qū)；茄子；番茄褪綠病毒；分子檢測；煙粉虱；傳毒

番茄褪綠病毒（Tomato chlorosis virus，ToCV）屬長線形病毒科毛形病毒屬，于1998年在美國佛羅里達(dá)州溫室番茄上首次被報(bào)道（Wisler et al.，1998），隨后擴(kuò)散至北美洲（Wintermantel et al.，2001；Castro et al.，2009；Sundaraj et al.，2011）、南美洲（Barbosa et al.，2008；Arruabarrena et al.，2014）、歐洲（Navas-Castillo et al.，2000；Accotto et al.，2001；Dalmon et al.，2005；Lozano et al.，2006；Papayiannis et al.，2006；Bese et al.，2011）、非洲（Lett et al.，2009；Fiallo-Oliv é et al.，2011）和亞洲（Segev et al.，2004；Abou-Jawdah et al.，2006；Hirota et al.，2010）等20多個國家和地區(qū)。我國于2012年在北京設(shè)施番茄上首次檢測出ToCV的發(fā)生（Zhao et al.，2013）。目前，該病毒已在北京（Zhao et al.，2013）、天津（高利利 等，2015）、河北（孫國珍 等，2015）、山東（趙黎明 等，2014a；Zhao et al.，2014；代惠潔 等，2016）、河南（胡京昂 等，2015）等番茄種植區(qū)暴發(fā)、流行，造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失（劉永光 等，2014；鄭慧新 等，2016）。

ToCV不能通過汁液摩擦傳播，其自然傳毒介體為溫室白粉虱（Trialeurodes vaporariorum）、紋翅粉虱（T. abutilone）和煙粉虱（Bemisia tabaci）。雖然這幾種粉虱對ToCV的傳毒效率有所差異，但都可以進(jìn)行有效傳毒（Wintermantel & Wisle，2006）。ToCV寄主范圍廣泛，主要侵染茄科的番 茄、辣椒、普通煙、本生煙等；此外，一些常見雜草和觀賞植物也是ToCV的寄主，如苦苣、百日菊、矮牽牛等（Wintermantel & Wisler，2006）。

設(shè)施蔬菜是現(xiàn)代農(nóng)業(yè)的重要組成部分，山東省是我國重要的設(shè)施蔬菜生產(chǎn)大省，茄子（Solanum melongena L.）作為一種高效益蔬菜在山東省大面積種植。隨著設(shè)施茄子栽培面積的不斷擴(kuò)大，由于重茬連作、栽培管理不當(dāng)?shù)仍驅(qū)е律a(chǎn)出現(xiàn)許多問題亟待解決，尤其是茄子病毒病發(fā)生日漸嚴(yán)重，已成為山東省設(shè)施茄子生產(chǎn)的重要限制因子。Zhou等（2015）報(bào)道了茄子是ToCV的自然寄主，并對北京地區(qū)設(shè)施茄子感染ToCV的情況進(jìn)行了分子檢測（周瑩 等，2016）。為明確山東地區(qū)ToCV在設(shè)施茄子上的發(fā)生狀況，筆者于2015年11月采集疑似感染ToCV的設(shè)施茄子葉片樣品進(jìn)行分子檢測鑒定，并對發(fā)病茄子植株上的煙粉虱體內(nèi)ToCV進(jìn)行了檢測；此外，分析了ToCV茄子分離物與其他分離物之間的親緣關(guān)系，以期了解不同寄主感染ToCV的情況，為田間ToCV的綜合防控提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

2015年11月在山東省壽光市現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)園（E 118°39′24″，N 36°55′28″）設(shè)施蔬菜品種展示溫室內(nèi)采集疑似感染ToCV（褪綠、黃化癥狀）的茄子葉片樣品10份，-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆茫煌瑫r(shí)，采集溫室內(nèi)發(fā)病茄子植株上的煙粉虱成蟲進(jìn)行ToCV帶毒檢測。

1.2 試劑及儀器

試劑：dNTP mixture、RTase M MLV（RNaseH-）、M-MLV Buffer、RNase Inhibitor、Taq DNA聚合酶和DL5000 DNA Ladder購于寶生物工程有限公司；氯仿、Trizol、乙醇和異丙醇購于天根生化科技（北京）有限公司。

儀器設(shè)備：WD-9413B凝膠成像分析儀、DDY-6C型電泳儀，北京市六一儀器廠生產(chǎn)；Mastercycler Gradient PCR儀，德國Eppendorf公司生產(chǎn)。

1.3 茄子葉片總RNA提取

2015年11月至2016年4月，在濰坊科技學(xué)院生物工程研發(fā)中心對疑似感病的茄子葉片樣品和煙粉虱成蟲進(jìn)行ToCV分子檢測。

采用Trizol法提取茄子葉片總RNA（代惠潔 等，2016）。取0.1 g葉片置于預(yù)冷研缽中，加液氮快速研磨成粉末，置于1.5 mL離心管中，加入1 mL Trizol混合，室溫放置5 min；取上清液，加入0.2 mL氯仿振蕩15 s，4 ℃、12 000 r·min-1離心15 min；加入等體積異丙醇，混勻，室溫放置25 min，4 ℃、12 000 r·min-1離心10 min；棄上清液，加入1 mL 75%乙醇洗滌沉淀，4 ℃、5 000 r·min-1離心5 min；在超凈工作臺中風(fēng)干，加入30～100 μL RNase-Free ddH2O充分溶解RNA，-20 ℃保存?zhèn)溆谩Ｒ晕幢憩F(xiàn)癥狀且經(jīng)檢測為ToCV陰性的健康茄子葉片樣品作為陰性對照，以感病番茄葉片樣品作為陽性對照。

1.4 煙粉虱總RNA提取

取單頭煙粉虱成蟲置于1.5 mL離心管中，加入10 μL Trizol研磨，再加入240 μL Trizol混勻，室內(nèi)放置5 min后加入50 μL氯仿混合物（氯仿∶異戊醇=24 V∶1 V），振蕩器混勻3 min，于4 ℃、12 000 r·min-1冷凍離心機(jī)離心10 min；將上清液移至另一離心管中，加等體積的冰異丙醇，顛倒混勻，放置10 min，4 ℃、12 000 r·min-1離心10 min后棄上清液，用1 mL 75%預(yù)冷乙醇洗沉淀2 次，每次洗滌后4 ℃、12 000 r·min-1離心5 min；棄上清液，在超凈工作臺中風(fēng)干，加10 μL 0.1% DEPC水，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 番茄褪綠病毒RT-PCR檢測

反轉(zhuǎn)錄體系（20 μL）：Random6 2 μL、dNTP 1 μL、模板RNA 10 μL、RNase-free H2O 1.5 μL，混勻，70 ℃變性5 min，冰上放置2 min；再加入5×Prime Script Buffer 4 μL、40 U·μL-1RNase Inhibitor 0.5 μL、200 U·μL-1Prime Script RTase 1 μL，混勻。30 ℃預(yù)熱10 min，42 ℃保溫50 min，95 ℃保溫5 min。將反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA利用引物Toc5/Toc6（Dovas et al.，2002）進(jìn)行RT-PCR檢測，確認(rèn)樣品是否攜帶ToCV；利用引物ToCV CP-R/ ToCV CP-F（Hirota et al.，2010）擴(kuò)增外殼蛋白基因（coat protein，CP）。所用引物均由北京三博遠(yuǎn)志生物技術(shù)有限公司合成，詳細(xì)信息見表1。

表1 用于ToCV分子檢測的引物信息

RT-PCR擴(kuò)增體系（20 μL）：PCR Master Mix 10 μL、上下游引物各1 μL、ddH2O 7 μL、反轉(zhuǎn)錄cDNA模板1 μL。擴(kuò)增條件為：94 ℃ 3 min；94 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min，循環(huán)30次；72 ℃ 10 min。擴(kuò)增結(jié)束后，取6.0 μL PCR產(chǎn)物進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳檢測，并用全自動凝膠成像系統(tǒng)記錄檢測結(jié)果。

1.6 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的克隆測序及分析

RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測，采用凝膠回收試劑盒對目的條帶進(jìn)行分離純化，回收產(chǎn)物連接到18-T載體上，再轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α，陽性克隆經(jīng)菌落PCR驗(yàn)證后由華大基因科技有限公司測序。

1.7 數(shù)據(jù)處理

利用MEGA 5軟件以及DNAStar軟件的MegAlign方法，將得到的ToCV-CP分離物蛋白核苷酸序列與GenBank中已登錄的有代表性的ToCVCP分離物蛋白核苷酸序列（表2）進(jìn)行同源性以及相似性比較；采用MEGA（Version 6.06）軟件的Neighbor-joining方法構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹，進(jìn)化樹各分支的置信度采用1 000次的重復(fù)檢驗(yàn)。

表2 GenBank中已登錄的有代表性的ToCV-CP分離物蛋白核苷酸序列

2 結(jié)果與分析

2.1 茄子葉片樣品RT-PCR檢測

利用ToCV特異性引物Toc5/Toc6對采集的10份茄子葉片樣品進(jìn)行RT-PCR檢測，其中有6份樣品擴(kuò)增得到約463 bp的特異條帶（圖1）。經(jīng)測序后比對，擴(kuò)增出的特異條帶序列與GenBank中ToCV序列相似性達(dá)到99.0%以上，確定擴(kuò)增到的基因片段為ToCV序列。茄子葉片樣品的ToCV檢出率為60%。

圖1 ToCV特異性引物對茄子葉片樣品的RT-PCR檢測結(jié)果

2.2 ToCV茄子分離物CP序列擴(kuò)增

選取ToCV檢測為陽性的茄子葉片樣品，利用ToCV CP-R/ToCV CP-F引物擴(kuò)增CP基因，得到大小為848 bp的目的條帶（圖2）。

2.3 ToCV茄子分離物CP序列進(jìn)化分析

ToCV-CP系統(tǒng)進(jìn)化樹顯示（圖3），所有ToCV分離物聚成1個大的分支，大分支又分成3個小的分支ToCV CladeⅠ、ToCV CladeⅡ、ToCV CladeⅢ。山東地區(qū)茄子分離物cp-1與北京番茄分離物BJ聚在1個小的分支上，親緣關(guān)系最近，其次為中國分離物14HD-12；因分離物系統(tǒng)進(jìn)化樹分支與國家地理位置有一定相關(guān)性，山東地區(qū)茄子分離物與中國山西、山東、吉林等地區(qū)的分離物親緣關(guān)系較近，而與日本、希臘等地區(qū)的分離物親緣關(guān)系較遠(yuǎn)；中國天津分離物ToCV-TJ6單獨(dú)形成1個分支，這可能是由于種群多樣性或者基因突變導(dǎo)致的。

圖2 茄子葉片樣品ToCV CP序列擴(kuò)增結(jié)果

圖3 基于CP基因序列構(gòu)建的ToCV茄子分離物及其相關(guān)分離物的系統(tǒng)進(jìn)化樹

2.4 煙粉虱體內(nèi)ToCV檢測

在溫室內(nèi)發(fā)病茄子植株上采集的煙粉虱體內(nèi)檢測到463 bp特異性片段，表明煙粉虱體內(nèi)攜帶ToCV病毒（圖4），帶毒率為70%。

圖4 部分煙粉虱成蟲體內(nèi)ToCV的RT-PCR檢測結(jié)果

3 結(jié)論與討論

近年來，ToCV在我國蔬菜主產(chǎn)地山東設(shè)施番茄種植區(qū)暴發(fā)、流行。濰坊科技學(xué)院病蟲害防治課題組對設(shè)施番茄ToCV發(fā)生流行規(guī)律、ToCV分子檢測鑒定、煙粉虱種群動態(tài)與番茄ToCV發(fā)生流行關(guān)系、煙粉虱對ToCV的傳毒特性及其防控措施等進(jìn)行了研究（劉永光 等，2014；Zhao et al.，2014，2015；代惠潔 等，2016）。Zhou等（2015）報(bào)道了茄子是ToCV的自然寄主，并對北京地區(qū)設(shè)施茄子感染ToCV的情況進(jìn)行了分子檢測，檢出率達(dá)40%（周瑩 等，2016）。本試驗(yàn)進(jìn)行樣品采集時(shí)，調(diào)查溫室內(nèi)茄子葉片出現(xiàn)褪綠、黃化癥狀的植株約占70%。對疑似感染ToCV的茄子葉片樣品進(jìn)行分子檢測，結(jié)果表明采集樣品中ToCV的檢出率為60%；且設(shè)施溫室內(nèi)發(fā)病茄子植株上有煙粉虱發(fā)生為害，經(jīng)分子檢測煙粉虱體內(nèi)ToCV帶毒率為70%。因此，在關(guān)注ToCV在設(shè)施番茄上發(fā)生為害的同時(shí)，還應(yīng)警惕設(shè)施茄子上ToCV的發(fā)生與擴(kuò) 展，避免在多種作物上的大發(fā)生。

根據(jù)ToCV茄子分離物CP基因構(gòu)建的系統(tǒng)進(jìn)化樹顯示，該分離物系統(tǒng)進(jìn)化樹分支與地理位置有一定的相關(guān)性。這也說明ToCV可能是通過粉虱或種苗調(diào)運(yùn)在不同地區(qū)和臨近國家間傳播，因此對媒介昆蟲的防控及種苗檢測是控制該病害的重要環(huán)節(jié)（周瑩 等，2016）。

目前尚未有抗ToCV的茄子品種，因此防控傳毒介體煙粉虱成為控制ToCV流行的重要方法之一。生產(chǎn)中通常使用殺蟲劑防治煙粉虱，但有時(shí)田間僅能夠有效地控制煙粉虱，卻不能有效防控ToCV，可能在防治前煙粉虱已傳播了該病毒（周濤 等，2014）。2013年濰坊科技學(xué)院病蟲害防治課題組首次在山東壽光設(shè)施番茄上檢測到ToCV與 TYLCV可以發(fā)生復(fù)合侵染（趙黎明 等，2014b）。隨后這兩種病毒的復(fù)合侵染又在天津（高利利 等，2015）、河北（孫國珍 等，2015）、江蘇（吳淑華 等，2016）等番茄種植區(qū)被報(bào)道。2015～2016年濰坊科技學(xué)院病蟲害防治課題組對不同設(shè)施番茄品種ToCV和TYLCV的復(fù)合侵染發(fā)生情況進(jìn)行調(diào)查檢測，發(fā)現(xiàn)不同番茄品種復(fù)合侵染率、癥狀表現(xiàn)均存在差異，有些品種的復(fù)合侵染率高達(dá)70%以上。發(fā)生復(fù)合侵染的番茄植株上部葉片主要表現(xiàn)TYLCV的癥狀：黃化、變小、葉緣上卷、皺縮；下部葉片主要表現(xiàn)ToCV的癥狀：脈間褪綠黃化，葉片變厚，老葉脈間壞死、變脆易碎；整株番茄矮縮、坐果很少，果實(shí)畸形變小，嚴(yán)重影響產(chǎn)量和品質(zhì)（代惠潔 等，2017）。目前，在茄子上尚未發(fā)現(xiàn)ToCV與TYLCV的復(fù)合侵染。我國對ToCV的研究尚處在開始階段，關(guān)于ToCV寄主范圍調(diào)查、ToCV對不同寄主的致病力差異、煙粉虱對不同寄主傳毒能力的差異及其流行過程中不同寄主中ToCV重組、變異等研究亟待進(jìn)一步開展；此外，在生產(chǎn)上應(yīng)全面開展ToCV綜合防控，如種苗檢測、現(xiàn)有品種抗性評價(jià)、煙粉虱防控及其綜合防治等。

代惠潔，劉永光，竺曉平，劉永杰，趙靜．2016．山東壽光地區(qū)Q型煙粉虱對番茄褪綠病毒的傳播．植物保護(hù)學(xué)報(bào)，43（1）：162-167．

代惠潔，程琳，竺曉平，劉永杰，趙靜．2017．煙粉虱傳播的番茄褪綠病毒和番茄黃化曲葉病毒對不同番茄品種的復(fù)合侵染．植物保護(hù)學(xué)報(bào)，44（3）：453-459．

高利利，孫國珍，王勇，高葦，張春祥，張安盛，竺曉平．2015．天津地區(qū)番茄褪綠病毒的分子檢測和鑒定．華北農(nóng)學(xué)報(bào)，30（3）：211-215．

胡京昂，萬秀娟，李自娟，黃文，李武高，應(yīng)芳卿．2015．河南番茄褪綠病毒的分子鑒定．中國蔬菜，（12）：25-28．

劉永光，魏家鵬，喬寧，李美芹，劉曉明，竺曉平．2014．番茄褪綠病毒在山東暴發(fā)及其防治措施．中國蔬菜，（5）：67-69．

孫國珍，高利利，陸文利，王勇，張安盛，竺曉平．2015．河北省設(shè)施番茄褪綠病毒分子檢測和鑒定研究．北方園藝，（9）：95-98．

吳淑華，李廷芳，趙文浩，程兆榜，郭青云，趙統(tǒng)敏，余文貴，朱葉芹，季英華．2016．江蘇省番茄黃化曲葉病毒和褪綠病毒復(fù)合侵染的分子檢測．園藝學(xué)報(bào)，43（1）：89-99．

趙黎明，李剛，劉永杰，劉永光，孫國珍，竺曉平．2014a．侵染番茄的番茄褪綠病毒山東泰安分離物的分子鑒定和序列分 析．植物保護(hù)，40（5）：34-39．

趙黎明，李剛，劉永光，國家進(jìn)，魏家鵬，竺曉平．2014b．番茄褪綠病毒與番茄黃化曲葉病毒復(fù)合侵染的分子鑒定．中國蔬菜，（12）：15-20．

鄭慧新，夏吉星，周小毛，張友軍．2016．警惕煙粉虱傳播的番茄褪綠病毒病在我國快速擴(kuò)散．中國蔬菜，（4）：22-26．

周濤，楊普云，趙汝娜，師迎春，原鍇，范在豐．2014．警惕番茄褪綠病毒在我國的傳播和危害．植物保護(hù)，40（5）：196- 200．

周瑩，黃金寶，喬廣行，羅晨，李明遠(yuǎn)．2016．北京地區(qū)茄子感染番茄褪綠病毒的分子鑒定．植物保護(hù)學(xué)報(bào)，43（1）：168- 172．

Abou-Jawdah Y，El Mohtar C，Atamian H，Sobh H．2006．First report of Tomato chlorosis virus in Lebanon．Plant Disease，90 （3）：378．

Accotto G P，Vaira A M，Vecchiati M，Sialer M M F，Gallitelli D，Davino M．2001．First report of Tomato chlorosis virus in Italy．Plant Disease，85（11）：1208．

Arruabarrena A，Rubio L，Gonz á lez-Arcos M，Maeso D，F(xiàn)onseca M E N，Boiteux L S．2014．First report of Tomato chlorosis virus infecting tomato crops in Uruguay．Plant Disease，98（10）：1445．

Barbosa J C，Teixeira A P M，Moreira A G，Camargo L E A，Bergamin Filho A，Kitajima E W，Rezende J A M．2008．First report of Tomato chlorosis virus infecting tomato crops in Brazil．Plant Disease，92（12）：1709．

Bese G，B ó ka K，Krizbai L，Tak á cs A．2011．First report of Tomato chlorosis virus in tomato from Hungary．Plant Disease，95（3）：363．

Castro R M，Hernandez E，Mora F，Ramirez P，Hammond R W．2009．First report of Tomato chlorosis virus in tomato in Costa Rica．Plant Disease，93（9）：970．

Dalmon A，Bouyer S，Cailly M，Girard M，Lecoq H，Desbiez C，Jacquemond M．2005．First report of Tomato chlorosis virus and Tomato infectious chlorosis virus in tomato crops in France．Plant Disease，89（11）：1243．

Dovas C I，Katis N I，Avgelis A D．2002．Multiplex detection of criniviruses associated with epidemics of a yellowing disease of tomato in Greece．Plant Disease，86（12）：1345-1349．

Fiallo-Oliv é E，Hamed A A，Moriones E，Navas-Castillo J．2011．First report of Tomato chlorosis virus infecting tomato in Sudan．Plant Disease，95（12）：1592．

Hirota T，Natsuaki T，Murai T，Nishigawa H，Niibori K，Goto K，Hartono S，Suastika G，Okuda S．2010．Yellowing disease of tomato caused by Tomato chlorosis virus newly recognized in Japan．Journal of General Plant Pathology，76（2）：168-171．

Lett J M，Hoareau M，Reynaud B，Saison A，Hostachy B，Lobin K，Benimadhu S P．2009．First report of Tomato chlorosis virus in tomato on Mauritius Island．Plant Disease，93（1）：111．

Lozano G，Moriones E，Navas-Castillo J．2006．Complete nucleotide sequence of the RNA2 of the Crinivirus Tomato chlorosis virus．Archives of Virology，151（3）：581-587．

Navas-Castillo J，Camero R，Bueno M，Moriones E．2000．Severe yellowing outbreaks in tomato in Spain associated with infections of Tomato chlorosis virus．Plant Disease，84（8）：835-837．

Papayiannis L C，Ioannou N，Dovas C I，Mailogka V I，Katis N I．2006．First report of Tomato chlorosis virus on tomato crops in Cyprus．Plant Pathology，55：567．

Segev L，Wintermantel W M，Polston J E，Lapidot M．2004．First report of Tomato chlorosis virus in Israel．Plant Disease，88（10）：1160．

Sundaraj S，Srinivasan R，Webster C G，Adkins S，Perry K，Riley D．2011．First report of Tomato chlorosis virus infecting tomato in Georgia．Plant Disease，95（7）：881．

Wintermantel W M，Polston J E，Escudero J，Paoli E R．2001．First report of Tomato chlorosis virus in Puerto Rico．Plant Disease，85（2）：228．

Wintermantel W M，Wisler G C．2006．Vector specificity host range and genetic diversity of Tomato chlorosis virus．Plant Disease，90（6）：814-819．

Wisler G C，Li R H，Liu H Y，Lowry D S，Duffus J E．1998．Tomato chlorosis virus：a new whitefly-transmitted，phloem limited，bipartite closterovirus of tomato．Phytopathology，88（5）：402-409．

Zhao L M，Li G，Gao Y，Liu Y J，Sun G Z，Zhu X P．2014．Molecular detection and complete genome sequences of Tomato chlorosis virus isolates from infectious outbreaks in China．Journal of Phytopathology，162（10）：627-634．

Zhao L M，Li G，Gao Y，Zhu Y R，Liu J，Zhu X P．2015．Reverse transcription loop-mediated isothermal amplification assay for detecting Tomato chlorosis virus．Journal of Virological Methods，213：93-97．

Zhao R N，Wang R，Wang N，F(xiàn)an Z F，Zhou T，Shi Y C，Chai M．2013．First report of Tomato chlorosis virus in China．Plant Disease，97（8）：1123．

Zhou Y，Yan J Y，Qiao G H，Liu M，Zhang W，Li X H．2015．First report of Tomato chlorosis virus infecting eggplant（Solanum melongena）in China．Plant Disease，99（11）：1567．

Molecular Identification of Tomato chlorosis virus on Eggplant in Shandong Province

LIU Yong-guang1，DAI Hui-jie1，YANG Yuan-yuan2，CHEN Peng2，ZHU Xiao-ping2，ZHAO Jing1*
（1Weifang College of Science & Technology，Key Laboratory of Protected Horticulture for Universities in Shandong

Province，Shouguang 262700，Shandong，China；2College of Plant Protection，Shandong Agricultural University，Key Laboratory for Biology of Vegetable Diseases and Insect Pests in Shandong Province，Tai’an 271018，Shandong，China）

In order to clarify the occurrence of Tomato chlorosis virus（ToCV）on eggplant in Shandong Province，this paper detected and identified by RT-PCR the samples of eggplant leaves prospectively infected by ToCV and also the viruliferous percentage of ToCV in Bemisia tabaci adults on infected eggplant plants．The results showed that 463 bp specific fragments were amplified from the detected samples and 6 samples were positive for ToCV and the positive percentage was 60%．The CP gene of positive samples were cloned and sequenced，sharing over 99.0% nucleotide identity with a tomato isolate from Beijing（BJ）．Moreover，ToCV could be detected in B. tabaci on ToCV-infected eggplant plants and the viruliferous percentage of ToCV was 70%．

Regions in Shandong Province；Eggplant；Tomato chlorosis virus（ToCV）；Molecular identification；Bemisia tabaci；Viral transmission

劉永光，講師，專業(yè)方向：植物病理學(xué)，E-mail：ygliu425@163.com

*通訊作者（Corresponding author）：趙靜，副教授，專業(yè)方向：害蟲生物防治，E-mail：zhjlovely@163.com

2017-05-28；接受日期：2017-08-01

山東省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（ZR2015CQ022），濰坊市科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（2016ZJ1113），山東省農(nóng)業(yè)重大應(yīng)用技術(shù)創(chuàng)新課題