大黃素通過(guò)影響AQP3表達(dá)水平改善急性重癥胰腺炎大鼠的器官功能

陳鋒，趙煜，熊偉

(四川省人民醫(yī)院1.急診科，2.急診外科，3.肝膽外科，四川 成都 610072)

大黃素通過(guò)影響AQP3表達(dá)水平改善急性重癥胰腺炎大鼠的器官功能

陳鋒1，趙煜2，熊偉3

(四川省人民醫(yī)院1.急診科，2.急診外科，3.肝膽外科，四川 成都 610072)

目的：探討大黃素對(duì)急性重癥胰腺炎(SAP)大鼠器官功能及水通道蛋白3(AQP3)信號(hào)通路的影響。方法：將72只大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(Sham組,24只)、模型組(Model組,24只)和大黃素組(Emodin組,24只)。Model組和Emodin組通過(guò)胰管內(nèi)注射牛黃膽酸鈉的方法建立SAP大鼠模型，Sham組僅向胰管內(nèi)注射等量生理鹽水。Emodin組采用大黃素灌胃，Sham、Model組給予等量生理鹽水。造模后24、48、72 h每組分別處死8只大鼠，取其組織，石蠟包埋切片后經(jīng)蘇木精-伊紅(HE)染色后光鏡下觀察大鼠胰腺、肝臟、肺臟組織病理改變，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)各組大鼠血清腫瘤壞死因子- α(TNF- α)、白細(xì)胞介素- 6(IL- 6)水平含量，氯化硝基苯- α- 半乳糖麥芽糖苷法檢測(cè)血清淀粉酶(Amy)的含量，蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western blotting)檢測(cè)回腸中AQP3蛋白表達(dá)，實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT- qPCR)檢測(cè)回腸中AQP3的mRNA表達(dá)。結(jié)果：Sham組不同時(shí)間點(diǎn)胰腺、肝臟、肺臟病理評(píng)分均顯著低于Emodin組和Model組(均P<0.05)，Emodin組不同時(shí)間點(diǎn)胰腺、肝臟、肺臟病理評(píng)分均顯著低于Model組(均P<0.05)。Sham組不同時(shí)間點(diǎn)血清Amy、TNF- α、IL- 6水平均顯著低于Emodin組和Model組(均P<0.05)，Emodin組不同時(shí)間點(diǎn)血清Amy、TNF- α、IL- 6水平均顯著低于Model組(均P<0.05)。Sham組回腸中不同時(shí)間點(diǎn)AQP3蛋白及mRNA表達(dá)均顯著低于Emodin組和Model組(均P<0.05)，Emodin組回腸中不同時(shí)間點(diǎn)AQP3蛋白及mRNA表達(dá)均顯著低于Model組(均P<0.05)。結(jié)論：SAP病理改變與AQP3異常表達(dá)有關(guān)；大黃素能夠保護(hù)SAP的器官功能，降低炎癥因子釋放，其作用機(jī)制可能與下調(diào)AQP3表達(dá)、降低腸黏膜通透性有關(guān)。

大黃素； 急性重癥胰腺炎； 水通道蛋白3； 炎癥細(xì)胞因子； 大鼠

重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis，SAP)發(fā)病與全身炎癥反應(yīng)有關(guān)。SAP常累及全身多器官，導(dǎo)致多器官功能衰竭或全身感染，這亦是SAP死亡的主要原因[1]。國(guó)外研究[2]顯示,在胰腺炎早期單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及中性粒細(xì)胞等釋放多種細(xì)胞因子，當(dāng)血液循環(huán)中細(xì)胞因子水平升高會(huì)進(jìn)一步誘導(dǎo)全身嚴(yán)重反應(yīng)及多器官功能障礙綜合征。基礎(chǔ)研究[3]證實(shí)，SAP急性反應(yīng)期器官功能衰竭的病理基礎(chǔ)是腸黏膜通透性增高，毛細(xì)血管滲漏而引起體液丟失。水通道蛋白3(aquaporin 3，AQP3)是存在于消化系統(tǒng)上皮細(xì)胞的一種轉(zhuǎn)化蛋白，其表達(dá)水平與甘油、水等小分子物質(zhì)的通透性有關(guān)[4]。在病理情況下，AQP3表達(dá)異常，導(dǎo)致腸黏膜通透性增加，黏膜屏障受損。大黃素(emodin)是從大黃中提取的蒽醌類衍生物。體外研究[5]證實(shí),大黃素具有導(dǎo)瀉、抑菌、利尿等作用，能夠改善SAP患者臨床癥狀，但是大黃素對(duì)SAP的具體作用機(jī)制尚不清楚。本研究對(duì)SAP大鼠采用大黃素灌胃治療，觀察大鼠器官功能及AQP3表達(dá)水平，旨在探討大黃素治療SAP的作用機(jī)制，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

本實(shí)驗(yàn)大鼠處置方法經(jīng)過(guò)本院動(dòng)物倫理學(xué)委員會(huì)批準(zhǔn)，選擇72只SPF級(jí)健康SD大鼠，雌雄各半，6～8周齡，體質(zhì)量220～300 g，平均(245±34)g，均購(gòu)自四川省華西醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號(hào)為SCXK- 2015- 009。按照隨機(jī)數(shù)字表法將72只大鼠分為假手術(shù)組(Sham組,24只)、模型組(Model組,24只)和大黃素組(Emodin組,24只)；Sham、Model、Emodin組3組大鼠的周齡、體質(zhì)量比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 主要儀器與試劑

?；悄懰徕c購(gòu)自上海一研生物科技有限公司(純度>95%)；大黃素購(gòu)自臺(tái)州海辰藥業(yè)有限公司；淀粉酶(amylase，Amy)定量測(cè)定試劑盒購(gòu)自保定長(zhǎng)城臨床試劑有限公司；腫瘤壞死因子- α(tumor necrosis factor，TNF- α)、白細(xì)胞介素- 6(interleukin- 6，IL- 6)購(gòu)自上海基免生物技術(shù)有限公司；兔抗鼠AQP3多克隆抗體購(gòu)自Sigma公司；免疫組化試劑盒、3,3′- 二氨基聯(lián)苯胺(DAB)、Trizol試劑盒購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司；甘油醛- 3- 磷酸脫氫酶(glyceraldehyde- 3- phosphate dehydrogenase，GAPDH)、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司；聚偏二氟乙烯(polyvinylidene fluoride, PVDF)膜、磷酸緩沖鹽溶液(phosphate buffered saline, PBS)、RPMI 1640培養(yǎng)基購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司。AU5800全自動(dòng)生化分析儀購(gòu)自貝克曼庫(kù)爾特公司；GeneAmp 9700 PCR儀購(gòu)自美國(guó)ABI公司；TS100- F倒置顯微鏡購(gòu)自尼康公司；Odyssey成像系統(tǒng)及圖像分析軟件購(gòu)自美國(guó)LI- COR公司。

1.3 方法

1.3.1 大鼠SAP模型的建立 參考Abe等[6]報(bào)道，大鼠術(shù)前24 h禁食，自由飲水，3%戊巴比妥鈉按1 ml·kg-1腹腔注射麻醉；于上腹正中作長(zhǎng)約2 cm切口，注射針頭經(jīng)十二指腸漿肌層行膽胰管穿刺術(shù)，穿刺成功后用無(wú)創(chuàng)傷血管鉗夾住膽胰管近肝端及十二指腸穿刺處，向胰管內(nèi)均勻注射5%的牛黃膽酸鈉(1 ml·kg-1)，注射后觀察5～10 min，去除血管鉗，確認(rèn)腹腔無(wú)活動(dòng)性出血后關(guān)腹。Sham組僅向胰管內(nèi)注射等量生理鹽水;Emodin組采用大黃素灌胃，20 mg·kg-1，每日灌胃1次，連續(xù)灌胃3 d；Sham、Model組給予等量生理鹽水，方法及給藥時(shí)間同Emodin組。各組造模成功后分別于造模后24、48、72 h分別處死8只大鼠，處死后從心臟取血置于肝素抗凝管中，-20 ℃保存待檢。再分別取米粒大小的回腸、胰腺、肝臟、肺臟組織，5%多聚甲醛固定，液氮保存待檢。

1.3.2 組織形態(tài)學(xué)的觀察 將不同時(shí)段的胰腺、肝臟、肺臟組織樣本從液氮中取出，置于10%甲醛-水溶液中72 h，常規(guī)脫水、透明、包埋，制成連續(xù)切片，采用蘇木精伊紅染色，并于光鏡下觀察切片。由病理科醫(yī)生采用雙盲法對(duì)組織病理進(jìn)行評(píng)分，其中胰腺病理評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)參考Rongione評(píng)分法[7]，肝臟病理評(píng)分參考Camargo等[8]報(bào)道的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，肺臟參考Jiang等[9]報(bào)道的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)；病理評(píng)分越高，組織損傷越嚴(yán)重。

1.3.3 血清指標(biāo)的檢測(cè) 取各時(shí)段全血1 ml，800×g離心10 min，靜置10 min后吸取上清液；血清置于全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)血清TNF- α和IL- 6的含量，氯化硝基苯- α- 半乳糖麥芽糖苷法檢測(cè)血清Amy的含量。相關(guān)檢測(cè)操作均嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

1.3.4 免疫組化染色檢測(cè)各組織AQP3蛋白的表達(dá) 將組織樣本制成厚度約為4 μm的切片，二甲苯、酒精梯度洗脫，切片脫蠟至水，加入3%過(guò)氧化氫室溫孵育5 min，以消除內(nèi)源性過(guò)氧化酶。自來(lái)水沖洗后PBS浸泡3 min，常規(guī)加入5%山羊血清封閉，室溫孵育10 min，加入1∶150兔抗鼠AQP3多克隆抗體，4 ℃孵育過(guò)夜。PBS沖洗3次，再加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔IgG的二抗，37 ℃孵育30 min，PBS沖洗3次，DAB顯色，自來(lái)水充分沖洗，復(fù)染，封片。結(jié)果判定由兩名病理科醫(yī)生采用盲法閱片，顯微鏡下隨機(jī)選擇10個(gè)視野，采用半定量法對(duì)細(xì)胞染色程度進(jìn)行評(píng)分。染色強(qiáng)度無(wú)染色為0分，淺棕色后淡紅色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。著色細(xì)胞所占百分比染色細(xì)胞<5%為0分，染色細(xì)胞5%～25%為1分，染色細(xì)胞26%～50%為2分，染色細(xì)胞51%～75%為3分，染色細(xì)胞>75%為4分。以染色強(qiáng)度×染色細(xì)胞百分比作為總分，其中總分0分代表陰性，1～4分代表弱陽(yáng)性，5～8分代表陽(yáng)性，9～12分代表強(qiáng)陽(yáng)性；其中1分以及上代表陽(yáng)性。

1.3.5 免疫印跡法(Western blotting)檢測(cè)回腸中AQP3蛋白的表達(dá) 將樣本充分研磨后加入蛋白裂解液冰上充分裂解30 min，4 ℃、1 400g離心10 min，留取上清液，置于-80 ℃冰箱保存待檢。配置好上樣緩沖液，沸水中變性5 min，冰浴5 min；SDS- PAGE電泳分離蛋白，將電泳段轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，電轉(zhuǎn)后將PVDF膜取出。5%脫脂牛奶封閉2 h，PBS沖洗3次，加入兔抗鼠AQP3多克隆抗體，室溫孵育1 h，4 ℃過(guò)夜；PBS沖洗3次；再加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗，室溫下振搖1 h，PBS沖洗3次。熒光圖像掃描及條帶灰度值分析，目的蛋白相對(duì)表達(dá)量為樣本條帶與GAPDH條帶灰度值之比。

1.3.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real- time quantitative PCR，RT- qPCR)檢測(cè)回腸AQP3的mRNA表達(dá) 按照RNA提取試劑盒說(shuō)明書提取細(xì)胞總RNA，并逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。引物委托南京金斯瑞生物科技有限公司設(shè)計(jì)。AQP3上游引物序列為5′- AGCTGGATCGGCTTGAATTGT- 3′,下游為5′- AGTGAAAACGGCACGTGGAT- 3′,產(chǎn)物大小為379 bp；GAPDH上游引物序列為5′- CTGAAGTAGATCCTGTAGATGTTGCA- 3′,下游為5′- GTTGCCATTGTGACGGTTCAGT- 3′，產(chǎn)物大小為125 bp。PCR反應(yīng)體系為ddH2O 24.5 μl、10×buffer緩沖液5 μl、dNTP 2 μl、上下游引物各0.5 μl，cDNA 5 μl、Taq酶0.5 μl，總反應(yīng)體系38 μl；反應(yīng)條件為95 ℃預(yù)變性5 min，95 ℃變性30 s，65 ℃退火45 s，72 ℃延伸1 min，35個(gè)循環(huán)后72 ℃ 5 min。記錄檢測(cè)指標(biāo)的CT值，每組測(cè)量3次取平均值，以GAPDH為內(nèi)參照，計(jì)算AQP3 mRNA相對(duì)表達(dá)量(2-ΔΔCT)；其中ΔCt=Ct(檢測(cè)樣品mRNA)-Ct(GAPDH mRNA)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組間比較采用單因素方差分析(ANOVA)，各組間均數(shù)兩兩比較采用SNK- q檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 3組大鼠各組織形態(tài)學(xué)的改變

造模后Sham組大鼠的胰腺、肝臟、肺臟組織細(xì)胞排列整齊，形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰，細(xì)胞間隙未見炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及水腫。Emodin組胰腺細(xì)胞較Model組清晰，炎性浸潤(rùn)面積明顯縮小；肝細(xì)胞未見空泡樣變性，肺組織充血、水腫明顯減輕。Model組胰腺組織出現(xiàn)大量細(xì)胞壞死，并伴有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，腺泡結(jié)構(gòu)不清；肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)混亂不清，細(xì)胞出現(xiàn)明顯腫脹，部分可見空泡樣變性；肺間質(zhì)水腫或充血，部分可見肺泡融合而成的肺大皰。見圖1。

2.2 3組大鼠各器官病理評(píng)分的比較

Emodin組造模后24、48、72 h各組織病理評(píng)分呈顯著下降趨勢(shì)(P<0.05)；Sham組不同時(shí)間點(diǎn)胰腺、肝臟、肺臟組織病理評(píng)分顯著低于Emodin組和Model組(均P<0.05)，Emodin組病理評(píng)分顯著低于Model組(均P<0.05)。見表1。

2.3 3組大鼠不同時(shí)段血清Amy、TNF- α、IL- 6濃度變化的比較

Emodin組造模后24、48、72 h血清Amy、TNF- α、IL- 6水平均呈明顯下降趨勢(shì)(P<0.05)。Sham組不同時(shí)間點(diǎn)血清Amy、TNF- α、IL- 6濃度顯著低于Emodin組和Model組(均P<0.05)，Emodin組不同時(shí)間點(diǎn)血清Amy、TNF- α、IL- 6濃度顯著低于Model組(P<0.05)，見表2。

A.Sham組; B.Emodin組; C.Model組

圖1 造模48 h后3組大鼠胰腺、肝臟、肺臟組織形態(tài)學(xué)改變(HE ×200)

Fig 1 Pathological changes of rats’ pancreas,liver and lung in three groups after 48 h of model establishment(HE ×200)

組 別n胰腺病理評(píng)分肝臟病理評(píng)分肺臟病理評(píng)分12h48h72h12h48h72h12h48h72hSham組81．23±0．27ab1．19±0．24ab1．21±0．27ab0．17±0．04ab0．19±0．05ab0．17±0．03ab0．13±0．04ab0．14±0．07ab0．12±0．02abEmodin組810．31±2．17a8．47±1．06a4．09±0．74a2．17±0．39a1．54±0．13a1．21±0．09a1．75±0．18a1．32±0．13a0．94±0．07aModel組812．19±2．5411．72±1．6311．39±1．383．04±0．562．98±0．522．94±0．482．17±0．322．09±0．292．11±0．32

與Model組比較，aP<0.05; 與Emodin組比較，bP<0.05

組 別nAmy水平/(U·L-1)ρ(TNF?α)/(ng·L-1)ρ(IL?6)/(ng·L-1)24h48h72h24h48h72h24h48h72hSham組8875．3±31．6ab883．1±34．9ab859．7±30．5ab13．1±1．7ab12．9±1．4ab13．5±1．9ab51．7±6．1ab49．5±5．7ab50．7±5．9abEmodin組85493．6±103．5a5321．4±85．3a5439．4±71．2a87．4±8．4a85．5±4．7a85．5±2．1a714．3±41．3a729．4±31．6a711．5±19．5aModel組87638．7±132．76572．9±117．34329．5±109．3104．2±11．585．4±7．652．7±6．4974．6±81．7816．5±64．8713．8±43．7

與對(duì)照組比較，aP<0.05;與大黃素組比較， bP<0.05

2.4 3組大鼠不同時(shí)段回腸AQP3蛋白的表達(dá)

免疫組化染色顯示，Sham組AQP3蛋白呈弱表達(dá)，主要集中于回腸黏膜絨毛上端上皮細(xì)胞內(nèi)；Model組AQP3蛋白呈強(qiáng)表達(dá)，并由回腸黏膜絨毛上端向隱窩延伸；Emodin組AQP3蛋白水平較Model組明顯減少，并主要集中分布于黏膜絨毛上端。Western blotting結(jié)果顯示，Emodin組造模后24、48、72 h AQP3蛋白水平均呈下降趨勢(shì)(P<0.05)，其中Sham組不同時(shí)間點(diǎn)AQP3蛋白水平顯著低于Emodin組和Model組(均P<0.05)，Emodin組顯著低于Model組(均P<0.05)。見圖2。

2.5 3組大鼠不同時(shí)段回腸AQP3的mRNA表達(dá)

Emodin組回腸AQP3的mRNA水平在造模后24、48、72 h呈逐漸下降的趨勢(shì)(均P<0.05)，Sham組不同時(shí)間點(diǎn)AQP3 mRNA顯著低于Emodin組和Model組(均P<0.05)，Emodin組不同時(shí)間點(diǎn)AQP3 mRNA顯著低于Model組(均P<0.05)，見圖3。

3 討 論

大黃素是從中藥大黃中提取的一類蒽醌類化合物?；A(chǔ)藥理學(xué)研究[11- 12]證實(shí)，大黃素具有導(dǎo)瀉、抑菌、免疫抑制、利尿、抗組胺等作用。Ni等[13]認(rèn)為，大黃素能夠顯著降低SAP并發(fā)腹水形成，對(duì)SAP的預(yù)后具有顯著改善作用。臨床研究[14]顯示，大黃素聯(lián)合西藥治療能夠降低SAP的手術(shù)率和死亡率，其作用機(jī)制與緩解括約肌痙攣和抑制二十碳烯酸類血管活性物質(zhì)有關(guān)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)[15]也證實(shí)，大黃素能夠促進(jìn)胃腸道局部微循環(huán)，加速細(xì)胞和內(nèi)毒素排除，并通過(guò)增加血供和氧供修復(fù)腸黏膜。

本研究顯示，與Sham組和Model組比較，Emodin組Amy、TNF- α、IL- 6水平呈下降趨勢(shì)，且Emodin組造模后血清Amy、TNF- α、IL- 6水平顯著低于Model組，說(shuō)明大黃素能夠顯著降低炎癥因子的釋放，從而改善局部炎癥反應(yīng)，緩解局部組織器官的損傷。Suboj等[16]報(bào)道,大黃素能夠顯著抑制大鼠腦缺血區(qū)組織ICAM- 1的表達(dá)，參與調(diào)節(jié)NF- κB信號(hào)途徑，降低中性粒細(xì)胞和炎癥介質(zhì)的釋放，從而對(duì)局部組織起到保護(hù)作用。Yin等[17]證實(shí),大黃素能夠下調(diào)Toll樣受體- 4 mRNA表達(dá)水平，抑制瘤壞死因子- α、二胺氧化酶能細(xì)胞因子釋放，對(duì)SAP腸屏障具有顯著改善作用。本研究顯示,Emodin組胰腺、肝臟、肺臟病理評(píng)分均顯著降低，說(shuō)明大黃素對(duì)SAP引起的器官損傷具有保護(hù)作用，這可能與大黃素改善局部血液循環(huán)、緩解炎癥反應(yīng)有關(guān)。

A.Sham組；B.Model組；C.Emodin組

圖2 3組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)回腸AQP3表達(dá)水平(上行為免疫組化檢測(cè)，下行為Western blotting檢測(cè))

Fig 2 AQP3 protein expression level of three groups in different time

圖3 3組大鼠回腸AQP3 mRNA在不同時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)水平

Fig 3 AQP3 mRNA expression level of three groups in different time

AQP3是哺乳動(dòng)物內(nèi)廣泛存在的一類活性蛋白，參與特異性水轉(zhuǎn)運(yùn)、細(xì)胞膜流動(dòng)性、血管生長(zhǎng)調(diào)節(jié)等過(guò)程[18- 19]。Matsuo等[20]將小鼠AQP3基因敲除，結(jié)果顯示小鼠腎集合管對(duì)水的通透性顯著降低，小鼠表現(xiàn)出多尿癥狀。Nong等[21]報(bào)道,小腸部分切除術(shù)患者隨著腸道AQP3 mRNA表達(dá)顯著升高，患者術(shù)后腹瀉明顯改善，AQP3在此過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。大黃素具有通腑瀉下的作用。齊文杰等[22]證實(shí),大黃提取的總蒽醌類化合物能夠?qū)е麓笫蟾篂a，回腸、結(jié)腸段AQP3、AQP4蛋白明顯下調(diào)。Masaldan等[23]報(bào)道,大黃酚、大黃素、大黃酸等能夠抑制LoVo細(xì)胞膜表面AQP3蛋白和mRNA的表達(dá)水平，這亦是大黃致瀉的主要機(jī)制。本研究顯示，隨著治療時(shí)間的延長(zhǎng)，Emodin組AQP3蛋白和mRNA呈逐漸降低趨勢(shì)，且Emodin組不同時(shí)間點(diǎn)AQP3蛋白和mRNA均顯著低于Model組。說(shuō)明SAP能夠誘導(dǎo)AQP3異常表達(dá)，而大黃素能夠下調(diào)AQP3表達(dá)水平，從而降低腸黏膜的通透性。

綜上所述，SAP病理改變與AQP3異常表達(dá)有關(guān),大黃素能夠保護(hù)SAP的器官功能，降低炎癥因子釋放[24]，其作用機(jī)制可能與下調(diào)AQP3表達(dá)、降低腸黏膜通透性有關(guān)。

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Effect of emodin on organ function and AQP3 expression level in severe acute pancreatitic rats

CHEN Feng1,ZHAO Yu2,XIONG Wei3

(1.DepartmentofEmergency, 2.DepartmentofEmergencySurgery, 3.HepatobiliarySurgery,People’sHospitalofSichuan,Chengdu610072,China)

Objective: To investigate the organ function and AQP3 signal pathway effect of emodin on severe acute pancreatitis rats. Methods: A total of 72 rats accorded to the random number table method was divided into sham operation group (Sham group) of 24 rats, Model group of 24 rats and Emodin group of 24 rats, SAP model was established in the Emodin group and the Model group, same volume of normal saline was intraperitoneal injected into the pancreatic duct in the Sham group. The Emodin group was orally administered emodin, the Sham group and the Model group were given the same amount of normal saline. After 24 h, 48 h and 72 h of model establishment, 8 rats was sacrificed in each group, the pathological changes of pancreas, liver and lung were observed under electron microscope, serum TNF- α, IL- 6 level was detected by enzyme- linked immunosorbent test, serum Amy level was detected by chlorinated nitrobenzene alpha galactose method, ileal AQP3 protein expression level was detected by Western blotting, ileum AQP3 mRNA expression level was detected by quantitative real- time PCR. Results: 24 h, 48 h, 72 h after model establishment, pancreas, liver, lung tissue had significantly pathological changes in the three groups. After 24 h, 48 h, 72 h, histopathological score in the Emodin group showed a significant decreased trend (P<0.05). The pathological scores of the pancreas, liver, lung in the Sham group at different time points were significantly lower than those of the Emodin group and the Model group (P<0.05), moreover those of the Emodin group at different time points were significantly lower than those of the Model group (P<0.05).After 24 h, 48 h, 72 h, serum Amy,TNF- α,IL- 6 level in the Emodin group showed a significant decreased trend (P<0.05),those of the Sham group at different time points were significantly lower than those of the Emodin group and the Model group (P<0.05), those of the Emodin group at different time points were significantly lower than those of the Model group (P<0.05). After 24 h, 48 h, 72 h, AQP3 protein and mRNA in the Emodin group showed a significant decreased trend (P<0.05), AQP3 protein and mRNA in the Sham group at different time points were significantly lower than those of in the Emodin group and the Model group (P<0.05), with the former lower than the latter (P<0.05). Conclusion: The abnormal expression of AQP3 is related to SAP, emodin can protect the organ function of SAP and reduce the release of inflammatory factors, and its mechanism may be related to the down- regulation of AQP3 expression and decrease intestinal permeability.

Emodin; acute severe pancreatitis; aquaporin 3; inflammatory factor; rats

2016- 12- 21

2017- 05- 18

四川省衛(wèi)生廳項(xiàng)目(080349)

陳鋒(1972-)，男，四川攀枝花人，副主任醫(yī)師，醫(yī)學(xué)碩士。E- mail:liushan12345624437@126.com

熊偉 E- mail:linyong63@163.com

陳鋒,趙煜,熊偉.大黃素通過(guò)影響AQP3表達(dá)水平改善急性重癥胰腺炎大鼠的器官功能[J].東南大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2017，36(4)：574- 580.

R576; R282.710.7

A

1671- 6264(2017)04- 0574- 07

10.3969/j.issn.1671- 6264.2017.04.016