排毒尪痹湯對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者T細(xì)胞亞群的影響

唐貞力

（大理大學(xué)第八附屬醫(yī)院，云南臨滄677000）

排毒尪痹湯對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者T細(xì)胞亞群的影響

唐貞力

（大理大學(xué)第八附屬醫(yī)院，云南臨滄677000）

目的：觀察排毒尪痹湯對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的影響，從細(xì)胞免疫方面探討本方藥的療效機(jī)制。方法：使用隨機(jī)且平行對照的方法，按隨機(jī)數(shù)字表法將200例門診及住院患者分為兩組。對照組100例，吲哚美辛腸溶片25 mg∕次，1次∕d，甲氨蝶呤片7.5 mg∕次，1次∕周；治療組100例，排毒尪痹湯煎服200 mL∕次，2次∕d。連續(xù)治療4周為1療程，兩個療程后，于治療前和治療后分別檢測CD4+，CD8+細(xì)胞，計算CD4+∕CD8+值。結(jié)果：治療前兩組CD4+、CD8+、CD4+∕CD8+值比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。治療后，兩組較治療前，CD4+細(xì)胞均下降，CD8+細(xì)胞均升高，CD4+∕CD8+比值均降低；且兩組治療后各指標(biāo)組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論：RA患者體內(nèi)存在著細(xì)胞免疫功能紊亂，排毒尪痹湯能調(diào)節(jié)T細(xì)胞分布，使機(jī)體趨向免疫穩(wěn)定狀態(tài)，具有類似MTX聯(lián)合用藥的免疫抑制效應(yīng)。

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；排毒尪痹湯；T淋巴細(xì)胞亞群

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（Rheumatoid Arthritis，RA）是一種病因復(fù)雜的自身免疫性疾病，目前其發(fā)病機(jī)制尚不十分清楚，臨床以多關(guān)節(jié)慢性炎癥為主要表現(xiàn)。研究發(fā)現(xiàn)，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞免疫功能紊亂，細(xì)胞異?；罨图?xì)胞亞群的平衡失控密切相關(guān)是其主要發(fā)病機(jī)制之一，且這種調(diào)節(jié)細(xì)胞主要存在于CD4+、CD8+淋巴細(xì)胞亞群中〔1-2〕。本院結(jié)合當(dāng)?shù)厣贁?shù)民族的佤醫(yī)佤藥獨(dú)特的治療特色，并通過十余年的臨床使用心得，篩選優(yōu)化組方配伍，最終總結(jié)出排毒尪痹湯。并運(yùn)用該方治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎100例，取得較好療效。本研究通過檢測RA患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的CD4+、CD8+細(xì)胞變化以及排毒尪痹湯對其影響，從細(xì)胞免疫方面探索本方藥治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的部分作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 研究設(shè)計及隨機(jī)分組方法采用隨機(jī)平行對照方法，將臨滄市人民醫(yī)院中醫(yī)科門診及住院符合條件的RA患者200例，按照隨機(jī)數(shù)字表方法，分為兩組，兩組在性別、年齡、病程、關(guān)節(jié)功能比較等方面差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)（1）年齡在15～70周歲之間。（2）均為活動性RA患者，符合美國風(fēng)濕病協(xié)會類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎1987年修訂標(biāo)準(zhǔn)?；顒有訰A診斷標(biāo)準(zhǔn)為〔3〕（需具備以下5項中4項）：①晨僵≥1 h。②休息時有中等程度疼痛。③關(guān)節(jié)腫脹≥3個。④關(guān)節(jié)壓痛≥5個。⑤ESR≥30 mm∕h。（3）中醫(yī)辨證屬于“風(fēng)寒濕型”標(biāo)準(zhǔn)。（4）受試者知情，自愿簽署知情同意書。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn)①伴有可能影響效應(yīng)指標(biāo)觀測、判斷的其他生理或病理狀況。②合并其他免疫系統(tǒng)疾病。③除規(guī)定用藥外，長期服用治療本病的西藥或其他藥物近3周未停服者。④特征人群：孕婦、哺乳期、精神病、病情危篤或疾病晚期。⑤嚴(yán)重心、肝、腎損害影響藥物代謝。

1.4 退出標(biāo)準(zhǔn)①違反試驗方案。②發(fā)生嚴(yán)重不良事件、并發(fā)癥，難以繼續(xù)治療。③資料不全無法判定療效、安全性。④不符合納入條件，納入錯誤或未按規(guī)定服藥無法判定療效。

1.5 診斷標(biāo)準(zhǔn)

1.5.1西醫(yī)診斷參照美國風(fēng)濕病學(xué)會（ARA）1987年對RA活動期的診斷標(biāo)準(zhǔn)〔2〕。

1.5.2中醫(yī)診斷參照衛(wèi)生部2002年《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》標(biāo)準(zhǔn)〔3〕。

1.6 治療方法4周為1療程，連續(xù)兩個療程。

1.6.1對照組吲哚美辛腸溶片（山西云鵬藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字H14020771）25 mg，1次∕d；甲氨蝶呤片（上海信誼藥廠有限公司，國藥準(zhǔn)字H31020644）7.5 mg，1次∕周。

1.6.2治療組排毒尪痹湯，200 mL，2次∕d。處方組成：娘母良10 g，火把花根（先煎）10 g，小銅錘5 g，秦艽15 g，威靈仙20 g，黃芪50 g，桂枝15 g，白術(shù)20 g，茯苓20 g，淫羊藿25 g，枸杞子25 g，川斷30 g，牛膝15 g，紅花10 g，雞血藤30 g，甘草6 g。將火把花根用開水先煎2 h，再放入其他藥物煎1 h，取汁200 mL，煎煮2次，共400 mL，早、晚2次飯后分服。以上藥物均來源臨滄市人民醫(yī)院，并由中醫(yī)科統(tǒng)一煎制。

1.7 實驗材料其鼠抗人CD4，CD8單抗及生物素-兔抗鼠IgG，鏈霉親和素-HRP等試劑（北京宜安泰醫(yī)療技術(shù)開發(fā)有限公司）。

1.8 實驗方法采用免疫組化S.P法（生物素-鏈霉親和素-過氧化酶連接法，Biotin-Streptanidin-Per?oxidase）。具體步驟如下：①標(biāo)本制備：抽取受試者靜脈血3～4 mL，加入肝素25 U∕mL，經(jīng)離心后分離淋巴細(xì)胞，PBS洗滌3次，使每微升細(xì)胞數(shù)約2 000個，涂片，干燥。②標(biāo)本染色：分別加抗T細(xì)胞亞群單克隆抗體10 μL，置濕盒中，30 min，37℃，PBSTween20淋洗4次，擦干。加（生物素-兔抗鼠IgG）10 μL，PBS洗滌同上。加（鏈霉親和素-HRP）10 μL，PBS洗滌。在1 mL蒸餾水中加入底物1，2，3各1滴（約50 μL）混勻備用。擦干涂片圈外水份，加1滴底物混合液（約30～50 μL），37℃，5～15 min，顯微鏡下觀察，待細(xì)胞膜被明顯染成紅色，用蒸餾水中止顯色，加復(fù)染液1滴，作用約1～3 min后PBS沖洗。③計數(shù)：高倍顯微鏡下計算每200個單核細(xì)胞中陽性染色細(xì)胞所占的百分比。

1.9 統(tǒng)計分析采用SPSS 15.0統(tǒng)計軟件分析，計量資料用表示，組內(nèi)比較用t檢驗，組間比較用單因素方差分析。

2 結(jié)果

兩組患者治療后與治療前比較，CD4+細(xì)胞均下降（P＜0.05），CD8+細(xì)胞明顯升高（P＜0.01），但兩組治療后CD4+、CD8+、CD4+∕CD8+比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 兩組治療前后T細(xì)胞亞群測定值比較

表1 兩組治療前后T細(xì)胞亞群測定值比較

注：與本組治療前比較*P＜0.05，**P＜0.05；與對照組治療后比較△P＞0.05。

3 討論

RA是一種系統(tǒng)性、復(fù)雜的、慢性、炎性的自身免疫性疾病，抗原多肽通過抗原提呈細(xì)胞激活T細(xì)胞是其特征性病理變化，T細(xì)胞激活后產(chǎn)生細(xì)胞因子，并聚集其他炎癥細(xì)胞（包括其他T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，產(chǎn)生更多細(xì)胞因子，大量巨噬細(xì)胞被激活并且釋放了白細(xì)胞介素-1（IL-1）和腫瘤壞死因子（TNF），致使軟骨細(xì)胞和滑膜細(xì)胞釋出細(xì)胞毒素，造成關(guān)節(jié)及其周圍正常細(xì)胞和組織損傷，滑膜增生，骨和軟骨受損。RA主要發(fā)病機(jī)制是T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)異常，成熟的T細(xì)胞按其免疫效應(yīng)功能，可分為CD4+輔助性T細(xì)胞（CD4+T細(xì)胞），CD8+殺傷性T細(xì)胞（CD8+或CTL細(xì)胞）和CD4+-CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tr細(xì)胞）〔4〕。研究表明，與正常人比較，RA患者外周血中CD3+、CD4+淋巴細(xì)胞顯著降低，CD4+∕CD8+比值降低〔5〕。

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎臨床特征與“歷節(jié)病”“白虎歷節(jié)病”較為相似，統(tǒng)屬中醫(yī)“痹證”范疇。中醫(yī)對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病因病機(jī)的認(rèn)識，經(jīng)過長期臨床實踐和理論探討，目前比較傾向于外邪、正虛、瘀血3個方面。風(fēng)、濕、寒、熱等閉阻經(jīng)絡(luò)，氣血運(yùn)行不暢，經(jīng)脈失養(yǎng)，肢體關(guān)節(jié)、肌肉、筋骨等處，從而發(fā)生疼痛、重著、酸楚，麻木、甚至關(guān)節(jié)變形、腫大、僵硬、屈伸不利。筆者采用排毒尪痹湯，全方祛風(fēng)散寒、利濕通絡(luò)、解毒消腫、活血化瘀、補(bǔ)腎益氣、扶正固本。方中君藥火把花根有祛風(fēng)除濕、舒筋活絡(luò)、清熱解毒等功效，有效成分為生物堿、萜類、內(nèi)酯、酚酸類等，具有明顯抑制病理性免疫反應(yīng)和抗炎鎮(zhèn)痛作用。小銅錘又稱“小麻藥”，《云南中草藥選》：“止痛，活血化瘀。主治骨折，跌打損傷，風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛，閉經(jīng)，胃寒痛”。娘母良被佤族稱作“娘三端”，學(xué)名為塊根木蘭，其味辛甘苦，歸心、肺、腎、肝諸經(jīng)。具有補(bǔ)腎助陽、養(yǎng)心安神、祛痰解痙的功效。秦艽、威靈仙祛風(fēng)濕、舒經(jīng)絡(luò)，止痹痛。再以黃芪、桂枝、白術(shù)、茯苓補(bǔ)氣通陽，健脾祛濕，據(jù)現(xiàn)代藥理研究，黃芪對免疫功能異常有雙向調(diào)節(jié)作用；再以枸杞滋補(bǔ)肝腎；淫羊藿補(bǔ)腎壯陽、祛風(fēng)除濕；川斷補(bǔ)肝腎、續(xù)筋骨、行血脈；紅花、牛膝、雞血藤活血祛瘀、補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨；甘草補(bǔ)脾益氣、緩急止痛、緩和藥性。全方共奏祛風(fēng)散寒、利濕活血、補(bǔ)虛之功。前期研究表明，該方治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎安全有效〔6〕。

本實驗檢測了排毒尪痹湯對RA病人T細(xì)胞亞群的影響，發(fā)現(xiàn)經(jīng)排毒尪痹湯治療后，CD4+細(xì)胞較治前明顯減少，CD8+細(xì)胞較治前明顯增多，CD4+∕CD8+值明顯下降。結(jié)果表明排毒尪痹湯對RA患者T細(xì)胞亞群比例紊亂有調(diào)節(jié)作用，推測對T細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)為排毒尪痹湯抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的機(jī)制之一。

〔1〕郭寧茹.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎淋巴細(xì)胞亞群的臨床研究〔J〕.臨床合理用藥，2015，9（3）：130-131.

〔2〕董麗娜.類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群變化的臨床意義〔J〕.河北醫(yī)學(xué)，2011，17（11）：1444-1447.

〔3〕鄭筱英.中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則〔M〕.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002.

〔4〕HAGGQVIST B，HULTMAN P.Efects of deviating the re?sponse in murine mercury induced autoimmunity towards a Th1 response〔J〕.Clin Exp Immunol，2003，134（2）：202-209.

〔5〕梅序橋，吳阿陽，鄭燕蘋，等.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群CD4+∕CD8+表達(dá)的意義〔J〕.檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2015，12（21）：3144-3149.

〔6〕唐貞力.排毒尪痹湯治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎活動期隨機(jī)平行對照研究〔J〕.云南中醫(yī)藥雜志，2016，6（3）：27-28.

Effects of Wang-bi Detoxification Herbal Medication on T-lymphocyte Subgroups of Patients with Rheumatoid Arthritis

Tang Zhenli
（The Eighth Affiliated Hospital of Dali University,Lincang,Yunnan 677000,China）

Objective：To observe effects of Wang-bi detoxification herbal medication on T-lymphocyte subgroups of patients with Rheumatoid Arthritis,and to explore the mechanism of it efficacy.Methods：A comparative study was conducted among 200 patients including inpatients and outpatients who were divided into two groups randomly.100 patients in the control group took Indometacin Enteric-coated Tablets with 25 mg every time and once a day,and Methotrexate Tablets with 7.5 mg every time and once a week,while 100 patients in the treatment group took Wang-bi detoxification herbal medication with 200 mL each time and twice a day.After two courses of eight weeks,we compared CD4+and CD8+of the two groups before and after the treatment.Results：There was no significant difference with regard to the comparison of CD4+and CD8+of each group before the treatment（P＞0.05）.However,after the treatment both of the groups had a lower CD4+and a higher CD8 and a lower ratio of CD4+to CD8+.Comparison between the two groups also showed no significant difference（P＞0.05）.Conclusion：Patients with RA has an autoimmune disorder.Wang-bi detoxification herbal medication can help the distribution of their T-lymphocyte subsets and help them keep a stable immune system, and can have a similar immunosuppressive effect as that produced by the therapy of MTX in combination with other medicines.

rheumatoid arthritis;Wang-bi detoxification herbal medication;T-lymphocyte subgroups

R593.22

B

2096-2266（2017）08-0053-03

10.3969∕j.issn.2096-2266.2017.08.013

（責(zé)任編輯 董杰）

2016-10-24

唐貞力，主任醫(yī)師，主要從事中醫(yī)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病研究.