結(jié)腸癌中CyclinD1蛋白的表達(dá)及臨床意義

王大東 韋春回

530021廣西醫(yī)科大學(xué)附屬民族醫(yī)院消化內(nèi)科(南寧)

結(jié)腸癌中CyclinD1蛋白的表達(dá)及臨床意義

王大東 韋春回

530021廣西醫(yī)科大學(xué)附屬民族醫(yī)院消化內(nèi)科(南寧)

目的：探討細(xì)胞周期蛋白D1(CyclinD1)蛋白在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)及臨床意義。方法：選取結(jié)腸癌患者癌組織、癌旁組織及正常胃黏膜組織50例，采用免疫組化SP法檢測各組標(biāo)本中CyclinD1的表達(dá)?；叶戎翟礁?，表示CyclinD1表達(dá)越少。結(jié)果：CyclinD1在結(jié)腸癌組織、癌旁組織、正常黏膜組織中的表達(dá)呈逐漸降低趨勢(P均＜0.05)，CyclinD1蛋白表達(dá)與結(jié)腸癌TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及組織學(xué)類型相關(guān)(P均＜0.05)。結(jié)論：CyclinD1在結(jié)腸癌中過度表達(dá)，其表達(dá)與結(jié)腸癌的臨床病理特征緊密相關(guān)，這對于結(jié)腸癌的早期診斷、治療及預(yù)后判斷具有重要意義。

結(jié)腸癌；細(xì)胞周期蛋白D1；免疫組織化學(xué)

目前，在全球常見的惡性腫瘤中，結(jié)腸癌的發(fā)病率排第3位[1]。而在我國全部惡性腫瘤死亡率中，結(jié)腸癌死亡率位于第5～6位[2]。在我國其發(fā)病率呈上升趨勢。目前尚未發(fā)現(xiàn)結(jié)腸癌特異的腫瘤標(biāo)志物。CyclinD1是目前公認(rèn)的原癌基因，其在細(xì)胞周期進展中起重要作用，是在細(xì)胞周期G1期起主要作用的蛋白。CyclinD1是主要的G1期正調(diào)節(jié)因子，促進細(xì)胞G1-S期時相的轉(zhuǎn)換，被認(rèn)為是原癌基因[3]。過度表達(dá)的CyclinD1蛋白對G/S期的轉(zhuǎn)換有促進作用，從而使腫瘤的發(fā)生進程加速[4]。本研究于2016年2月-2017年2月采用免疫組織化學(xué)方法檢測CyclinD1在結(jié)腸癌中的表達(dá)，對CyclinD1與結(jié)腸癌的臨床病例特征相關(guān)性進行探討。

資料與方法

2016年2月-2017年2月收集結(jié)腸癌標(biāo)本50例，均取材于廣西醫(yī)科大學(xué)附屬民族醫(yī)院結(jié)腸癌切除術(shù)后的組織，術(shù)前、術(shù)后結(jié)腸癌診斷明確，所有患者在術(shù)前均未接受放化療。其中男31例，女19例，平均年齡(61.2±3.25)歲；其中低分化20例，中分化16例，高分化14例；浸潤深度達(dá)黏膜層4例，達(dá)肌層17例，達(dá)漿膜層14例，侵及漿膜層以外15例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移32例，其余18例無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。同時在相對應(yīng)的位置取距癌緣4～6 cm癌旁組織共40例及正常胃黏膜組織40例作為對照組。

方法：采用免疫組化(S-P)法檢測結(jié)腸癌、癌旁組織及正常黏膜組織中CyclinD1蛋白的含量。操作步驟：進行包埋，采用的是常規(guī)石蠟；對腫瘤、癌旁組織及正常黏膜組織標(biāo)本進行連續(xù)切片，切片厚度4 μm；脫蠟，采用的是二甲苯；隨后進行梯度酒精脫水；行抗原修復(fù)，采用的是高溫高壓的方法，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，封片。替代一抗選用的是PBS，并做陰性對照。

判定標(biāo)準(zhǔn)：CyclinD1染色定位在細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)，陽性信號的判定標(biāo)準(zhǔn)是漿棕黃色或黃色染色顯現(xiàn)。分別取6個高倍視野(200倍)對每個標(biāo)本進行檢測，對陽性信號平均灰度值進行測定，采用的是病理圖像分析儀，灰度值越高，表示CyclinD1表達(dá)越少。

統(tǒng)計學(xué)方法：采用SPSS 16.0軟件進行分析，所有計數(shù)資料均采用χ2檢驗，計量資料采用(±s)表示；P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

CyclinD1在結(jié)腸癌組織、癌旁組織及正常結(jié)腸黏膜組織中的陽性灰度值分別 為(198.54±10.25)、 (268.49±11.19)、(450.44±12.42)，同時進行各組間兩兩比較，P＜0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。CyclinD1表達(dá)水平與患者性別及年齡無關(guān)(P＞0.05)，而其在低分化型組、有漿膜浸潤組及有淋巴轉(zhuǎn)移組的陽性灰度值明顯低于中高分化組、無漿膜浸潤組及無淋巴轉(zhuǎn)移組水平(均P＜0.05)。見表1、圖1。

討 論

近年來我國結(jié)腸癌的發(fā)病率及死亡率都有所升高，且有年輕化趨勢[5]。但結(jié)腸癌腫瘤標(biāo)志物特異性及敏感性低，進行結(jié)腸癌篩查較為困難，需尋找特異性結(jié)腸癌標(biāo)志物。CyclinD1是細(xì)胞周期調(diào)控過程中重要的正向調(diào)控因子，當(dāng)激活CyclinD1基因時，CyclinD1處于持續(xù)高表達(dá)狀態(tài)，這將造成G1期縮短，細(xì)胞會提前進入S期，打破正常調(diào)節(jié)，干擾細(xì)胞周期，使其進程加快、增殖失控，最終導(dǎo)致腫瘤的生成[6]。因此在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮重要的作用。CyclinD1是已經(jīng)確定的原癌基因之一，其痕量或低水平表達(dá)于正常細(xì)胞和增殖細(xì)胞中，而在許多腫瘤中存在過度表達(dá)。有研究表明，在結(jié)直腸癌的侵襲和轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為中，CyclinD1蛋白表達(dá)起到了一定的作用[7]。亦有研究表明，PI3Kp110、I3Kp110與Bcl-2、CyclinD1在大腸癌原發(fā)灶及轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)均高于正常黏膜[8]，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，并與腫瘤生長、分化程度及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，在結(jié)腸癌中CyclinD1蛋白的表達(dá)與其在癌旁組織及正常黏膜組織中的表達(dá)相比，前者明顯高于后者，且其陽性表達(dá)會隨著癌組織分化程度的降低、浸潤深度的加深、出現(xiàn)淋巴結(jié)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移而升高，這說明在促進結(jié)腸癌發(fā)生過程中CyclinD1的表達(dá)呈逐漸增高趨勢，結(jié)果表明在結(jié)腸癌發(fā)生、發(fā)展過程中CyclinD1蛋白的高表達(dá)起重要作用。本研究結(jié)果與曲福杰等研究結(jié)果一致[9]。因此，檢測CyclinD1蛋白水平，在預(yù)測結(jié)腸癌發(fā)生、發(fā)展及評估其預(yù)后過程中起著重要作用。

表1 CyclinD1的表達(dá)與結(jié)腸癌臨床病理特征的關(guān)系

圖1 CyclinD1在不同分化程度結(jié)腸癌組織中的表達(dá)(SP×200)

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Expression changes of cyclin-D1 protein in colon cancer and its clinical significance

Wang Dadong,Wei Chunhui
Department of Gastroenterology,the Affiliated Minzu Hospital of Guangxi Medical University(Nanning City)530001

Objective：To investigate the expression changes of cyclin-D1 protein in the colon cancer tissues and its clinical significance.Methods：50 cases of colon cancer tissues,paracancerous tissues and normal gastric mucosa tissues were selected,the expression of cyclin-D1 in each group was detected by immunohistochemical SP method.The higher the gray value,the less the cyclin-D1 expression.Results：The expression of cyclin-D1 protein level was gradual downward trend in colon cancer tissues,pericarcinomatous tissue and normal colon mucosa tissue(allP＜0.05),the expression of cyclin-D1 protein of colon cancer was significantly related with lymph node metastasis,TNM stage and the degree of differentiation and histological type(allP＜0.05).Conclusion：Cyclin-D1 may be participated the whole course of carcinogenesis of cyclin-D1 cancer,which might be valuable for the early diagnosis,treatment and prognosis.

Colon cancer;Cyclin-D1;Immunohistochemistry

10.3969/j.issn.1007-614x.2017.22.71