脂肪因子Vaspin、Chemerin在妊娠期糖尿病孕婦的表達(dá)

李曉紅，陳卓，馬潤(rùn)玫

（昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，昆明650031）

脂肪因子Vaspin、Chemerin在妊娠期糖尿病孕婦的表達(dá)

李曉紅，陳卓，馬潤(rùn)玫*

（昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，昆明650031）

目的：探討內(nèi)臟脂肪組織源性絲氨酸蛋白酶抑制劑（visceral adipose tissue-derived serine protease inhibitor，Vaspin）及趨化素（Chemerin）在孕婦血清及大網(wǎng)膜脂肪組織的表達(dá)與妊娠期糖尿?。╣estational diabetes mellitus，GDM）的關(guān)系。方法：研究對(duì)象在足月入院待產(chǎn)時(shí)收集晨起空腹血，測(cè)量各研究對(duì)象產(chǎn)前體重、空腹血糖、空腹胰島素等臨床指標(biāo)。ELISA檢測(cè)血清中Vaspin與Chemerin水平。免疫印跡法檢測(cè)大網(wǎng)膜組織中Vaspin及Chemerin的表達(dá)。結(jié)果：（1）GDM組血清中Vaspin及Chemerin水平顯著高于對(duì)照組；（2）Spearmen相關(guān)性分析顯示Vaspin與產(chǎn)前BMI、OGTT2h血糖、HDL、FINS密切相關(guān)。Chemerin與TC、TG、CRP密切相關(guān)；（3）肥胖孕婦大網(wǎng)膜脂肪中Chemerin的表達(dá)顯著增高。結(jié)論：脂肪因子Vaspin及Chemerin與GDM的胰島素抵抗、肥胖及脂代謝密切相關(guān)。

妊娠期糖尿??；Vaspin；趨化素；胰島素抵抗

妊娠期由于其特殊的生理狀態(tài)，孕婦存在不同程度的胰島素抵抗，隨妊娠進(jìn)展，獲得性胰島素抵抗加重〔1〕。正常妊娠晚期孕婦存在高血脂代謝改變，妊娠期糖尿?。╣estational diabeles mellitus，GDM）孕婦由于其嚴(yán)重的胰島素抵抗使胰島素抑制脂肪氧化和分解作用減弱，血脂升高〔2-3〕，即使予以飲食與胰島素治療后，仍存在糖脂代謝紊亂。脂肪組織是強(qiáng)大的內(nèi)分泌器官，可分泌大量的脂肪因子，對(duì)糖脂代謝、胰島素抵抗、系統(tǒng)炎癥等重要代謝中起調(diào)節(jié)作用〔4-5〕。脂肪因子（Chemerin）參與脂肪組織的分化、成熟〔6-7〕，與肥胖、血脂代謝紊亂密切相關(guān)〔8〕。內(nèi)臟脂肪組織源性絲氨酸蛋白酶抑制劑（visceral adipose tissue-derived serine protease inhib?itor，Vaspin）屬于絲氨酸蛋白酶抑制劑（serpin）家族，具有胰島素增敏作用〔9〕。本文將檢測(cè)血清中及內(nèi)臟脂肪組織（大網(wǎng)膜脂肪組織）中Vaspin、Chemerin表達(dá)及糖脂代謝指標(biāo)，探討Chemerin、Vaspin與GDM孕婦胰島素抵抗、糖脂代謝的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2012年10月至2013年3月在我院產(chǎn)科門(mén)診規(guī)律產(chǎn)前檢查單胎且足月妊娠后入我院分娩的產(chǎn)婦52例。本次妊娠前無(wú)高血壓、腎臟、心血管、肝臟等疾病，無(wú)內(nèi)分泌疾病，如甲亢、甲減、糖尿病等。未服用干擾糖、脂代謝的藥物，如消炎痛、可的松等。在28～30周時(shí)行75 gOGTT試驗(yàn)，診斷標(biāo)準(zhǔn)參照1998年WHO的GDM診斷標(biāo)準(zhǔn)，分為妊娠期糖尿病和妊娠期糖耐量受損（gestational impaired glucose tolence，GIGT）。GDM和GIGT統(tǒng)稱(chēng)妊娠期糖代謝異常狀態(tài)，按GDM治療。其中GDM組30例，對(duì)照組22例。本研究已通過(guò)昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)審核，每位入組者均簽署知情同意書(shū)。

1.2 身體參數(shù)指標(biāo)檢測(cè)測(cè)量受試對(duì)象，身高、分娩前體重，詢問(wèn)孕前體重，計(jì)算BMI及孕期增重。

1.3 血清的收集及生化指標(biāo)的測(cè)定受試對(duì)象禁食10 h后清晨采集空腹靜脈血，全血5 mL，其中2 mL用于測(cè)定空腹血糖（FPG）、空腹胰島素（FINS）。余3 mL靜置2 h后3 000 r∕s離心10 min，取上層血清分裝，用于測(cè)定FINS及后續(xù)ELISA測(cè)定Vaspin、Chemerin。測(cè)定FPG采用己糖激酶法（美國(guó)OlympasAU2700自動(dòng)生化分析儀，試劑購(gòu)自北京中生公司）檢測(cè)。FINS采用化學(xué)發(fā)光法（DPC IMMULITE化學(xué)發(fā)光分析儀，試劑購(gòu)自DPC Cirrus Inc）檢測(cè)。胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）=FPG（mmol∕L）×FINS（mU∕L）∕22.5。

1.4 Vaspin、Chemerin的測(cè)定Vaspin、Chemerin均采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA法）測(cè)定，Vaspin ELISA試劑盒（Visceral Adipose Tissue-Derived Serpin A12（human）ELISA Kit，Cayman Chemical Item Number 579000），Chemerin ELISA試劑盒（Human Omentin-1 ELISA，EZH0MNTN1-29K）。

1.5 網(wǎng)膜組織的收集受試對(duì)象在足月妊娠因產(chǎn)科指征需剖宮產(chǎn)分娩的患者，在剖宮產(chǎn)時(shí)收集大網(wǎng)膜組織5 g，-80℃保存待測(cè)。

1.6 免疫印跡法檢測(cè)Vaspin及Chemerin的表達(dá)

收集好的大網(wǎng)膜組織5 g，加入1 mL蛋白裂解液（含1 mL RIPA buffer+100 μL蛋白酶抑制劑+100 μL磷酸酶抑制劑）冰上勻漿，4℃，30 000 r∕min離心4 min，去除上層油脂，吸取中層水溶部分（含蛋白質(zhì)），棄沉淀。BCA法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。取120 μg蛋白質(zhì)予以上樣，上樣前加入6×上樣緩沖液，予沸水煮沸5 min充分變性，Chemerin蛋白采用15%膠，Vaspin蛋白采用8%膠分別進(jìn)行聚丙烯胺凝膠電泳（SDS-PAGE），PVDF膜轉(zhuǎn)移后進(jìn)行一抗Vaspin（An?ti-Vaspin Antibody，millpore，AB10628）、Chemerin（Human Chemerin MAb（Clone 365317，MAB2324，R&D）孵育，然后通用二抗孵育，增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光（enhanced chemiluminescence，ECL）顯色，底片曝光。每樣至少重復(fù)3次以消除誤差。Image J軟件分析圖像灰度值，以目的蛋白灰度值∕內(nèi)參GAPDH灰度值為蛋白相對(duì)表達(dá)量。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理用SPSS 21.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。計(jì)量資料以表示。組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)或單因素方差分析；Spearman相關(guān)性分析臨床參數(shù)、HOMA-IR與Vaspin、Chemerin之間相關(guān)性。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 GDM組和對(duì)照組的一般臨床特征、代謝參數(shù)與血清中Vaspin、Chemerin的比較兩組孕婦在孕前平均體重及孕期體重增加、甘油三脂（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）均無(wú)明顯差異。而產(chǎn)前GDM組孕婦胰島素水平升高，并表現(xiàn)明顯的胰島素抵抗及高CRP水平，且Vaspin及Chemerin均比對(duì)照組明顯升高。見(jiàn)表1。

表1 GDM組和對(duì)照組一般臨床特征、代謝參數(shù)與血清中Vaspin、Chemerin的比較

2.2 各身體參數(shù)與Vaspin、Chemeirn的相關(guān)性Spearman相關(guān)性分析顯示：Vaspin與孕前產(chǎn)前體重、產(chǎn)前BMI、OGTT2h血糖、甘油三脂、空腹胰島素及HOMA-IR正相關(guān)，與高密度脂蛋白負(fù)相關(guān)。Chemerin與甘油三脂、總膽固醇、CRP正相關(guān)。見(jiàn)表2。

表2 各身體參數(shù)與Vaspin、Chemeirn的相關(guān)性分析

2.3 產(chǎn)前不同BMI（kg∕m2）對(duì)GDM組與對(duì)照組血清中Vaspin、Chemerin的影響按產(chǎn)前BMI不同將兩組孕婦各分為BMI≤28 kg∕m2組（非肥胖組），及BMI＞28 kg∕m2組（肥胖），比較各組孕婦TG、TC、HDL、LDL、CRP及血清中Vaspin、Chemerin水平。肥胖GDM孕婦存在明顯的高脂血癥（高水平的TC、TG）。對(duì)照組肥胖孕婦血脂TC增高。肥胖GDM孕婦血清中Chemerin水平明顯高于任何其他體重指數(shù)的孕婦，而非肥胖的GDM孕婦血清中Chemerin水平比對(duì)照組非肥胖孕婦明顯升高，但與對(duì)照組肥胖孕婦比較無(wú)差異性。提示：肥胖的孕婦表現(xiàn)出血脂代謝紊亂，而GDM孕婦的肥胖更加重了血脂代謝紊亂，伴隨著血清中高水平的Vaspin及Chemerin。見(jiàn)表3。

表3 不同BMI的孕婦血脂、CRP及血清中Vaspin、Chemerin的比較

2.4 大網(wǎng)膜脂肪組織中Chemerin及Vaspin的表達(dá)Chemerin在BMI＞28 kg∕m2的GDM組及對(duì)照組孕婦大網(wǎng)膜組織中高表達(dá)，BMI≤28 kg∕m2的孕婦，Chemerin在GDM組與對(duì)照組表達(dá)無(wú)顯著性差異。Vaspin在GDM組網(wǎng)膜組織的表達(dá)有增高趨勢(shì)，在BMI＞28 kg∕m2的孕婦有高表達(dá)于其他BMI的孕婦的趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)圖1～2。

3 討論

胰島素抵抗是公認(rèn)的妊娠期糖尿病發(fā)生發(fā)展的病理生理基礎(chǔ)，胰島素抵抗的高低是影響宮內(nèi)血糖水平不可忽視的因素，宮內(nèi)血糖水平對(duì)母兒結(jié)局有決定性的作用。故探討孕期胰島素抵抗的影響因素，對(duì)治療或緩解孕期胰島素抵抗，對(duì)妊娠的結(jié)局有一定意義。本研究對(duì)象均為在我科門(mén)診定期產(chǎn)檢，并接受孕期飲食及體重控制指導(dǎo)，在年齡、孕周、孕期體重增加無(wú)顯著性差異，仍發(fā)現(xiàn)GDM孕婦比對(duì)照組孕婦有更明顯的胰島素抵抗。Chemerin在肥胖人群及2型糖尿病動(dòng)物模型的白色脂肪組織中高表達(dá)，與肥胖、高血脂、高胰島素血癥、胰島素抵抗及心血管疾病為表型的代謝綜合癥密切相關(guān)，即使校正BMI，年齡和性別后，Chemerin依然和HDL、TC、TG密切相關(guān)〔10-11〕。本文發(fā)現(xiàn)在GDM孕婦血清中Chemerin的水平明顯高于對(duì)照組孕婦，與TC、TG、CRP正相關(guān)。肥胖GDM組血清中Chemerin水平明顯高于任何其他孕婦。Chemerin在大網(wǎng)膜脂肪組織中肥胖孕婦均為高表達(dá)，且GDM組表達(dá)更高。高胰島素水平可促進(jìn)脂肪組織Chemerin的分泌，二甲雙胍可降低血清及脂肪組織中的Chemerin水平，刺激胰島素作用下的葡萄糖攝取并促進(jìn)胰島素受體底物-1（insulin receptor substrate-1，IRS-1）的磷酸化而提高胰島素的敏感性〔10〕。Chemerin可降低糖尿病鼠的胰島素水平，并加重糖耐量異常〔12〕。孕期肥胖可促進(jìn)Chemerin的分泌，Chemerin的高表達(dá)促進(jìn)系統(tǒng)性炎癥的發(fā)生，進(jìn)一步促進(jìn)肥胖及脂代謝紊亂的發(fā)生。GDM孕婦胰島素抵抗及血清中高水平FINS促進(jìn)脂肪分泌Chemerin，高Chemerin水平加重糖耐量的異常，加重胰島素抵抗〔14〕。

圖1 不同BMI網(wǎng)膜脂肪組織中Chemerin與Vaspin的蛋白表達(dá)

圖2 不同BMI網(wǎng)膜脂肪組織中Chemerin的表達(dá)分析

Vaspin在肥胖及糖尿病人群循環(huán)及脂肪組織中的高表達(dá)〔13〕。本文中發(fā)現(xiàn)GDM孕婦血清中Vaspin水平明顯高于對(duì)照組，且不同BMI，GDM組Vaspin水平均高于對(duì)照組，且與孕前及產(chǎn)前體重、BMI、FINS、HOMA-IR正相關(guān)。故Vaspin的高表達(dá)與肥胖及胰島功能抵抗有關(guān)。

特殊的生理特征及傳統(tǒng)的飲食習(xí)慣使孕婦在孕期體重增加過(guò)快，過(guò)多。而肥胖會(huì)引起一系列的代謝紊亂及不同程度的胰島素抵抗。妊娠期糖尿病是一種特殊類(lèi)型的2型糖尿病，伴有不同程度的脂代謝紊亂及胰島素抵抗，脂肪因子Vaspin及Chemerin均是GDM的高危因素，與孕婦的肥胖及脂代謝紊亂有關(guān)。

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The Expression of Adipokines Vaspin and Chemerin in Pregnant Women with Gestational Diabetes Mellitus

Li Xiaohong,Chen Zhuo,Ma Runmei*
（Department of Obstetricians and Gynecologists,The First Affiliated Hospital of Kunming Medical University, Kunming 650031,China）

Objective：To explore the relationships between the expression of visceral adipose tissue-derived serine protease inhibitor（vaspin）and Chemerin in serum and visceral omental adipose tissue of pregnant women with gestational diabetes mellitus.Methods：The levels of Vaspin and Chemerin in serum were measured by enzyme-linked immuno sorbent assay（ELISA）.Fasting plasma glucose（FPG）,fasting insulin（FINS）,total cholesterol（TC）,triglyceride（TG）and c-reactive protein（CRP）were also detected.The expression of Vaspin and Chemerin in visceral adipose tissue was detected by western blot.Results：Pregnant women with GDM had higher insulin levels and insulin resistant（IR）than the healthy control group.Serum Vaspin and Chemerin levels were found to be significantly increased in patients with GDM compared with healthy control subjects.Serum Chemerin levels were positively associated with TC,TG and CRP,while Vaspin levels in serum were positively associated with body weight before pregnancy and BMI at delivery,HDL,FINS and HOMA-IR.The expression levels of Chemerin in obese pregnant women obviously increased.Conclusion:Vaspin and Chemerin are closely related to GDM risk factors,obesity and lipid metabolism disorders in pregnant women.

gestational diabetes mellitus;Vaspin;Chemerin;insulin resistance

R714.256

B

2096-2266（2017）08-0044-05

10.3969∕j.issn.2096-2266.2017.08.011

（責(zé)任編輯 董杰）

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81160082）

2017-05-16［修改日期］2017-05-25

李曉紅，博士，主治醫(yī)師，主要從事圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)研究.

*通信作者：馬潤(rùn)玫，教授，博士生導(dǎo)師.